生物钟基因Per2对Ang Ⅱ诱导血管平滑肌细胞表型转换的影响及机制

目的 探讨生物钟基因Per2对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)表型转换的影响及机制。方法 常规培养VSMC,并将其随机分为Control A组、siRNA组、Per2 siRNA组,分别给予常规培养、转染空载siRNA、转染Per2 siRNA(沉默Per2);将VSMC随机分为Control B组、pcDNA组、pcDNA-Per2组,分别给予常规培养、转染空载pcDNA、转染pcDNA-Per2(Per2过表达)。用Western blotting法检测各组Per2蛋白表达以确认转染效率。选择部分VSMC随机分为Control C组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+Per2 siRNA组,分别给予常规培养、1×10^(-7)mol/L Ang Ⅱ处理48 h、先转染Per2 siRNA后再加入1×10^(-7)mol/L Ang Ⅱ处理48 h;另选部分细胞随机分为Control D组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+Per2 siRNA组,分别给予常规培养、1×10^(-7)mol/L Ang Ⅱ处理48 h、先转染pcDNA-Per2后再加入1×10^(-7)mol/L Ang Ⅱ处理48 h。用Western blotting法检测VSMC内表型转换相关蛋白[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)]及自噬相关蛋白[p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)]表达。结果 Per2 siRNA组Per2蛋白相对表达量低于Control B组、siRNA组(P均<0.05),pcDNA-Per2组Per2蛋白相对表达量高于Control组、pcDNA组(P均<0.05),均转染成功。与Control C组比较,Ang Ⅱ组α-SMA、p62蛋白相对表达量低,OPN、LC3蛋白相对表达量高,比较差异有统计学意义(P均<0.05);与Ang Ⅱ组比较,Ang Ⅱ+Per2 siRNA组α-SMA、p62蛋白相对表达量高,OPN、LC3蛋白相对表达量低,比较差异有统计学意义(P均<0.05)。与Control D组比较,Ang Ⅱ组α-SMA、p62蛋白相对表达量低,OPN、LC3蛋白相对表达量高,比较差异有统计学意义(P均<0.05);与Ang Ⅱ组比较,Ang Ⅱ+Per2 siRNA组α-SMA、p62蛋白相对表达量低,OPN、LC3蛋白相对表达量高,比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 生物钟基因Per2可能通过激活细胞自噬参与Ang Ⅱ诱导的VSMC表型转换。

黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪、当归对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)粘着斑激酶(FAK)表达和细胞凋亡的影响。方法:应用RT-PCR、Western blot检测黄芪、当归对FAK表达的影响;应用 Greiss试剂检测 VSMC培养液中NO_2^-含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性。结果:黄芪、当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达,增加细胞培养液中的NO_2^-含量,诱导cas-pase-3表达。下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡。结论:黄芪、当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成、抑制FAK表达、诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关。

血小板源生长因子受体结构域切除对肺血管平滑肌细胞增殖和c-sis基因表达的影响

目的探讨从血小板源生长因子α(PDGF-α)受体水平阻断对肺血管平滑肌细胞增殖的影响。方法在肺动脉平滑肌细胞(V SM C)培养液中分别给予不同剂量的受体结构域切除的PDGF-α受体腺病毒重组体A d5CM V-PaR tr(ACP),对细胞不同时相的增殖曲线和c-s is原癌基因表达进行测定。结果5 m l/L、10 m l/L剂量ACP对细胞增殖有明显抑制作用。在5 m l/L ACP作用下,加入PDGF-BB不能促进V SM C的增殖。不同剂量的ACP可使c-s is mRNA的表达上调。5 m l/L ACP作用下,加入PDGF-BB可下调c-s is mRNA的表达。结论5 m l/L、10 m l/L ACP能明显抑制肺V SM C的增殖,使c-s is mRNA的表达上调。

