Development of Ultra Fast Liquid Chromatography (UFLC) Method for Fluorescence Detection of Domperidone in Human Serum and Application to Pharmacokinetic Study

A simple and sensitive fluorescence detection of domperidone by ultra fast liquid chromatographic method was developed and validated in human serum. For the evaluation of new drug delivery systems, conducting of pharmacokinetic studies in human volunteers is essential for approval to marketing after preclinical evaluation in animal models. The present method consists of protein precipitation, extraction of analytes from human serum into dichloromethane and separation using reversed-phase C18 column. Propranolol hydrochloride was used as an internal standard and the eluent was monitored by fluorescence detector at excitation 282 and emission 328 nm. The mobile phase used was 62:38 ratio of 10 mM phosphate buffer pH adjusted to 3.1 with OPA and methanol at a flow rate of 1 mL·min-1. The method was evaluated for assay, LLOD, LLOQ, recovery and stability studies. The retention times for domperidone and propranolol hydrochloride were found to be 6.36 and 7.94 minutes respectively. The intraday and inter-day coefficient of variation and percent error values of assay method were less than 5%;mean recovery was more than 96% for each analyte and the method was found to be precise, accurate and specific during study. The method was successfully applied for pharmacokinetic study of immediate and controlled release bioadhesive hot melt extruded buccal patches of domperidone after buccal administration to healthy human volunteers. The Cmax, Tmax, and AUC0–24 of domperidone from immediate and controlled release buccal patches were found to be 129.7 ng·mL-1, 1.5 h, 455.1 ng·h·mL-1 and 145.7 ng·mL-1, 5.25 h, 911.0 ng·h·mL-1 respectively. A simple, sensitive and reliable method for the fluorescence determination of domperidone in human serum by UFLC method was developed and validated.

Validated Chiral Ultra Fast Liquid Chromatographic Method for Quantitative Analysis of Enantiomeric Vildagliptin

A rapid, accurate, and precise chiral Ultra fast liquid chromatography (UFLC) method was developed and validated for enantiomeric separation of racemic vildagliptin and S-vildagliptin according to the guidelines of the International Conference on Harmonization (ICH). The chiral chromatographic separation was achieved with a mobile phase consisting of 20 mM borax buffer (pH 9.0 ± 0.05), ACN, and 0.1% Triethylamine (50:50:0.1, v/v/v) at a flow rate of 1 ml/min using a chiralcel OD-RH column, tris(3,5-dimethyl phenyl carbamate) (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) column. The UFLC analysis was monitored at 210 nm. The method showed good linearity with a regression coefficient (r2) of 0.999 in the range of 1 - 12 μg/ml for S-vilda. The detection limit (LOD), quantitation limit (LOQ), and the average percentage recovery for S-vilda were found to be 0.024, 0.075 μg/mL, and 99.19% to 100.4%, respectively. The percentages of relative standard deviation (% RSD) for intra- and inter-day precision were found to be 0.346% and 0.364%, respectively. The developed method proved to be reproducible as % RSD was <2% and it had robustness within the acceptable limit. The percentage purity of pharmaceutical preparations of S-vilda was found to be 99.19 w/w. The proposed chiral method can be put in application for the enantiomeric purity determination of S-vilda formulations.

基于UFLC-QTrap-MS/MS结合多元统计分析的不同产地、不同部位乌药中核苷和氨基酸类成分分析

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm×3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)进行质谱检测;基于各成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)、逼近理想解排序法(TOPSIS)以及灰色关联度分析(GRA),对不同产地、不同部位乌药样品进行综合评价。结果表明,所测成分在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9924;精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率为94.86%~106.47%,相对标准偏差(RSD)均小于4.55%。不同产地、不同部位乌药样品间存在一定的差异,HCA和PCA 2种方法均将样品分为3类。OPLS-DA模型分析通过VIP值共筛选得到6个差异性化合物,分别为尿苷、丙氨酸、胞嘧啶、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤。该方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中核苷和氨基酸类成分的同时测定,为药材质量评价和综合利用提供方法参考。

