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肾衰Ⅱ号方对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织AngⅡ及nNOS蛋白表达的影响 被引量:12
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作者 秦军燕 王琛 +2 位作者 邵命海 杨婧 李睿琳 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1280-1284,共5页
目的观察肾衰Ⅱ号方对5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠残余肾组织纤维化及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取57只SD雄性大鼠... 目的观察肾衰Ⅱ号方对5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠残余肾组织纤维化及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取57只SD雄性大鼠按5/6(A/I)肾衰模型法制备大鼠模型。造模后随机分为模型组、肾衰Ⅱ号方组(中药组,肾衰Ⅱ号方浓煎液2mL灌胃)和西药组(氯沙坦钾合福辛普利钠混悬液,2mL灌胃),每组15只,另选取15只大鼠作为正常组,正常组和模型组予等量纯净水灌胃,各组均每天干预1次,连续干预60天。检测各组大鼠SCr、BUN、内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,CCr),采用Western blot法测定大鼠残余肾皮质、髓质AngⅡ和nNOS蛋白表达,观察肾组织病理形态。结果与正常组比较,模型组SCr、BUN升高,CCr降低(P<0.01),提示造模成功。与本组干预前比较,中药组及西药组SCr、BUN水平下降,CCr水平升高(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组SCr、BUN水平及髓质AngⅡ表达均降低(P<0.01,P<0.05),CCr水平及皮质、髓质nNOS表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。肾组织病理显示,中药组病理变化明显减轻,优于模型组。结论肾衰Ⅱ号方可以改善5/6肾切除CRF大鼠的肾功能,减轻肾间质纤维化,其作用机制可能与调节肾内失衡的AngⅡ和nNOS信号转导途径有关。 展开更多
关键词 肾衰号方 血管紧张素 神经型一氧化氮合酶 肾间质纤维化
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Ⅱ型糖尿病大鼠海马Alzheimer病样Tau蛋白过度磷酸化修饰及机制探讨 被引量:6
2
作者 杨雁 胡蜀红 +1 位作者 张建华 张木勋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期659-665,共7页
Tau蛋白过度磷酸化是Alzheimer病(Alzheimer′sdisease,AD)的一个重要特征.本研究检测了Ⅱ型糖尿病大鼠海马tau蛋白磷酸化水平,对其形成机制进行探讨.以同龄正常Wistar大鼠作为对照,高脂高蛋白高糖饮食加小剂量链脲佐菌素(streptozotoci... Tau蛋白过度磷酸化是Alzheimer病(Alzheimer′sdisease,AD)的一个重要特征.本研究检测了Ⅱ型糖尿病大鼠海马tau蛋白磷酸化水平,对其形成机制进行探讨.以同龄正常Wistar大鼠作为对照,高脂高蛋白高糖饮食加小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射诱导造Ⅱ型糖尿病模型(T2DM组).放免法检测血浆胰岛素;葡萄糖氧化酶法检测血浆葡萄糖;蛋白质印迹技术检测各组大鼠海马内总tau蛋白、tau蛋白上部分位点磷酸化、神经细胞膜上胰岛素受体及葡萄糖转运子3(glucosetransport3,GLUT3)水平;表面等离子共振技术(surfaceplasmonresonance,SPR)检测细胞膜上胰岛素受体与血浆胰岛素结合力;γ-32P标记的ATP和特异性底物肽检测海马内胰岛素信号传导系统中的关键酶糖原合酶激酶-3β(glycogensynthasekinase-3β,GSK-3β)活性.结果显示,T2DM组血浆血糖、血浆胰岛素及运用HOMA-IR公式计算的胰岛素抵抗指数显著高于对照组.蛋白质印迹结果显示两组大鼠海马回总tau蛋白水平无差异;T2DM组中tau蛋白在Ser199、Thr212、Ser214、Thr217、Ser396及Ser422位点上的磷酸化水平均显著高于对照组;T2DM组海马神经细胞膜上胰岛素受体水平及与胰岛素结合的功能均显著低于对照组;GSK-3β活性检测结果显示,T2DM组大鼠模型海马回中GSK-3β活性明显增高.研究结果表明,Ⅱ型糖尿病中由于胰岛素抵抗导致GSK-3β激活从而出现AD样tau蛋白的过度磷酸化,葡萄糖代谢紊乱也可能在tau蛋白的过度磷酸化起一定作用. 展开更多
关键词 型糖尿病 阿尔茨海默病 胰岛素抵抗 TAU蛋白 糖原合酶激酶-3Β
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分子模拟在门冬酰胺酶Ⅱ表面呈现多肽技术中的应用(英文)
