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The ZmHSF08-ZmUGT92A1 module regulates heat tolerance by altering reactive oxygen species levels in maize 被引量:1
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作者 Hao Li Jing Wang +4 位作者 Menglong Li Leiming Wu Wenhui Rao Xiaojian Peng Haiyang Jiang 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2024年第5期1437-1446,共10页
GTs(Glycosyltransferases)are important in plant growth and abiotic stresses.However,its role in maize heat response is far from clear.Here,we describe the constitutively expressed UDP-glycosyltransferase ZmUGT92A1,whi... GTs(Glycosyltransferases)are important in plant growth and abiotic stresses.However,its role in maize heat response is far from clear.Here,we describe the constitutively expressed UDP-glycosyltransferase ZmUGT92A1,which has a highly conserved PSPG box and is localized in chloroplasts,is induced under heat stress.Functional disruption of ZmUGT92A1 leads to heat sensitivity and reactive oxygen species accumulation in maize.Metabolomics analysis revealed that ZmUGT92A1 affected multiple metabolic pathways and altered the metabolic homeostasis of flavonoids under heat stress.In vitro assay showed ZmUGT92A1 exhibits glycosyltransferase activity on flavonoids and hormones.Additionally,we identified a rapidly heat-induced transcription factor,ZmHSF08,which can directly bind and repress the promoter region of ZmUGT92A1.The ZmHSF08 overexpression line exhibits heat sensitivity and reactive oxygen species accumulation.These findings reveal that the ZmHSF08-ZmUGT92A1 module plays a role in heat tolerance in maize and provide candidate strategies for the development of heat-tolerant varieties. 展开更多
关键词 Heat shock transcription factors Heat stress Oxidative damage uridine diphosphate glycosyltransferase Zea mays L.
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猪UGT 1A1酶基因的克隆、表达及其对呕吐毒素特异性降解的作用
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作者 贺卫华 陈诗琪 +3 位作者 王丽华 丁斓 翟晓虎 杨俊花 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第8期1722-1728,共7页
为了在Sf9昆虫细胞中表达猪尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A1蛋白并对其进行功能鉴定。首先,合成密码子优化的UGT 1A1基因,克隆到载体pFastBacⅠ中,构建杆状病毒重组转移载体,然后导入DH10Bac中,获得重组的穿梭质粒,再转染Sf9细胞得... 为了在Sf9昆虫细胞中表达猪尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)1A1蛋白并对其进行功能鉴定。首先,合成密码子优化的UGT 1A1基因,克隆到载体pFastBacⅠ中,构建杆状病毒重组转移载体,然后导入DH10Bac中,获得重组的穿梭质粒,再转染Sf9细胞得到重组杆状病毒,采用Western blotting方法鉴定重组后UGT 1A1蛋白的表达;对镍柱亲和层析纯化获得目的蛋白酶的动力学参数及其对呕吐毒素(DON)的代谢进行检测。结果表明:pFastBac-UGT 1A1质粒被成功构建,导入感受态细胞DH10Bac中获得重组穿梭质粒Bacmid-UGT 1A1,再转染昆虫细胞Sf9获得重组Bacmid-UGT 1A1蛋白,能够与多组氨酸标签单抗发生特异性反应。优化目的蛋白表达,并对其体外代谢DON进行了酶学性质和动力学参数的研究。本研究通过基因克隆、表达和代谢产物的分析等技术手段获得具有较好的生物活性且纯化的Bacmid-UGT 1A1蛋白,为揭示DON在肝脏中的代谢途径、代谢产物和关键调控因子提供参考。 展开更多
