虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著降低,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PD-H组比较,PD+SC79组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著升高,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著降低(P<0.05);虎杖苷干预治疗后,小鼠移植瘤的生长速度显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可以通过调节Akt/MDM2/p53信号通路使细胞周期阻滞,抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。

TP53BP2基因真核表达载体的构建及在人胚肾Expi293F细胞中蛋白表达、纯化及活性鉴定

目的构建人肿瘤抑制因子p53结合蛋白2(tumor suppressor p53-binding protein 2,TP53BP2)的重组真核表达载体,转染人胚肾Expi293F细胞,获得高纯度的重组人全长TP53BP2蛋白并对其进行生物学活性鉴定。方法利用UniProt网站查询TP53BP2基因序列,并进行Expi293F表达系统序列优化,通过同源重组连接至pcDNA3.1(+)-P2Ae GFP载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pcDNA3.1(+)-P2A-eGFPTP53BP2质粒瞬时转染至Expi293F细胞,荧光显微镜观察转染效率,收集实验组及对照组细胞,利用免疫印记试验(Western blot,WB)检测TP53BP2重组蛋白表达水平。通过His标签纯化试剂盒及Superdex 20010/300GL层析柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)对纯化后重组蛋白进行鉴定。利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白结合情况。利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白共定位。利用表面等离子体共振(surface-plasmon resonance,SPR)技术,检测纯化后的重组人全长TP53BP2蛋白与TP53BP2抗体的相互作用。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pcDNA3.1(+)-P2A-eGFP-TP53BP2构建成功。经荧光显微镜观察结果显示转染效率约为60%,WB结果表明TP53BP2蛋白在Expi293F细胞中过表达,证明转染成功。SDS-PAGE结果表明纯化后重组蛋白纯度在90%以上,证明纯化成功。Co-IP结果表明,TP53BP2重组蛋白可与p65蛋白相互作用。IF结果表明,His标签蛋白、TP53BP2蛋白及p65蛋白存在共定位,表明三者之间存在相互作用。SPR结果表明,纯化的重组人TP53BP蛋白与TP53BP2抗体具有较好的结合活性。以上结果均证明重组人全长TP53BP2蛋白具有生物学活性。结论成功构建了TP53BP2基因真核表达载体并在人胚肾Expi293F细胞中成功表达出具有生物学活性的重组人全长TP53BP2蛋白,为进一步研究TP53BP2的结构和功能奠定了基础。

CTNNB1、TP53蛋白在儿童肝母细胞瘤组织中的表达及与病理特征、预后的关系

目的 探讨钙黏蛋白相关蛋白(cadherin associated protein beta 1,CTNNB1)、肿瘤抑制因子P53(tumor suppressor factor P53,TP53)蛋白在儿童肝母细胞瘤(hepatoblastoma, HB)组织中的表达及与病理特征、预后的关系。方法 选取2017-06/2020-06月作者医院收治的72例HB患儿为研究对象,手术留取癌组织标本及对应的癌旁组织。连续随访3年,记录患儿的预后生存情况,并计算总生存率(overall survival, OS)。采用免疫组织化学法检测CTNNB1、TP53蛋白在HB患儿癌组织及癌旁组织中的表达情况;采用χ~2检验分析CTNNB1、TP53蛋白表达与HB患儿临床病理特征的关系;采用多因素Cox回归分析探讨HB患儿预后的影响因素。结果 HB患儿癌组织中CTNNB1阳性表达率(76.39%)高于对照组(43.06%),TP53阴性表达率(70.83%)高于对照组(38.89%)(P均<0.05)。初诊甲胎蛋白浓度≥100μg/L、POST-TEXT分期Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤直径≥3 cm、有肿瘤侵袭或转移HB患儿的CTNNB1阳性表达率、TP53阴性表达率高于初诊甲胎蛋白<100μg/L、POST-TEXT分期Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤直径<3 cm、无肿瘤侵袭或转移HB患儿(P均<0.05)。初诊甲胎蛋白≥100μg/L、POST-TEXT分期Ⅲ~Ⅳ期、有肿瘤侵袭或转移、CTNNB1阳性表达、TP53阴性表达的HB患儿3年OS低于初诊甲胎蛋白<100μg/L、POST-TEXT分期Ⅰ~Ⅱ期、无肿瘤侵袭或转移、CTNNB1阴性表达、TP53阳性表达的HB患儿(P均<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,POST-TEXT分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=2.077,95%CI:1.423~3.032)、有肿瘤侵袭或转移(HR=2.291,95%CI:1.536~3.417)、CTNNB1阳性表达(HR=2.757,95%CI:1.781~4.268)、TP53阴性表达(HR=2.477,95%CI:1.635~3.753)是HB患儿预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 HB患儿癌组织中CTNNB1主要呈阳性表达,而TP53主要呈阴性表达,二者与初诊甲胎蛋白、POST-TEXT分期、肿瘤直径、有肿瘤侵袭或转移密切相关,有望作为评估HB患儿预后的生物学指标。