3
作者 杨欣 李文佳 刘景晶 《生物信息学》 2007年第2期70-73,共4页
简要地介绍了表面呈现技术和组合酶技术的应用以及发展前景,描述了一种应用分子建模系统辅助进行抗动脉粥样硬化的嵌合酶疫苗的构建过程。门冬酰胺酶活力测定结果证明,嵌合酶的空间结构和活性位点均能够依照设计要求保留。提供了一种生... 简要地介绍了表面呈现技术和组合酶技术的应用以及发展前景,描述了一种应用分子建模系统辅助进行抗动脉粥样硬化的嵌合酶疫苗的构建过程。门冬酰胺酶活力测定结果证明,嵌合酶的空间结构和活性位点均能够依照设计要求保留。提供了一种生物信息学手段在组合生物合成领域中的应用方法。 展开更多
关键词 组合生物合成 表面呈现 分子建模
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AngⅡ/AT_1R通路通过激活人脐静脉内皮细胞PP2A导致eNOS Ser1177磷酸化水平下调 被引量:6
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作者 王阿磊 丁菁 +4 位作者 王凌霄 张倩 黄华 姜君财 陆德琴 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1558-1563,共6页
目的:初步探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1 receptor,AT_1R)通路是否通过激活人脐静脉内皮细胞蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)导致内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177磷酸化... 目的:初步探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1 receptor,AT_1R)通路是否通过激活人脐静脉内皮细胞蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)导致内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177磷酸化水平下调。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照(control)组、AngⅡ处理组、单纯坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性阻断剂)组和CAN预处理+AngⅡ组。用Western blot方法检测各组eNOS总蛋白表达、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2Ac蛋白表达、PP2Ac-Tyr307磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2^(PP2A)表达水平。采用化学比色法检测各组细胞培养基中的NO含量。结果:与control组相比,AngⅡ处理后eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加eNOS Ser1177磷酸化水平及细胞培养基中的NO含量(P<0.05);各组间eNOS蛋白表达差异无统计学显著性。与control组比较,AngⅡ处理后PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达降低(P<0.05);与同一浓度AngⅡ组相比,CAN预处理可增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达(P<0.05);各组间PP2Ac蛋白表达差异无统计学显著性。结论:AngⅡ可通过AT_1R通路导致人脐静脉内皮细胞eNOS Ser1177磷酸化水平下调,NO合成减少,这一效应可能与AngⅡ/AT_1R通路降低PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平、导致PP2A活性增强有关。特异性AT_1R阻断剂CAN预处理可通过增加PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I_2^(PP2A)表达水平而降低PP2A活性,最终上调eNOS Ser1177磷酸化水平,恢复eNOS活性。 展开更多
关键词 血管紧张素 血管紧张素1型受体 蛋白磷酸酶2A 内皮型一氧化氮合酶 磷酸化
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Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中Ⅱ型聚酮合酶基因sahA的功能分析 被引量:2
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作者 李华 鲁慧囡 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期12-17,共6页
