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Cloning, sequencing and analyzing of the heavy chain V region genes of human polyreactive antibodies
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作者 ZHANGJINSONG MINGYEH 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1994年第1期31-46,共16页
The heavy chain variable region genes of 5 human polyreactive mAbs generated in our laboratory have been cloned and sequenced using polymerase chain reaction (PCR) technique. We found that 2 and 3 mAbs utilized genes ... The heavy chain variable region genes of 5 human polyreactive mAbs generated in our laboratory have been cloned and sequenced using polymerase chain reaction (PCR) technique. We found that 2 and 3 mAbs utilized genes of the VHIV and VHIII families, respectively. The former 2 VH segments were in germline configuration. A common VH segment, with the best similarity of 90.1 % to the published VHIII germline genes, was utilized by 2 different rearranged genes encoding the V regions of other 3 mAbs. This strongly suggests that the common VH segment is a unmutated copy of an unidentified germline VHIII gene. All these polyreactive mAbs displayed a large NDN region (VH-D-JH junction). The entire H chain V regions of these polyreactive mAbs are unusually basic. The analysis of the charge properties of these mAbs as well as those of other poly- and mono- reactive mAbs from literatures prompts us to propose that the charged amino acids with a particular distribution along the H chain V region,especially the binding sites (CDRs), may be an important structural feature involved in antibody polyreactivity. 展开更多
关键词 human polyreactive antibody heavy chain variable region gene gene cloning and sequencing polymerase chain reaction (PCR)
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人免疫球蛋白重链可变区基因引物设计方法的改良 被引量:4
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作者 姜晶 孙颖 +2 位作者 刘红艳 牟玲 罗恩杰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期60-63,共4页
针对抗体胚系基因数据库的数据不断更新和完善,为获得人全部免疫球蛋白(Ig)重链可变区基因,改进引物设计方法,自主设计针对可变区基因高度保守的框架区1(FR1)和框架区4(FR4)的引物,提取未经免疫的健康人外周血单个核细胞,通过RT-PCR扩... 针对抗体胚系基因数据库的数据不断更新和完善,为获得人全部免疫球蛋白(Ig)重链可变区基因,改进引物设计方法,自主设计针对可变区基因高度保守的框架区1(FR1)和框架区4(FR4)的引物,提取未经免疫的健康人外周血单个核细胞,通过RT-PCR扩增重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列分析符合人免疫球蛋白重链基本框架结构,为胚系基因重排产生的序列。多个克隆的测序结果对比分析显示了良好的多样性。获得的重链序列为研制基因工程抗体及构建噬菌体抗体库奠定了物质基础,也为扩增其他物种Ig可变区基因的引物提供新的设计思路。 展开更多
关键词 重链可变区 引物设计 序列分析
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鸡源Bursin-ScFv噬菌体展示文库的构建及初步筛选 被引量:1
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作者 邬向东 曲悦 +2 位作者 谌南辉 王萍 何后军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期488-493,共6页