UFLC法测定黄芪桂枝五物汤与芍药水提物中芍药苷和芍药内酯苷的含量

目的建立一种测定黄芪桂枝五物汤和芍药水提物中芍药苷和芍药内酯苷含量的超快速液相色谱法。方法采用ShimPack XR-ODS色谱柱,以0.1%磷酸水(A)和乙腈(B)作为流动相,梯度洗脱(0~5 min,10%-20%B;5~10 min,20%-25%B),平衡时间为5 min,流动相的流速为0.4 mL/min,色谱柱的温度设定为35℃,紫外检测器的波长设定为230 nm,进样量设定为5μL。结果芍药苷和芍药内酯苷的线性范围均为0.5~20 mg/L,所建立的分析方法具有较好的线性关系、精密度、稳定性和回收率。黄芪桂枝五物汤和芍药水提物中芍药苷的含量分别为2.75~3.84 g/L和4.70~4.99 g/L,芍药内酯苷的含量分别为0.632~0.928g/L和0.729~0.870 g/L。结论芍药苷在黄芪桂枝五物汤中比在芍药水提物中的含量少,表明其它药材成分对芍药苷的提取具有抑制作用。芍药内酯苷在黄芪桂枝五物汤中和在芍药水提物中含量无明显差异。本方法分析时间短、稳定性好,可用于黄芪桂枝五物汤的质量控制和配伍规律研究。

基于UFLC-IT-TOF MS分析技术的妇科再造丸化学成分研究

大品种妇科再造丸由42味中药组成,对多种妇科疾病具有显著疗效。但其组方复杂,化学成分尚未被充分阐明,质量控制水平较低。该研究建立了一种采用超快速液相色谱-离子阱飞行时间质谱联用技术(UFLC-IT-TOF MS)快速鉴定妇科再造丸化学成分的方法,系统研究了其化学物质基础。采用COSMOSIL C18色谱柱(3.0 mm×150 mm,2.6μm)进行分离,以0.4%乙酸和乙腈为流动相梯度洗脱;采用电喷雾离子源(ESI)在正负离子模式下采集妇科再造丸MS1、MS2和MS3的碎片信息。通过推导质谱裂解规律,与对照品、文献数据和单味药材图谱比对等方式,共鉴定出155种化学成分,包括萜类成分47个,酚及酚酸类成分43个,黄酮类成分39个,生物碱类成分14个,苯酞类成分8个,其他类成分4个,其中133个成分首次在妇科再造丸中发现。该研究进一步阐明了妇科再造丸的化学成分组成,为其质量标准的提高及药效物质的阐明提供了丰富信息。

UFLC法测定不同地区博落回果实中生物碱的含量

为筛选优质的博落回种质资源,促进博落回优良品种的选育。采用UFLC法同时测定15个不同地区16份博落回资源果实中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱4种生物碱含量,探究不同地区博落回果实中生物碱含量差异。结果表明:15个地区的博落回果实中原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱及这4种生物碱的总含量存在差异。其中福建三明明溪县的MC-1博落回总生物碱含量最高,达(0.435 2±0.008 8)%,与其他地区的样本具有显著性差异;MC-1博落回别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱含量均最高,其生物碱含量高低趋势为别隐品碱>血根碱>原阿片碱>白屈菜红碱。说明MC-1可作为选育当地的博落回优良品种的种质资源,本研究结果为博落回的育种工作提供理论基础。

SPE-UFLC-MS/MS法测定制药废水中四环素类抗生素

文章建立了利用固相萃取-超快速液相色谱-串联质谱（SPE-UFLC-MS/MS）测定制药废水中四环素类抗生素（土霉素、四环素和金霉素）残留的方法。水样经（30%硫酸锌＋20%亚铁氰化钾）溶液作为沉淀剂沉淀蛋白质后,上清液采用Oasis HLB固相萃取柱富集和净化,以（0.1%甲酸溶液＋乙腈）为流动相进行梯度洗脱,经Agilent ZORBAX SB C18柱分离后,在串联质谱ES（I＋）模式下进行MRM检测。该方法四环素类抗生素检出限（S/N=3时）0.02μg/L,3种目标物在0.010~1.0 mg/L范围内线性关系良好,线性相关系数在0.998 2~0.999 8之间。在0.20、0.40和0.60μg/L添加水平,各组分的回收率在80.8%~97.2%之间,相对标准偏差在5.31%~9.92%之间。该方法可满足制药废水中四环素类抗生素残留检测的要求。

