基于HNRNPA2B1及其调控miRNAs构建肺腺癌TP53突变人群的预后模型

目的基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库多组学数据构建肺腺癌TP53突变人群的预后模型,探讨核内不均一核糖核蛋白A2/B1(HNRNPA2B1)与肺腺癌TP53突变之间的相关性。方法通过生物信息学方法搜集TCGA和基因表达数据库(GEO)中的突变数据,分析TP53突变对肺腺癌病人HNRNPA2B1表达及预后的影响;将病人随机分为训练集和验证集(7∶3),筛选潜在的受HNRNPA2B1调控的miRNAs构建模型、绘制ROC曲线,并通过列线图可视化。结果HNRNPA2B1在TP53突变肺腺癌中显著高表达(P<0.001),且高表达病人预后不良(P=0.031)。筛选出9个受HNRNPA2B1调控且与预后相关的miRNAs构建预后模型,结果表明列线图对预后模型具有较好的区分度和准确度(χ^(2)=9.443,P=0.306)。结论HNRNPA2B1与肺腺癌TP53突变存在正相关,基于HNRNPA2B1调控的miRNAs可建立预测TP53突变肺腺癌病人预后的良好模型。

LHON的分子遗传学研究进展

Leber遗传性视神经病变(LHON)表现典型的母系遗传特征,与线粒体DNA(mtDNA)突变相关。然而单一的mtDNA遗传模式不能解释LHON患者男性占优势、外显率逐渐减少、女性患者发病年龄较晚和仅视神经受累等其他的临床特征。对LHON的两种遗传模式即mtDNA遗传模式和mtDNA与核基因互作遗传模式方面的研究进展进行综述。

阿尔茨海默病转基因小鼠肝内核受体和细胞色素氧化酶基因转录谱变化

目的探讨阿尔茨海默病(AD)病变与肝Ⅰ相药酶基因表达的相关性,为早期和长期药物干预AD病程提供实验参考。方法制备B6.129-PS1M146V/APPSwe/Tau P301L三重转基因AD模型小鼠(3×Tg AD小鼠)及同系非转基因正常小鼠(NTg小鼠)肝组织总RNA和总蛋白质样品,逆转录PCR/实时荧光定量PCR技术检测肝核因子4(HNF4)等7种核受体和细胞色素氧化酶P4501a2(Cyp1a2)等7种CYP基因mRNA相对表达量,比较基因转录谱差异;Western蛋白印迹法检测技术检测差异显著的目的基因蛋白质水平。结果与NTg小鼠相比,3×Tg AD小鼠HNF4、雌激素受体(ERα)及组成型雄甾烷受体均下调近66%(P<0.01),孕烷X受体和芳香烃受体分别上调1.84和1.64倍(P<0.05),糖皮质激素受体及受氧化应激激活的核因子E2相关因子未见显著变化;主要药物代谢酶Cyp2b10及Cyp2a5 mRNA分别降低至正常小鼠水平的3%(即下降97%,P<0.01)和30%(P<0.05),Cyp2e1、Cyp2j9、Cyp3a11基因的转录水平则分别上调了2.26倍、2.42倍和3.66倍(P<0.05);Cyp1a2和Cyp2d22基因转录在两种小鼠中无明显差异。Western蛋白印迹分析证实,3×Tg AD小鼠ERα和CYP2a5明显下降(P<0.05)而Cyp3a11表达则明显上升(P<0.05),蛋白质表达变化的趋势与其相应mRNA水平改变一致。结论 3×Tg AD小鼠肝内核受体基因及CYP酶基因转录谱发生显著改变,提示AD病变可能干扰机体肝代谢功能,对机体内源性及外源性化合物生物转运产生影响。