本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩... 本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡,获得产生抗独特型抗体的脾细胞,从中提取总RNA,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板,根据来航鸡IgG抗体重链(VH)、轻链(VL)可变区基因FR设计引物,进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因(大小分别约为370和320 bp)。通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×105,噬菌体中ScFv基因的插入率为80%,用辅助噬菌体援救后,得到滴度为1011PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的淘筛,出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)特异性结合,并能促进抗体的生产。 展开更多
关键词 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区 重链 轻链 单链抗体 单克隆抗体 噬菌体抗体库
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抗端粒酶蛋白hTERT重链可变区基因的克隆和表达 被引量:2
4
作者 张徽 张波 韩继生 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第3期435-439,共5页
利用噬菌体表面展示技术制备端粒酶蛋白 h TERT抗体。从重组的 h TERT免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总 RNA,逆转录成 c DNA;以逆转录合成的 c DNA第一条链为模板 ,用 VHback和 VHfor引物 ,通过 PCR扩增出约 35 0 bp大小的抗 h TERT重链可... 利用噬菌体表面展示技术制备端粒酶蛋白 h TERT抗体。从重组的 h TERT免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总 RNA,逆转录成 c DNA;以逆转录合成的 c DNA第一条链为模板 ,用 VHback和 VHfor引物 ,通过 PCR扩增出约 35 0 bp大小的抗 h TERT重链可变区基因 ,将其克隆到噬菌粒载体 PCANTAB 5 E中 ,转化入 E.coli TG1宿主菌后 ,在 M13K0 7辅助噬菌体帮助下 ,将 VH与 g3蛋白形成的复合物展示于噬菌体表面。我们利用 Dot Blot检测方法筛选出 h TERT具有亲和性的 VH单功能区抗体。结果提示噬菌体展示技术是制备抗体的一种有效的新途径。抗h TERT VH基因克隆成功 ,为进一步构建单链抗体 Sc 展开更多
关键词 端粒酶 重链可变区 噬菌体表面展示技术 基因克隆 基因表达 hTERT抗体
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从人源单链抗体库中筛出具有抗原结合活性的重链可变区和更小抗体片段 被引量:3
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作者 胡志伟 段招军 +3 位作者 朱建高 周国华 胡锦跃 孙去病 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期148-150,共3页
目的:用噬菌体呈现技术结合体外致敏法构建了人源单链抗体库,并用大肠癌相关抗原CAHb3筛选出抗大肠癌噬菌体抗体克隆EL5D、EL6D和Ca12,测定3个克隆的核苷酸序列,并研究其免疫活性。方法:采用抗体克隆扩增、测... 目的:用噬菌体呈现技术结合体外致敏法构建了人源单链抗体库,并用大肠癌相关抗原CAHb3筛选出抗大肠癌噬菌体抗体克隆EL5D、EL6D和Ca12,测定3个克隆的核苷酸序列,并研究其免疫活性。方法:采用抗体克隆扩增、测序分析、免疫组化法测定活性。结果:抗体基因插入片段分别为220、500、500bp。测序结果表明,EL6D和Ca12属VH5DJH4,仅为VH结构亚单位,而EL5D属Vκ的Jκ1,仅为FR3CDR3FR4结构。三者均能与人结直肠癌细胞和组织反应,与其亲本鼠源单抗Hb3的结合特性一致。3个抗体克隆已列入国际基因库,序号为AF051165AF051167。结论:短的人源抗体片段具有潜在临床应用价值。 展开更多
关键词 免疫球蛋白基因 单链抗体库 大肠癌靶向
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人B细胞淋巴瘤独特型DNA疫苗诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究 被引量:2
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作者 仲凯励 张伟京 +3 位作者 原野 吴英 张明伟 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期609-615,共7页
