智能手机辅助双探针比色法检测α-葡萄糖苷酶

该文以3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和罗丹明B为比色探针,建立了α-葡萄糖苷酶的比色检测方法,并在此基础上基于智能手机策略,通过RGB值对α-葡萄糖苷酶进行检测。结果表明,Fe^(3+)-TMB-罗丹明B显色体系的吸光度与α-葡萄糖苷浓度在20~100 U/L范围内呈线性关系,检出限为3.3 U/L。采用photo⁃shop软件分析样品图像和样品荧光图像的RGB值,其与α-葡萄糖苷酶浓度在10~100 U/L范围内呈线性关系,检出限分别为2.5 U/L和1.2 U/L。该法已成功用于α-葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖抑制率评估和胎牛血清中α-葡萄糖苷酶浓度的测定。所构建的智能手机辅助检测法为α-葡萄糖苷酶的临床分析和酶抑制剂的快速筛选提供了简便、快捷和准确的方法。

发酵液中乳酸含量测定方法比较研究

为寻找高效便捷、成本低廉的乳酸测定方法,对比研究了三氯化铁法和对羟基联苯法对尾菜发酵液中乳酸含量的测定性能。结果显示,三氯化铁法和对羟基联苯法的线性方程相关系数均大于0.99,检出限分别为9.70×10^(-2)g/L和2.35×10^(-3)g/L,均满足分析测试要求;精密度测定中,三氯化铁法和对羟基联苯法的相对标准偏差(RSD)分别为1.19%~3.53%和2.54%~3.71%,加标回收率分别为99.3%~105.2%和102.7%~109.1%;杂质的存在对三氯化铁法的测定结果影响较小,但对对羟基联苯法的测定结果有较大影响;统计学检验表明,两种方法对发酵液中乳酸含量的测定结果无显著性差异;与对羟基联苯法相比,三氯化铁法操作简便,测定速度快,试剂成本低,所需样品量少,是较为优异的乳酸含量测定方法,具有广阔的应用前景。

WO_(3)纳米片的制备及其在比色测定尿酸中的应用

在室温条件下制备具有过氧化物酶样活性的WO_(3)纳米片(WO_(3)NSs),基于WO_(3)NSs催化H_(2)O_(2)氧化3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)生成蓝色氧化产物(ox-TMB)及在尿酸氧化酶催化下,尿酸被氧化并定量释放H_(2)O_(2)的原理,建立一种以WO_(3)NSs为过氧化物模拟酶的尿酸测定方法。考察了多种因素对吸光度响应的影响。在优化的实验条件下,当尿酸浓度在1.0~100μmol/L范围内时,吸光度与浓度呈良好的线性关系,方法的检出限为0.61μmol/L,应用于血清样品中尿酸的测定,回收率在97.1%~101.4%范围内。

无花果可溶性糖含量测定

为了建立一个可靠且高效的测定方法,专门用于测量不同成熟度无花果中的可溶性糖含量,深入探索并精确改进蒽酮-硫酸比色法。根据研究目的,针对性优化了显色时间、蔗糖标准液浓度与冷却比色时间,建立了可用于无花果果实可溶性糖含量测定的蒽酮-硫酸比色法。实验结果显示,最佳显色时间为10 min,最佳蔗糖标准溶液浓度为100μg·mL^(-1),最佳冷却比色时间为20 min。回归方程y=0.005x+0.1534(R2=0.9982)。通过检测不同成熟度的无花果,发现糖度变化趋势与可溶性糖含量变化趋势一致,可溶性糖含量可作为无花果产品质量控制指标。

基于海藻酸钠-银纳米粒比率型探针的尿酸比色法检测研究

该文以硼氢化钠为还原剂、海藻酸钠(SA)为稳定剂,通过一步法制备了海藻酸钠-银纳米粒功能探针(SA-AgNPs)。采用透射电子显微镜(TEM)、动态光散射(DLS)、红外光谱(FT-IR)、X-射线能量散射谱(EDS)、紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)对制备的SA-AgNPs的形貌和光学特性进行表征。结果显示,SA可以增强AgNPs的分散性和稳定性,提高其400 nm波长处的表面等离子体共振吸收。当尿酸(UA)存在时,UA与SA分子发生配体交换导致AgNPs聚集,并在530 nm处产生吸收峰,同时溶液颜色由亮黄色变为酒红色。基于此构建了一种比率型的UA比色法检测体系,并实现了UA的可视化分析。优化条件下,在1.67×10-5~1.67×10-3 mol/L浓度范围内,检测体系的吸光度比值(A530 nm/A400 nm)与UA浓度的对数呈良好的线性关系(r=0.992),检出限(LOD)为14.9μmol/L。尿液中常见的无机离子及其他生物小分子如葡萄糖、抗坏血酸、尿素、肌酐等不干扰尿酸测定。尿样的加标回收率为92.7%~109%,相对标准偏差小于1.0%。该比色探针环保、制备简单、特异性强、稳定性好,有望为尿酸临床相关疾病(如高尿酸血症、痛风、肾病、心血管疾病等)的生化诊断提供一种新的检测方法。

