柱色谱-紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮的含量

目的 建立广金钱草中总黄酮的含量测定方法。方法 选用测定波长 2 72 nm,以 6 - C-葡萄糖 - 8- C-木糖洋芹素 (vicenin- 2 )为对照品 ,采用柱色谱 -紫外分光光度法对不同来源的广金钱草进行了总黄酮的含量测定。结果 vicenin- 2在 10 .8～ 2 5 .2 μg/ m L 具有良好的线性关系 ,回归方程为 Y=0 .0 30 9X+0 .0 16 (r=0 .9999) ,平均回收率为 10 0 .82 % ,RSD为 1.30 %。结论 该方法操作简便 ,结果准确 ,重复性好 。

反相高效液相色谱法制备广金钱草黄酮对照品

目的:建立广金钱草黄酮对照品6-C-葡萄糖-8-C木糖洋芹素(vicen in-2)的反相高效液相色谱制备方法。方法:结合萃取、大孔树脂柱层析、重结晶等方法,用反相高效液相色谱法对广金钱草的乙醇提取物进行分离纯化,以HPLC对分离产物进行纯度和含量测定。结果:从广金钱草中分离纯化出黄酮对照品vicen in-2纯度可以达到98.5%以上。结论:该方法简单、准确、重现性好,产品纯度高,可作为中药药效物质基础研究中的对照品。

CdTe/CdS QDs对葡萄糖基芹菜素与人血清白蛋白结合力的影响

模拟人体内生理环境,研究了CdTe/CdS量子点(QDs)对葡萄糖基芹菜素与人血清白蛋白(HSA)相互作用的影响。结果表明,CdTe/CdS QDs可有规律地猝灭HSA荧光;在CdTe/CdS QDs存在条件下,葡萄糖基芹菜素可使HSA荧光最大发射波长从346 nm红移到349 nm,红移程度明显大于无QDs存在时,同时葡萄糖基芹菜素与HSA的表观结合常数和结合位点数均有增加,即CdTe/CdS QDs使葡萄糖基芹菜素与HSA的结合力增强。

超高效液相色谱法测定陈皮藿香汤中4种成分的含量

目的建立超高效液相色谱法测定陈皮藿香汤中维采宁-2、橙皮苷、川陈皮素、桔红素4种成分质量浓度的方法。方法以Endeavorsil C18（2.1 mm×50 mm,1.8μm,Dikma）柱为分离柱,流动相为甲醇（A）-0.2%（体积分数）甲酸（B）,梯度洗脱。流速为0.3 m L/min,柱温为25℃,进样量为5μL,检测波长为300 nm。结果维采宁-2在4.20-12.6μg/m L范围内具有良好的线性关系（r=0.999 2）,平均回收率为97.4%,RSD为2.38%（n=6）;橙皮苷在9.52-78.4μg/m L范围内具有良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为98.9%,RSD为1.09%（n=6）;川陈皮素在4.00-12.0μg/m L范围内具有良好的线性关系（r=0.999 7）,平均回收率为100.3%,RSD为1.71%（n=6）;桔红素在1.76-3.96μg/m L范围内具有良好的线性关系（r=0.999 3）,平均回收率为103.5%,RSD为1.22%（n=6）。结论本法操作简单、重复性好,测定结果准确,可用于陈皮藿香汤的质量控制,也可为含有该药对的中药成方制剂的质量控制提供参考。

一测多评法同时测定健骨注射液中3种黄酮类成分的含量

目的建立同时测定健骨注射液中3种黄酮类成分含量的一测多评法。方法采用高效液相色谱,以夏佛塔苷为内标,测定其与维采宁-2、维采宁-3的相对校正因子,计算含量,并用外标法进行验证。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论一测多评法操作简便,结果准确,可用于健骨注射液的质量评价。

HPLC法测定广金钱草茎、叶中4种黄酮类成分的含量

目的:测定9批不同产地广金钱草茎、叶中新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素的含量。方法:采用高效液相色谱法,采用Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相乙腈-0.2%磷酸水溶液(14∶86),流速0.8ml·min-1,检测波长335 nm,柱温为30℃。结果:新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷、异夏佛塔苷和异牡荆素线性范围分别为13.5~540.8 ng、33.0~1321.6 ng、26.0~1040.6 ng、13.6~543.6 ng(r>0.999);精密度、稳定性、重复性试验的RSD小于3.0%;平均回收率分别为98.2%、98.6%、99.9%和98.0%,RSD分别为1.4%、0.9%、1.7%和1.1%(n=9)。广金钱草叶中4种成分的含量远大于茎。结论:建立的方法简单、灵敏、准确、可靠,重复性好,建立的方法可用于广金钱草的质量控制,也为如何保证广金钱草的质量提供了理论依据。