本研究目的在于探讨含人B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链可变区基因片段的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫反应的情况 ,为人B细胞淋巴瘤疫苗的应用提供基础实验研究资料。本研究通过PCR方法获得人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa膜表面免疫球蛋白重链可... 本研究目的在于探讨含人B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链可变区基因片段的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫反应的情况 ,为人B细胞淋巴瘤疫苗的应用提供基础实验研究资料。本研究通过PCR方法获得人B细胞淋巴瘤细胞系Namalwa膜表面免疫球蛋白重链可变区 (VH)基因片段 ,同时克隆小鼠单核细胞趋化蛋白 3(MCP 3)作为免疫佐剂分子 ,进一步以重组PCR的方法获得MCP 3和VH基因的融合基因片段 ,构建DNA疫苗重组质粒。在体外以瞬时转染的方法证实以融合基因片段作为抗原基因的DNA疫苗质粒能够在真核细胞中正确表达。DNA疫苗质粒大量提取后免疫小鼠 ,用流式细胞术检测小鼠抗体生成情况 ,并用LDH释放法测定CTL活性以检测抗独特型细胞免疫。结果表明 ,从接种疫苗第 8周开始小鼠体内特异性抗独特型抗体明显升高 ,并且抗体滴度可维持高水平至少至第 2 0周。在DNA疫苗免疫组中 5只免疫小鼠有 3只产生抗体。所诱导的抗体只特异性识别肿瘤细胞表面独特型抗原 ,而不识别人A5 4 9对照细胞。用乳酸脱氢酶释放法未测到明显CTL反应的产生。结论 :以MCP 3与VH的融合作为抗原基因构建的DNA疫苗能够诱导小鼠体内产生抗淋巴瘤细胞的特异性抗独特型抗体 ,为DNA疫苗临床用于人B细胞淋巴瘤治疗提供了初步实验支持。 展开更多
关键词 B细胞 DNA疫苗 免疫球蛋白重链可变区 VH 肿瘤 免疫反应 淋巴瘤 抗体
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三肽囊素抗独特型ScFv噬菌体展示文库的构建 被引量:1
7
作者 邬向东 谌南辉 +3 位作者 李麟 何后军 袁汉英 王萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期482-485,共4页
利用在体外构建的三肽囊素抗独特型抗体可变区VH和VL基因,通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,且ScFvDNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得... 利用在体外构建的三肽囊素抗独特型抗体可变区VH和VL基因,通过重叠延伸反应(SOE),以(Gly4Ser)3为连接肽,将VH和VL基因连接成为VH-Linker-VLScFv,且ScFvDNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13K07感染后,获得重组的鸡源抗三肽囊素抗独特型抗体全套单链噬菌体抗体库,并将该抗体库展示在噬菌体表面,以利用噬菌体展示技术的强大筛选能力筛选出与三肽囊素同功能单链抗体(Bursin-ScFv)。 展开更多
关键词 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区重链和轻链基因 单链抗体 噬菌体抗体库
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抗乙型脑炎病毒单克隆抗体轻链可变区基因的分离和鉴别 被引量:2
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作者 黄发灿 黄华梁 +5 位作者 熊曦明 桂进 熊伟 林晴 宋海燕 陈伯权 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第1期23-29,共7页
为了构建抗乙型脑炎病毒的人—鼠嵌合抗体,以分泌抗乙型脑炎病毒单克隆体的51-8杂交瘤细胞株为材料,以J_κ和V_κ为探针,从λEMBL-3为载体构建的基因文库中分离有功能性的轻链可变区基因。经3次复筛得到19个阳性噬菌斑。将阳性噬菌斑的... 为了构建抗乙型脑炎病毒的人—鼠嵌合抗体,以分泌抗乙型脑炎病毒单克隆体的51-8杂交瘤细胞株为材料,以J_κ和V_κ为探针,从λEMBL-3为载体构建的基因文库中分离有功能性的轻链可变区基因。经3次复筛得到19个阳性噬菌斑。将阳性噬菌斑的DNA重组体和小鼠肝DNA分别用BamH I酶切后进行分析,在分析的8个重组体中,其中5个含有2.8kb片段,而肝DNA含有8.9kb、5.6kb、3.6kb及3.1kb4个片段,没有2.8kb片段。由于肝DNA的4个片段是未经重排的种系基因,因此可以推断重组体中的2.8kb片段是经过重排的轻链可变区基因。为了进一步鉴定,又从中选出3个含有2.8kb片段的重组噬菌斑,以V_κ和J_κ作探针分别进行点杂交,结果都为阳性,进一步说明了2.8kb片段是经过重排的轻链可变区基因。将这一2.8kb片段克隆到pUC19中,得一重组子,命名为pVLD24。利用pCR扩增技术从pVLD24中扩增出预期的334 bp轻链V基因。综合证实了所鉴别得到的功能性轻链可变区基因是完整的,并且用不同的限制性内切酶绘制了这一功能性基因的酶切图谱。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 单克隆抗体 轻链
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三肽囊素抗独特型抗体可变区基因库的建立 被引量:1
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作者 邬向东 曲悦 +1 位作者 袁汉英 谌南辉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-316,共4页
利用抗bursin单克隆抗体免疫SPF来航鸡 ,获得抗独特型抗体的产生细胞 ,从中提取总RNA ,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板 ,根据鸡抗体重、轻链基因设计引物 ,进行PCR扩增。在体外成功地扩增出该抗体的可变区重链和轻链基因。
关键词 三肽囊素 抗独特型抗体 可变区基因库 轻链基因 反转录 cDNA第一链 PCR扩增 重链基因 家禽 法氏囊