以酮基合酶基因KSa的简并性引物对Streptomyces sahachiroi基因组进行扩增,发现除了已知的阿嗪霉素B生物合成基因簇以外,还存在一个潜在的聚酮合酶(PKS)基因sahA。对sahA编码的氨基酸序列进行同源性比对及进化树分析,结果表明,sahA属于... 以酮基合酶基因KSa的简并性引物对Streptomyces sahachiroi基因组进行扩增,发现除了已知的阿嗪霉素B生物合成基因簇以外,还存在一个潜在的聚酮合酶(PKS)基因sahA。对sahA编码的氨基酸序列进行同源性比对及进化树分析,结果表明,sahA属于Ⅱ型聚酮合酶基因家族,与合成孢子色素的基因亲缘关系较近。通过单交换中断sahA基因后,链霉菌孢子的颜色由铅灰色变为白色,而产孢时间、孢子的产量以及其抗紫外线的能力都没有变化,对抗生素阿嗪霉素B的产量也没有影响。初步证实这个潜在的Ⅱ型聚酮合酶基因sahA很可能与S.sahachiroi孢子色素的生物合成有关。 展开更多
关键词 STREPTOMYCES sahachiroi ATCC 33158 型聚酮合酶 孢子色素 进化树分析 单交换
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Ⅱ型硫脂酶与次生代谢产物合成 被引量:1
6
作者 乔龙亮 朱鹏 庞建虎 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1115-1124,共10页
Ⅱ型硫脂酶(type Ⅱ thioesterases,TEⅡ)属于α/β水解酶,含有保守的催化三元件(Ser-His-Asp),广泛存在于非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetases,NRPS)和聚酮合成酶(polyketide synthases,PKS)系中。与Ⅰ型硫脂酶(type Ⅰ... Ⅱ型硫脂酶(type Ⅱ thioesterases,TEⅡ)属于α/β水解酶,含有保守的催化三元件(Ser-His-Asp),广泛存在于非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide synthetases,NRPS)和聚酮合成酶(polyketide synthases,PKS)系中。与Ⅰ型硫脂酶(type Ⅰ thioesterases,TEⅠ)不同,TEⅡ作为一个独立的蛋白质行使硫脂键水解功能。以往的数据研究发现,合成途径中TEⅡ基因缺失导致聚酮(polyketides,PK)或非核糖体肽(nonribosomal peptide,NRP)的产量显著降低。本文通过对硫酯酶(thioesterases,TE)的聚类分析,显示序列同源性方面TE聚类成两个不同的进化枝,一个含有所有TEⅠ,第二个包含所有TEⅡ。对TEⅡ的多序列比对及结构分析,结果显示TEⅡ序列中的标记序列"GHSMG"为保守序列,结构的差异性导致TEⅡ功能的差异性,综合前期相关数据研究,对TEⅡ在生物合成中的功能途径进行了概括性论述,并对其今后在次生代谢物合成研究中的应用进行了展望,以期加深对TEⅡ的认识和理解。 展开更多
关键词 聚酮合酶 非核糖体肽合成酶 型硫脂酶 编辑功能 次生代谢
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尾加压素Ⅱ及内皮型一氧化氮合酶与子痫前期关系的研究
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作者 李艳秋 《吉林医学》 CAS 2013年第18期3539-3540,共2页
目的:探讨尾加压素Ⅱ及内皮型一氧化氮合酶与子痫前期关系。方法:选择子痫前期的孕妇30例,将其命名为观察组,同时另选择30例体检正常的孕妇作为对照组。于清晨抽取孕妇的空腹全血2 ml,经抗凝、分离后取上层血浆采用ELISA法,检测尾加压... 目的:探讨尾加压素Ⅱ及内皮型一氧化氮合酶与子痫前期关系。方法:选择子痫前期的孕妇30例,将其命名为观察组,同时另选择30例体检正常的孕妇作为对照组。于清晨抽取孕妇的空腹全血2 ml,经抗凝、分离后取上层血浆采用ELISA法,检测尾加压素Ⅱ及内皮型一氧化氮合酶的含量,并进行对比。结果:观察组的尾加压素Ⅱ的含量较对照组明显增高;观察组的一氧化氮合酶的含量较对照组显著降低。结论:尾加压素Ⅱ及内皮型一氧化氮合酶的平衡失调可能是子痫前期发病机制中的关键环节。 展开更多
关键词 尾加压素 内皮型一氧化氮合酶 子痫前期
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植物Ⅲ型聚酮合酶的研究进展 被引量:8
8
作者 张萍 陈国神 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期309-313,共5页
综述了近10年来从植物中克隆、鉴定的型聚酮合酶(PKS)的研究进展。型PKS即查耳酮合酶超家族,能催化生成一系列结构各异、具有不同生理活性、具有查耳酮合酶(CHS)基本骨架的植物次生代谢产物,对这些PKS的基因进行调控可用于合成一些难以... 综述了近10年来从植物中克隆、鉴定的型聚酮合酶(PKS)的研究进展。型PKS即查耳酮合酶超家族,能催化生成一系列结构各异、具有不同生理活性、具有查耳酮合酶(CHS)基本骨架的植物次生代谢产物,对这些PKS的基因进行调控可用于合成一些难以化学合成的新型天然化合物。目前,国内对Ⅲ型PKS在药学领域的应用研究甚少,此研究对于活性成分的生物合成具有重要意义。 展开更多
关键词 Ⅲ型聚酮合酶(PKS) 生物合成 查耳酮合酶