康视明合剂中柚皮苷的UFLC法测定

建立了超快速液相色谱(UFLC)法测定康视明合剂中柚皮苷的含量。采用CR-ODS柱,流动相为乙腈-磷酸(pH3),梯度洗脱,检测波长283nm。柚皮苷在0.015～0.135μg范围内线性关系良好,平均回收率98.3%,RSD为1.88%。并与HPLC法比较。

UFLC法同时测定龙胆中3种环烯醚萜苷的含量

目的采用超快速液相色谱(UFLC)法同时测定龙胆中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷和獐芽菜苷的含量。方法采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),检测波长为240 nm,流速为0.5 m L·min^(-1),柱温为40℃。结果龙胆苦苷、獐芽菜苦苷和獐芽菜苷进样量分别在1.0~20μg(r=0.9998)、1.0~20μg(r=0.9995)、0.12~2.4μg(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.3%、99.3%和98.3%(n=3),RSD均小于1.0%。结论 UFLC法简便、快速、准确、重现性好,可用于龙胆药材中环烯醚萜苷类成分的质量控制研究。

基于UFLC-MS/分子模拟计算的吴茱萸醇提取物中胆碱酯酶抑制剂筛选

采用超高速液相色谱⁃质谱(UFLC⁃MS)研究了吴茱萸醇提取物中入血小分子化合物的体内药代动力学过程.同时对UFLC⁃MS生物样品分析方法进行包括特异性、线性、精密度、准确度、稳定性、基质效应和回收率等考察,结果表明,该方法稳定可靠,且醇提取物中10个生物碱类化合物均被胃肠道快速吸收,并且多数化合物血药浓度在1~2 h左右达到峰值.将吸收入血的10个生物碱类化合物与乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱脂酶进行柔性分子对接及构效关系分析,发现其中活性最高的为去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱和吴茱萸酰胺Ⅰ4个吲哚型生物碱,它们与乙酰胆碱酯酶的对接打分均在-46.02 kJ/mol以下;与丁酰胆碱脂酶对接打分均在-41.84 kJ/mol以下.吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱和吴茱萸酰胺可能是以乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱脂酶为靶点的胆碱酯酶抑制剂前体化合物.

UFLC-IT-TOF-MS分析婴幼儿配方乳粉中的12种雌孕激素

建立了婴幼儿配方乳粉中12种雌孕激素的超快速液相色谱-离子阱-飞行时间串联质谱(UFLCIT-TOF-MS)测定方法。乳粉样品在37℃水溶解、酶解后,经乙腈提取,HLB柱净化,Shim-pack XRODSⅡ和HSS T3色谱柱梯度分离,采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式对雌激素进行分析,正离子模式对孕激素进行分析。12种雌孕激素在1.0~200μg/L范围内线性关系均良好(r^2>0.998),平均回收率为79.9%~110.4%,相对标准偏差为2.8%~8.0%,检出限和定量下限分别为0.3~0.6μg/kg及0.9~1.8μg/kg。实验考察了12种雌孕激素精确质量数的测定能力并验证了雌酮的三级裂解。

在线固相萃取-超高效液相色谱串联质谱法快速测定水中10种抗生素

建立了一种测定水中喹诺酮类、磺胺类、大环内酯类、四环素类等4大类10种抗生素含量的在线固相萃取-液质联用法。样品通过在线固相萃取提取,采用含有0.1%甲酸的乙腈和超纯水为流动相,Hypersil GOLD为分离色谱柱,三重四级杆质谱仪检测和多反应监测(MRM)正离子扫描模式(HESI+)。结果表明10种抗生素在1.0~10.0ng/mL浓度范围内线性良好,相关系数均大于0.99,检出限范围0.126~0.227ng/mL,RSD范围0.5%~6.7%,加标回收率范围为71.4%~104.8%。