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从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区 被引量:1
10
作者 周吉航 周世权 +3 位作者 王晔恺 曾芳 马利娜 刘晓光 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期479-483,共5页
目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并... 目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型。结果共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列。没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5’端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率最高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03。33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次)。18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次)。Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异。结论利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因。 展开更多
关键词 外周血 免疫球蛋白 轻链 可变区 反转录聚合酶链式反应
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从兔外周血直接克隆IgG重链可变区 被引量:1
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作者 周世权 廖智 +2 位作者 杨林 周吉航 刘晓光 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期762-766,共5页
目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,... 目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因。结果获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同。37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个。VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异。结论从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性。 展开更多
关键词 外周血 免疫球蛋白 重链 可变区 反转录-聚合酶链反应 序列分析
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抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体重链基因的克隆及序列分析 被引量:1
12
作者 张新涛 李洪涛 +2 位作者 刘明 刘春国 杜金玲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期151-153,共3页
为获得抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(MAb)重链可变区基因,提取MAb杂交瘤细胞8C4总RNA,通过RT-PCR扩增其重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列包含CDR1、CDR2、CDR33个高变区,CDR1含GYTFTSYY 8个氨基酸... 为获得抗猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(MAb)重链可变区基因,提取MAb杂交瘤细胞8C4总RNA,通过RT-PCR扩增其重链可变区基因。其DNA序列与GenBank数据库和IMGT/V-QUEST软件比对,序列包含CDR1、CDR2、CDR33个高变区,CDR1含GYTFTSYY 8个氨基酸、CDR2含IYPGDGST 8个氨基酸、CDR3含ARVMIAMDY 9个氨基酸。第22位和96位为骨架区的2个半胱氨酸,形成链内特征性二硫键。该序列符合鼠Ig重链基本框架结构,框架区内无终止密码子,为重排产生的序列。本实验获得的重链序列为研制基因工程抗体奠定了物质基础。 展开更多
关键词 猪流感 重链可变区 序列分析
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史氏鲟免疫球蛋白重链可变区序列及多样性 被引量:2
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作者 刘红柏 王荻 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期557-563,共7页
为了研究史氏鲟免疫球蛋白重链可变区基因的组织结构和多样性,采用RTPCR技术从史氏鲟(Acipenserschrenckii)脾脏总RNA中获得了免疫球蛋白重链可变区cDNA克隆,随机挑取31个阳性克隆进行测序。结果表明:所有序列相同率高于75%,前导肽相同... 为了研究史氏鲟免疫球蛋白重链可变区基因的组织结构和多样性,采用RTPCR技术从史氏鲟(Acipenserschrenckii)脾脏总RNA中获得了免疫球蛋白重链可变区cDNA克隆,随机挑取31个阳性克隆进行测序。结果表明:所有序列相同率高于75%,前导肽相同率高于90%,应属于同1个VH家族。其变异主要存在于互补性决定区,特别是CDR3区。在D片段序列中发现大量保守的基因序列(motif)。并发现多个VH基因片段可以共用一个J片段的现象。在基因组DNA重排过程中,VH片段可以与任意的D和J片段结合。此外,史氏鲟免疫球蛋白重链可变区的VH,D和J片段的随机重排外,外切核酸酶作用,以及在重排位点大量N,P片段的插入现象,都大大增加了鲟鱼免疫球蛋白的多样性。 展开更多