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AT_1R基因及CYP基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性 被引量:9
9
作者 李宏芬 牛建清 +4 位作者 沈志霞 张蕴霞 代琪 王健 范淑英 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第26期23-25,共3页
目的探讨妊娠期高血压疾病的分子遗传学机制。方法采用聚合酶链反应—限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)分别检测87例妊娠期高血压疾病患者(观察组)和175例正常人(对照组)血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166-C和醛固酮合成酶(... 目的探讨妊娠期高血压疾病的分子遗传学机制。方法采用聚合酶链反应—限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)分别检测87例妊娠期高血压疾病患者(观察组)和175例正常人(对照组)血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166-C和醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344 T/C突变位点基因型。基因型及等位基因患妊娠期高血压疾病的风险率以比数比(OR)与95%可信区间(95%CI)表示。结果观察组中AT1R基因的AC基因型频率为33.3%,C等位基因频率为17.2%,相对于AA基因型、A等位基因,OR值分别为1.803、1.711;CYP11B2基因的TC和CC基因型频率分别为40.2%和17.2%,C等位基因频率为37.4%,相对于TT基因型、T等位基因,OR值分别为1.577、6.081、2.114;AT1R和CYP11B2联合基因型分析显示,相对于AA-TT联合基因型,同时携带AC-TC、AA-CC、AC-CC联合基因型的OR值分别为2.407、6.296、7.870。结论AT1R基因1166C和CYP11B2基因-344C点突变的等位基因可能增加妊娠期高血压疾病的遗传易感性;二者可能共同参与妊娠期高血压疾病的发生。 展开更多
关键词 妊娠期高血压疾病 血管紧张素-1型受体基因 醛固酮合成酶基因 基因多态性
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ACE基因和CYP基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究 被引量:6
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作者 牛建清 李宏芬 +4 位作者 沈志霞 张蕴霞 代琪 王健 范淑英 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期535-538,544,共5页
目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)、醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344T/C位点突变多态性与妊娠期高血压疾病的相关关系。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP),分别检测87例妊娠期高血压疾病组... 目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)、醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344T/C位点突变多态性与妊娠期高血压疾病的相关关系。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP),分别检测87例妊娠期高血压疾病组和175例正常对照组ACE基因I/D、CYP11B2基因-344T/C突变位点的基因型。结果妊娠期高血压疾病组中ACE基因I/D的ID和DD基因型频率明显高于正常对照组,分别为41.4%和28.7%;相对于II基因型,携带ID和DD基因型人群患妊娠期高血压疾病的OR值分别为1.981和2.347;D等位基因频率也高于正常对照组为49.42%,差异有显著性;相对于I等位基因,D等位基因患妊娠期高血压疾病的OR值为1.737;妊娠期高血压疾病组CYP11B2基因-344T/C的TC和CC基因型频率分别为40.2%和17.2%;相对于TT基因型,携带TC和CC基因型人群患妊娠期高血压疾病的OR值分别为1.577和6.081;C等位基因频率为37.4%,相对于T等位基因,C等位基因患妊娠期高血压疾病的OR值为2.114;ACE和CYP11B2两组联合基因分析:相对于II-TT联合基因型,同时携带TC-DD联合基因型患妊娠期高血压疾病的OR值为6.019;CC-II、CC-ID、CC-DD联合基因型由于样本量小,不具有代表性,应加大样本量。其余联合基因型,差异均无显著性(P>0.05)。结论ACE基因中D等位基因及CYP11B2基因-344T点突变等位基因C可能增加妊娠期高血压疾病的遗传易感性;在妊娠期高血压疾病的发生中,ACE基因及CYP11B2基因可能共同对妊娠期高血压疾病的发生起作用。 展开更多