HPLC一测多评法同时测定金蓝清瘟合剂中8种成分含量

目的:建立高效液相色谱一测多评法(HPLC-QAMS)同时测定金蓝清瘟合剂中(R,S)-告依春、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡子苷元、新西兰牡荆苷、藿香黄酮醇和广藿香酮的含量。方法:采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;柱温:30℃;流速:1.0 mL·min-1。以连翘苷为内参物,建立其它7个成分的相对校正因子,计算各成分含量。结果:(R,S)-告依春、连翘酯苷B、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡子苷元、新西兰牡荆苷、藿香黄酮醇、广藿香酮分别在1.34~26.80μg·mL^-1(r=0.9995)、2.66~53.20μg·mL^-1(r=0.9992)、9.57~191.40μg·mL^-1(r=0.9997)、3.59~71.80μg·mL^-1(r=0.9995)、0.93~18.60μg·mL^-1(r=0.9993)、1.74~34.80μg·mL^-1(r=0.9998)、0.81~16.20μg·mL^-1(r=0.9991)、1.22~24.40μg·mL^-1(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均加样回收率及相对标准偏差(RSD)分别为98.77%(1.06%);99.96%(0.74%);100.00%(0.61%);99.21%(0.82%);96.98%(1.27%);97.95%(1.33%);98.00%(1.52%);97.74%(1.11%)。金蓝清瘟合剂中8种指标性成分含量一测多评法计算结果与外标法实测结果无明显差异。结论:该法简便、准确,可有效地控制金蓝清瘟合剂的质量。

基于特征图谱-网络药理学-多指标定量的辣木叶调血脂质量标志物(Q-Marker)研究

目的基于辣木Moringa oleifera叶的特征图谱并结合网络药理学,筛选辣木叶的质量标志物(quality markers,QMarker),建立其定量分析方法,为辣木叶的质量评价提供科学依据。方法采用HPLC法建立辣木叶的特征图谱,条件如下:Phenomenex Luna C_(18)(2)100A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相乙腈(A)-0.5%甲酸水溶液(B)梯度洗脱,检测波长254 nm,体积流量0.8 mL/min,柱温35℃,进样量5µL。应用化学计量学方法筛选不同产地的辣木叶差异标志物,基于网络药理学获取辣木叶特征成分的关键靶点及关键通路,绘制出“特征成分-关键靶点-关键通路”网络,以预测辣木叶的调血脂Q-Marker。再以15批辣木叶药材为研究对象,对质量标志物进行含量测定。以五原则为核心确定出最终的Q-Marker。结果建立了15批辣木叶药材的特征图谱,结合高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(high performance liquid chromatographyquadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS/MS)确认了8个共有峰,通过对照品指认出其中6个色谱峰,分别为新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、维采宁-2、异槲皮素、紫云英苷;经化学计量学分析,初步确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为不同产地的差异性标志物。经网络药理学确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为活性成分,可作用于白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)等5个核心靶点,影响3条关键通路[细胞因子-细胞因子受体相互作用、产生免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)的肠道免疫网络、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3 kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)信号通路]发挥调血脂作用。结合“五原则”初步预测新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为辣木叶调血脂的潜在的Q-Marker,质量分数分别为5.81、1.91、2.23、6.59、0.94 mg/g。结论建立的质量评价方法准确可靠,在此基础上结合网络药理学所筛选出的质量标志物可为辣木叶的质量控制提供参考,为阐明其药效物质基础的作用机制奠定基础。

UPLC同时测定鸡骨草中2种生物碱和2种黄酮碳苷的含量

目的:建立UPLC法同时测定鸡骨草中相思子碱、下箴刺桐碱、新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷含量,为药材质量标准改进提供方法。方法:采用HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈(A)-0.2%甲酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 m L·min^(-1),检测波长270 nm,柱温30℃。结果:相思子碱、下箴刺桐碱、新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷的质量浓度分别在10.20~102.00μg·mL^(-1)(r=0.999 2)、6.88~68.80μg·mL^(-1)(r=0.999 0)、5.40~54.00μg·mL^(-1)(r=0.999 9)、10.92~109.20μg·mL^(-1)(r=0.999 3)的范围内线性关系良好;各成分平均加样回收率为99.1%(RSD=1.3%)、101.1%(RSD=0.69%)、103.8%(RSD=0.81%)、100.9%(RSD=0.75%)。5批样品中相思子碱、下箴刺桐碱、新西兰牡荆苷2、夏佛塔苷含量范围分别为23.02~67.24、14.98~40.09、3.02~22.51、6.34~111.38μg·g^(-1)。结论:该法经方法学验证,可同时测定鸡骨草中4种成分的含量,可为该药材的质量标准改进提供参考。