内质网应激在高糖所致血管平滑肌细胞钙化中的作用与机制

目的探讨内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激在高糖引起的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化中的作用与机制。方法 35mmol/L D-葡萄糖(高糖)处理VSMCs,模拟糖尿病状态,观察高糖能否引起VSMCs的ER应激和VSMCs表型转化(收缩型转变为成骨样细胞),观察ER应激的抑制剂对VSMCs钙化的效应,采用比色法、o-cresolphthalein法和western blot观察碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化转录因子(Runx2)等指标。结果应用35mmol/L D-葡萄糖分别处理VSMCs 3d或7d,可引起VSMCs的ER应激蛋白表达上调、碱性磷酸酶活性增加、钙沉积和骨分化标志蛋白增多;苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)预处理在抑制VSMCs的ER应激的同时,能阻断高糖所致VSMCs钙化(表现为碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化标志蛋白下降)。结论高糖能激活VSMCs的ER应激,继而引起VSMCs凋亡和钙化,提示ER应激在高糖引起的VSMCs钙化中起着重要作用。

血小板源生长因子-α受体结构域切除对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨从血小板源生长因子 - α(PDGF- α)受体水平阻断对肺血管平滑肌增殖的影响。方法 将组织贴块法培养的肺动脉平滑肌细胞 (VSMC)分别施加小、中、大剂量的受体结构域切除的 PDGF- α受体腺病毒重组体 Ad5 CMV- Pa Rtr(ACP) ,通过四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法观察细胞不同时相的增殖曲线 ;采用流式细胞学技术观察不同干预条件下 VSMC细胞周期的变化。结果 中、大浓度 ACP对细胞增殖有明显抑制作用。中、大剂量 ACP干预后 ,VSMC生长明显受抑 ,波峰减弱或消失 ,第 7～ 9天生长曲线才呈现上升趋势。在中浓度的 ACP作用下 ,加入 PDGF- BB不能促进 VSMC的增殖。 ACP干预前后 ,VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化 ,以 G0 +G1 期细胞增多、S+G2 +M期细胞减少为特征。与对照组相比 ,各组的 G0 +G1 期细胞均有显著升高 (P<0 .0 5 )。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间 G0 +G1 期细胞有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 ACP作为细胞增殖抑制剂 ,能在中、大剂量下明显抑制肺 VSMC的增殖 ,可使 G0 /G1 期细胞数明显增多 ,且与

血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化发生中的哲学思维

随着对血管平滑肌细胞增殖在动脉粥样硬化中研究的不断深入,逐步意识到细胞凋亡的存在及其相互之间的矛盾关系,对动脉粥样硬化的认识亦由从形态结构和生化组成等描述病变,发展为在细胞乃至分子基因水平上的深入研究,发现血管平滑肌细胞的增殖和凋亡在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。从哲学角度探讨血管平滑肌细胞在动脉粥样硬化发生中的作用,有助于科学的发现疾病的本质。

血管平滑肌细胞与动脉粥样硬化关系研究进展

随着对血管平滑肌细胞增殖在动脉粥样硬化中研究的不断深入,逐步意识到细胞凋亡的存在及其相互之间的关系,对动脉粥样硬化的认识亦由从形态结构和生化组成等描述病变,发展为在细胞乃至分子基因水平上的深入研究,发现血管平滑肌细胞的增殖和凋亡在动脉粥样硬化形成过程中起重要作用。

氧化苦参碱对大鼠血管平滑肌细胞钙化抑制作用的研究

目的观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对血管钙化的影响,探讨血管钙化的发生机制。方法以β-甘油磷酸盐诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)钙化,OMT干预。采用磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法测定细胞钙含量,硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量。结果β-甘油磷酸盐可诱导VSMCs发生钙化,钙化组细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量明显增高,OMT呈浓度依赖性地降低细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量,VSMCs的钙化程度亦明显减轻。结论OMT能有效抑制β-甘油磷酸盐诱导的大鼠主动脉VSMCs钙化,其机制可能与减轻细胞的氧化损伤有关。

