盾壳霉抗杀菌剂vinclozolin的诱变及突变体的生防潜力

采用适应性培养的方法获得了4个抗杀菌剂vinclozolin的盾壳霉突变体。vinclozolin对野生型盾壳霉菌株Chy-1菌丝生长和分生孢子萌发的EC50分别为1.1和140.0μg/ml;而对突变菌株SV-5-1、SV-5-2、SV-10-1和V-250-1菌丝生长的EC50分别为2219.1、2683.9、2222.8和2504.2μg/ml,对分生孢子萌发的EC50分别是710.4、866.0、931.3和609.3μg/ml。在没有杀菌剂存在的情况下,这些突变菌株的转代培养后代和感染核盘菌菌核后产生的分生孢子后代仍具有抗性。用突变菌株与野生菌株接种核盘菌菌核时,突变菌株的大多数接种处理的菌核被寄生率和菌核腐烂指数与野生菌株接种处理没有明显差异。除菌株V-250-1外,其它3个突变菌株在至少1个接种处理的菌核上产生分生孢子的能力显著高于野生菌株或无明显差异。突变菌株与野生菌株在油菜花瓣上对核盘菌子囊孢子侵染油菜叶片具有明显抑制作用。

乙烯菌核利在有机溶剂中的光化学降解

观察乙烯菌核利在4种有机溶剂中的光解动力学状况。结果表明,高压汞灯下乙烯菌核利在甲醇、乙腈、正己烷和丙酮中的光解半衰期分别为27.51min、46.52min、1.32h、46.52h。太阳光下乙烯菌核利在乙腈中光解极其缓慢,在丙酮、甲醇和正己烷中的光解半衰期分别为0.70h、14.17h、24.58h。作为反应介质的有机溶剂对乙烯菌核利的光解产生了显著的影响,这种影响表现为作为反应基质的溶剂对溶质在光吸收上的竞争效应。

QuEChERS法测定葡萄酒中乙烯菌核利方法研究

建立了QuEChERS测定葡萄酒中乙烯菌核利的方法。样品经乙腈提取,丙基乙二胺(Primary Secondary Amine,PSA)净化,冷冻离心分离,氮气吹干,最后采用气相色谱-串联质谱检测。结果表明:乙烯菌核利浓度在25～250μg·L-1时与峰面积有良好的线性关系(R2>0.9900),定量限(10 S/N)为1.3μg·L-1;当添加量在25、50、250μg·L-1时乙烯菌核利的平均回收率为87%～102%,相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD)为3.1%～7.3%。因此,该方法定性定量结果准确,适合葡萄酒中乙烯菌核利残留的快速检测。

表面活性剂对乙烯菌核利光解的影响

研究了6种表面活性剂对乙烯菌核利在液相和固相表面光解的影响。结果表明,高压汞灯下,表面活性剂对乙烯菌核利液相光解的光猝灭效应随其添加浓度的不同而存在显著差异;但在玻片表面上,不同添加浓度对光猝灭效应的影响差异较小。太阳光下,SLS、SLBS、CTAB和S-20对乙烯菌核利的液相光解表现为光敏化效应;但在玻片上,只有SDS表现为光敏化效应。

法呢醇、三丁基锡和乙烯菌核利对汤氏纺锤水蚤的急性和亚急性毒性

研究了3种环境内分泌干扰物质法呢醇、三丁基锡和乙烯菌核利对深海甲壳纲类动物汤氏纺锤水蚤(Acartia tonsa)产生的急性和亚急性毒性,以及三丁基锡和乙烯菌核利对该水蚤第二代幼虫发育的毒性.在急性毒性实验中,法呢醇作用下的汤氏纺锤水蚤48-h-LC10和48-h-LC50值分别为2.16和6.11 mg/L,三丁基锡作用下的值分别为0.39和2.33μg/L,而乙烯菌核利作用下的96-h-LC50值为7.89 mg/L.在亚急性毒性实验中,三丁基锡作用下的水蚤幼虫生长5-d-EC10和5-d-EC50分别为113和150 ng/L,乙烯菌核利作用下的值分别为0.3和2.7 mg/L.实验结果表明,这3种化学物质在一定的浓度下都会对汤氏纺锤水蚤产生急性毒性.相对于卵孵化率和幼虫存活率,幼虫生长更容易受到3种化学物质毒性的影响,且在特定浓度下生长被完全抑制.第二代汤氏纺锤水蚤幼虫的生长对于三丁基锡毒性的耐受程度与第一代没有显著差别,但对乙烯菌核利却表现出了更强的抵御能力,即在对第一代产生毒性的浓度下,第二代幼虫未显现出毒性.