三阴性乳腺癌EGFR、Ki-67、P53及CTC表达与预后的关系研究

目的探讨三阴性乳腺癌表皮生长因子受体(EGFR)、细胞核增殖相关抗原Ki-67(Ki-67)、P53及循环肿瘤细胞(CTC)表达与预后的关系。方法选取95例三阴性乳腺癌患者,免疫组化检测病理组织标本中EGFR、Ki-67、P53表达;所有患者接受8个周期化疗,采用膜滤过分离肿瘤细胞技术(ISET)检测化疗前后的CTC表达,并分析化疗前后CTC表达与化疗疗效的关系;分析CTC与EGFR、Ki-67、P53表达的关联性;随访患者无进展生存期(PFS),采用COX回归分析三阴性乳腺癌进展的危险因素。结果EGFR、Ki-67、P53阳性检出率分别为44.21%(42/95)、63.16%(60/95)、56.84%(54/95);化疗后患者的CTC阳性检出率(14.74%)低于化疗前(61.05%,P<0.05);化疗疗效与化疗后CTC阳性表达呈负相关(P<0.001);COX回归分析显示,临床分期为Ⅲ期、EGFR阳性、化疗后CTC阳性是三阴性乳腺癌进展的独立危险因素(P<0.05);不同临床分期患者PFS比较,Ⅰ期>Ⅱ期>Ⅲ期,EGFR阳性患者PFS短于阴性患者,化疗后CTC阳性患者PFS短于阴性患者(P<0.05)。结论化疗前EGFR阳性表达、化疗后CTC阳性表达与三阴性乳腺癌患者预后差有关,化疗后CTC阳性率越低患者化疗疗效越好。

组织中P53、人表皮生长因子受体2表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系

目的:探讨组织中P53、人表皮生长因子受体2(HER2)表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系.方法:选取2019年2月至2023年2月于本院采取手术治疗的60例乳腺癌患者作为研究对象.检测其组织中P53、HER2表达,分析其阳性表达与乳腺癌患者不同临床病理特征的相关性.结果:60例乳腺癌患者肿瘤组织中,P53、HER2阳性率分别为53.33%(32/60)和45%(27/60).Ⅲ期、组织低分化、发生淋巴结转移乳腺癌患者的P53、HER2阳性率,显著高于Ⅰ/Ⅱ期、组织中高分化、未发生淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P<0.05).乳腺癌患者肿瘤组织中P53、HER2阳性表达,与肿瘤分期、淋巴结转移情况呈正相关关系(r>0,P<0.05),与组织分化程度呈负相关关系(r<0,P<0.05).结论:乳腺癌患者肿瘤组织中P53、HER2多呈阳性表达.肿瘤分期、组织分化程度、淋巴结转移情况,可能与P53、HER2表达有关.

Hp、RASAL2、CDH1及TP53对胃癌前病变与早期胃癌的鉴别诊断价值

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)、RAS蛋白激活样因子2(RASAL2)、钙黏蛋白1(CDH1)及肿瘤抑制基因P53(TP53)对胃癌前病变与早期胃癌的鉴别诊断价值。方法选取2021年6月至2023年6月收治的早期胃癌52例,根据1:1选例原则另选取同期胃癌前病变52例、胃炎52例,分别纳入胃癌组、癌前组、胃炎组。比较3组及不同病理特征的早期胃癌患者Hp、RASAL2、CDH1、TP53阳性表达率,比较胃癌组Hp阳性、阴性患者RASAL2、CDH1、TP53阳性表达率,采用Spearman相关分析探讨各指标阳性表达与早期胃癌患者部分病理特征的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析联合检测对早期胃癌及胃癌前病变的鉴别诊断价值。结果3组Hp、CDH1、TP53阳性表达率胃癌组>癌前组>胃炎组,RASAL2阳性表达率胃癌组<癌前组<胃炎组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。胃癌组Hp阳性患者CDH1、TP53阳性表达率高于Hp阴性患者,RASAL2阳性表达率低于Hp阴性患者(P<0.05,P<0.01);早期胃癌患者Hp、RASAL2、CDH1、TP53阳性表达率在肿瘤浸润深度及淋巴结转移方面比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。Hp、CDH1、TP53阳性表达与早期胃癌肿瘤浸润深度、淋巴结转移均呈正相关,RASAL2阳性表达与之呈负相关(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,Hp、RASAL2、CDH1、TP53联合诊断胃癌前病变的曲线下面积(AUC)为0.904(95%CI:0.846,0.945),联合诊断早期胃癌的AUC为0.894(95%CI:0.819,0.946)。结论Hp、CDH1、TP53在早期胃癌组织中阳性表达率较高,RASAL2阳性表达率较低,联合检测对胃癌前病变及早期胃癌具有一定鉴别诊断价值,可作为临床鉴别诊断胃癌前病变、早期胃癌的辅助指标。