关键词 呕吐毒素(DON) 葡萄糖醛酸缀合物 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(ugt) 猪肝脏
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Correlation between UGT1A1 Polymorphism and Neonatal Hyperbilirubinemia of Neonates in Wuhan 被引量:8
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作者 刘伟 常立文 +4 位作者 谢敏 李文斌 容志惠 吴莉 陈玲 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2017年第5期740-743,共4页
This study attempts to discuss the correlation between UGT1A1*28 as uridine diphosphate glucuronosyltransferase gene promoter and coding region Gly71 Arg gene polymorphism with neonatal hyperbilirubinemia of neonates... This study attempts to discuss the correlation between UGT1A1*28 as uridine diphosphate glucuronosyltransferase gene promoter and coding region Gly71 Arg gene polymorphism with neonatal hyperbilirubinemia of neonates in Wuhan. A total of 168 neonates were divided into the hyperbilirubinemia group(case group, n=108) and healthy neonates group(control group, n=60). Their DNA was obtained through blood extraction. The gene exon mutation of UGT1A1 was detected by Sanger sequencing, which revealed the relationship between UGT1A1*28 and Gly71 Arg polymorphism with neonatal hyperbilirubinemia of neonates. The results showed that:(1) The frequency of UGT1A1*28 allele mutation in the case group and the control group was 9.3% and 10% respectively, with the difference being not significant between the two groups(P〉0.05).(2) The frequency of Gly71 Arg allele mutation in the case group and the control group was 35.1% and 21.7% respectively, with the difference being significant between the two groups(P〈0.01).(3) The serum bilirubin level of Gly71 Arg mutant homozygous and heterozygous subgroups(n=66) in the case group was 302.7±31.4 μmol/L, which was significantly higher than 267.3±28.5 μmol/L of the wild subgroup(n=42)(P〈0.01). It was suggested that the occurrence of neonatal hyperbilirubinemia of neonates in Wuhan was not associated with UGT1A1*28 gene polymorphism, but closely with the Gly71 Arg gene polymorphism. Meanwhile, the Arg allele mutation was related to the degree of jaundice. 展开更多
关键词 NEONATES gene polymorphism uridine diphosphate glucuronosyltransferase JAUNDICE ugt1A1*28 Gly71Arg
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CYP450、GSTs、UGT基因多态性与抗结核药物肝损伤的关系 被引量:2
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作者 孙淑丰 李标 +1 位作者 崇英之 杜莹 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第39期6-10,共5页