农利灵对斑马鱼胚胎发育的毒性

[目的]探讨农用杀菌剂农利灵(vinclozolin)对斑马鱼(Brachydanio rerio)的胚胎发育毒性及其机制。[方法]采用水浴染毒法,将受精后2h(hours post fertilization,hpf)内的斑马鱼卵分别暴露于浓度为12.5、25、50、100μg/mL的农利灵,作为4个染毒组,同时设置溶剂(DMSO)对照组、10μg/mL睾酮(testosterone)组及10μg/mL睾酮+50μg/mL农利灵混合组。通过死亡率、孵化时间、发育畸形等指标评价农利灵的胚胎发育毒性。[结果]农利灵染毒组的胚胎死亡率分别为52.6%、68.4%、85.0%、100.0%,明显高于溶剂对照组(10.0%),P<0.01,并呈剂量-效应关系。比较孵化时间,12.5μg/mL农利灵染毒组高于溶剂对照组(t=4.077,P<0.05)。10μg/mL睾酮+50μg/mL农利灵混合组的死亡率为51.2%,低于50μg/mL农利灵染毒组的死亡率85.0%(X^2=6.53,P<0.05)。此外,在农利灵染毒组观察到脊柱弯曲、心包囊肿等发育畸形,其畸形与睾酮染毒组所观察到的畸形相似。[结论]农利灵可延迟斑马鱼的胚胎发育、具有胚胎致死毒性和致畸毒性,其毒性至少有部分是来源于抗雄性激素样作用。

湖北省灰葡萄孢抗药性测定及抗药分子机制研究

评价湖北省灰葡萄孢（Botrytis cinerea）群体抗药性水平，为防治灰霉病提供理论依据，评估了源于湖北省的96个灰葡萄孢菌株对4种杀菌剂的抗性。结果表明，大部分菌株对多菌灵、农利灵和菌核净敏感，抗性菌株出现的频率分别为5%、2%和3%；所有供试菌株均对环酰菌胺敏感，EC50为0.004~0.200μg/mL；对Bc-hc h基因序列扩增和酶解谱带分析结果进一步证实了供试菌株对环酰菌胺敏感。抗性菌株抗药相关基因β-微管蛋白和组氨酸激酶基因的氨基酸序列比对结果显示，部分位点的突变是抗药性形成的可能机制之一，另外也发现了新的突变位点。

乙烯菌核利对稀有鮈鲫性腺组织及相关基因转录水平的影响

乙烯菌核利在哺乳动物实验中被广泛证实具有抗雄激素效应,而对鱼类的研究结论目前并不统一。将性成熟稀有鮈鲫分别暴露于0、2、10、50μg·L-1乙烯菌核利21 d,研究环境浓度下乙烯菌核利对鱼类生殖系统的影响及作用机制。结果表明,雌鱼的性腺指数(GSI)、肝脏指数(HSI)在所有浓度组均显著降低(p<0.05),同时卵巢组织中卵泡的发育受到了抑制;而雄鱼仅HSI在最高浓度组(50μg·L-1)出现显著降低(p<0.05),精巢组织切片也未观察到明显损伤,说明乙烯菌核利对雌鱼生殖系统的影响大于雄鱼。在转录水平上,雌鱼性腺中er mRNA、vtg mRNA分别在50μg·L-1和10、50μg·L-1时显著升高(p<0.05),ar mRNA在所有浓度组显著升高(p<0.05);而雄鱼性腺中ar mRNA、dmrt1 mRNA水平分别在10μg·L-1浓度组和所有浓度组显著降低(p<0.05),er mRNA在所有浓度组显著降低(p<0.05),说明雌雄鱼对乙烯菌核利暴露的分子响应机制存在差异。综上,环境浓度下乙烯菌核利短期暴露会对稀有鮈鲫生殖系统产生一定的影响,并且雌雄鱼在敏感性和分子响应机制上都存在差异。