单宁酸修饰纤维素比色试纸的制备及其在Fe^(3+)及Ag^(+)检测中的应用

为了开发便于快速原位检测的新型传感器,以天然纤维素材料(滤纸)为比色基底,通过浸渍法制备出两种单宁酸修饰的纤维素试纸。利用扫描电子显微镜、傅里叶变换红外光谱仪、X射线能谱探究所制复合材料的结构和性能,并将两种单宁酸修饰的重金属离子检测试纸进行了目视比色检测及色度值测试。试验结果表明:通过浸渍法可成功制备单宁酸修饰的用于Fe^(3+)和Ag^(+)检测的纤维素试纸。对于单一金属离子溶液,两种比色试纸都能达到1×10^(-5)mol/L的比色极限。而对于多金属离子溶液或者双金属离子干扰溶液,两种比色试纸都能在浸泡法中得到1×10^(-4)mol/L的即时比色极限。通过Fe^(3+)和Ag^(+)混合溶液的复合灵敏度实验,确定了在Fe^(3+)和Ag^(+)双金属离子混合溶液的情况下两种比色试纸的搭配使用方法,达到了在复杂情况下提高检测准确度的目的。综上所述,制备得到的单宁酸修饰且用于铁离子和银离子检测的纤维素试纸,在户外高效快速检测金属离子上具有很大的应用前景。

钩藤地上部营养器官总生物碱积累规律研究

【目的】研究钩藤[Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq. ex Havil.]地上部营养器官总生物碱含量变化规律,阐明总生物碱积累及源库关系,确认钩藤药材最佳采收部位及采收期,改变仅以带钩枝条为药材的传统方式,从而避免钩藤药材资源的浪费,同时为钩藤总生物碱研究提供基础资料。【方法】运用酸性染料比色法测定钩藤主茎、侧枝、叶及钩总生物碱含量,从而阐明总生物碱的积累规律。【结果】钩藤地上部营养器官中总生物碱积累的最大值分布在6—9月及11月,钩中总生物碱积累最大值为6.599 mg/g、主茎为7.726 mg/g、侧枝为6.880 mg/g、叶为6.890 mg/g,且钩中总生物碱含量在钩藤营养生长期表现为升高趋势,在生殖生长期则呈降低趋势,而全年积累均值由大到小表现为主茎、钩≈侧枝、叶;综合各营养器官基本生理功能与其总生物碱积累规律,从而推测叶为生物碱合成源,主茎及侧枝作为运输通道,钩为库;丹寨基地不同生长年限钩藤中总生物碱积累由大到小表现为三年生、五年生、六年生、四年生,长顺基地为四年生、五年生、六年生、三年生,而3—12月地上部营养器官中总生物碱积累总量较高的是:7月8.911 mg/g、11月8.750 mg/g、6月8.237 mg/g。【结论】钩藤地上部营养器官均可作为药材采收,其采收期应在6月、7月及11月。

比色法和荧光法检测碱性磷酸酶活性的研究进展

碱性磷酸酶(ALP)与多种疾病密切相关,且ALP被广泛用作酶免疫分析中的标记酶,建立简便、灵敏、准确、高效的ALP活性检测方法对人体健康监测、临床诊断和基础研究都具有重要意义。基于底物或去磷酸化产物发展了多种ALP活性检测方法。着重对近10年发展的用于ALP活性检测的比色法和荧光法策略以及检测机理进行了综述,并对其应用前景进行了展望。

黄精总皂苷的提取和含量测定方法研究

目的建立黄精总皂苷含量测定方法。方法考察香草醛-高氯酸比色法测定黄精总皂苷的实验条件和不同提取方法对其总皂苷含量测定的影响。结果香草醛-高氯酸比色法测定黄精总皂苷含量,检测波长为550 nm,显色条件:水浴温度70℃,时间15 min,在4.03~24.18μg/mL范围内呈良好的线性关系,其回归方程为Y=0.0232X-0.0015(R^(2)=0.9985),重现性较好,RSD为1.68%,平均回收率为100.02%。结论采用水饱和正丁醇超声提取,香草醛-高氯酸比色法测定黄精总皂苷操作简便、灵敏、重现性好,可用于黄精及其炮制品的质量评价。

