石榴叶片蛋白提取方法研究

以"大红袍"石榴叶片为试材,研究比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、Tris-HCl提取法和酚-甲醇/醋酸铵沉淀法对石榴叶片总蛋白质的提取效果间的差异。结果表明:TCA/丙酮沉淀法所得电泳图谱背景不清晰;酚-甲醇/醋酸铵沉淀法步骤繁琐,蛋白质信息量少;Tris-HCl提取法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大。

适用于教学的PAGE电泳染色脱色方法研究

以牛血清蛋白等标准蛋白为材料进行PAGE电泳,并对多种染色、脱色方法进行研究比较和改进。结果表明：用考马斯亮蓝R-250微波中火染色5min后,再间隔微波中火脱色3个5min后,可观察实验结果,继续摇床脱色1~2 h后,背景低、灵敏度高;用考马斯亮蓝G-250微波染色后,用水漂洗约30min就可达到粗略观察实验结果的目的,若继续在去离子水中浸泡,则时间越久,背景越清晰;脱色时用乙醇替代甲醇,脱色效果相当。

蛋白质凝胶电泳及染色方法的几点改进

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及染色技术,是常用测定蛋白质亚基分子量的方法之一,具有设备简单、操作方便和分辨率高等优点.但在操作中,尤其样品较多时,此方法仍然有一些不足之处.通过大量实践,做以下改进:建立根据不同相对分子量的蛋白质快速选择凝胶浓度的方法,并确立解决蛋白质凝胶电泳和染色过程中的常见问题及改进策略.

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法的改进

针对常规的SDS-PAGE染色脱色耗时长,还需使用甲醇的缺点,对传统的SDS-PAGE染色脱色进行了改进,用无毒的乙醇替代有毒的甲醇.改进后的SDS-PAGE染色脱色具有耗时短,且不需要使用甲醇的优点.

两种考马斯亮蓝凝胶染色方法的比较

目的:比较考马斯亮蓝(Coomassie brilliant blue,CBB)R250和G250两种凝胶染色方法的特点及染色效果。方法:用R250和G250两种染液在同一条件下对完全相同的两块聚丙烯酰胺凝胶进行染色,观察比较其染色及漂洗的时间、效果、灵敏度、安全性等指标。结果:CBB R250染色至少需要2 h,漂洗4 h以上可见蛋白条带;CBB G250染色2 h后不需漂洗即可见蛋白条带,漂洗2 h后背景几乎无色,条带清晰。结论:G250染色在所需时间、效果、灵敏度、安全性和相关度等方面均优于R250,适用于要求快速出结果的重复性好、稳定性高的染色。

一种考马斯亮蓝G-250快速染色法在SDS-PAGE中的应用

对SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中一种仅加入3m mol/L盐酸的考马斯亮蓝G-250染色液配合微波加热的快速染色方法的具体条件进行了研究。该方法能在1h内完成,比常规考马斯亮蓝R-250染色法短得多。同时未加入有机溶剂和其他酸,对人体几乎无害,对环境污染小。而其灵敏度与常规考马斯亮蓝R-250染色法相近,适于在实验教学和科研方面进行推广应用。