基于TCGA数据库分析UHRF1基因在恶性胸膜间皮瘤中的表达及预后意义

利用生物信息学数据库分析泛素样含PHD和环指结构域蛋白1(UHRF1)在恶性胸膜间皮瘤(MPM)中的表达水平及临床意义。基于TCGA数据库和GTEx数据库差异表达分析UHRF1 m RNA在MPM组织和正常肺组织中的表达水平;使用R软件分析UHRF1 mRNA表达量与临床病理参数的相关性;构建Kaplan-Meier模型和单因素多因素COX回归模型分析UHRF1基因在MPM中的预后;利用TIMER2.0数据库分析UHRF1基因与免疫细胞浸润的关系;GSEA分析UHRF1基因发挥功能的主要富集通路。选取8例MPM组织及4例非MPM胸膜组织,通过RT-q PCR的方法验证UHRF1在MPM与非MPM胸膜组织的表达情况。数据库分析结果表明,与正常肺组织相比,UHRF1 m RNA在MPM组织中高表达;UHRF1高表达患者提示MPM患者预后不良;UHRF1基因表达量与CD4^(+)辅助型T细胞2、CD4^(+)效应记忆性T细胞、巨噬细胞等多种免疫细胞浸润水平具有显著的相关性(P<0.01),且显著影响MPM患者的预后。功能富集分析显示,UHRF1主要在DNA复制、蛋白酶体、同源重组等通路中起作用。在收集到的病例样本中,与非MPM胸膜组织相比,UHRF1 mRNA在MPM组织中的表达显著增高(P<0.001)。UHRF1在MPM组织中高表达,可能通过调节DNA甲基化和免疫细胞浸润来影响MPM患者预后,有望成为MPM治疗和预后评估的潜在靶点。

射血分数保留心力衰竭患者血清WWP1和NLRP3的表达水平及其临床价值研究

目的 探讨WW结构域E3泛素蛋白连接酶1(WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1,WWP1)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)在射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)患者血清中的表达水平及临床意义。方法选取华北医疗健康集团峰峰总医院2021年1月~2022年9月收治的153例HFpEF患者为观察组,并根据患者纽约心脏病协会(New York Heart Association,NYHA)心功能分级分为心功能分级Ⅰ~Ⅱ级组(n=64)和心功能分级Ⅲ~Ⅳ级组(n=89),另选取同期体检健康的148例志愿者为对照组。血清WWP1,NLRP3水平与患者心功能指标的相关性采用Pearson分析;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清WWP1和NLRP3水平对HFpEF患者心衰严重程度的诊断价值。结果 与对照组比较,观察组血清WWP1(1.68±0.35 vs 1.04±0.19)和NLRP3(6.72±1.26 ng/ml vs 4.57±0.84 ng/ml)表达水平明显升高,差异具有统计学意义(t=19.623,17.359,均P <0.05);与心功能分级Ⅰ~Ⅱ级组比较,心功能分级Ⅲ~Ⅳ级组血清WWP1(1.87±0.39 vs 1.42±0.32)和NLRP3(7.53±1.40 ng/ml vs 5.59±1.18 ng/ml)表达水平明显升高,差异具有统计学意义(t=7.744,9.017,均P<0.05);心功能分级Ⅰ~Ⅱ级组与心功能分级Ⅲ~Ⅳ级组心率、左心房内径(left atrial diameter,LAD)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左室舒张末期后壁厚度(left ventricular end-diastolic posterior wall thickness,LVPWT)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、二尖瓣舒张早期流速峰值(peak mitral early diastolic velocity,E)/舒张晚期流速峰值(peak late diastolic velocity,A)以及心房颤动发生率比较差异均具有统计学意义(t/χ^(2)=2.757~7.069,均P <0.05);HFpEF患者血清WWP1水平与LAD,LVEDD,LVPWT呈正相关(r=0.547,0.471,0.536,均P <0.05),与LVEF和E/A呈负相关(r=-0.485,-0.417,均P <0.05);血清NLRP3水平与LAD,LVEDD,LVPWT呈正相关(r=0.534,0.494,0.520,均P <0.05),与LVEF和E/A呈负相关(r=-0.462,-0.523,均P <0.05)。ROC结果显示,血清WWP1和NLRP3水平单独诊断HFpEF患者心衰严重程度的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.825和0.855,两者联合诊断的AUC(0.924)显著大于血清WWP1和NLRP3水平单独诊断的AUC(Z=3.600,P<0.001;Z=3.053,P=0.002)。结论 血清WWP1和NLRP3水平在HFpEF患者中明显升高,且与患者心功能密切相关,血清WWP1和NLRP3对HFpEF患者心衰严重程度具有一定的诊断价值。

胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3表达及与患者临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中类泛素样含环指域蛋白1(UHRF1)、Yes相关蛋白1(YAP1)和叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)表达及与患者临床病理特征的关系。方法收集2021年1至12月湖州市第一人民医院经手术切除的85例胃癌患者的癌组织与配对癌旁组织,采用免疫组化法测定UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。比较胃癌组织与癌旁组织及不同临床病理特征患者间UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。结果胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径胃癌患者UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率比较,差异均无统计意义(均P>0.05);低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者,淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移胃癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌组织UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率高,并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征有关。

类泛素蛋白FAT10共价结合底物蛋白质的活性分析

目的探讨类泛素蛋白FAT10的C末端双甘氨酸基团及双泛素结构域结合修饰底物蛋白质的活性。方法分别将野生型全长FAT10,C末端双甘氨酸的缺失突变体FAT10ΔGG,分别包含N端、C端泛素结构域的截断突变体FAT10-N和FAT10-C构建到真核表达载体中,转染HEK293T细胞,并使用26S蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞。利用Western blot方法检测野生型FAT10及其突变体结合底物蛋白质的活性。结果与野生型FAT10的蛋白质底物结合能力相比,FAT10ΔGG、FAT10-N、FAT10-C与底物蛋白质结合能力均显著下降。蛋白酶体抑制剂MG132能够促进FAT10及其突变体的底物结合活性。结论 FAT10的C末端双甘氨酸基团及双泛素结构域都是FAT10与底物共价结合所需的活性基团,被FAT10标记后的底物蛋白质通过26S蛋白酶体途径降解。

UHRF1基因在人原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因在人原发性肝细胞肝癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)、免疫组织化学法检测63例肝癌组织、癌旁组织及10例正常肝组织中UHRF1 mRNA及蛋白的表达情况,分析UHRF1蛋白表达与肝癌患者临床病理参数及预后的相关性。结果肝癌组织中UHRF1 mRNA表达水平明显高于癌旁组织和正常肝组织(P均<0.05);肝癌组织中UHRF1蛋白阳性表达率为85.71%(54/63),而UHRF1在癌旁组织几乎不表达。UHRF1的表达与肿瘤分化、大小、TNM分期及是否侵袭周围组织密切相关(P均<0.05),与患者预后呈负相关(P<0.05)。结论 UHRF1在肝癌组织中高表达,和多项临床病理因素具有明显关联,其在肝癌早期诊断、预后判断及靶向治疗中具有潜在的临床应用价值。

UHRF1在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的:探讨UHRF1(Ubiquitin-like,containing PHD and RING finger domains 1)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测556例HCC组织及其癌旁组织中UHRF1的表达,分析其与HCC患者临床病理特征的关系。结果:免疫组织化学结果显示,UHRF1蛋白阳性表达定位于HCC细胞核,UHRF1蛋白在HCC组织中的表达显著高于癌旁组织。HCC组织中UHRF1蛋白阳性表达率为59%,其表达与肿瘤大小(P<0.01)、肿瘤分化(P<0.05)和微血管侵犯(P<0.01)相关。结论:HCC中UHRF1的表达与其恶性表型相关,UHRF1可能参与HCC的侵袭和转移。