关键词 妊娠期高血压疾病 血管紧张素转换酶基因 醛固酮合成酶基因 多态性
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鼠伤寒沙门菌对巨噬细胞内过氧化物酶体与诱导型一氧化氮合酶结合的诱导作用 被引量:4
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作者 潘欣 李广波 +5 位作者 李晗 蔡家麟 陈龙 沈下贤 刘培培 吴鉴今 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1023-1026,共4页
目的探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用。方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式。用pDsRed2-Perxi... 目的探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用。方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式。用pDsRed2-Perxi和pTassC-GFP质粒共转染RAW264.7细胞,将阳性细胞命名为RAW-DT,用pDsRed2-Perxi质粒转染RAW264.7细胞,阳性细胞命名为RAW-D。采用Alexa Fluor 350对结合单抗的鼠伤寒沙门菌显色,用Alexa Fluor 488对iNOS进行显色,并在荧光显微镜下观察。用鼠伤寒沙门菌感染RAW-DT细胞,以观察鼠伤寒沙门菌与TassC和过氧化物酶体的关系;用鼠伤寒沙门菌感染RAW-D细胞,以观察iNOS与过氧化物酶体和鼠伤寒沙门菌的关系。结果免疫荧光观察显示,呈现绿色荧光的TassC-GFP有膜性结构,可与标记了红色荧光的过氧化物酶体共定位;感染1h的RAW-DT胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可招募TassC-GFP和过氧化物酶体;感染1h的RAW-D胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可与iNOS和过氧化物酶体共定位;在1h的观察期间,一旦鼠伤寒沙门菌进入巨噬细胞,膜性小泡(SCV)周围即可募集较多过氧化物酶体。结论野生型鼠伤寒沙门菌可诱导巨噬细胞产生iNOS,iNOS和TassC均可与过氧化物酶体结合,可能具有一定的杀菌作用。 展开更多
关键词 巨噬细胞 沙门菌 鼠伤寒 靶向沙门菌分泌的spiC蛋白(TassC) 一氧化氮合酶 过氧化物酶体类
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PKSI-AT结构域及在组合生物合成研究中的应用 被引量:1
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作者 焦豫良 王梁华 焦炳华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期218-223,共6页
Ⅰ型聚酮合酶(PKSI)的模块型分子结构组织方式非常适合于组合生物合成研究.结构域和模块通过二级组织方式构成了PKSI的催化单元,其它结构多肽则作为"支架".在"支架"上对结构域和模块两个水平进行突变、替换、插入... Ⅰ型聚酮合酶(PKSI)的模块型分子结构组织方式非常适合于组合生物合成研究.结构域和模块通过二级组织方式构成了PKSI的催化单元,其它结构多肽则作为"支架".在"支架"上对结构域和模块两个水平进行突变、替换、插入、缺失等基因操作形成重组PKS,可以理性设计并获得复杂多样的新活性或高活性的聚酮化合物.利用PKSI进行组合生物合成以期获得新聚酮化合物的研究迄今已有约25年,但是目前仍不能够对PKS进行完美的理性设计,快速合成目标活性的新聚酮化合物.PKS中的酰基转移酶结构域的研究在PKS的组合生物合成研究中一直发挥着重要作用.本文结合本课题组的研究基础,对AT结构域的结构、功能及在组合生物合成研究中的最新研究成果作以分析总结. 展开更多
关键词 Ⅰ型聚酮合酶 酰基转移酶结构域 组合生物合成
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内生放线菌A00122中germicidin生物合成基因的克隆
13
作者 吴莹莹 李瑶瑶 +2 位作者 郑忠辉 白林泉 黄耀坚 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期598-602,共5页
在植物和细菌中,Ⅲ型聚酮合酶能够产生种类多样的次生代谢产物.在药用植物内生放线菌A00122的发酵产物中,分离到了一个已知的Ⅲ型聚酮类化合物germicidin.对A00122菌株建立了基因组文库,根据已知的同源基因Sco7221设计引物作为探针对文... 在植物和细菌中,Ⅲ型聚酮合酶能够产生种类多样的次生代谢产物.在药用植物内生放线菌A00122的发酵产物中,分离到了一个已知的Ⅲ型聚酮类化合物germicidin.对A00122菌株建立了基因组文库,根据已知的同源基因Sco7221设计引物作为探针对文库进行PCR筛选,并通过Southern杂交的方法从阳性克隆5-3-10中定位了包含germi-cidin基因的片段,经测序得到长度为1 185 bp的完整合成基因.该基因的获得为深入研究Ⅲ型聚酮合酶的底物选择性,通过定向改造的方法获得非天然Ⅲ型聚酮类化合物提供了重要基础. 展开更多