目的探讨细胞色素P450(CYP450)、谷胱甘肽转移酶(GSTs)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)基因多态性及其交互作用与抗结核药物性肝损伤(ADLI)发生的关系。方法选择接受抗结核化疗6个月内出现肝损伤的汉族结核病患者207例纳入病例组,以... 目的探讨细胞色素P450(CYP450)、谷胱甘肽转移酶(GSTs)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)基因多态性及其交互作用与抗结核药物性肝损伤(ADLI)发生的关系。方法选择接受抗结核化疗6个月内出现肝损伤的汉族结核病患者207例纳入病例组,以同期治疗中未出现肝功能异常的结核病患者207例为对照组。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法观察CYP1A2 734C/A、CYP3A4 18B-20232G/A、CYP3A5 3-6986A/G、CYP2C19 681G/A、GSTA1-69C/T、GSTM3缺失突变、UGT2B7-268A/G、UGT2B7 802C/T位点的多态性。采用单因素、多因素Logistics回归分析法分析CYP450、GSTs、UGT基因多态性与ADLI发生的关系。采用多因子降维法分析CYP450、GSTs、UGT基因多态性位点之间的交互作用与ADLI发生的关系。结果 CYP1A2 734C/A的AA基因型、CYP3A4 18B-20232G/A的GA基因型、UGT2B7-268A/G的AG基因型、UGT2B7 802C/T的TT基因型是ADLI的保护基因型,而CYP3A5 3-6986A/G的AG及GG基因型、GSTA1-69C/T的TT基因型则是ADLI的危险基因型。调整其他基因多态性的影响后,发现CYP3A4*18B-20232G/A、CYP3A5*3-6986A/G、UGT2B7-268A/G和UGT2B7802C/T位点基因多态性与ADLI的发生有关。多因子降维法分析得到UGT2B7-268A/G、CYP3A4 18B-20232G、CYP3A5 3-6986G组成的3因素模型为最佳模型,检验样本准确度为61.29%,交叉验证一致性为10/10。最佳模型的估计结果显示,与低危基因型组合相比,高危基因型组合显著增加ADLI的发病风险。结论 CYP3A4*18B-20232G/A、CYP3A5*3-6986A/G、UGT2B7-268A/G、UGT2B7 802C/T位点基因多态性与ADLI的发生有关,且基因位点之间存在交互作用,其中UGT2B7-268A/G、CYP3A4 18B-20232G、CYP3A5 3-6986G组合将显著增加ADLI的发生风险。 展开更多
关键词 结核病 抗结核药 药物性肝损伤 药物代谢酶 细胞色素P450 谷胱甘肽转移酶 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 基因多态性
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植物UDP-糖基转移酶生化特性和功能研究进展 被引量:27
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作者 姬向楠 何非 +1 位作者 段长青 王军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期316-323,共8页
UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以... UDP-糖基转移酶催化糖基转移反应,将糖基从活化的供体分子转移到受体分子上,从而调节受体分子在细胞和机体内的活性,如生物活性、溶解性和转运性。糖苷化是植物次生代谢较为普遍的修饰反应,在调节植物体内激素平衡、解除外源毒素毒性以及次生代谢产物的合成和贮存等方面发挥重要功能。本文就与植物次生代谢产物、植物激素及生物异源物质糖苷化相关的UDP-糖基转移酶的生化特性和功能研究进展进行综述,以期为本领域相关研究提供一定的参考。 展开更多
关键词 植物次生代谢 UDP-糖基转移酶 生化及分子生物学
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家蚕核型多角体病毒egt基因的分子进化分析 被引量:2
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作者 曹广力 贡成良 +2 位作者 薛仁宇 朱越雄 魏育红 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1244-1254,共11页
通过PCR方法获得家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclearpolyhedrosis virus,BmNPV)的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因(egt)片段,序列分析表明该片段带有EGT的完整ORF,推测的多肽可形成EGT结构域的高级结构。为了研究egt的起源,... 通过PCR方法获得家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclearpolyhedrosis virus,BmNPV)的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因(egt)片段,序列分析表明该片段带有EGT的完整ORF,推测的多肽可形成EGT结构域的高级结构。为了研究egt的起源,利用家蚕基因组数据库,电子克隆了多个家蚕尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)基因,在此基础上进行了进化分析,表明BmNPV的EGT为antennal-enriched型UGT;推测核型多角体病毒(nucleopolyhedrivirus,NPV)和颗粒体病毒(granulovirus,GV)的egt基因在进化上来源于昆虫的UGT基因,但GV的egt基因在进化上的起源可能要早于NPV的egt基因;可能在昆虫祖先种进化形成不同昆虫目的某一时期,杆状病毒的祖先种从昆虫中获得了antennal-enriched型UGT基因,并进化为egt基因。家蚕的部分UGT基因与转座子元件连锁的基因组结构特点反映了杆状病毒的egt基因可能通过转座子的传递而获得。 展开更多