烯菌酮对小鼠前列腺癌细胞增殖及其脂质过氧化物含量和抗氧化物酶活性的影响

为研究烯菌酮对小鼠前列腺癌(RM-1)细胞增殖及其脂质过氧化物和抗氧化物酶的影响,实验采用了四唑盐法(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测了RM-1细胞增殖活力,采用比色法测定了其细胞内抗氧化物酶活性和脂质过氧化物(Maleic Dialdehyde,MDA)含量的改变。结果表明,0.01μmol/L、1μmol/L和100μmol/L三个浓度的烯菌酮作用24和48 h,RM-1细胞增殖活力均明显低于对照组。100μmol/L烯菌酮作用48 h,小鼠前列腺癌细胞中脂质过氧化物含量明显高于对照组及0.01μmol/L和1μmol/L两个浓度组。烯菌酮作用24、48和72 h,RM-1细胞中总超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)活性随烯菌酮浓度增加而增加,具有浓度依赖性。0.01μmol/L、1μmol/L和100μmol/L烯菌酮作用24 h时,RM-1细胞中过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性明显低于对照组,但随着烯菌酮浓度增加,CAT活性明显增加。100μmol/L烯菌酮作用48和72 h时,RM-1细胞中CAT活性明显高于其他三组。这说明,烯菌酮能抑制RM-1细胞增殖活力,促进其细胞内脂质过氧化物的含量和抗氧化物酶的活性。

农利灵的气相色谱分析方法研究

本文介绍用５％ＳＥ－３０，长度为２ｍ的不锈钢填充柱，以十八烷为内标物，在２４５℃的柱温下用ＦＩＤ检测器对唑烷酮类杀菌剂农利灵（ｖｉｎｃｌｏｚｏｌｉｎ）进行定量分析。分析方法的变异系数为０．１９５％；平均回收率为９９．９９％；线性相关系数为０．９９８２。

环境激素烯菌酮引发小鼠前列腺癌细胞的毒性机制

为探讨环境激素烯菌酮引发小鼠前列腺癌(RM-1)细胞毒性机制,设计了3组实验,分别为对照组、烯菌酮染毒组(染毒组)和烯菌酮染毒后添加维生素E组(实验组),各组给药培养48h后,观察细胞形态变化。检测细胞增殖活性、丙二醛(MDA)含量、抑制羟自由基能力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、Na+-K+-ATP酶活性和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果表明,与对照组相比,染毒组RM-1细胞圆缩脱落明显,贴壁细胞减少;细胞增殖率、抑制羟自由基能力、Na+-K+-ATP酶活性和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显降低(p<0.05),LDH活性和MDA含量显著升高(p<0.05)。与染毒组相比,染毒后添加维生素E,圆缩脱落细胞减少,而梭形贴壁细胞明显增加;细胞增殖率、抑制羟自由基能力、Na+-K+-ATP酶活性和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著升高(p<0.05),LDH活性和MDA含量明显下降(p<0.05)。这表明维生素E可能通过其抗氧化性拮抗了烯菌酮引发的氧化应激,缓解了细胞膜的损伤,维持了细胞膜的完整性和膜蛋白的功能,防止了细胞内LDH外逸、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的下降,从而逆转了烯菌酮引发的细胞死亡和增殖率的下降。

固相萃取-高效液相色谱法测定蔬菜中三唑酮、百菌清和乙烯菌核利残留量

目的建立固相萃取-高效液相色谱-二极管阵列检测法测定蔬菜中三唑酮、百菌清和乙烯菌核利残留量的方法。方法蔬菜样品用乙腈超声提取,加入氯化钠进行盐析脱水,提取液过中性氧化铝柱净化,用正己烷/丙酮(90:10,V:V)淋洗液洗脱,洗脱液水浴氮吹近干,流动相定容后采用高效液相色谱法进行测定,外标法定量。结果三唑酮、百菌清和乙烯菌核利质量浓度在0.02~5.0 mg/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系,方法检出限为0.02 mg/kg,加标回收率为89.5%~105.1%,精密度(relative standard deviation,RSD)为0.85%~4.25%。结论该方法操作简单、准确,可应用于蔬菜中三唑酮、百菌清和乙烯菌核利的检测。