理脾调脂胶囊对血脂失调症大鼠及ApoE基因敲除小鼠PPARs mRNA的调控作用

目的研究理脾调脂胶囊对血脂失调症大鼠及ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠PPARα、γmRNA的调控作用,探讨其调节脂质代谢的作用机制。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、理脾调脂胶囊治疗组(理脾调脂组)、血脂康对照组(血脂康组),造模4周,将ApoE-/-小鼠30只随机分为空白组、血脂康组、理脾调脂组。理脾调脂组大鼠、ApoE-/-小鼠(以下简称大、小鼠)每日灌胃理脾调脂胶囊,血脂康组每日灌胃血脂康,用药8周。酶法测定大、小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)浓度,沉淀法测定大、小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);内参照模板法荧光定量PCR检测大、小鼠肝脏PPARα、γmRNA的表达。结果理脾调脂组大、小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度较模型组、空白组显著降低(P<0.01),HDL-C浓度显著提高(P<0.01),大、小鼠PPARα、γmRNA表达较模型组(或空白组)显著提高(P<0.01);与血脂康组比较,理脾调脂组大、小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度均降低(P<0.05),HDL-C浓度均显著提高(P<0.01,P<0.05),PPARα、γmRNA表达明显提高(P<0.05)。结论理脾调脂胶囊能显著提高实验性血脂失调症大、小鼠肝脏PPARα、γmRNA的表达,具有调控核因子而影响血脂代谢的作用。

鳖甲煎丸对CCl4致大鼠肝纤维化模型中NF-κB信号通路的影响

目的：通过研究鳖甲煎丸对四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化的抑制作用及其对核转录因子-κB（NF-κB）信号通路信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制。方法：使用CCl4复制肝纤维化大鼠模型,鳖甲煎丸药物溶液灌胃,8周末腹主动脉采血,留肝组织检测指标。苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理形态学改变;酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠血清中肝纤维化4项,基质金属蛋白酶（MMP）-2,MMP-9,组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达;免疫组化法检测大鼠肝组织中p65,转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝组织中p65,NF-κB抑制蛋白（IκB）α,IκB激酶（IKK）α/β,TGF-β1的表达。结果：病理学结果显示模型组肝小叶被破坏,纤维组织增生严重,而鳖甲煎丸治疗组肝细胞坏死减少,纤维组织增生明显减少,纤维间隔薄;与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组大鼠肝纤维化4项指标,TIMP-1含量明显降低（P〈0.05）,而MMP-2,MMP-9含量明显上升（P〈0.05）;免疫组化结果显示鳖甲煎丸治疗组肝组织p65,TGF-β1表达较模型组明显降低,Western blot检测结果显示与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组肝组织中p65,TGF-β1蛋白表达明显减少（P〈0.05）,IκBα蛋白表达明显增加（P〈0.05）,而IKKα/β则无显著变化。结论：鳖甲煎丸能够显著减轻四氯化碳致大鼠肝纤维化的程度,减缓其发展,主要与鳖甲煎丸能够抑制p65的表达,从而阻断NF-κB信号通路,减少其下游靶基因TIMP-1,TGF-β1的合成,上调MMP-2,MMP-9的表达,从而加快细胞外基质的降解有关。

消脂汤对FFA诱导NASH细胞模型的影响及其相关机制

目的:探讨消脂汤对游离脂肪酸(FFA)诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)细胞模型的作用及机制。方法:用0.5μmol·L-1FFA诱导Hep G2细胞建立NASH细胞模型,用消脂汤及非诺贝特干预NASH细胞模型;油红O染色观察细胞内脂滴含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)p65,IκB激酶(IKKβ),IκB磷酸化激酶[Phospho-IKKα/β(Ser176/180)],胰岛素受体底物1磷酸化蛋白[Phospho-IRS-1(Ser^(307))],胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达。结果:FFA刺激24 h后,模型组内脂滴含量,细胞上清液中TNF-α,IL-6含量高于正常组(P<0.01),IKKβ,p-IKKα/β(Ser176/180),p-IRS-1(Ser^(307)),NF-κB(核蛋白)表达明显增加(P<0.01),IRS-1蛋白表达减少(P<0.05),各给药组p-IKKα/β(Ser176/180),p-IRS-1(Ser^(307)),NF-κB p65(核蛋白)表达减少(P<0.01),尤其是消脂汤高浓度组较非诺贝特p-IKKα/β(Ser176/180),p-IRS-1(Ser^(307))蛋白表达显著减少(P<0.01),各给药组IRS-1蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:消脂汤可改善FFA诱导的NASH细胞模型中脂质沉积及炎症反应,其机制可能与抑制细胞内IKKα/β,IRS-1 Ser^(307)的磷酸化及IKKβ,NF-κB p65(核蛋白)表达有关。