基于抑制MnO_(2)纳米片刻蚀金纳米棒的尿酸比色测定

制备了MnO_(2)纳米片(MnO_(2)NSs)和金纳米棒(Au NRs)。Au NRs被MnO_(2)NSs刻蚀导致其纵向表面等离子体共振(LSPR)吸收蓝移,而尿酸(UA)对Au NRs的刻蚀具有抑制作用,基于此原理,建立了一种以波长变化为响应信号的比色分析法用于UA的高灵敏测定。考察了pH值、孵育时间和MnO_(2)NSs浓度等因素对信号响应的影响。在选定的实验条件下,当UA浓度在1.5~70μmol/L范围内时,波长移动值与浓度呈良好的线性关系,方法的检出限为0.72μmol/L,应用于实际样品中UA含量的测定,结果满意。

一种具有级联酶促活性金属—有机框架材料的制备及尿酸比色法检测研究

目的:制备一种具有级联酶催化活性的功能化金属—有机框架(MOF)材料,并将其用于体液中尿酸浓度的比色法测定。方法:以1,3,5-苯三甲酸(BTC)和氯化铁(FeCl3)为原料,在室温下采用一锅合成法包封尿酸氧化酶(UOx),得到UOx@FeBTC。利用扫描电子显微镜、透射电子显微镜、X射线衍射、X-射线光电子能谱、紫外—可见光谱、傅里叶变换红外光谱对制备的材料进行表征,明确其性质并证明尿酸酶的成功包封。对UOx@Fe-BTC的合成时间及pH条件进行优化,考察材料的稳定性及特异性。最后利用3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)进行显色反应,对尿酸浓度进行定量检测。结果:成功制备了具有级联酶促效应的UOx@Fe-BTC MOF材料。pH 3.5时,酶促反应活性最强。在优化的分析条件下,尿酸的线性响应范围为5~800μmol/L(R2=0.9975),检测限为1.1μmol/L;常见内源性物质不干扰测定。结论:具有双酶体系的功能MOF材料,可为尿酸水平的常规监测和临床相关疾病诊断提供了一种新的技术手段。

苦豆子颗粒剂质量标准研究

研究建立苦豆子颗粒的质量标准。采用TLC法对苦豆子颗粒进行定性鉴别;采用酸性染料比色法测定苦豆子颗粒中总生物碱含量;采用HLPC法对苦豆子颗粒中有效成分槐定碱进行含量测定,并进行方法学考察。结果显示,TLC图谱中苦豆子颗粒在与氧化苦参碱和槐定碱对照品相应位置上呈现相同颜色的斑点,阴性样品无干扰。采用酸性染料比色法测定总生物碱含量,选定415 nm为最大吸收波长,槐定碱在10~80μg/mL范围内线性关系良好,有效成分在90 min内稳定性良好,重现性较好,平均回收率为98.1%,RSD为2.2%。HPLC法测定槐定碱含量,槐定碱在25~250μg/mL范围内线性关系良好,有效成分在24 h内稳定性良好,重现性好,平均加样回收率为100.2%,RSD为2.5%。所建立的方法简便准确、专属性强、重现性好,为苦豆子颗粒建立了有效可行的质量控制体系。

不同方法测定磷的比较与分析

以钼酸铵分光光度法、钒钼磷酸比色法、电感耦合等离子体发射光谱法3种分析方法为研究对象,考察了不同浓度条件下3种方法的准确度和精密度。结果表明,在低质量浓度条件(低于0.08μg/mL)下,考察准确度时应优先考虑电感耦合等离子体发射光谱法。

弱酸性土壤有效磷测定中两种检测方法的对比

使用氟化铵-盐酸提取法和碳酸氢钠提取法结合钼锑抗比色法分别对弱酸性土壤的有效磷进行检测,对比了两种方法的检测结果,结果显示,两种方法测得土壤有效磷含量均接近标准值,说明碳酸氢钠提取法也适用于弱酸性土壤的有效磷浸提,且该方法的实验步骤相对简便,适用的土壤范围更广,因此在弱酸性土壤的有效磷含量测试中可作为有效方法应用。

大麦籽粒γ-氨基丁酸含量的测定分析

为研究不同大麦材料的籽粒γ-氨基酸(GABA)含量和发掘高GABA含量的大麦品种,采用比色法测定了美国、中国及其他国家的180个大麦品种籽粒GABA的含量。结果发现,不同品种中GABA的含量(mg/100g)差异很大,中国大麦籽粒GABA含量(9.99±4.59)高于美国大麦籽粒(8.31±2.17),裸大麦籽粒GABA含量(15.28±8.51)高于皮大麦籽粒(8.56±2.54),多棱大麦籽粒GABA含量(9.40±4.22)高于二棱大麦籽粒(8.60±2.68);其中来自云南迪庆州的青稞籽粒GABA含量(29.51±1.20)是供试样品中最高的。本分析结果可为进一步选育富含γ-氨基丁酸的大麦品种提供材料,并为大麦资源开发提供方法和手段。

