Chondrogenic differentiation of human bone mesenchymal stem cells treated with growth differentiation factor 5 under hypoxia

Objective To explore the feasibility and effectiveness of the self-assembly cartilage tissue engineered with chondrogenically differentiated human bone mesenchymal stem cells (hBMCs) induced by growth differentiation factor-5 (GDF-5)

两种H9C2心肌细胞氧化损伤模型的比较

目的:探讨低氧、低糖及血清剥夺(glucose and serum deprivation under hypoxia(1%O_(2)),GSDH)处理与H_(2)O_(2)处理在构建H9C2心肌细胞氧化损伤模型中的应用价值。方法:培养H9C2心肌细胞,当细胞生长状态良好时,用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理或200μmol/L的H_(2)O_(2)作用于心肌细胞24 h。采用CCK8实验检测细胞增殖能力;通过细胞凋亡试剂(annexinV-FITC/PI)、Hoechst染色检测细胞凋亡;细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测细胞氧化应激水平;BODIPY检测细胞脂质过氧化水平;过碘酸雪夫(periodic acid-schiff stain,PAS)染色检测细胞糖原合成能力;线粒体膜电位检测试剂(mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1,JC-1)染色检测线粒体膜电位水平;Western blot检测能量代谢相关分子AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)及氧化应激相关分子NAD(P)H醌脱氢酶1(NAD(P)H quinone dehydrogenase 1,NQO-1)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,GSDH处理组与H_(2)O_(2)处理组的心肌细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组相比,GSDH处理与H_(2)O_(2)处理都增加了心肌细胞的凋亡水平、ROS和脂滴堆积水平增高、糖原消耗量增加且线粒体膜电位降低。但相比于H_(2)O_(2)处理组,GSDH处理组的细胞糖原消耗增多更明显,脂滴堆积也更明显,并且AMPK磷酸化水平显著降低。结论:低氧、低糖及GSDH处理与H_(2)O_(2)处理均能造成H9C2心肌细胞氧化损伤,但相比于H_(2)O_(2)处理组,GSDH处理组的效果更符合体内心肌损伤时的能量代谢转变,有望作为一种更简单便捷的心肌氧化损伤模型应用于科研。

低氧低糖及血清剥夺联合处理抑制Nrf2信号通路诱发大鼠骨髓间充质干细胞氧化应激和凋亡

目的探讨低氧低糖血清剥夺(GSDH)处理对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)氧化应激及凋亡的影响。方法在体外对提取纯化后的原代BMSCs利用低氧(1%O_(2))、低糖(1.0 g/L)及血清剥夺联合处理建立BMSCs细胞损伤模型。采用集落形成实验、细胞周期测定以及CCK-8实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;通过细胞凋亡试剂(AnnexinV-FITC/PI)、线粒体膜电位检测试剂(JC-1)染色和线粒体荧光探针(Mito-Trancker)检测细胞凋亡;细胞活性氧簇(ROS)和钙离子(Fluo-4AM)检测细胞氧化应激水平;Western blotting检测抗氧化应激相关分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)等以及核因子红细胞系2相关因子2(Nrf2)信号通路中关键分子的蛋白表达水平。结果大鼠原代BMSCs表面标志物高表达CD29、CD71,低表达CD45、CD34;GSDH处理抑制BMSCs细胞增殖(P<0.05)和迁移(P<0.05),增加ROS和钙离子水平(P<0.05),且抑制抗氧化应激相关分子GPX4等蛋白表达(P<0.01);与空白对照组相比,GSDH处理后BMSCs凋亡显著升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.01),网络化减少(P<0.01)。Nrf2信号通路中Nrf2蛋白及下游关键分子的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论GSDH处理诱发的BMSCs氧化应激及进一步导致的凋亡损伤与Nrf2信号通路被抑制有关。