微小RNA-506-3p调控UHRF1抑制大肠癌细胞转移的机制

目的探讨微小RNA-506-3p(miR-506-3p)通过调控含PHD及指环结构域的类泛素蛋白1(UHRF1)的表达,进而影响大肠癌细胞转移能力的机制。方法利用生物信息学的方法预测并筛选UHRF1上游可能发挥调控作用的miRNA-506-3p;在大肠癌细胞及组织中分别检测miR-506-3p及UHRF1的表达水平并分析其相关性;运用荧光素酶报告基因技术检测miR-506-3p与UHRF1 3′非翻译区(3′UTR)特异性结合的情况;荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测大肠癌细胞转染miR-506-3p类似物(mimics)后对UHRF1表达水平的影响;构建UHRF1过表达的大肠癌稳转细胞株,分别转染miR-506-3p mimics及其对照序列(mimics control)后,利用Transwell实验检测处理前后大肠癌细胞转移能力的变化。结果相对于正常大肠上皮细胞及癌旁组织而言,miR-506-3p在大肠癌细胞及组织中的表达均下调(均 P <0.05),且与UHRF1的表达水平呈负相关( r =-0.456, P =0.044);miR-506-3p通过其“种子序列”与UHRF1 3′UTR特异性结合( P <0.01),并减少了UHRF1的mRNA及蛋白表达(均 P <0.01);转染miR-506-3p mimics抑制了大肠癌LoVo细胞的转移能力( P <0.01),而在此基础上增加UHRF1的表达则逆转了miR-506-3p的抑制作用( P <0.01)。结论 miR-506-3p通过调控UHRF1抑制了大肠癌细胞的转移能力,在大肠癌中发挥抑癌基因的作用。

耐药人胃癌细胞UHRF1基因的表达变化及其与多药耐药的关系

目的观察耐药人胃癌细胞泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因的表达变化,并探讨其与胃癌细胞多药耐药的关系。方法取对数生长期人胃癌细胞SGC7901、耐长春新碱(VCR)的SGC7901(SGC7901/VCR)、耐阿霉素(ADR)的SGC7901(SGC7901/ADR),采用实时定量PCR法检测各细胞UHRF1 mRNA,采用Western blotting法检测各细胞UHRF1蛋白。取对数生长期SGC7901/VCR、SGC7901/ADR细胞分别转染抑制UHRF1表达的小干扰RNA(si UHRF1)(SGC7901/VCR-si UHRF1、SGC7901/ADR-si UHRF1)、无意义空白质粒(SGC7901/VCR-UHRF1、SGC7901/ADR-UHRF1),另设空白对照,不做任何处理。取对数生长期SGC7901细胞,分别转染过表达的UHRF1质粒(SGC7901-UHRF1)、无意义空白质粒(SGC7901-NC),另设空白对照。转染48 h收集以上细胞备用。采用MTT法检测SGC7901/VCR、SGC7901/ADR细胞各干扰组和SGC7901细胞各干扰组对化疗药物[(VCR、ADR、5-氟尿嘧啶(5-FU)和顺氨氯铂(CDDP)]的药物敏感性,计算半数抑制浓度(IC_(50));取SGC7901/VCR、SGC7901/ADR细胞各干扰组和SGC7901空白对照,加入5-FU共培养,采用流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果 SGC7901细胞UHRF1 mRNA及蛋白的相对表达量均低于SGC7901/VCR、SGC7901/ADR细胞,P均<0.05。促进UHRF1表达可升高SGC7901细胞对VCR、ADR、5-FU、CDDP的IC_(50),降低细胞凋亡率,P均<0.05。抑制UHRF1表达可降低VCR、ADR、5-FU、CDDP对SGC7901/VCR和SGC7901/ADR细胞的IC_(50),升高细胞凋亡率,P均<0.05。结论耐药人胃癌细胞中存在UHRF1高表达。UHRF1高表达可降低胃癌细胞的药物敏感性、提高细胞多药耐药性,可能与UHRF1抑制胃癌细胞凋亡有关。

下调UHRF1表达对食管鳞癌Eca-109细胞放射敏感性的影响

目的研究下调UHRF1对食管鳞癌Eca-109细胞放射敏感性的影响,并对其作用机制进行探讨。方法以人UHRF1基因为靶标设计shRNA序列,慢病毒介导将UHRF1-shRNA转染至Eca-109细胞,qRT-PCR及Western blotting测定转染前后UHRF1 mRNA及蛋白的表达;克隆形成实验评估UHRF1沉默后Eca-109细胞放射敏感性的改变;流式细胞术检测沉默UHRF1对X线照射前后Eca-109细胞凋亡影响;Western blotting检测下调UHRF1、X线照射前后Eca-109细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、caspase-3及AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果成功构建了UHRF1表达稳定下调的Eca-109 shUHRF1细胞系;克隆形成实验显示,UHRF1表达下调后Eca-109细胞的放射敏感性提高;流式细胞术分析显示,shUHRF1组凋亡细胞的比例较NC组增加,而照射后这种趋势更加明显;Western blotting检测显示,与NC组相比,shUHRF1组凋亡抑制蛋白Bcl-2表达量下降,凋亡蛋白Active caspase-3表达量升高,AKT/mTOR信号通路关键分子p-AKT、p-mTOR蛋白表达量下降,而6 Gy X线照射后,Bcl-2、Active caspase-3、p-AKT、p-mTOR蛋白变化较照射前更为明显。结论沉默UHRF1可以增加食管癌Eca-109细胞的放射敏感性,其机制与减弱AKT/mTOR信号通路传导活性及诱导凋亡有关。