关键词 杆状病毒 核型多角体病毒 颗粒体病毒 蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 进化起源
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小鼠慢性肝损伤对尿苷二磷酸葡萄糖苷酰转移酶1A1 mRNA表达的影响
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作者 傅玉如 陈梅 《岭南现代临床外科》 2004年第1期70-72,共3页
目的探讨慢性肝损伤对小鼠尿苷二磷酸葡萄糖苷酰转移酶(UGT)1A1mRNA表达的影响。方法通过四氯化碳(CCl4)灌胃建立小鼠慢性肝损伤模型,采用33只雄性昆明鼠,随机分为三组:A组(正常对照),B组(实验组,以10%CCl4花生油溶液0.1ml/10g灌胃/每3... 目的探讨慢性肝损伤对小鼠尿苷二磷酸葡萄糖苷酰转移酶(UGT)1A1mRNA表达的影响。方法通过四氯化碳(CCl4)灌胃建立小鼠慢性肝损伤模型,采用33只雄性昆明鼠,随机分为三组:A组(正常对照),B组(实验组,以10%CCl4花生油溶液0.1ml/10g灌胃/每3天,持续30天),C组(实验组,以10%CCl4花生油溶液0.1ml/10g灌胃,每3天,持续60天)。观察肝功能改变,肝脏形态变化,并以逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肝脏UGT1A1mRNA表达的差异。结果各组间UGT1A1mRNA表达有显著差异(P<0.05),实验组UGT1A1mRNA表达比正常组降低,且肝损伤程度越严重表达越低。结论CCl4所致慢性肝损伤中能降低肝脏UGT1A1mRNA的表达。 展开更多
关键词 小鼠 慢性肝损伤 尿苷二磷酸葡萄糖苷酰转移酶1A1 MRNA表达 基因表达
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构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D 被引量:4
8
作者 费理文 王勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第22期116-122,共7页
利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA... 利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。 展开更多
关键词 甜菊糖苷 莱鲍迪苷D 尿苷二磷酸葡萄糖 蔗糖合酶 UDP-糖基转移酶 生物催化
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植物类黄酮UDP-糖基转移酶研究进展 被引量:9
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作者 姚宇 顾佳珺 +2 位作者 孙超 申国安 郭宝林 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期47-57,共11页
植物类黄酮化合物是一类重要的天然产物,通常以糖苷的形式存在。尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate glycosyltransferase,UGT)能够对类黄酮进行糖基化修饰,形成种类丰富的类黄酮糖苷,是许多药用植物中的类黄酮药用活性成分。近... 植物类黄酮化合物是一类重要的天然产物,通常以糖苷的形式存在。尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate glycosyltransferase,UGT)能够对类黄酮进行糖基化修饰,形成种类丰富的类黄酮糖苷,是许多药用植物中的类黄酮药用活性成分。近年来,随着越来越多的植物基因组被解析,大量参与类黄酮合成的糖基转移酶得以鉴定。本文首先简述了植物UGT的结构特征和家族分类,然后详细综述了植物类黄酮UGT的研究进展,对处于不同家族中的植物类黄酮UGT的修饰位点特异性、以及糖供体和糖受体的特异性进行了全面的归纳和总结,以期为植物类黄酮UGT的结构与功能相关性研究及新植物类黄酮UGT的发掘与鉴定研究奠定基础。 展开更多
关键词 类黄酮 生物合成 糖基转移酶 尿苷二磷酸糖基转移酶 基因家族
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野菊尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)基因家族的全基因组鉴定和表达分析 被引量:4
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作者 廖家豪 陈诗 +2 位作者 刘迪 张景景 刘义飞 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期702-716,共15页
尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)在植物体内参与多种次生代谢产物的糖基化修饰,在植物生长发育与次生代谢调节中具有重要作用。该研究基于二倍体野菊Chrysanthemum indicum基因组,利用生物信息学方法对野菊UGT基因家族进行鉴定,并对UGT蛋白... 尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)在植物体内参与多种次生代谢产物的糖基化修饰,在植物生长发育与次生代谢调节中具有重要作用。该研究基于二倍体野菊Chrysanthemum indicum基因组,利用生物信息学方法对野菊UGT基因家族进行鉴定,并对UGT蛋白的理化性质、亚细胞定位预测、保守基序、系统发育、染色体定位、基因结构以及基因复制事件进行分析,利用转录组与实时荧光定量PCR分析野菊UGT基因在花和叶组织中的表达模式,利用类靶向代谢组分析花和叶中差异代谢物。结果显示,在二倍体野菊基因组中共鉴定出279个UGT基因,系统发育分析显示这些UGT基因分为了8个亚家族,同一亚家族成员在染色体上呈簇状分布,串联重复是野菊UGT基因家族扩张的主要驱动力。结构域分析显示,262个UGT基因具有完整的植物次生代谢信号序列(PSPG box)。顺式作用元件分析表明,光响应元件是UGT基因家族成员启动子区域最普遍存在的元件。花和叶组织的类靶向代谢组分析显示,木犀草素-7-O-葡萄糖苷、山柰酚-7-O-葡萄糖苷等多种黄酮类代谢物在花中具有更高的积累水平。花和叶组织的比较转录组分析显示,差异表达的UGT基因有72个,其中29个基因是在花中上调,43个基因在叶中上调。相关性网络与系统发育分析显示CindChr9G00614970.1、CindChr2G00092510.1、CindChr2G00092490.1可能参与了野菊中7-O-黄酮苷的合成。实时荧光定量PCR分析证实了转录组数据的可靠性。该研究结果有助于了解野菊UGT基因家族的功能,为深入研究野菊黄酮苷合成的分子调控机制提供数据参考和理论依据。 展开更多
关键词 野菊 尿苷二磷酸糖基转移酶(ugt) 代谢组分析 转录组分析
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茶树类黄酮生物合成UGT基因的鉴定与表达分析
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作者 范家坤 念波 +6 位作者 周玲霞 陈立佼 安江珊 蒋勋 王兴华 赵明 马燕 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第20期6707-6718,共12页
类黄酮物质是茶树最重要的次生代谢物,对茶叶风味和保健功能具有决定作用。尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate glycosyltransferase,UGT)催化的糖基化反应是黄酮类物质合成的关键步骤,具有重要的研究价值。本研究应用Iso-seq全... 类黄酮物质是茶树最重要的次生代谢物,对茶叶风味和保健功能具有决定作用。尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate glycosyltransferase,UGT)催化的糖基化反应是黄酮类物质合成的关键步骤,具有重要的研究价值。本研究应用Iso-seq全长转录组技术获得了茶树UGT基因,通过与拟南芥以及已经报道的合成类黄酮的UGT基因进行序列比对,筛选参与类黄酮生物合成的UGT基因,并采用RT-qPCR和高效液相色谱测定候选基因的表达和类黄酮物质的含量,分析基因表达量与类黄酮物质含量的相关性。结果发现UDP75L121、UDP75L123、UDP78A15、UDP94P11与儿茶素没食子酸酯(catechin gallate,CG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)含量呈正相关,UDP78A15与花青素矢车菊色素(cyanidin,Cy)、天竺葵色素(pelargonidin,Pel)和锦葵色素(malvidin,Ma)含量呈正相关,而UDP75L123、UDP78A15与黄烷醇类山柰酚(kaempferol,Kae)和酚酸类鞣花酸(ellagic acid,EA)含量呈负相关(P<0.05),初步表明这4个基因可能参与茶叶类黄酮物质的生物合成。本研究可为进一步分析茶树类黄酮物质的生物合成提供参考。 展开更多
关键词 茶树 类黄酮 尿苷二磷酸糖基转移酶基因 Iso-seq全长转录组 相关性分析
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群体感应动态调控促进大肠杆菌合成红景天苷
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作者 沈玉平 贺茜 +2 位作者 周紫微 何春兰 张祖姣 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第14期110-117,I0001-I0003,共11页
红景天苷是一种高品质天然产物,极具应用和开发价值。目前,大肠杆菌从头合成红景天苷存在产量低和高比例中间产物酪醇残留等问题。为此,在前期获得的苯丙酮酸脱羧酶突变体ARO10F138L/D218G基础上,通过优选合成途径关键酶醇脱氢酶和尿苷... 红景天苷是一种高品质天然产物,极具应用和开发价值。目前,大肠杆菌从头合成红景天苷存在产量低和高比例中间产物酪醇残留等问题。为此,在前期获得的苯丙酮酸脱羧酶突变体ARO10F138L/D218G基础上,通过优选合成途径关键酶醇脱氢酶和尿苷二磷酸葡萄糖糖基转移酶,红景天苷产量达到(605.8±16.8) mg/L。敲除分支途径基因feaB,强化表达尿苷二磷酸葡萄糖合成关键基因pgm和galU,红景天苷产量提高95.0%,达到(1 156.3±44.2) mg/L。针对中间产物酪醇积累和发酵菌体密度低的问题,通过群体感应动态调控合成途径,降低了酪醇比例,减轻了其对底盘细胞的毒性作用,红景天苷产量提高36.3%,达到(1 484.6±21.4) mg/L,OD600值提高31.6%,达到8.18±0.23。在2 L发酵罐中,群体感应动态调控工程菌的红景天苷产量达到4.38 g/L,OD600值达到46.74,分别较对照提高48.2%和26.6%,发酵液中酪醇比例由33.7%下降至17.9%,展现了良好的生产潜力。该研究采用的群体感应动态调控策略,可有效降低中间产物积累,缓解毒性代谢物对底盘细胞的生长抑制,对其他糖苷类天然产物或高毒性化学品的生物合成具有良好的借鉴和参考意义。 展开更多
