转基因tritordeum的遗传分析

从一批使用无启动子uidA转化策略转化的tritordeum中,分离出标定有花药组织特异性启动子的单株并考察其外源基因的遗传稳定性,为即将开展的启动子分离工作奠定基础;对转基因材料不同生长时期的不同组织进行Gus组织化学检测,分析Gus表达的特异性,应用RT-PCR从转录水平进一步确证启动子的特异性;所筛选出的植株中,Gus的表达特异性和T0代的表现完全一样,只有花药原基和花粉粒,整合位点在各代之间传递的频率较低,明显不符合显性:隐性(3∶1)规律,但Gus的表达特异性在各代之间传递时有着极强的稳定性;成功地分离出了被标定有花药组织特异性启动子的tritordeum,对其遗传特性作了进一步的分析.

tritordeum花粉特异性表达的遗传分析

为明确转基因tritordeum中被外源uidA基因标记的启动子的调控特异性,对筛选到的一株标记材料进行了两代uidA基因的遗传表达分析,结果表明,后代材料基因组中都含有uidA基因,没有发生分离,且都只在花粉中检测到GUS活性,在其他组织没有检测到GUS活性.进一步RT-PCR分析显示uidA基因在根和叶中没有发生转录,说明该株材料为花粉特异性启动子被uidA基因标记的阳性纯合体,实验证明该特异性能稳定遗传.

无启动子转化策略用于分离组织特异性启动子的研究

通过研究外源uidA基因在体内表达的时空特异性,利用PCR、GUS组织化学检测等技术,从以tritordeum为受体、经无启动子uidA转化策略得到的转基因供试材料中成功筛选出了外源uidA基因在花药原基特异表达的单株。结果表明,花药原基特异表达单株的内源组织特异性启动子已被外源uidA片段标定,为启动子的分离克隆提供了一种有效手段。