UHRF2通过其PHD结构域与组蛋白H3K9乙酰化相互作用

目的:探讨UHRF2蛋白与组蛋白组蛋白H3第9位赖氨酸残基乙酰化(Histone H3 Lys9 acetylation,H3K9ac)的相互作用及两者相互作用结合区域的测定。方法:在LO2和Hep G2细胞中转染p CMV-FLAG-UHRF2,激光共聚焦分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在细胞内的共定位。采用免疫沉淀技术分别检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和组蛋白H3第14位赖氨酸基乙酰化(Histone H3 Lys14 acetylation,H3K14ac)在细胞中的相互作用,以及用UHRF2的不同缺失体层粒分别与组蛋白H3K9ac相结合方法来检测UHRF2与之相互作用的功能性结合区域。结果:(1)UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在LO2和Hep G2细胞中存在共定位现象。(2)在LO2和Hep G2细胞中,UHRF2与H3K9ac相互结合。(3)在正常肝细胞LO2中,UHRF2与H3K9ac相互作用的结合区域为PHD结构域。而在肝癌细胞Hep G2中,除了PHD结构域以外,YDG/SRA结构域也是UHRF2与H3K9ac的关键结构域。结论:UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac相互作用。

围手术期食管鳞状细胞癌患者血清UHRF1水平变化

目的检测食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)水平,分析其在不同临床病理参数亚组间的差异以及围手术期的变化。方法收集130例ESCC患者术前血清,另收集其中62例患者的术后1周血清以及14例患者术后1周和2周血清,以67例体检健康者作为对照组。同时收集患者临床病理资料。用ELISA法检测血清UHRF1含量,采用独立样本t检验、配对t检验及单因素方差分析比较不同组间水平差异。结果 130例ESCC患者术前血清UHRF1含量明显高于健康人对照组(t=7.680,P<0.01);在不同年龄、性别、肿瘤部位和大体分型间UHRF1水平差异无统计学意义(P>0.05),不同肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况、pTNM分期间血清UHRF1水平差异有统计学意义(P<0.05)。62例患者术后UHRF1水平较术前明显降低(t=5.530,P<0.01),且与健康人对照组差异无统计学意义(t=1.622,P>0.05);14例患者术前、术后1周、术后2周血清UHRF1水平逐渐降低,差异有统计学意义(F=7.595,P<0.01)。结论血清UHRF1可作为围手术期动态监测的潜在指标。

抑制UHRF1基因表达对肝癌细胞MHCC-97H迁移的影响及相关机制

目的探讨通过RNA干扰抑制泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)基因表达对肝癌MHCC-97H细胞迁移的影响及可能机制。方法合成UHRF1基因特异性小发夹RNA(shRNA),构建稳定干扰UHRF1基因表达的重组慢病毒LV-sh UHRF1(以空载体慢病毒LV-sh NC作为阴性对照),并将其感染MHCC-97H细胞。实时荧光定量PCR法检测UHRF1 mRNA在MHCC-97H细胞中表达情况,蛋白质印迹法检测UHRF1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况,Transwell法检测MHCC-97H细胞迁移能力。结果 LV-sh UHRF1组UHRF1mRNA和蛋白表达量及MMP-9、VEGF蛋白表达量均明显低于LV-sh NC组(P均<0.05),迁移细胞数明显少于LV-sh NC组(P<0.05)。结论通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制UHRF1的表达后可抑制MHCC-97H细胞的迁移能力,机制可能与影响MMP-9和VEGF的表达有关。

TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的构建、表达及生物活性鉴定

目的:构建TANK结合激酶1(TBK1)相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,检测该基因相关突变体在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:根据文献报道的突变序列及QuickChange Site-Directed Mutagenesis实验设计手册,设计合成2条针对TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的引物,以实验室之前构建的TBK1野生型真核表达载体为模板,构建TBK1激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,分别命名为pcDNA3-Flag-TBK1(KD)、pcDNA3-Flag-TBK1(ΔULD)。以LipofactAMINE2000转染试剂转染至293细胞中进行瞬时表达,利用萤光素酶实验检测2种TBK1突变体诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体真核表达载体构建成功,Western印迹检测表明其在293细胞中获得有效表达;用萤光素酶报告基因实验检测,与野生型TBK1相比,其相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体诱导IFN-β转录激活的作用明显降低。结论:真核表达的TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。

DAXX翻译后修饰的研究进展

Fas死亡结构域相关蛋白(Fas death domain-associated protein)DAXX是一种高度保守的核蛋白,广泛分布于核质、核仁、胞浆、异染色质和早幼粒细胞白血病蛋白核体(PML-NBs)等亚细胞区域,在细胞凋亡和转录调控中发挥重要作用。DAXX功能的调控涉及一系列的翻译后修饰,包括泛素化修饰、类泛素样蛋白修饰、磷酸化修饰,通过修饰,可引起DAXX在各亚细胞区域间的转位,也可引起DAXX参与的生理功能的改变。本文对DAXX此方面的研究进展做一综述。

抑制UHRF1基因表达对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨抑制泛素样含PHD和环指域1[ubiquitin-like with plant homeodomain(PHD)and ringfinger domains 1,UHRF1]基因表达对肝癌MHCC-97H细胞增殖、周期分布和凋亡的影响。方法合成UHRF1基因特异性小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),构建稳定干扰UHRF1基因表达的重组慢病毒LV-shUHRF1作为LV-shUHRF1组,并将其感染MHCC-97H细胞;以空载体慢病毒LV-shNC作为阴性对照组即LV-shNC组。采用蛋白质印迹法检测UHRF1蛋白在MHCC-97H细胞中表达情况,采用CCK-8法和流式细胞术检测2组MHCC-97H细胞增殖、周期分布和凋亡情况。结果蛋白质印迹法显示,LV-shUHRF1组细胞UHRF1蛋白表达量为0.018±0.010,LV-shNC组细胞UHRF1蛋白表达量为0.818±0.031,LV-shUHRF1组细胞UHRF1蛋白表达水平明显低于LV-shNC组(P<0.05)。LV-shUHRF1组细胞的增殖能力明显低于LV-shNC组(P<0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率明显高于LV-shNC组(P均<0.05),S期细胞比例明显低于LV-shNC组(P<0.05)。结论通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制UHRF1的表达后可抑制MHCC-97H细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,促进细胞凋亡,抑制肝癌的发生和发展。

NLRP3炎症小体在中医药治疗抑郁障碍中的作用研究进展

抑郁障碍是一种以心境低落为主要特征的情感性精神障碍综合征,近年来在我国发病率逐步增高。其不仅危害患者的生活质量和生命健康,更为社会和家庭带来巨大的负面影响。核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体参与抑郁障碍的发病过程并受到众多中医药治疗方式的影响,其表达和激活在细胞自噬、细胞凋亡、泛素化过程以及外泌体作用等生理过程中均有作用靶点;同时,脑肠菌轴、下丘脑-垂体-肾上腺轴、下丘脑-垂体-性腺轴的活动对NLRP3炎症小体也具有调控作用。因此,探索中医药治疗手段对NLRP3炎症小体泛素化过程的调控机制,以及中医药对外泌体的形成、分泌、信息传递的影响途径均将成为研究抑郁障碍中NLRP3炎症小体作用的新方向。

UHRF1表达下调对胃癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)表达下调后对胃癌细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法将培养好的人胃癌细胞系(MKN45)随机分为空白对照组、阴性对照组(sh NC)和干扰组,后两组分别感染病毒sh NC、sh UHRF1,采用短发夹RNA(shRNA)技术下调MKN45细胞中UHRF1表达,XTT法测定各组细胞生长情况,平板克隆形成试验测算细胞克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;裸鼠皮下成瘤试验检测细胞体内生长能力。结果 UHRF1表达下调后,MKN45细胞生长速度明显下降、克隆形成减少(P均<0.05);干扰组G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少(P均<0.05),细胞凋亡率升高(P均<0.05);裸鼠皮下肿瘤生长速度下降(P<0.01)。结论下调UHRF1的表达能够抑制胃癌细胞增殖,该作用可能通过延长细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的。