关键词 红景天苷 大肠杆菌 群体感应 动态调控 醇脱氢酶 尿苷二磷酸葡萄糖糖基转移酶
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北柴胡UGT基因的克隆及其过量表达和RNAi转基因载体的构建 被引量:8
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作者 隋春 徐洁森 +3 位作者 赵立子 魏建和 徐艳红 孙鹏 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期558-563,共6页
目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的UGT基因,构建其过表达和抑制表达的转基因载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过RACE和LD-PCR方法扩增全长cDNA克隆。设计含有酶切位点... 目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的UGT基因,构建其过表达和抑制表达的转基因载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过RACE和LD-PCR方法扩增全长cDNA克隆。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增UGT基因的ORF和部分片段后,酶切,分别插入到pCAMBIA-SUPER1 300和pHANNIBAL中。重组的pHANNIBAL经Not I酶切后插入到pART27中。最终以构建出过表达和抑制表达的转基因载体。结果:扩增到了北柴胡1个UGT基因全长cDNA克隆,构建了这一基因的过表达和抑制表达转基因载体。结论:通过UGT基因的全长cDNA克隆和转基因载体构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。 展开更多
关键词 北柴胡 ugt基因 转基因载体
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北柴胡糖基转移酶基因BcUGT8的克隆、序列分析及其原核表达载体构建 被引量:8
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作者 徐洁森 魏建和 +2 位作者 陶韵文 孙晶 隋春 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期2453-2459,共7页
目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础... 目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和长距离PCR扩增方法(LD-PCR)克隆全长cDNA。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增其开放阅读框(ORF),酶切后,插入到pET-28a(+)载体中,构建出原核表达载体。结果扩增到北柴胡1个糖基转移酶(UGT)基因全长cDNA,构建了这一基因的原核表达载体。结论通过BcUGT8基因的全长cDNA克隆、序列分析和原核表达载体的构建,为后续开展体外酶蛋白表达、纯化和催化活性分析实验,验证其生物功能奠定了基础。 展开更多
关键词 北柴胡 糖基转移酶基因 序列分析 原核表达载体 PCR
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北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化 被引量:6
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作者 陶韵文 徐洁森 +6 位作者 魏建和 孙晶 徐艳红 杨欣 张岩 刘娟 隋春 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1345-1352,共8页
本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1 ORF序列,预测了其蛋白三维结构,利用qRT-PCR分析了BcUGT1的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性。结果表明,BcUGT1可能参与柴胡皂苷生物合成。随后,构建了BcUGT1原核表达载体,成功诱导出目标蛋白... 本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1 ORF序列,预测了其蛋白三维结构,利用qRT-PCR分析了BcUGT1的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性。结果表明,BcUGT1可能参与柴胡皂苷生物合成。随后,构建了BcUGT1原核表达载体,成功诱导出目标蛋白,并进行了纯化。原核表达实验中共采用了3种载体:pRSET-A、pET-28a(+)和pET-30a(+),3种宿主菌:BL21(DE3)plysS、BL21A1和BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,进行了不同诱导条件的探索,包括不同诱导物(L-阿拉伯糖和IPTG)的不同浓度、不同诱导时间和温度,结果以pET-28a(+)和pET-30a(+)为载体,BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL为宿主菌,0.5或1 mmol.L 1IPTG,16℃,20 h为条件,诱导出目标蛋白。利用PrepEase His标签蛋白纯化试剂盒,纯化获得了目标蛋白,为后续开展BcUGT1基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 北柴胡 ugt基因 茉莉酸甲酯诱导表达 组织表达 原核表达 蛋白纯化