线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷的含量动态变化研究

目的：建立同时测定线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷含量的方法,以确定线纹香茶菜的最佳采摘期。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（梯度洗脱）,流速为0.8 ml/min,检测波长为334 nm,柱温为25℃,进样量为15μl。结果：咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷检测的质量浓度线性范围分别为0.23～5.68、0.31～7.76、0.45～11.30μg/ml（r=0.999 9、0.999 8、0.999 9）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2.0%;加样回收率分别为95.1%～98.9%、97.4%～101.3%、95.5%～98.8%,RSD分别为1.8%、1.7%、1.4%（n=6）。采收于每年4-5月、7-8月的线纹香茶菜中上述3种成分含量最高。结论：该方法简便、准确、重复性好,可用于同时测定线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、异夏佛塔苷的含量;线纹香茶菜的最佳采摘期为每年4-5月、7-8月。

新西兰牡荆苷等4种碳苷黄酮的电喷雾质谱裂解规律研究

目的:利用电喷雾质谱技术对新西兰牡荆苷、木犀草素-6-C-葡萄糖-8-C-木糖苷、槲皮素-6-C-葡萄糖苷和二氢槲皮素-6-C-葡萄糖苷4种碳苷黄酮的质谱裂解规律进行研究。方法:用电喷雾多级质谱(ESI-MSn)对该类化合物进行研究,并分别在正离子和负离子扫描模式下对其主要特征碎片离子进行解析。结果:负离子扫描模式下,主要发生糖环裂解,六碳糖碳苷主要产生脱去m/z 120,90的碎片峰,五碳糖碳苷主要产生脱去m/z 90,60的碎片峰,双糖碳苷主要产生连续脱去m/z120,90,60的碎片峰;正离子扫描模式下,主要发生糖羟基连续脱水,六碳糖碳苷产生脱去m/z 120的碎片峰,五碳糖碳苷产生脱去m/z 60的碎片峰。碳苷黄酮的负离子扫描模式比正离子扫描模式的质谱特征更明显。结论:分析了这4种碳苷黄酮的电喷雾多级质谱裂解规律,探讨了碳苷黄酮,特别是双糖碳苷黄酮质谱裂解规律,为碳苷黄酮的快速鉴别提供了参考。

高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱法研究大鼠口服不同剂量广金钱草总黄酮后的药动学特征

目的建立高效液相色谱-三重四极杆/线性离子阱质谱法,同时测定大鼠血浆中4种广金钱草总黄酮活性成分(夏佛塔苷、维采宁-1、维采宁-2和维采宁-3)的方法,并应用此方法研究SD大鼠口服不同剂量广金钱草总黄酮后的体内药动学特征。方法液相色谱采用ACQUITY UPLC HSS T3柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm,Waters,USA),流动相为甲醇-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱,质谱检测采用电喷雾(ESI-)离子源,多反应监测离子扫描模式(MRM)。结果大鼠血浆中4种黄酮成分在0.5~200.0 ng·mL^(-1)内呈良好线性关系,批内和批间精密度与准确度偏差均小于15%,回收率高且无基质效应,样品在处理、储存和分析过程中稳定性良好,可满足实验要求。大鼠口服不同剂量广金钱草总黄酮后各组分吸收较快,其中夏佛塔苷的血药浓度最高,之后依次是维采宁-3、维采宁-2和维采宁-1,各组分的体内暴露量和剂量呈正相关。结论本研究可为广金钱草总黄酮后续的人体药动学研究提供可靠的方法学参考和数据支持。

基于HPLC-Q-TOF-MS和HPLC-DAD的广金钱草主要活性成分分析

目的通过高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法（HPLC-Q-TOF-MS）鉴定广金钱草中主要活性成分，通过高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）法同时测定广金钱草中7种黄酮类成分（夏佛塔苷、异夏佛塔苷、维采宁。2、异荭草苷、异牡荆苷、木犀草素、芹菜素）的量。方法采用Phenomenex Kinetex C185色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），以甲醇（A）-0．2％甲酸水（B）为流动相梯度洗脱进行色谱分离，体积流量为1．0mL／min，柱温40℃；Q—TOF—MS在电喷雾负离子模式下采集数据，分流比为1：1；采用HPLC-DAD法定量，检测波长为272nm。结果采用HPLC-Q-TOF-MS法鉴定了广金钱草中的41种主要活性成分，其中包括37个黄酮类成分，4个酚酸类成分。成功建立了同时测定广金钱草中7种黄酮类成分的HPLC-DAD法，各成分的线性关系良好（r〉0．9990），精密度、重复性和稳定性良好，回收率在96．7％-102．4％（n=6），RSD均小于4．94％。结论通过HPLC-Q-TOF-MS联用技术，为阐明广金钱草药效物质基础提供参考；建立的HPLC-DAD法同时测定广金钱草中7种黄酮类成分的定量分析方法简便、快捷、准确，为综合评价广金钱草的质量提供参考。