关键词 Ⅲ型聚酮合酶 germicidin 基因克隆
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心房颤动患者左、右心房肌组织AT_1-R、AT_2-R、CYP11B2的mRNA表达
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作者 王学东 杜立杰 +3 位作者 李家鏐 丛海霞 贾三庆 孟旭 《国际心血管病杂志》 2006年第5期346-348,共3页
目的:观察心房颤动患者左、右心房肌组织中的血管紧张素Ⅱ受体1型(AT_1-R)、2型(AT_2-R)、醛固酮合成酶(CYP11B2)的mRNA表达情况。方法:取23例因心脏病住院接受开胸手术的心房颤动患者的左、右心耳组织,用半定量聚合酶链式反应技术测... 目的:观察心房颤动患者左、右心房肌组织中的血管紧张素Ⅱ受体1型(AT_1-R)、2型(AT_2-R)、醛固酮合成酶(CYP11B2)的mRNA表达情况。方法:取23例因心脏病住院接受开胸手术的心房颤动患者的左、右心耳组织,用半定量聚合酶链式反应技术测定AT_1-R、AT_2-R和CYP11B2 mRNA在左、右心房肌组织中的表达情况。结果:与右心房相比,AT_1-R mRNA在左心房肌组织中的表达有增高的趋势,但无统计学差异;AT_2-R mRNA在左心房肌组织中的表达明显上调了21.3%(P<0.05)。CYP11B2 mRNA在左、右心房肌组织中的表达没有差异。结论:AT_1-R可能主要介导了左心房结构重构,AT_2-R mRNA表达升高可能是对左心房结构重构的一种适应和代偿机制。 展开更多
关键词 心房颤动 血管紧张素受体1型 血管紧张素受体2型 醛固酮合成酶
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虎杖PcPKS1基因RNAi载体的构建
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作者 柳忠玉 赵树进 《湖北农业科学》 2015年第9期2255-2259,共5页
虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是富含芳香族聚酮化合物的药用植物,Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)对芳香族聚酮化合物的合成起重要作用。为了研究虎杖Ⅲ型聚酮合酶基因Pc PKS1的功能,分别选取Pc PKS1基因的编码区... 虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)是富含芳香族聚酮化合物的药用植物,Ⅲ型聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)对芳香族聚酮化合物的合成起重要作用。为了研究虎杖Ⅲ型聚酮合酶基因Pc PKS1的功能,分别选取Pc PKS1基因的编码区保守序列(574 bp)和3′端非编码区特异序列(209 bp)作为干扰片段。将选定的干扰片段,分别以正向和反向插入到p YLRNAi载体中GUS基因内含子的两侧,以形成hp RNA表达盒,成功构建了以组成型Ca MV35S为启动子,以潮霉素抗性为筛选标记的RNA干扰表达载体p YLRNAi-CDS和p YLRNAi-UTR,并将载体导入农杆菌LBA4404中。 展开更多
关键词 虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.) III型聚酮合酶 查尔酮合酶 RNA干扰 转基因
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Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中一个Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆及功能分析 被引量:2
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作者 强慧玲 原海亮 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期13-20,共8页
从链霉菌Streptomyces sahachiroi ATCC 33158基因组中克隆到1个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因orf18。生物信息学及进化树分析表明它可能属于rppA类Ⅲ型PKS基因。通过RT-PCR证实了该基因在野生型S.sahachiroi中是可以进行转录... 从链霉菌Streptomyces sahachiroi ATCC 33158基因组中克隆到1个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因orf18。生物信息学及进化树分析表明它可能属于rppA类Ⅲ型PKS基因。通过RT-PCR证实了该基因在野生型S.sahachiroi中是可以进行转录表达的。HPLC和LC-MS分析的结果表明orf18在S.lividans中异源表达时可产生1,3,6,8-四羟基萘(THN),并且发现该基因也可以在革兰氏阴性菌Pseudomonas stutzeri中异源表达并产生明显的棕红色色素。证明orf18编码的蛋白属于RppA类Ⅲ型PKS,可催化THN的合成,而产物THN在革兰氏阴性菌P.stutzeri中可进一步氧化及聚合形成棕红色色素。 展开更多
