应用PCR检测产vero毒素大肠杆菌

根据产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌（ＶＴＥＣ）产生的ｖｅｒｏ毒素１（ＶＴ１）和ｖｅｒｏ毒素２（ＶＴ２）的基因序列，合成了２对寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增方法。共对４株产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和其他７个属的４１株肠道致病菌中的ＶＴ基因进行了检测，结果仅从用传统组织培养方法确定为ＶＴ阳性的产ｖｅｒｏ毒素大肠杆菌和痢疾１型志贺氏菌提取的ＤＮＡ中观察到了ＰＣＲ扩增产物，而从其他肠道致病菌提取的模板ＤＮＡ中未扩增出任何ＤＮＡ片段。用这２对引物可以清楚地区分产ＶＴ１、ＶＴ２或ＶＴ１／ＶＴ２的大肠杆菌。ＰＣＲ扩增方法的检测敏感性为３２０ｐｇ全细菌ＤＮＡ，用ｖｔ１引物可以检测出低达３２ｐｇ的全细菌ＤＮＡ。

从长春地区牛肉和猪肉中检出产vero毒素大肠杆菌O157∶H7

用分离培养法、生化反应鉴定、胶乳凝集试验和聚合酶链式反应 ( PCR)对长春地区市售的 4 0份牛肉和 3 0份猪肉样品进行了调查 ,结果从 2份牛肉 ( 5%)和 1份猪肉 ( 3 .3 %)样品中检出了产 vero毒素大肠杆菌 O1 57∶

大肠杆菌O-157产生的VT2对中性粒细胞自发性凋亡的抑制作用

目的研究毒源性大肠杆菌VETCO-157产生的外毒素-VT2对中性粒细胞自发性凋亡的影响,探索VETC感染后并发的溶血性尿毒症HUS及相关疾病的发病机理。方法运用形态学观察、流式细胞仪FACS技术和DNA分离技术进行研究。结果在无VT2存在的情况下,经过24h体外培养,65%左右的中性粒细胞发生了凋亡,而浓度为10-6M的VT2使其凋亡发生率降至20%左右。结论VT2延长了中性粒细胞的功能性生命期限,使其胞浆内细胞毒性物质有更多的机会损伤肾小球血管内皮细胞,促进微血栓的形成,因而中性粒细胞可能参与了HUS的形成过程。

从肿头综合征鸡分离出产Vero毒素E.coli

本研究从哈尔滨郊区某鸡场肿头综合征（ Ｓ Ｈ Ｓ）鸡分离出 ３ 株血清型为 Ｏ７８ 的埃希氏大肠杆菌（ Ｅ．ｃｏｌｉ），从鞍山 Ｓ Ｈ Ｓ病料分离出 １ 株血清型为 Ｏ８ 的 Ｅ．ｃｏｌｉ。并证实这 ４ 株 Ｅ．ｃｏｌｉ 能够对 Ｖｅｒｏ 细胞产生毒性作用，与产 Ｖｅｒｏ 毒素的 Ｅ．ｃｏｌｉ一致。对哈尔滨市郊 Ｓ Ｈ Ｓ病鸡做病理组织学观察，主要变化为头部皮下组织，头盖骨气室及鼻粘膜下纤维素性化脓性炎症，水肿和大肠杆菌性肉芽肿，心、肝、肾等器官炎症变化并有大量异嗜性粒细胞和细菌团块。

出血性大肠杆菌O157:H7 vero细胞毒素抗体的保护性研究

目的:在体外研究vero细胞毒素抗体的保护作用。方法:用从出血性大肠杆菌O157:H7中纯化的一种新的vero细胞毒素来免疫家兔,获得多克隆抗体。用不同剂量抗体,在不同时间段与此vero细胞毒素进行vero细胞毒性试验。结果:高剂量的抗体预先处理过的vero细胞,可以受到抗体保护,毒素的细胞毒作用被抑制。预先用毒素作用vero细胞后,一小时内给予大剂量抗体可以部分抑制毒素的细胞毒作用。结论:本试验提示用抗毒素紧急预防和治疗Vero细胞毒素引起的疾病是可行的。

重组V2毒素延长中性粒细胞的功能性生命期限

目的 :揭示V毒素在溶血性尿毒症 (HUS)和其他与多源性大肠杆菌 (VTEC)相关疾病中的病理性损伤作用。方法 :运用流式细胞技术 ,荧光标记探针———BCECF AM和细胞色素C还原法测定超氧离子 (O- 2 )技术。结果 :重组V2毒素 (rVT2 )对中性粒细胞自发性凋亡有着显著性的抑制作用。被rVT2 延迟了凋亡的中性粒细胞仍然保留多种生物学活性 ,如 :细胞表面粘附分子的表达 (CD6 2L减少和CD11b CD18增加 ) ,粘附人脐带静脉血管内皮细胞 (HUVEC)以及产生超氧离子 (O-2 )。结论 :V2毒素延长中性粒细胞的功能性生命期限 ,会加重炎症局部的炎症反应 ,这可能是HUS和VTEC相关疾病的发生过程中 ,中性粒细胞介导的组织损伤的一个重要因素。

stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法检测产志贺毒素大肠埃希菌的评估

目的评价stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒3种方法在检测产志贺毒素大肠埃希菌的特异性和敏感性的差异。方法运用stx-PCR方法、Vero细胞毒性试验和酶联免疫试剂盒分别对29株大肠埃希菌参考菌株和45株食品分离大肠埃希菌株进行检测。结果 stx-PCR方法可以判定50株菌携带stx基因,同时Vero细胞毒性试验可以判定这些菌株具有细胞毒性,两者的一致性为100%;酶联免疫试剂盒能判定其中38株菌具有志贺毒素。结论 3种方法都具有很好的特异性。stx-PCR方法和Vero细胞毒性试验较酶联免疫试剂盒具有更高的敏感性,试剂盒适用于食源性疾病暴发事件中产志贺毒素大肠埃希菌的快速筛选,stxPCR方法推荐作为实验室常规快速检测方法,Vero细胞毒性试验是检测产志贺毒素大肠埃希菌是否具有志贺毒素生物学活性的金标准方法。

抗大豆胰蛋白酶抑制剂单链抗体表达与纯化方法优化

[目的]利用大肠杆菌毒素蛋白VTB的五聚体化结构域（VT1B）及梭菌纤维素酶的纤维素结合结构域（CBD）,异源表达其与抗大豆胰蛋白酶抑制剂单链抗体（anti-BBI Sc Fv）的融合蛋白,对该单链抗体表达与纯化方法进行优化。[方法]构建CBD-VT1B-anti-BBI Sc Fv融合蛋白大肠杆菌表达系统;应用Ni-NTA树脂与微晶纤维素两步亲和层析法提纯单链抗体融合蛋白。[结果]单链抗体融合蛋白在大肠杆菌中得到大量表达,通过两步纯化法获得了高纯度的融合蛋白,纯度比Ni-NTA树脂一步纯化法提高约12~34%;五聚体融合蛋白与纤维素的结合能力及蛋白纯化效率比单体蛋白提高约1倍。[结论]通过增加纤维素标签和五聚体化结构域,抗大豆胰蛋白酶抑制剂五聚体化单链抗体融合蛋白的纯化效果得到提高。