UFLC法同时测定当归芍药散中3种活性成分的含量

目的建立超快速液相色谱法(UFLC)同时测定当归芍药散中芍药苷、芍药内酯苷和阿魏酸的含量。方法采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(14∶86,V/V);流速为0.4 m L·min^(-1);检测波长为232 nm;柱温为35℃;进样量为5μL。结果芍药苷、芍药内酯苷、阿魏酸分别在10~500μg·m L^(-1)(r=0.999 9)、2~100μg·m L^(-1)(r=0.999 9)和0.2~10μg·m L^(-1)(r=0.999 9)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为98.9%、97.0%和96.8%。结论该方法快速、准确、重复性好,可用于当归芍药散的质量控制研究。

UFLC-MS/MS法同时测定黄芩汤中8个活性成分的含量

目的建立超快速液相色谱-串联质谱法(UFLC-MS/MS)同时测定黄芩汤中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷和甘草酸8个活性成分的含量。方法采用Shim-Pack XRODS色谱柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~15 min,10%→70%B);流速:0.4 mL·min^(-1);柱温:35℃;进样量:5μL;电喷雾电离源(ESI源)负离子检测,多反应检测(MRM)。结果黄芩汤中8个成分质量浓度分别在浓度范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率为98.5%~100.3%。黄芩汤中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芍药苷、芍药内酯苷、甘草苷和甘草酸的含量范围分别为0.124~0.135、0.057~0.067、0.259~0.282、0.145~0.158、0.077~0.085、0.0061~0.0064、0.030~0.035、0.0157~0.189 mg·mL^(-1)。结论本方法分析时间短、灵敏度高、稳定性好,可用于黄芩汤的质量控制。

UFLC法同时测定黄芩汤中3个有效成分的含量

目的采用超快速液相色谱法同时测定黄芩汤中3个有效成分(汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素)的含量。方法采用梯度洗脱,以Shim-Pack XR ODS柱为分离柱分离样品,0.1%甲酸水-乙腈为流动相,流速为0.4 mL/min,检测波长274 nm,柱温35℃。结果上述3个成分均在1~50 mg/L有良好的线性关系,在黄芩汤中的含量分别为0.128~0.134、0.242~0.267、0.138~0.146 g/L。结论该方法能够准确地测定黄芩汤中汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量,可为黄芩汤质量控制提供依据。

UFLC法同时测定甘草及其炮制品中2种活性成分的含量

目的建立同时测定甘草及其炮制品中甘草苷和甘草酸含量的超快速液相色谱法,为甘草药材及其炮制品的质量控制提供参考。方法采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm);流动相为0.05%磷酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~4 min,5%~20%B;4~12 min,20%~40%B;12~15 min,40%~45%B),平衡时间为2 min;流速为0.8 m L/min;检测波长为237 nm;柱温为30℃。结果甘草苷和甘草酸分别在10~500 mg/L(R=0.999 8)、10~500 mg/L(R=0.999 9)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.9%和99.3%。结论该方法能够准确地测定甘草中甘草苷与甘草酸的含量,操作简便,具有良好的重现性和稳定性,可用于甘草药材的质量控制。