关键词 链霉菌ATCC 33158 Ⅲ型PKS RT-PCR 异源表达 1 3 6 8-四羟基萘
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干扰素-γ、一氧化氮与血管平滑肌细胞增殖的关系 被引量:8
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作者 魏妤 徐成斌 王申五 《北京医科大学学报》 CSCD 1999年第1期62-64,85,共4页
目的:研究干扰素γ与一氧化氮合酶、一氧化氮及血管平滑肌细胞增殖之间的关系。方法:将不同质量浓度的干扰素γ(250~1000U·ml-1)作用于培养的血管平滑肌细胞中,采用[3H]TdR掺入、细胞生长曲线和定... 目的:研究干扰素γ与一氧化氮合酶、一氧化氮及血管平滑肌细胞增殖之间的关系。方法:将不同质量浓度的干扰素γ(250~1000U·ml-1)作用于培养的血管平滑肌细胞中,采用[3H]TdR掺入、细胞生长曲线和定量RTPCR等方法检测血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达,一氧化氮产生及血管平滑肌细胞增殖。结果:干扰素γ可以诱导血管平滑肌细胞表达一氧化氮合酶基因及酶蛋白,产生一氧化氮并呈质量浓度依赖。同时还发现干扰素γ抑制血管平滑肌细胞的DNA合成及细胞增殖与一氧化氮的产生是相平行的。 展开更多
关键词 干扰素Γ 血管平滑肌 细胞增殖 一氧化氮
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Role of nitric oxide and inducible nitric oxide synthase in human abdominal aortic aneurysms: a preliminary study 被引量:3
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作者 LIAO Ming-fang JING Zai-ping +7 位作者 BAO Jun-min ZHAO Zhi-qing MEI Zhi-jun LU Qing-shen Feng Xiang FENG Rui ZHANG Su-zen LI Xiao-yan 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2006年第4期312-318,共7页
Background Nitric oxide (NO) is an important mediator in the pathophysiology of many vascular diseases. However, the definite role of NO in human abdominal aortic aneurysm (AAA) formation is unclear. The aim of th... Background Nitric oxide (NO) is an important mediator in the pathophysiology of many vascular diseases. However, the definite role of NO in human abdominal aortic aneurysm (AAA) formation is unclear. The aim of this study was to investigate production of NO and expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS), and their possible role in AAA. Methods A total of 28 patients with AAA, 10 healthy controls, and 8 patients with arterial occlusive disease were enrolled into this study. Standard colorimetric assay was used to examine NO concentration in plasma from patients with AAA and normal controls, and in cultured smooth muscle cells (SMCs). Expression of iNOS in aortas and cultured SMCs were detected by immunochemistry. The correlation of iNOS expression with age of the patient, size of aneurysm, and degree of inflammation was also investigated by Cochran-Mantel-HaenszelX^2 