益智仁药理作用的初步研究

益智仁氯仿提取物和益智仁水提物具有中枢抑制作用,均能明显提高戊巴比妥纳阈下剂量的小白鼠的睡眠率。具有镇痛作用和提高小白鼠常压下耐缺氧存活时间。益智仁氯仿提取物能提高异丙肾上腺素作用下的小白鼠常压下耐缺氧存活时间。二种提取物均能使幼年大白鼠脾脏、胸腺缩小。

辽东楤木抗应激作用的研究

目的本课题从实验的角度研究辽东楤木抗应激作用。方法根实验要求将不同剂量的辽东楤木灌入小鼠胃中并计算小鼠的游泳时间、常压耐缺氧时间和脑缺血缺氧存活时间。结果辽东楤木能显著地延长小鼠游泳时间、常压耐缺氧时间和脑缺血缺氧存活时间。结论辽东楤木具有突出的抗应激作用。

葛藤与葛根抗炎、耐缺氧作用对比研究及其安全性评价

目的:与葛根对比,初步探讨葛藤抗炎、耐缺氧作用,并对葛藤的安全性进行评价,为葛藤的深入研究提供科学依据。方法:采用常压耐缺氧、低浓度醋酸致小鼠腹腔毛细管通透性增高实验法,考察葛藤耐缺氧及抗炎作用;测定小鼠经口给药的最大耐受量。结果:葛藤小鼠最大耐受量为200g·kg-,为葛藤成人每日最大用量的400倍。葛藤提取液对小鼠1腹腔毛细血管通透性有明显抑制作用,并显示剂量依赖性,葛藤提取液与葛根提取液各组间无显著性差异。葛藤与葛根各剂量组均能延长小鼠常压耐缺氧存活时间,葛藤各剂量组与葛根对比,作用较强。结论:葛藤毒性较小,在抗炎与耐缺氧方面与葛根作用近似。

在模拟低氧环境下心肌细胞HIF-1与CT-1的相互作用

目的:研究低氧环境下大鼠心肌细胞系H9C2细胞中HIF-1与CT-1的相互作用。方法:氯化钴(CoCl2)模拟低氧环境。采用CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率。化学合成siRNA片段,并通过li-pofectamine 2 000转染大鼠心肌细胞系H9C2。采用Real-time PCR和Western-blot技术分别检测HIF-1α和CT-1的mRNA和蛋白质水平。结果:低氧处理48h后,干扰组(转染针对HIF-1α的siR-NA的H9C2)中CT-1mRNA和蛋白水平较对照组(转染无义干扰片段的H9C2)明显减少(P<0.05)。低氧3d和4d后,加入CT-1组的心肌细胞存活率较对照组高(P<0.05),HIF-1mRNA表达水平与对照组无显著差异(P>0.05),HIF-1蛋白水平增加。结论:在培养心肌细胞中模拟低氧环境,HIF-1表达减少伴随着CT-1表达减少,加入CT-1后,HIF-1蛋白表达也增加,HIF-1与CT-1相互作用。

siRNA沉默HIF-1α对大鼠心肌细胞CT-1表达的影响

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在心肌细胞适应低氧环境中作用机制。方法合成针对HIF-1α的siRNA片段,转染大鼠心肌细胞系H9C2。Real-time PCR检测HIF-1α和心肌营养素(CT-1)mRNA水平,Westernblot检测HIF-1α和CT-1蛋白水平。结果低氧环境下,转染针对HIF-1αsiRNA片段后HIF-1αmRNA水平、HIF-1α蛋白质水平、CT-1 mRNA水平和蛋白水平均明显减低(P<0.05)。不进行转染时,CT-1 mRNA水平、HIF-1α蛋白和CT-1蛋白水平在低氧下比常氧下明显增高(P<0.05)。CT-1蛋白由对照组的0.34±0.05增至0.55±0.05(P<0.05)。结论低氧情况下CT-1基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在心肌细胞适应低氧环境中具有重要作用。