UFLC-MS/MS法同时测定龙胆中7个活性成分的含量

建立可同时测定龙胆中7个活性成分(马钱苷酸、獐牙菜苦苷、6'-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、异荭草苷和异牡荆素)含量的超快速液相色谱-串联质谱方法。流动相采用0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),色谱柱Shim-Pack XR-ODS(75 mm×3.0 mm,2.2μm),梯度洗脱;采用三重四极杆串联质谱仪,电喷雾电离源,正离子模式监测。上述7个成分线性浓度范围分别为2.5~100μg·mL^(-1)(r=0.9996)、1~40μg·mL^(-1)(r=0.9995)、1~40μg·mL^(-1)(r=0.9995)、5~200μg·mL^(-1)(r=0.9996)、0.1~4μg·mL^(-1)(r=0.9995)、0.05~2μg·mL^(-1)(r=0.9998)和0.01~0.4μg·mL^(-1)(r=0.9995)。6批龙胆样品中上述7个成分的含量分别为0.894%~1.072%、0.260%~0.285%、0.223%~0.268%、3.88%~4.05%、0.00726%~0.00898%、0.000840%~0.00195%和0.000779%~0.00104%。该方法灵敏、稳定,可用于龙胆药材的质量控制。

UFLC法同时测定芍药甘草汤中甘草苷和甘草酸的含量

目的建立同时测定芍药甘草汤中甘草苷和甘草酸含量的超快速液相色谱法。方法采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm),0.1%磷酸水(A)-乙腈(B)流动相,梯度洗脱(0~4 min,5%~20%B;4~12 min,20%~40%B;12~15 min,40%~45%B),流速0.8 mL/min,检测波长237 nm,柱温30℃。结果甘草苷和甘草酸均在2~100 mg/L线性关系良好;回收率分别为98.8%和99.1%。结论该方法能够准确地测定芍药甘草汤中甘草苷与甘草酸的含量,可为芍药甘草汤的质量控制提供依据。

UFLC法同时测定栀子厚朴汤中2个黄酮类成分的含量

目的建立同时测定栀子厚朴汤中2个黄酮类成分(柚皮苷和新橙皮苷)含量的超快速液相色谱法分析方法。方法色谱柱采用Shim-Pack XR-ODS柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm),流动相A为0.1%甲酸水,流动相B为乙腈,梯度洗脱(0~10 min,20%B~30%B),平衡时间设定为5 min,流速设定为0.4 mL/min,检测波长采用265 nm,柱温设定为30℃,进样量设定为5μL。结果柚皮苷与新橙皮苷分别在3~150 mg/L(r=0.9993)和1~50 mg/L(r=0.9997)浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为98.9%和99.1%。结论该方法结果准确、操作简便、具有良好的重现性和稳定性,可用于栀子厚朴汤的质量控制。

超快速液相色谱-质谱法测定鲜人参晶及林下山参中的39个人参皂苷成分

目的:通过超快速液相色谱-质谱法(UFLC-MS/MS)同时测定鲜人参晶和林下山参中主要活性成分人参皂苷的含量,探讨鲜人参晶及林下山参中人参皂苷的差异变化,为阐明鲜人参晶物质基础提供参考。方法:室温下,用70%甲醇水溶液对鲜人参晶及林下山参药材进行超声提取,采用Waters ACQUITY UPLC■BEH Shield RP C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-0.5 mmol·L^(–1)甲酸铵水溶液为流动相梯度洗脱。在电喷雾离子源负离子、多反应监测模式下,通过UFLC-MS/MS外标对照品法测定鲜人参晶及林下山参中39个人参皂苷的含量。结果:经方法学验证,建立的分析方法符合定量分析要求。4批林下山参和1批鲜人参晶中的总人参皂苷质量分数分别为27.59~52.63、52.26 mg·g^(–1),稀有人参皂苷质量分数分别为3.79~6.65、7.42 mg·g^(–1)。林下山参中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re总质量分数为0.72%~0.94%,人参皂苷Rb1质量分数为0.24%~0.53%;鲜人参晶中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re总质量分数为1.21%,人参皂苷Rb1质量分数为0.43%。结论:所检测的鲜人参晶和林下山参中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re总量及人参皂苷Rb1含量均符合《中华人民共和国药典》2020年版质量标准规定;采用现代工艺制成的鲜人参晶中含有丰富的人参皂苷,尤其是稀有人参皂苷,其与林下山参中的人参皂苷种类几乎无变化,但含量有一定差异。研究结果为综合评价林下山参和鲜人参晶的质量与功效提供了参考。