肝细胞癌变过程中核因子-κB及其基因的动态表达与定量分析

目的观察肝癌形成过程中核因子-κB（NF-κB）及NF-κB mRNA动态表达与作用机制。方法雄性SD大鼠以2乙酰氨基芴制备肝癌模型，经病理组织学分析肝细胞形态学变化，定量观察NF-κB动态变化，以巢式PCR分析NF-κB mRNA的表达。并以自身配对法收集经手术切除后的肝癌及其癌周组织，定量分析肝癌组织中NF-κB表达及病理学特征。结果诱癌后在肝细胞呈颗粒样变性、不典型增生、肝细胞癌形成，NF-κB及基因表达呈梯度增加。NF-κB阳性表达呈棕黄色颗粒状染色，癌组织NF-κB点灶状表达，定位于胞质和细胞核；癌周组织NF-κB主要定他于胞质，未见细胞核阳性。癌变过程中NF-κB mRNA表达明显增强。人肝癌组织NF-κB（69．3±40．2）pg／mg，明显高于癌周组织（21．0±17．2）pg／mg（t=6．54，P〈0．01）。癌组织NF-κB表达阳性牢为100％，癌周组织为68．6％（x^2=13．05，P〈0．01）。其表达与肿瘤分化程度、肿瘤数目和肿瘤直径无关。结论NF-κB异常表达与肝癌的发生发展有关，表达抑制有助于肝癌治疗。

锌指核酸内切酶:基因操作的有力工具

针对动植物进行基因靶向操作的技术,是解析基因功能、研究疾病,以及农业经济生产中一个有用的工具。至今,基因靶向操作主要是通过在胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES cell)中进行同源重组或者是体细胞核转移的方法进行,但同源重组方法由于需要ES细胞而被限制在个别物种,而核转移方法存在核去分化、效率低、成本高的缺陷。近几年,一种基于锌指核酸内切酶(zinc-finger nuclease,ZFN)基因靶向修饰的新技术被应用于包括植物、果蝇、爪蟾、斑马鱼和大鼠等不同物种的基因操作。通过胚胎注射ZFN的质粒或是mRNA可以有效地定靶并迅速地在内源基因上引起可遗传的突变。ZFN介导基因靶向敲除的可行性,使得那些无法获得ES细胞和克隆技术支持的物种的基因靶向修饰成为可能。

黄芩苷抑制错配修复基因缺失的结直肠癌裸鼠原位移植瘤的实验研究

目的研究黄芩苷抑制错配修复基因hMLHI缺失的人结肠癌HCT－116细胞在裸鼠原位移植瘤生长、转移的作用。方法建立人结肠癌HCT-116细胞裸鼠荧光原位移植模型。60只荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组（G1），50、100、200mg／kg黄芩苷组（C2～G4），每组15只。治疗组分别给予相应剂量的黄芩苷灌胃，每日2次；阴性对照组采用等容量5％NaHCO，灌胃。荧光影像系统下观察原发肿瘤的体积、血管密度以及肿瘤转移情况，并分析实验动物的体质量、生存状况和死亡率。结果药物干预后的第14、21、28天，G2～G4组肿瘤生长速度低于G1组，荧光测量的肿瘤体积（mm^3）明显小于G1（14d：832±637；21d：2012±1566；28d：2494±1557），差异具有统计学意义（F=4．433，P〈0．05），但治疗组间比较差异无统计学意义。实验终点（第28天）时，G2、G3组实验动物的存活率分别为9／15、13／15，生存状态分析显示G3组明显优于G1组和G4组，差异具有统计学意义（x2=4．665、3．980，P〈0．05）；体内开放观察结果显示各组间原发肿瘤的重量、表面血管密度和肿瘤转移情况差异均无统计学意义。结论黄芩苷对错配修复基因hMLH1缺失的结肠癌HCT-116细胞裸鼠原位移植瘤生长具有明显的抑制作用；100mg／kg可能是一个比较理想的治疗剂量。