Function of apoptosis and expression of the proteins Bcl-2,p53 and C-myc in the development of gastric cancer

INTRODUCTIONIn China ,the incidence and mortality of gastric cancer rank the second among all cancers. Recent development of cancer [1-20].The aim of this study was investigat the insight of apoptosis and bcl-2, p53 and C-myc protein expression in the development of gastric cancer .

体外靶向TP53BP2基因shRNA慢病毒载体的构建及功能鉴定

目的 本研究旨在构建靶向肿瘤蛋白p53结合蛋白2(TP53BP2)基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,以抑制肝癌细胞TP53BP2的表达。方法 设计了2对针对TP53BP2基因的RNA干扰序列,并合成相应的shRNA序列。shRNA退火形成双链oligo序列后,应用基因重组技术构建重组质粒,经菌落PCR和测序鉴定,将重组正确的质粒进行慢病毒包装和滴度测定,并采用Western Blot、qRT-PCR和激光共聚焦技术观察慢病毒Lenti-shTP53BP2对HepG2细胞TP53BP2基因的干扰效果。结果 测序比对结果显示,各重组慢病毒载体与设计参考序列一致,提示各重组慢病毒体构建成功;重组慢病毒载体经慢病毒包装后,显示pHS-ASR-LW429、pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513的滴度分别为9.7×108TU/mL、6.1×108TU/mL和6.4×108TU/mL;用慢病毒Lenti-shTP53BP2(pHS-ASR-LW512和pHS-ASR-LW513)感染HepG2细胞后,与对照慢病毒(pHS-ASR-LW429)比,经Western Blot、qRT-PCR和激光共聚焦结果显示两个Lenti-shTP53BP2均能显著下调HepG2细胞TP53BP2基因水平和蛋白表达量。结论 本研究成功构建了靶向TP53BP2基因shRNA慢病毒载体,其能有效下调HepG2细胞TP53BP2的表达,为进一步研究TP53BP2在肝癌发生发展过程中的机制研究奠定了基础。

p53信号通路调控铁死亡在肝细胞癌中的作用机制

肝细胞癌(HCC)在我国是最常见的肝癌类型,其发生发展是一个复杂的病理过程。铁死亡作为一种新的细胞死亡方式,在治疗HCC方面有巨大的潜在作用。本文介绍了抑癌因子p53在调控铁死亡中的作用机制,简述其在HCC发生、发展中的作用。抑癌因子p53可以通过影响溶质载体家族7成员11、亚精胺/精胺N1-乙酰转移酶1、谷氨酰胺酶2、二肽基肽酶4和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A来促进或抑制铁死亡,进而影响HCC的进展,通过调控铁死亡通路治疗HCC具有很大的应用前景。