基于灰色关联分析方法研究炒酸枣仁镇静催眠作用谱效关系

目的采用基于灰色关联分析方法的谱效相关研究手段筛选炒酸枣仁Ziziphi Spinosae Semen发挥镇静催眠作用的药效物质基础。方法ip对氯苯丙氨酸建立大鼠失眠模型,造模结束后ig给予炒酸枣仁水煎液,分别于给药后不同时间点采集各实验组大鼠大脑皮层、下丘脑及血浆样品,采用酶联免疫试剂盒方法测定相关药效指标,建立各个药效指标的效应-时间曲线;同时利用UHPLC-Q-TOF-MS分析技术对其中化学成分进行监测,建立各成分的响应强度-时间曲线,使用灰色关联统计方法,对各药效指标的效应-时间曲线与各成分的响应强度-时间曲线分别进行拟合,计算得到各成分与药效的相关度,再将代谢产物归属为原型化学成分,进行权重计算,得到相关系数,并进行排序,客观反映炒酸枣仁水煎液中化学成分与药效的动态发展过程和内在联系。结果于大鼠大脑皮层、下丘脑及血浆中共发现药物相关移行成分23种,其中7种为原型成分,16种为代谢产物。灰色关联分析结果表明,斯皮诺素、山茶苷B、6′′′-阿魏酰斯皮诺素、维采宁-2、莲心季铵碱、去甲异紫堇定、酸枣仁碱F、白桦脂酸共8种化学成分的相关系数较高。结论推测斯皮诺素、山茶苷B、6′′′-阿魏酰斯皮诺素、维采宁-2、莲心季铵碱、去甲异紫堇定、酸枣仁碱F、白桦脂酸为炒酸枣仁发挥镇静催眠作用的主要化学物质基础。

超高效液相色谱法同时测定广藿香中6个成分的含量

目的:建立同时测定广藿香中新西兰牡荆苷2、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、列当苷、藿香黄酮醇和广藿香酮的超高效液相色谱(UPLC)分析方法。方法:采用Waters BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速0.4 mL·min^(-1);柱温30℃;检测波长309nm。结果:新西兰牡荆苷2、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、列当苷、藿香黄酮醇、广藿香酮的线性范围分别为2.18～109.00、8.66～433.11、2.12～106.00、1.81～90.40、0.90～45.00、1.09～54.24μg·mL^(-1)(r^2>0.999 7);平均回收率(n=9)为99.1%～100.7%,精密度、重复性、稳定性均符合有关规定;10批样品中6个成分的含量范围分别为0.137～0.959、0.980～5.877、0.306～1.363、0.273～1.169、0.136～0.387、0.292～1.619 mg·g^(-1)。结论:本法经方法学验证,可用于广藿香质量控制。

HPLC-MS/MS法测定鸡骨草与毛鸡骨草中主要成分在大鼠尿液和胆汁中的浓度及其排泄动力学比较研究

目的:建立同时测定大鼠尿液中9种成分和胆汁中6种成分的HPLC-MS/MS法,并对鸡骨草与毛鸡骨草中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、相思子碱、芒柄花素、木犀草素、维采宁-2、下箴刺桐碱、牡荆素、异牡荆素在大鼠尿液和胆汁中的排泄动力学进行比较。方法:SD大鼠按一定剂量灌胃给予鸡骨草与毛鸡骨草提取物后,在24 h内收集胆汁,96 h内收集尿液。色谱分离采用ZORBAX SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,流动相为甲醇-0.05%乙酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1);质谱检测采用电喷雾离子化(ESI)源,正负离子切换,多反应监测(MRM)模式。结果:尿液的胆汁中各待测成分在测定浓度范围内呈良好的线性关系(r≥0.996 6),日内、日间精密度RSD均小于15%,准确度RE在-11.2%~14.0%,提取回收率均不低于85.9%,基质效应基质因子RSD均不大于15%,样品稀释效应RSD<15%。实验结果表明,鸡骨草与毛鸡骨草中的多数成分在尿液中的排泄情况相似,但在胆汁中差异较大。结论:建立的HPLC-MS/MS方法简单、快速,灵敏度高。测定结果为鸡骨草与毛鸡骨草相互替代合理性的全面评价提供了一定的参考依据。