关键词 史氏鲟 免疫球蛋白 重链 可变区 多样性
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抗癌胚抗原单区抗体的质粒构建及表达 被引量:1
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作者 李彪 朱承谟 吴祥甫 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第2期99-102,109,共5页
目的对抗癌胚抗原单区抗体进行表达研究。方法采用PCR技术将已获得的抗癌胚抗原(CEA)鼠源单克隆抗体E7B10重、轻链可变区基因(VH、VK)进行改造后分别克隆进大肠杆菌表达质粒pET-24α(+)中,并进行表达。结果显示重、轻链可变区... 目的对抗癌胚抗原单区抗体进行表达研究。方法采用PCR技术将已获得的抗癌胚抗原(CEA)鼠源单克隆抗体E7B10重、轻链可变区基因(VH、VK)进行改造后分别克隆进大肠杆菌表达质粒pET-24α(+)中,并进行表达。结果显示重、轻链可变区在大肠杆菌中获得了高效表达,其表达量达到菌体总蛋白的20%与25%,SDS-PAGE和Westernblot图谱显示表达产物分子量为13KD、12KD,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。表达产物在胞内主要以不溶性包含体存在。结论经变性和复性处理后,RIA表明重链可变区基因表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力。 展开更多
关键词 癌胚抗原 PCR 基因表达 肿瘤 诊断 治疗 抗体
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抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B_2轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析 被引量:2
15
作者 周萍 冯捷 +2 位作者 钱和年 蒋欣 黄华梁 《徐州医学院学报》 CAS 1998年第3期173-175,共3页
目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2轻链可变区(VL)基因并测定其核苷酸序列。方法用PCR方法体外扩增单抗COC183-B2VL基因,将其克隆入PUC19载体,重组子用Sanger’s双脱氧链终止法测定其核... 目的分离抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2轻链可变区(VL)基因并测定其核苷酸序列。方法用PCR方法体外扩增单抗COC183-B2VL基因,将其克隆入PUC19载体,重组子用Sanger’s双脱氧链终止法测定其核苷酸序列,将其序列通过Internet与GeneBank、EMBL、DDBJ和PDB已发表的抗体序列进行比较分析。结果VL基因全长336bp,属小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类(SubgroupⅡ),由种系基因的VK及J基因的MUSJK2重排而成。该VL基因序列已被GeneBank收录(acesionNo.gbAF044077)。结论该VL基因为抗人卵巢癌单抗COC183-B2功能性轻链可变区基因。 展开更多
关键词 单克隆抗体 轻链可变区 序列分析 卵巢肿瘤
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乙肝免疫球蛋白抗体的多样性 被引量:1
16
作者 周世权 周吉航 +4 位作者 徐岳军 庄晓玲 李翊卫 李世波 刘晓光 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期479-484,共6页
目的基于重链可变区的编码基因序列对乙肝免疫球蛋白(HBIG)中的IgG抗体进行分类。方法借用文献提供的引物,以HBsAb强阳性健康个体外周血中的总RNA为模板进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,通过将产物克隆到T载体、随机挑选测序,分析并统计出... 目的基于重链可变区的编码基因序列对乙肝免疫球蛋白(HBIG)中的IgG抗体进行分类。方法借用文献提供的引物,以HBsAb强阳性健康个体外周血中的总RNA为模板进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,通过将产物克隆到T载体、随机挑选测序,分析并统计出插入子的VH-D-JH-Cγ组合方式。结果共获得56个有效克隆,全部为人VH3-D-JH-Cγ序列,可分成49种序列,其中5种序列有2或3个序列完全相同的克隆。4个Cγ功能基因也全部出现,其中IGHG2频率最高(28次);23个VH3功能基因有11个出现,其中频率最高的是IGHV3-23(29次);23个D功能基因有16个出现,其中频率最高的是IGHD1-26(8次);6个JH功能基因则全部出现,其中频率最高的是IGHJ4(33次)。VH3-D-JH组合有33种,频率最高的是IGHV3-23/IGHD1-26/IGHJ4(8次),其中5种与IGHG2拼接,但这5种VH3-D-JH-Cγ2序列仍有明显的差异。结论成功地从HBsAb强阳性健康个体外周血中克隆到由VH3亚家族参与重排的IgG重链可变区序列;初步证实可变区序列不仅在VH3-D-JH-Cγ组合方式上具有极大的多样性,而且在序列上也具有明显的差异性;基于可变区测序对IgG抗体或B细胞进行分类是可行的,但需大大提高挑取克隆的数量或改用新一代大规模测序技术。 展开更多