生长素抑制大鼠血管钙化及其可能机制

为探讨生长素调节血管钙化的可能机制 ,用肌肉注射维生素D3和口服尼古丁诱导大鼠血管钙化模型和 β 甘油磷酸盐诱导血管平滑肌细胞钙化模型 ,采用原子吸收分光光度法测定血管和细胞钙含量 ,磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶活性 ,4 5CaCl2 摄入测定钙沉积 ,逆转录—聚合酶链反应测定生长素、骨桥蛋白和内皮素mRNA表达水平 ,放射免疫分析方法测定血浆生长素和内皮素含量。结果表明 ,维生素D3和尼古丁明显诱导大鼠血管钙化 ,β 磷酸甘油可诱导血管平滑肌细胞钙化。采用 30和 30 0nmol kg生长素治疗大鼠均可抑制血管钙化 ,且高剂量时效应强于低剂量 ,与钙化组相比较 ,血管组织钙化指标均下降并且差异有显著性 ,而骨桥蛋白mRNA的表达明显上调。 10 - 8～ 10 - 6 mol L生长素呈浓度依赖性降低血管平滑肌细胞钙化指标 ,并上调骨桥蛋白mRNA表达。此外生长素明显下调血浆内皮素浓度及血管组织的内皮素表达 ,且高剂量生长素的效应更强。结果提示 ,生长素可能部分通过拮抗血浆和血管组织局部的内皮素系统效应而产生抑制血管组织和血管平滑肌细胞钙化的作用。

阿托伐他汀对高脂兔肺血管重构及平滑肌增殖肌化的影响

目的探讨阿托伐他汀对高脂兔肺动脉组织形态学、平滑肌增殖和肺小动脉肌化的影响。方法15只3月龄新西兰雄性兔随机分成对照组、高脂组及阿托伐他汀干预组,对肺组织石蜡切片进行α-平滑肌肌动蛋白、增殖细胞核抗原免疫组化检查及HE染色,观察阿托伐他汀对肺血管重构的影响。结果高脂组出现明显的肺血管重构;阿托伐他汀干预组肺动脉中膜厚度、小动脉肌化比例、中膜平滑肌细胞增殖指数均明显低于高脂组。结论阿托伐他汀可以抑制高脂兔肺动脉平滑肌细胞增殖及肺小动脉肌化,改善肺血管重构。

p38 MAPK通路激活内质网应激参与高糖诱导血管平滑肌细胞钙化

目的探讨p38 MAPK通路是否通过激活内质网应激及凋亡参与高糖所致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscular cell,VSMCs)钙化。方法大鼠VSMCs分为对照组、高糖组(35μmol/L D-葡萄糖)、内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)组、p38 MAPK通路抑制剂SB203580组、β-磷酸甘油组、4-PBA+高糖组、SB203580+高糖组、β-磷酸甘油+高糖组,分别用比色法、o-cresolphthalein法和Western blot测定碱性磷酸酶(ALP)活性、钙含量和骨分化转录因子(Runx2和Osterix)表达。结果 D-葡萄糖处理3、7d上调VSMCs ALP活性、钙含量和骨分化标志蛋白表达;SB203580下调ALP活性、钙含量和骨分化转录因子表达,而4-PBA抑制高糖引起VSMCs内质网应激及凋亡。结论 p38 MAPK通路通过激活内质网应激和凋亡可能是高糖诱导VSMCs钙化的重要机制。

三氧化二砷对球囊拉伤后兔血管平滑肌细胞作用的实验研究

目的 探讨三氧化二砷对球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的促凋亡作用及其对再狭窄防治的意义。方法 贴块法行球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞培养 ,将细胞分为正常对照组 ,三氧化二砷 (浓度分别为 1 0、2 0、3 0、4 0及 5 0 μmol/L)组 ,通过绘制细胞生长曲线、DNA电泳、透射电镜、原位细胞凋亡检测试剂盒 (TUNEL)来观察三氧化二砷促细胞凋亡作用。结果 随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制细胞的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关 ,观察第7天、浓度为 5 0 μmol/L时活细胞数为 (5 30± 0 10 )× 10 5/ml与正常对照组 (2 8 77± 0 93)× 10 5/ml相比较差异有显著意义P <0 0 5 )。透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由 18 0 %± 3 1%增至 39 8%± 2 7% (P <0 0 5 )。正常对照组均不见上述变化。结论 三氧化二砷可促进球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的凋亡 ,抑制其过度增殖。