乙酰唑胺对低氧大鼠肺组织的保护作用

目的研究低氧环境下乙酰唑胺对大鼠肺组织低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血红素氧化酶1(HO-1)、Caspase-3 mRNA表达的影响。方法采用常压低氧实验建立大鼠低氧模型,单次腹腔注射乙酰唑胺,分别在低氧0,3,6 h后取肺组织,观察肺组织病理学变化,并检测低氧相关基因HIF-1α、Caspase-3、HO-1 mRNA的表达。结果随着低氧时间的延长,模型组大鼠肺组织HIF-1α、Caspase-3和HO-1 mRNA表达均呈升高趋势;与模型组比较,乙酰唑胺组大鼠肺组织HIF-1α、Caspase-3 mRNA的表达明显降低,而HO-1mRNA的表达却更加升高。结论乙酰唑胺可通过降低HIF-1α、Caspase-3 mRNA的表达、增加HO-1 mRNA的表达,对低氧大鼠的肺组织起到保护作用。

低氧抑制人脐静脉血管内皮细胞miR-26a的表达

目的观察低氧对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)miR-26a及PTEN/AKT/VEGF通路相关因子表达的影响。方法分常氧组和低氧组培养48h。荧光定量RT-PCR和Western blot法检测miR-26a及PTEN/AKT/VEGF通路相关因子的表达。结果 RT-PCR结果显示低氧组HUVEC中miR-26a和PTEN的相对表达量为0.42±0.02和0.62±0.03,显著低于常氧组的1.00±0.34和1.00±0.35(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,与常氧组相比,乏氧组HIF-1、VEGF和AKT蛋白表达明显升高,PTEN蛋白明显降低(P<0.05)。结论低氧抑制HUVEC miR-26a的表达并继发下游PTEN/AKT/VEGF因子的序贯反应,可作为创面改善缺血状态治疗的新靶点。

海冬花粉对营养性肥胖小鼠的影响

目的:探讨药食同源的海冬花粉对营养性肥胖小鼠减肥作用的机理。方法:用摄入热量过多造成的小鼠肥胖模型观察海冬花粉的药效及其机理。结果:海冬花粉可降低肥胖小鼠的 Lee′s 指数(P<0.01,P<0.05);降低血糖含量(P<0.01,P<0.05);对耐缺氧、耐疲劳能力均无明显影响;厌食试验阴性;粪便性状无变化。结论:海冬花粉具减肥作用,其减肥不致厌食和腹泻,不影响体力。其减肥机理可能与调节糖代谢有关。

牡蛎肉提取物对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响

目的:探讨牡蛎肉提取物对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响。方法:分别以高、中、低剂量的牡蛎肉提取物给小鼠连续灌胃,不同剂量的干预时间均有2周和4周两种方案,干预后通过负重游泳实验观察小鼠负重游泳时间和免疫器官指数,常压耐缺氧实验观察小鼠耐缺氧能力,强迫游泳实验观察小鼠运动后肝糖原和血乳酸含量变化。结果:与对照组相比,牡蛎肉提取物干预组小鼠负重游泳时间和缺氧死亡时间显著延长(P<0.05),肝糖原含量增加(P<0.05),血清血乳酸含量降低(P<0.05),免疫器官指数提高(P<0.05),并且小鼠抗疲劳能力随着干预时间的延长和干预浓度的增加而逐渐提高,以4周干预时间效果较好。结论:牡蛎肉提取物可以提高小鼠的抗疲劳能力和耐缺氧能力,增强小鼠的免疫能力。

常压低氧气调杀虫系统杀灭文物虫害的试验研究

为研究常压低氧气调杀虫系统对文物常见害虫的杀灭效果,此次试验委托国家档案局档案科学技术研究所提供的黑毛皮蠹幼虫,在对文物进行低氧气调杀虫的同时,采用实验虫体标本去模拟文物在虫害状态下的低氧气调杀虫试验研究。试验结果表明,常压低氧气调杀虫法对黑毛皮蠹幼虫具有良好的杀灭效果,这进一步论证了低氧气调杀虫方法在馆藏有机质文物杀虫领域的安全性、可行性、有效性以及普遍适用性。