关键词 乙肝免疫球蛋白 重链 可变区 反转录一聚合酶链反应 DNA测序
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抗人血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体轻链可变区基因的克隆和序列分析 被引量:1
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作者 杨西川 王大章 +3 位作者 郑光勇 程云 李伯安 李静 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期195-197,I011,共3页
为构建和表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)工程抗体奠定基础,从分泌抗人VEGF抗体的杂交瘤细胞株中提取总RNA,利用反转录-聚合酶链反应方法,克隆抗人VEGF单克隆抗体轻链可变区基因,将其重组入pEGMR-TVec... 为构建和表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)工程抗体奠定基础,从分泌抗人VEGF抗体的杂交瘤细胞株中提取总RNA,利用反转录-聚合酶链反应方法,克隆抗人VEGF单克隆抗体轻链可变区基因,将其重组入pEGMR-TVector测序载体测序。结果表明轻链可变区序列全长333bp,编码111个氨基酸,通过国际联机检索及Kabat库扫描证实,该轻链可变区符合小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因特征,同源性高达89.3%,归属小鼠轻链可变区基因第Ⅲ亚组。 展开更多
关键词 血管 内皮生长因子 单克隆抗体 轻链可变区
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抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因的体外扩增、克隆和序列分析 被引量:2
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作者 刘健 吴文书 +4 位作者 王斌 潘志美 田培坤 黄震宇 洪锦心 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第1期70-75,共6页
本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分... 本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的重链可变区基因。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 重链变区 嵌合抗体
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新生儿免疫球蛋白重链可变区基因多样性分析 被引量:1
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作者 毛晓健 肖昕 +1 位作者 熊爱华 周晓光 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2004年第1期8-10,共3页
目的 构建不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,探讨新生儿成熟度对IgH基因谱型多样性的影响 .方法提取 2 7~ 42周新生儿RNA、进行RT -PCR反应、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色 ,获得不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,用Tiger凝胶图... 目的 构建不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,探讨新生儿成熟度对IgH基因谱型多样性的影响 .方法提取 2 7~ 42周新生儿RNA、进行RT -PCR反应、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染显色 ,获得不同胎龄新生儿IgH基因指纹图谱 ,用Tiger凝胶图像分析仪进行曲线转化和分析 .结果 各家族指纹图谱转化后的曲线下面积积分值 ,在 2 8~ 3 2周、3 3~ 3 6周和 3 7~ 42周新生儿之间无差异 ;但胎龄 2 7周新生儿曲线下面积小于胎龄 2 8~ 42周新生儿 .结论  2 8周可能是人类IgH基因谱型发育由不完善到趋于完善的一个转折点 ,2 展开更多
关键词 新生儿 免疫球蛋白 重链可变区 基因多样性 指纹图谱
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抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体8F8轻链可变区基因的克隆和序列分析 被引量:2
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作者 阎岩 汪力亚 +1 位作者 张劲翼 汪美先 《第四军医大学学报》 1993年第5期377-378,共2页
作者从抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体(单抗)8F8杂交瘤细胞提取RNA,逆转录成cD-NA,应用PCR快速克隆出8F8单抗的轻链可变区基因(V_L)。并对8F8单抗V_L的核苷酸序列和相应编码的氨基酸序列进行了测定和推导。
关键词 出血热病毒 流行性 单克隆抗体
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