三阴性乳腺癌组织中雄激素受体、肿瘤抑制蛋白P53的表达及与预后的关系

目的 探讨雄激素受体(AR)、肿瘤抑制蛋白p53(P53)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及与患者预后的关系。方法 将52例女性TNBC患者纳入观察组,同期收治的50例女性非三阴性乳腺癌(NTNBC)患者纳入对照组,所有患者均经手术病理检查确诊。运用免疫组织化学法检测2组癌组织内的AR、P53表达情况;同时分析AR、P53的表达与TNBC患者临床病理特征的关系。随访3年,以Kaplan-Meier法分析AR、P53表达与TNBC患者预后的关系。结果 观察组的AR阳性表达率低于对照组,P53阳性表达率高于对照组,有统计学差异(P<0.05)。AR、P53的表达与TNBC患者的组织学分级、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与年龄、绝经状态、肿瘤直径无关(P>0.05)。Kaplan-Meier结果显示:AR阴性表达患者的3年生存率[40.63%(13/32)]低于AR阳性表达[75.00%(15/20)],P53阳性表达患者的3年生存率[40.00%(16/40)]低于P53阴性表达[75.00%(9/12)],有统计学差异(P<0.05)。结论 TNBC患者的癌组织内的AR呈阴性表达,P53呈阳性表达,AR、P53的表达与患者的组织学分级、TNM分期、淋巴结转移联系紧密,且AR阴性表达、P53阳性表达患者生存率更低,预后更差。

p53与线粒体动力学的相互作用及其在癌症治疗中的应用

p53蛋白是癌细胞代谢过程和代谢重编程的关键调节因子,在细胞死亡和存活之间保持平衡。线粒体动力学与细胞周期、免疫、凋亡和线粒体质量控制等许多细胞过程密切相关。p53和线粒体动力学之间存在复杂的相互作用,二者相互调节和相互影响,在细胞生理和病理过程中具有重要意义。本研究综述p53和线粒体动力学之间的相互作用机制及其在癌症中的作用,探讨相关调控机制的治疗策略。通过揭示细胞代谢和癌症发生机制,旨在为癌症治疗提供新的思路和方法。

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

ATRX、P53表达的相关性及联合多因素对胶质瘤预后的意义

目的探讨脑胶质瘤患者中ATRX失表达与P53过表达的相关性,并分析二者与临床多因素在胶质瘤诊断及预后中的意义。方法收集2014年1月—2020年12月徐州医科大学附属医院神经外科收治的术后病理诊断为胶质瘤的患者92例,其中包括星形细胞瘤(WHOⅡ、Ⅲ级)30例、少突胶质细胞瘤(WHOⅡ、Ⅲ级)50例、胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)12例,并使用免疫组织化学染色法检测ATRX与P53表达情况,并统计不同年龄、性别与二者间的关系;χ~2检验分析ATRX失表达、P53过表达与不同病理类型脑胶质瘤的关系且二者表达之间的关系用Spearman等级相关分析法检验;Kaplan-Meier生存曲线分析二者对胶质瘤患者预后的影响,其他临床因素纳入多因素Cox回归分析。结果ATRX与P53表达与胶质瘤病理类型相关(P<0.05);相关性分析显示,胶质瘤中ATRX与P53表达呈负相关(r=-0.580,P<0.01);多因素分析表明,胶质瘤患者的年龄≥60岁、病理分级WHOⅢ-Ⅳ级、术前KPS评分<60分、术后无放化疗、肿瘤直径≥5 cm、肿瘤非全切、ATRX失表达、P53过表达是预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论在人脑胶质瘤患者中,ATRX失表达与P53过表达密切相关,与临床其他多因素联合可更好地对胶质瘤患者的预后进行评估。

基于网络药理学方法和动物实验探讨五福健膝方治疗膝骨关节炎的作用机制

目的:探讨五福健膝方治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:①网络药理学研究。采用网络药理学方法筛选五福健膝方治疗KOA的靶点。②动物实验。将18只10周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,每组6只。模型组和五福健膝方组小鼠采用内侧半月板失稳术在右后肢构建KOA模型,假手术组小鼠仅切开对应区域皮肤和关节囊后缝合。造模手术后第2天,五福健膝方组小鼠以五福健膝方汤剂(生药浓度1.1 g·mL^(-1))灌胃,每次0.6 mL,每天1次,连续灌胃8周;模型组和假手术组小鼠以等量生理盐水灌胃。药物干预结束后,收集小鼠右后肢膝关节,分别进行股骨远端Micro-CT扫描、组织病理学观察(阿尔新蓝-苏木素/橙黄G染色)及免疫组织化学染色。免疫组织化学染色主要针对Ⅱ型胶原蛋白与网络药理学研究确定的核心靶点蛋白,测量Ⅱ型胶原蛋白表达阳性区域的厚度(视为软骨厚度),同时计算核心靶点蛋白阳性细胞百分比。结果:①网络药理学研究结果。通过网络药理学研究确定的五福健膝方治疗KOA的关键靶点基因15个,其中TP53为核心靶点基因,其对应的蛋白为P53蛋白。②动物实验结果。股骨远端Micro-CT检查结果显示,模型组较假手术组骨表面积骨体积比值降低(P=0.028)、骨体积分数升高(P=0.003),五福健膝方组较模型组骨表面积骨体积比值升高(P=0.004)、骨体积分数降低(P=0.048)。膝关节软骨组织阿尔新蓝-苏木素/橙黄G染色显示,模型组小鼠软骨缺失明显,五福健膝方组小鼠软骨丢失较模型组明显改善。免疫组织化学染色结果显示,模型组小鼠膝关节软骨厚度较假手术组减小(P=0.001),五福健膝方组小鼠膝关节软骨厚度较模型组增加(P=0.048);模型组小鼠膝关节软骨组织中P53阳性细胞百分比较假手术组增加(P=0.000),五福健膝方组小鼠膝关节软骨组织中P53阳性细胞百分比较模型组减少(P=0.000)。结论:五福健膝方能够有效延缓KOA模型小鼠的软骨退变,其机制可能与其抑制P53蛋白表达有关。