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186例消化系统恶性肿瘤患者UGT1A1~*6、UGT1A1~*28基因多态性的检测和分析 被引量:5
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作者 杨阳 龚晓斌 +5 位作者 柳珂 侯幸赟 黄立峰 仲人前 张凤 陈万生 《中国医院药学杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期1077-1083,共7页
目的:检测和分析消化系统恶性肿瘤患者UGT1A1*6、UGT1A1*28基因多态性。方法:收集186例消化系统恶性肿瘤患者血液标本,采用焦磷酸测序方法对UGT1A1*6、UGT1A1*28基因多态性进行检测,并对基因多态性频率进行统计分析。结果:186例消化系... 目的:检测和分析消化系统恶性肿瘤患者UGT1A1*6、UGT1A1*28基因多态性。方法:收集186例消化系统恶性肿瘤患者血液标本,采用焦磷酸测序方法对UGT1A1*6、UGT1A1*28基因多态性进行检测,并对基因多态性频率进行统计分析。结果:186例消化系统恶性肿瘤患者样本具有群体代表性。UGT1A1*6基因多态性为野生型G/G占比63.4%、杂合型G/A占比32.8%、突变纯合型AA占比3.8%;UGT1A1*28基因多态性为野生型TA6/TA6占比75.8%、杂合型TA6/TA7占比21.5%、突变纯合型TA7/TA7占比2.7%;UGT1A1*6和*28基因多态性为野生型G/G且TA6/TA6占比48.9%,单点变异型G/G且TA6/TA7占比12.4%、G/A且TA6/TA6占比23.1%,双点变异型G/G且TA7/TA7占比2.2%、G/A且TA6/TA7占比9.1%、A/A且TA6/TA6占比3.8%,三点变异型G/A且TA7/TA7占比0.5%。患者UGT1A1*6与UGT1A1*28基因多态性频率分布之间具有显著性差异(P<0.05)。3个不同年龄段患者之间,胃癌、结直肠癌、其他消化系统恶性肿瘤患者之间的UGT1A1*28、UGT1A1*6和*28基因型分布具有显著性差异(P<0.05)。结论:消化系统恶性肿瘤患者应用伊立替康时,应联合检测UGT1A1*6和UGT1A1*28基因多态性,同时密切关注患者的肿瘤类型以及年龄差异。 展开更多
关键词 尿苷二磷酸葡糖醛酸基转移酶 ugt1A1*6 ugt1A1*28 基因多态性 消化系统恶性肿瘤
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升清胶囊对胆色素结石B-UGT mRNA表达的影响 被引量:3
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作者 顾宏刚 章学林 +2 位作者 梁晓强 朱培庭 张静喆 《上海中医药大学学报》 CAS 2012年第1期59-62,共4页
目的:探讨疏肝利胆中药升清胶囊防治胆色素结石的作用机制。方法:以原代细胞培养方法建立胆色素结石豚鼠肝细胞模型,采用血清药理学方法制备不同浓度含升清胶囊药物血清;以RT-PCR法检测不同浓度含药血清对于尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移... 目的:探讨疏肝利胆中药升清胶囊防治胆色素结石的作用机制。方法:以原代细胞培养方法建立胆色素结石豚鼠肝细胞模型,采用血清药理学方法制备不同浓度含升清胶囊药物血清;以RT-PCR法检测不同浓度含药血清对于尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(B-UGT)mRNA的影响。结果:升清胶囊可增强肝细胞内B-UGT的mRNA表达,且随着用药浓度的增加肝细胞内B-UGT mRNA表达呈上升趋势。结论:升清胶囊防治胆色素结石的作用机制可能与增强肝细胞B-UGT mRNA表达,进而改善胆红素代谢、抑制致石性胆汁的形成有关。 展开更多
关键词 升清胶囊 胆石病 肝细胞 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶
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北柴胡糖基转移酶基因BcUGT3,BcUGT6的表达分析及其原核表达 被引量:2
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作者 陶韵文 徐洁森 +3 位作者 孙晶 魏建和 刘娟 隋春 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期185-191,共7页