二苯乙烯苷对鹅膏蕈氨酸致痴呆大鼠模型脑内胆碱能系统的影响

目的研究何首乌有效成分二苯乙烯苷(2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷,简称TSG)对胆碱能损伤致痴呆大鼠的保护作用。方法采用鹅膏覃氨酸(IBO)基底前脑注射造成模型大鼠脑内胆碱能系统损伤,模拟老年性痴呆动物模型。实验分为假手术、模型、阳性对照药盐酸多奈哌齐(多奈哌齐1.2mg·kg-1)、TSG小剂量(30mg·kg-1)、中剂量(60mg·kg-1)和大剂量(120mg·kg-1)组,灌胃给药1个月后,取脑分区测定皮层和海马胆碱乙酰基转移酶、乙酰胆碱酯酶活性,M-胆碱能受体结合力。胆碱乙酰基转移酶活性测定用放射化学法,乙酰胆碱酯酶活性测定用羟胺比色法,M-胆碱能受体结合力测定用放射配基结合实验。结果IBO模型大鼠皮层和海马胆碱乙酰基转移酶活性降低,M-胆碱能受体结合力明显下降;皮层乙酰胆碱酯酶活性下降。TSG小剂量可提高模型大鼠皮层和海马胆碱乙酰基转移酶活性;对于M-胆碱能受体结合力的下降,TSG各剂量组均有明显的改善作用;对于皮层乙酰胆碱酯酶活性的下降,TSG中、大剂量组有一定提升作用。结论TSG可明显改善模型动物胆碱能系统的损伤,对于老年性痴呆的治疗有重要意义。

水果及其制品中果胶含量的比色法测定条件优化

为研究水果及其制品中果胶测定方法,以半乳糖醛酸为标准物质,对硫酸-咔唑比色法测定水果及其制品中果胶含量的比色条件如吸收波长、咔唑-无水乙醇溶液用量、硫酸用量、显色温度、显色时间、显色后稳定时间等进行了优化和系统研究。结果表明,最佳显色条件为在1.0 mL滤液中,加入0.25 mL 0.1%咔唑-无水乙醇溶液,迅速加入5.0 mL硫酸,在85℃水浴中加热20 min,自来水浴中冷却,显色后1.5 h内在525 nm波长条件下测定。在此条件下,标准曲线线性范围广、相关性良好,精密度和准确度高,均符合相关标准要求。

3,5-二硝基水杨酸比色法快速测定烟草水溶性总糖、还原糖及淀粉的探讨

通过还原糖对3,5-二硝基水杨酸的还原产物的吸收光谱分析,结果表明,该还原产物在500 nm波长下有最大吸收峰,但最佳的工作波长确定为540 nm。同时找出了显色反应时间及显色剂的最佳用量。并对烟草中水溶性总糖的提取方法进行了优化,建立了批量连续测定烟样中还原糖、水溶性总糖(进行酸水解)、淀粉的快速方法。同时对多个烟样进行了测定,与伯川法测定结果比较,其相对误差在5%以内。

比色法测定巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量

利用比色法简便、准确和快速地测定了巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量。结果表明,虫草酸即D-甘露醇的最大特征吸收峰在412nm处,质量浓度在10～50mg/L范围内线性良好,它的线性回归方程为:Y=0.0102X-0.0029,R2=0.9989;仪器精密度良好,RSD为0.35%(n=6);样品显色后在180min内基本没变化;平均回收率为100.30%,RSD为1.44%(n=5);干扰试验表明在葡萄糖、鼠李糖和果糖中,只有果糖对检测结果有较大影响。通过果糖的特征吸收峰和高效液相色谱法表明,巴西虫草菌丝体中没有果糖的存在,验证了比色法测定巴西虫草菌丝体中虫草酸含量的准确性;用该方法测定的巴西虫草菌丝体中虫草酸的质量分数为8.45%,RSD为0.34%(n=6)。

茚三酮比色法测定谷氨酸含量的研究

依据α-氨基酸与茚三酮显色反应的原理,研究了比色法定量检测谷氨酸的方法,着重探讨了此显色反应的影响因素、反应条件及注意事项。作为定量检测谷氨酸的方法,它与常规的谷氨酸检测方法相比,具有简便实用的特点。适用于一般实验室的样品分析及谷氨酸生产过程中的产品检测。