原肌球蛋白3与雄激素受体配体结合域之间的相互作用

目的为明确雄激素对动脉粥样硬化的影响及机制,在单核细胞内筛选与雄激素受体结合的蛋白。方法将雄激素受体配体结合域(AR-LBD)做为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从男性单核细胞cDNA文库中筛选与AR-LBD相互作用的蛋白,进一步应用Pull-down、免疫荧光技术验证二者在体外的相互作用。结果从男性单核细胞cDNA文库中筛选出原肌球蛋白3(TPM3)与AR-LBD存在相互作用。在体外通过Pull-down实验证实了TPM3与AR-LBD的相互作用,进一步通过共聚焦显微镜检测免疫荧光确认TPM3与AR-LBD在293HEK细胞中重叠共表达。结论在男性外周血单核细胞内,TPM3与AR-LBD存在相互作用。

应用siRNA敲低TPM3基因表达后对大鼠胰腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的:探究原肌球蛋白3(tropomyosin alpha-3 chain,TPM3)在大鼠胰腺癌细胞中对其侵袭转移能力的影响并初步阐述其可能的分子机制。方法:(1)将70只大鼠随机分为手术组40只[将7,12-二甲基苯并蒽(7,12-dimethyl-1,2-benzanthracene,DMBA]植入大鼠胰腺被膜下后荷包缝合被膜),假手术组15只(只对胰腺进行荷包缝合而后关腹,不置入DMBA),阴性对照组15只(不做任何处理),建立大鼠胰腺癌模型。(2)通过组织免疫组化染色的方法对差异蛋白TPM3进行验证。(3)通过机械分离和酶阶段消化法分离胰腺癌组织的方法获取大鼠胰腺癌细胞,体外传代培养获得纯度较高的细胞后,应用si RNA敲低大鼠胰腺癌细胞中TPM3基因的表达;通过RT-PCR技术检测其沉默效果。(4)通过Transwell实验和平板克隆实验分别对细胞的侵袭、迁移能力及生长增殖能力进行观察。结果:(1)经病理验证模型组有37.83%(14/37)形成胰腺癌,证明大鼠胰腺癌模型建立成功。(2)免疫组化验证胰腺癌组织中TPM3阳性率(92.8%)明显高于正常胰腺组织(6.7%)。(3)RT-PCR结果显示,转染TPM3-si RNA的细胞中TPM3的表达量(0.31±0.02)明显低于其余各组,脂质体组(0.45±0.02),阴性对照组(0.45±0.02),空白对照组(0.43±0.02)(P<0.05),其余各组之间TPM3表达量差异无统计学意义(P>0.05)。(4)转染TPM3-si RNA的细胞其侵袭[(161.63±4.94)个]、迁移能力[(206.87±4.21)个]及生长增殖能力[(51.5±2.327)个]较对照组明显降低[分别为(39.7±1.40)个,(67.27±1.76)个,(5.900±0.767)个](P<0.05)。结论:体外化学合成的TPM3-si RNA可有效的抑制大鼠胰腺细胞TPM3的表达,TPM3表达降低后其侵袭能力、迁移能力及生长增殖能力下降。