CyclinD1、p21^(WAF1)、p53及Ki-67在肝细胞癌中的表达及与预后的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)中cyclin D1、p21、p53及Ki-67蛋白的表达及其与HCC预后的关系。方法选择2000年1月-2005年1月在解放军总医院行手术切除的80例HCC患者的肝组织标本,采用EliVision法进行cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67免疫组化染色,分析其表达水平与HCC病理特征的关系,并进行生存分析。结果 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67在HCC中的阳性表达率分别为38.8%、40.5%、65.4%及80.0%,均明显高于癌旁肝组织(分别为19.0%、11.5%、0.0%、6.3%,P<0.005)。相关分析显示,cyclin D1阳性表达与核分级呈正相关(P=0.041),p21WAF1及p53阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.032、P=0.031)和血管浸润(P=0.036、P=0.011)呈正相关,Ki-67阳性表达与肿瘤分化程度(P=0.004)、核分级(P=0.045)和血管浸润(P=0.001)呈正相关。生存分析显示,cyclin D1及Ki-67高表达者预后较差。Ki-67阳性表达与p53(P=0.000)及p21WAF1(P=0.047)阳性表达有明显相关性,其他各蛋白之间表达无明显相关。Cox回归模型分析显示,肿瘤大小(P=0.042)、肿瘤数目(P=0.004)及血管浸润(P=0.000)为HCC的独立预后因素。结论 Cyclin D1、p21WAF1、p53及Ki-67可能参与了HCC的生物学进程;cyclin D1及Ki-67阳性表达对HCC预后的判断有一定价值。

ERCC1、RRM1和p53表达与Ⅰ-Ⅱ期肺癌术后预后相关性分析

背景与目的顺铂是肺癌化疗的基础药物,而ERCC1、RRM1、p53表达水平与铂类耐药和预后有关,本研究分析Ⅰ-Ⅱ期NSCLC的ERCC1、RRM1、p53表达与术后生存期的关系,探讨它们与患者预后及与顺铂耐药的相关性。方法收集1992年2月-l994年1月有随访的75例Ⅰ-Ⅱ期NSCLC术后患者,Ⅰ期术后随机分成不化疗组和化疗组,Ⅱ期术后均作化疗,化疗采用以DDP为基础的方案。免疫组化法检测手术标本的ERCC1、RRM1、p53表达,并进行统计分析。结果Ⅰ期ERCC1高表达患者预后明显好于ERCC1低表达,1、3、5年生存率分别为100.00%、91.30%、86.74%和96.43%、60.71%、57.14%(P=0.0058)。Ⅰ期不化疗组ERCC1高表达者生存情况优于ERCC1低表达,中位生存期(MST)分别为72.00+个月和64.67个月(P=0.0327)。Ⅱ期与Ⅰ期相反,ERCC1低表达者预后好,ERCC1低表达者的MST为60.00+个月,而高表达者仅为25.50个月(P=0.0442)。RRM1、p53表达与术后生存率无关。结论ERCC1高表达是Ⅰ期NSCLC术后预后良好的独立指标;含DDP化疗延长了Ⅱ期ERCC1低表达患者的生存,术后可根据ERCC1的水平决定是否选用含DDP化疗;ERCC1表达对NSCLC术后生存期的影响在Ⅰ期和Ⅱ期DDP化疗患者中可能不尽相同,ERCC1高表达在Ⅰ期NSCLC术后展现的是其保护的一面,而Ⅱ期以化疗抵抗为主。