test and Kendall' Tau correlation. Results Expression of iNOS increased significantly in the wall of aneurism in the patients with AAA compared to the healthy controls (P〈0.05) and the patients with occlusive arteries (P〈0.05). iNOS protein and media NOx (nitrite+nitrate) also increased in cultured SMCs from human AAA (n=4, P〈0.05), while plasma NOx decreased in patients with AAA (n=25) compared to the healthy controls (n=20). There was a positive correlation between iNOS protein and degree of inflammation in aneurismal wall (Kendall coefficient=0.5032, P=0.0029) Conclusions SMCs and inflammatory cells were main cellular sources of increased iNOS in AAA, and NO may play a part in pathogenesis in AAA through inflammation. 展开更多
关键词 aortic aneurysm abdominal nitric oxide nitric oxide synthase type
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利用同框敲除技术研究Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的代谢产物
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作者 原海亮 管仁艳 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期74-80,共7页
为了阐明Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的功能,利用同源双交换的方法对该基因进行同框敲除,采用异位表达的方法进行了相应的回补实验。通过高效液相色谱及液相色谱-质谱联用分析发现基因orf18的敲除会明... 为了阐明Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中Ⅲ型聚酮合酶基因orf18的功能,利用同源双交换的方法对该基因进行同框敲除,采用异位表达的方法进行了相应的回补实验。通过高效液相色谱及液相色谱-质谱联用分析发现基因orf18的敲除会明显降低发酵产物中苯甲酸盐的含量,回补该基因能够在一定程度上恢复苯甲酸盐的产量,表明orf18在原宿主中极有可能参与苯甲酸盐的生物合成。 展开更多
关键词 链霉菌 Ⅲ型聚酮合酶 同源双交换 同框敲除 基因回补 苯甲酸盐
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卡伍尔氏链霉菌NA4生物合成巴弗洛霉素前体甲氧基丙二酰ACP来源的研究
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作者 鲍秀艳 姚雪春 +2 位作者 史美君 胡江春 潘华奇 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2022年第1期9-16,共8页
巴弗洛霉素(bafilomycin)是一类由Ⅰ型聚酮合成酶装配合成的具有十六元大环内酯骨架的化合物,是研发农药和医药的良好母体。深海来源的卡伍尔氏链霉菌(Streptomyces cavourensis) NA4能产生巴弗洛霉素,而较低的发酵产量限制了巴弗洛霉... 巴弗洛霉素(bafilomycin)是一类由Ⅰ型聚酮合成酶装配合成的具有十六元大环内酯骨架的化合物,是研发农药和医药的良好母体。深海来源的卡伍尔氏链霉菌(Streptomyces cavourensis) NA4能产生巴弗洛霉素,而较低的发酵产量限制了巴弗洛霉素产业化应用。明确前体来源是理性构建高产菌株的基础,为了确定卡伍尔氏链霉菌NA4中合成巴弗洛霉素重要前体甲氧基丙二酰ACP的来源,构建了甲氧基丙二酰ACP生物合成部分基因bafB-E缺失突变株。实时荧光定量PCR分析发现野生株NA4中bafB mRNA表达水平随培养时间延长而不断增强,突变株则检测不到bafB mRNA的表达,显示ΔbafB-E突变株构建成功。进一步HPLC-UV分析结果显示,相比野生株NA4,ΔbafB-E突变株不再产生巴弗洛霉素。提示野生株NA4中bafB-F编码的合成途径是巴弗洛霉素装配前体甲氧基丙二酰ACP的唯一来源。将为通过强化前体供应策略理性构建巴弗洛霉素高产菌株提供参考。 展开更多
关键词 Ⅰ型聚酮合酶 延伸单元 甲氧基丙二酰ACP 巴弗洛霉素 ΔbafB-E突变株
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