该研究测定了北柴胡中2个糖基转移酶基因BcUGT3和BcUGT6在不同组织中的转录水平及MeJA处理后不定根中的转录水平。BcUGT3在根、叶、花和果中的转录水平无明显差异,但均高于茎中的转录水平。BcUGT6在叶中转录水平最高,在花中最低。以未... 该研究测定了北柴胡中2个糖基转移酶基因BcUGT3和BcUGT6在不同组织中的转录水平及MeJA处理后不定根中的转录水平。BcUGT3在根、叶、花和果中的转录水平无明显差异,但均高于茎中的转录水平。BcUGT6在叶中转录水平最高,在花中最低。以未处理的为对照,BcUGT6在MeJA处理后2 h,8 h,24 h,2 d,4 d的北柴胡不定根中,转录水平均提高近2倍,表明BcUGT6的转录受MeJA影响较小。BcUGT3转录水平随处理时间的延长不断增加,4 d时,达7倍左右。利用载体pET-28a(+),进行了2个基因的原核表达。IPTG诱导后,宿主菌表达出了目的蛋白,并获得了纯化蛋白。为后续开展这2个基因的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 北柴胡 ugt基因 组织表达 MeJA诱导表达 原核表达 蛋白纯化
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铁皮石斛尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)基因家族鉴定与表达分析 被引量:5
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作者 陈家栋 姜武 +4 位作者 宋敏全 周银君 李亚萍 段晓婧 陶正明 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1840-1850,共11页
尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)是一个在植物中高度保守的蛋白,通常在次生代谢途径中起作用。该文利用隐马可列夫模型(HMM)在铁皮石斛Dendrobium officinale全基因组中进行UGT基因家族成员筛选,共得到44个UGT家族成员。利用生物信息学对铁... 尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)是一个在植物中高度保守的蛋白,通常在次生代谢途径中起作用。该文利用隐马可列夫模型(HMM)在铁皮石斛Dendrobium officinale全基因组中进行UGT基因家族成员筛选,共得到44个UGT家族成员。利用生物信息学对铁皮石斛基因的结构、系统进化以及启动子区域原件进行分析,结果表明,UGT基因家族可分为4个亚家族,各亚家族中UGT基因具有相对保守的基因结构,拥有9个保守的结构域。UGT基因上游启动子区含有多种植物激素及环境因子相关的顺式作用元件,表明UGT基因的表达可能会受到植物激素和外界环境因素的诱导,比较铁皮石斛不同组织中UGT基因的表达,发现UGT基因在铁皮石斛各个部位中均有表达,可以推测UGT基因在铁皮石斛多个组织的中发挥着重要作用。通过对铁皮石斛菌根共生低温胁迫、缺磷胁迫的转录组分析,该研究发现仅有一个基因在菌根共生和低温、缺磷胁迫下均上调表达。该研究结果有助于了解兰科植物UGT基因家族的功能,为深入研究铁皮石斛多糖代谢途径的分子调控机制提供理论基础。 展开更多
关键词 铁皮石斛 尿苷二磷酸糖基转移酶(ugt) 基因表达 系统进化分析
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UGT8在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞转移的调控作用 被引量:2
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作者 何旭旭 赵萌 +4 位作者 杨一群 左芦根 耿志军 葛思堂 陈德利 《中华全科医学》 2023年第4期544-548,共5页
目的 研究尿苷二磷酸糖基转移酶8(UGT8)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与患者远期预后的关系及对胃癌细胞转移的调控作用。方法 纳入分析2013年12月—2016年10月于蚌埠医学院第一附属医院行胃癌根治术的109例患者;采用免疫组化与免疫... 目的 研究尿苷二磷酸糖基转移酶8(UGT8)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与患者远期预后的关系及对胃癌细胞转移的调控作用。方法 纳入分析2013年12月—2016年10月于蚌埠医学院第一附属医院行胃癌根治术的109例患者;采用免疫组化与免疫印迹法检测UGT8在胃癌组织中的表达水平;运用统计学方法分析胃癌中UGT8表达水平与临床病理参数之间的关系;采用Cox回归模型和ROC曲线评估影响患者术后5年生存率的独立风险因素和UGT8的诊断效能;采用GEO数据库获取胃癌数据集并对UGT8进行GO和KEGG富集分析;体外分析UGT8对胃癌细胞(MGC-803)转移的影响。结果 胃癌组织中UGT8的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01);UGT8高表达组肿瘤直径(≥5 cm)、T3~4期、N2~3期、CEA≥5μg/L及糖类抗原19-9≥37 kU/L患者比例明显高于UGT8低表达组(均P<0.05)。Cox回归分析显示UGT8高表达是影响胃癌患者术后5年生存率的独立风险因素。ROC曲线分析显示UGT8预判胃癌患者术后5年死亡的敏感性为73.00%,特异性为78.30%(P<0.01)。GO富集分析显示UGT8涉及钙黏蛋白结合活性,KEGG富集结果显示UGT8主要参与黏附通路等。免疫印迹实验显示UGT8可促进癌细胞转移相关信号基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和趋化因子受体4(CXCR4)的磷酸化(P<0.05)。结论 UGT8在胃癌组织中高表达与预后不良相关,并可能通过调控SDF-1/CXCR4信号参与胃癌细胞转移进程。 展开更多
关键词 胃癌 尿苷二磷酸糖基转移酶8 远期预后 癌细胞转移 生物标志物
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