下调泛素样含PHD和环指域1基因的表达对喉癌Hep-2细胞增殖侵袭能力的影响

目的探讨下调泛素样含PHD和环指域1(ubiquitin-like protein containing PHD and RING finger domains 1,UHRF1)基因在喉癌Hep-2细胞中的表达后对其增殖,凋亡,侵袭迁移能力的影响。方法实验分为空白组,阴性对照组和干扰组。利用UHRF1-si RNA干扰UHRF1在喉癌Hep-2细胞中的表达,采用q RT-PCR、Western blot检测UHRF1的表达变化。采用MTT法、流式细胞术、Transwell实验检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的变化。Western blot检测下调UHRF1表达后Hep-2细胞内Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达的变化情况。结果与空白组和阴性对照组相比干扰组下调UHRF1的表达后可明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖能力(P<0.001)。空白组,阴性对照组,干扰组凋亡率分别为(5.47±2.77)%,(3.95±0.66)%,(18.95±1.10)%,干扰组凋亡率明显提高(P<0.001)。空白组,阴性对照,干扰组每视野侵袭细胞数分别为(213.7±13.1),(221.3±10.3),(97.7±7.5),干扰组侵袭细胞数明显降低(P<0.001)。空白组,阴性对照,干扰组每视野迁移细胞数分别为(230.7±5.5),(222.7±11.2),(111.7±7.6),干扰组迁移细胞数明显降低(P<0.001)。干扰组细胞Bax蛋白表达上调(P<0.001),Bcl-2蛋白表达下调(P<0.001),MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达下调(P<0.001)。结论在喉癌Hep-2细胞中下调UHRF1的表达后可明显抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞的侵袭迁移能力。

过表达microRNA-144通过靶向调节泛素样PHD和环指结构域1基因诱导非小细胞肺癌凋亡

目的探讨microRNA-144 (miR-144)对非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖以及预后的影响。方法通过癌症基因组图谱(The cancer genome atlas,TCGA)检测NSCLC患者组织中miR-144以及泛素样PHD和环指结构域包含1(Ubiquitin like PHD and ring finger domain 1,UHRF1)的表达预后以及两者表达的相关性。采用CCK-8、AO/EB以及γH2A检测不同表达miR-144对NSCLC细胞活性、细胞凋亡、增殖以及DNA损伤的影响,Western blot检测PCNA、Bax、Bcl-2及UHRF1的表达。荧光素酶报告证明miR-144以及UHRF1的靶向关系。结果在NSCLC患者组织中,miR-144表达水平较低,低表达miR-144 NSCLC患者生存时间明显低于高表达miR-144者。UHRF1在NSCLC患者组织中明显升高,且在不同年龄、性别、TNM分期和种族有显著差异。低表达UHRF1非小细胞肺癌患者生存率明显高于高表达UHRF1的NSCLC患者。过表达miR-144能够明显降低A549细胞活性,诱导A549细胞凋亡,增加γH2ax表达;抑制PCNA以及Bax蛋白表达,上调Bcl-2表达。荧光素酶报告证明UHRF1是miR-144的靶基因。同时,低表达miR-144能够使UHRF1表达增加,过表达miR-144能够抑制UHRF1的表达。结论过表达miR-144通过靶向UHRF1诱导A549细胞凋亡以及DNA损伤,参与NSCLC的病理生理过程,进而影响预后。

UHRF1在胃癌侵袭和转移中的作用及其机制

目的探讨甲基化调节因子UHRF1在胃癌转移过程中的作用及其调控机制。方法 RT-PCR和Western blot检测胃癌高低转移细胞系中UHRF1的表达,应用UHRF1的si RNA和质粒改变UHRF1的表达,Transwell及体内转移实验检测胃癌转移能力的变化。甲基化特异性PCR和Western blot检测UHRF1表达改变后p16^(INK4)和RB1的甲基化状态及蛋白表达。结果 UHRF1在高转移潜能的胃癌细胞系GC9811-P中的表达显著高于低转移潜能的细胞系GC9811。下调UHRF1的表达抑制胃癌细胞的体外和体内转移能力,同时减弱p16^(INK4)甲基化,增加p16^(INK4)蛋白表达。上调UHRF1的表达可见相反结果。结论 UHRF1可能通过调控p16^(INK4)和RB1的甲基化促进胃癌细胞的侵袭和转移,其有望成为胃癌转移预警和治疗的新靶点。