鼻前庭吸氧在2岁以内患儿的临床应用效果观察

[目的]观察鼻前庭吸氧在2岁以内患儿的临床应用效果。[方法]选取100例2岁以内患支气管肺炎并且有中度缺氧症状的住院患儿,随机分为观察组和对照组,每组50例,观察组采用鼻前庭吸氧,对照组采用常规鼻导管吸氧。设定氧流量为1.5L/min。观察两组患儿吸氧前、吸氧后30min、吸氧后1h测经皮血氧饱和度(SpO2)变化情况及临床缺氧症状改善情况。[结果]观察组与对照组在SpO2和缺氧症状改善方面差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]鼻前庭吸氧和常规鼻导管吸氧对2岁以内中度缺氧患儿治疗效果相近。

丹参多酚酸盐对缺氧心肌细胞的保护作用

目的分析丹参多酚酸盐对缺氧心肌细胞的保护作用。方法新生SD大鼠50只,分离并培养其原代心肌细胞,选择生长良好的心肌细胞,建立心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,随机分为空白对照组(仅于细胞DMEM培养基中培养)、缺氧/复氧组(仅建立H/R模型)、干预1组(H/R模型+丹参多酚酸盐)、干预2组(丹参多酚酸盐+H/R模型)、干预3组(丹参多酚酸盐+H/R模型+丹参多酚酸盐)各10只,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定心肌细胞活力,以紫外分光光度计平行测定各组氧化应激指标、心肌损伤标志物、炎症因子水平。结果缺氧/复氧组心肌细胞存活率低于空白对照组,干预1组、干预2组、干预3组细胞存活率高于缺氧/复氧组,且药物干预组中干预3组细胞存活率最高(P<0.05);缺氧/复氧组SOD含量低于空白对照组,而MDA、p22phox活性明显高于空白对照组,干预1组、干预2组、干预3组SOD含量高于缺氧/复氧组,而MDA、p22phox活性低于缺氧/复氧组,且干预3组上述指标改善最明显(P<0.05);缺氧/复氧组心肌细胞培养液中AST、CK⁃MB、LDH、TNF⁃α、IL⁃1、hs⁃CRP水平明显高于空白对照组,而干预1组、干预2组、干预3组AST、CK⁃MB、LDH、TNF⁃α、IL⁃1、hs⁃CRP水平明显低于缺氧/复氧组,且干预3组上述指标改善最明显(P<0.05)。结论丹参多酚酸盐可较好保护缺氧心肌细胞,减轻其氧化应激反应、心肌损伤、炎症因子水平,抑制细胞凋亡,提高细胞存活率。

低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响

目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α（HIF-1α）过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Western blotting检测2组细胞常氧和缺氧时HIF-1α的表达;Hochest33342染色、流式细胞仪和Caspase-3活性检测3种方法观察神经细胞拟缺氧损伤时HIF-1α的过表达对细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L及100μmol/L CoCl2处理PC12细胞12 h、24 h可以诱导细胞拟缺氧损伤模型,实验组细胞常氧和缺氧时HIF-1α表达均高于对照组.Hochest33342染色结果提示实验组凋亡细胞明显少于对照组细胞.50 μmol/L CoCl2处理24 h后,流式细胞仪结果显示实验组细胞凋亡率为（5.41±3.29）%,对照组为（8.35±2.59）%,差异有统计学意义（P＜0.05）.加入50μmol/LCoCl2处理12 h后,实验组细胞中Caspase-3活性的增加倍数明显低于实验组细胞.结论 适量CoCl2处理的神经细胞系拟缺氧损伤模型中,HIF-1α的过表达对细胞凋亡有显著的抑制作用.