p53、bcl-2、caspase-3在非小细胞肺癌组织中的表达及相关性分析

目的探讨p53、bcl-2、caspase-3在老年晚期非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及相关性。方法收集经手术后病理学检查确诊的117例老年晚期NSCLC患者的临床资料和存档石蜡组织标本。免疫组织化学方法检测肿瘤组织中p53、bcl-2、caspase-3蛋白的表达情况,分析p53、bcl-2、caspase-3蛋白表达的相关性及其与患者临床病理学特征的关系。结果 117例老年晚期NSCLC组织标本中,p53、bcl-2、caspase-3的阳性表达率分别为42.74%(50/117)、38.46%(45/117)、36.75%(43/117)。p53阳性表达率在低分化、中央型、有淋巴结转移的鳞癌患者中较高;bcl-2阳性表达率在高分化、有淋巴结转移患者中较高;caspase-3阳性表达率在高分化、无淋巴结转移患者中较高。NSCLC组织中bcl-2与caspase-3表达呈正相关(r=0.262,P=0.003)。结论 p53、bcl-2、caspase-3可能在老年晚期NSCLC的发生和发展过程中起重要调控作用,为临床病理诊断提供理论依据。

突变P53功能研究新进展与个性化的肿瘤治疗新策略

p53是迄今为止研究最多的一种抑癌蛋白,最新研究仍在不断地揭示p53在调控机体代谢、生殖方面的新功能。同时,也揭示了不同p53突变蛋白的获得性新功能在肿瘤发生中的促进作用。这些研究对于了解p53突变的个性化新功能,寻找再激活野生型p53,校正突变p53的新途径奠定了基础,不同突变p53蛋白的个性化治疗将是未来肿瘤治疗的热点。文章综述了已发现的一些突变p53的获得性新功能,及针对不同的p53功能缺陷进行的p53蛋白功能再激活的策略:通过小分子或多肽再激活肿瘤细胞中的p53突变蛋白的野生型功能;通过重组的腺病毒在肿瘤细胞中表达野生型p53蛋白;通过抑制MDM2与p53的相互作用稳定野生型p53蛋白。对p53不同位点突变的深入研究可以帮助我们制定更合理的个性化治疗方案,寻求更有效的肿瘤治疗新途径。

p53-miR-34a-SIRT1反馈环在血管内皮祖细胞复制性衰老过程中的调控作用及机制

目的:研究p53-miR-34a-SIRT1反馈环在血管内皮祖细胞(EPC)复制性衰老过程中的调控作用及机制。方法:培养并鉴定由脐带血来源的EPC;观察第三代和第六代EPC在衰老、凋亡、周期和血管形成等方面的差异;检测第三代和第六代EPC中p53、乙酰化的p53(Ac-p53)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达情况;构建携带微小核糖核酸(miR)-34a抑制因子的慢病毒载体,明确外源性miR-34a抑制因子能否延缓第六代EPC的凋亡。结果:成功培养了脐带血来源的EPC。第六代EPC的衰老率和凋亡率明显高于第三代EPC,细胞周期主要停留在G0/G1期;第六代EPC的p53表达量高于第三代EPC,Ac-p53和SIRT1表达则相对较低,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。转染携带miR-34a抑制因子的慢病毒载体后,第六代EPC衰老情况有所改善,血管形成能力也增强,晚期凋亡率明显减少。结论:p53-miR-34a-SIRT1是EPC复制性衰老过程中的重要反馈调节机制,miR-34a抑制因子可能是延缓EPC衰老的靶点。

p14^(ARF)、p53蛋白表达与H101治疗鼻咽癌疗效的关系

目的:观察肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达状态与E1B缺陷型腺病毒治疗鼻咽癌疗效的关系,探讨E1B缺陷型腺病毒(简称H101)基因治疗的作用机制。方法:应用免疫组织化学方法对36例H101治疗的晚期鼻咽鳞癌病例进行肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白检测,分析肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达与H101临床疗效的关系;结果:突变型p53和p14ARF蛋白在36例晚期鼻咽鳞癌中总阳性表达率分别为55.6%和44.4%;突变型p53+p14ARF+(即p14ARF蛋白无缺失)患者均无治疗有效病例;突变型p53+p14ARF-(即p14ARF蛋白有缺失)患者中有4例有效;结论:对于p53基因无突变的恶性肿瘤,p14ARF基因缺失可能是H101能在肿瘤细胞内有效复制并杀死肿瘤细胞的一个重要影响因素。