黄瓜中乙烯菌核利残留测定的测量不确定度评定

依据NY/T761—2008标准第二部分,采用气相色谱法对黄瓜中乙烯菌核利残留进行测定,分析检测过程中的各不确定度分量来源,建立了不确定度评定的数学模型,进而对各不确定分量进行合成与扩展。结果表明:黄瓜中乙烯菌核利残留测量结果的合成相对标准不确定度和扩展不确定度分别为2.78%和5.56%(k=2),其中标准溶液的稀释与定容过程、乙烯菌核利残留的提取和净化过程所产生的回收率差异、色谱峰面积测量导致的误差是测量不确定度的主要来源。本研究结果可为客观评价蔬菜中农药残留检测结果提供参考。

QuEChERS-气相色谱-串联质谱法测定果蔬中乙烯菌核利及其代谢物的残留量

建立了改进的QuEChERS方法结合气相色谱/质谱(GC/MS)法快速测定果蔬中乙烯菌核利及其代谢物3,5-二氯苯胺残留量的方法。研究改良了QuEChERS方法中吸附剂的种类和用量,用乙酸乙酯提取番茄、黄瓜、生菜、芹菜、柑橘和葡萄中乙烯菌核利及其代谢物残留,经乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)粉80 mg、石墨化碳黑(GCB)粉50 mg吸附杂质净化后,GC/MS外标法定量。结果表明,乙烯菌核利及其代谢物3,5-二氯苯胺在0.02~0.25μg/mL的质量浓度范围内呈线性关系,相关系数为0.997和0.998。乙烯菌核利及其代谢物在番茄、黄瓜、生菜、芹菜、柑橘和葡萄中的添加水平为0.05~3.0 mg/kg时平均回收率范围均处于81.67%~113.33%之间,相对标准偏差(RSD)小于9.47%,方法的检出限(LOD,S/N=3)乙烯菌核利在4.2~15.5μg/kg之间,3,5-二氯苯胺在6.3~17.6μg/kg之间。本方法具有快速、简便、灵敏等特点,能满足果蔬中残留乙烯菌核利及其代谢物的检测要求。

气相色谱-质谱联用法测定茶叶和辣椒粉中的乙烯菌核利及其代谢物3,5-二氯苯胺残留量

目的建立气相色谱-质谱联用法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)测定茶叶和辣椒粉中的乙烯菌核利及其代谢物3,5-二氯苯胺残留量的分析方法。方法茶叶和辣椒粉样品用乙腈振荡提取,提取液过复杂基质(multiplug filtration clean-up,m-PFC)快速滤过型固相萃取(solid phase extraction,SPE)柱净化,滤液氮吹至近干,用乙酸乙酯定容后用GC-MS进行测定,外标法定量。结果乙烯菌核利及其代谢物3,5-二氯苯胺的质量浓度在20~200 ng/mL范围内与其峰面积呈良好的线性关系。乙烯菌核利和3,5-二氯苯胺的定量限(limit of quantification,LOQ)在茶叶中为0.33 mg/kg,在辣椒粉中为0.07 mg/kg,加标回收率为83.3%~93.5%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.12%~8.11%。结论该方法操作简单、准确,可应用于茶叶和辣椒粉中的乙烯菌核利及其代谢物3,5-二氯苯胺残留量的检测。

气相色谱快速测定粮谷及油籽中烯菌酮残留量

建立一种快速。

环境抗雄激素乙烯菌核利的生殖毒性研究进展

乙烯菌核利是常见的环境内分泌抗雄激素干扰物之一，虽然属于低毒杀菌剂，但在人群中暴露率较高。大鼠性别分化关健期暴露于乙烯菌核利可引起雄性子代生殖发育毒性和遗传毒性，并出现F1-F3代雄性生殖细胞系表观遗传跨代遗传现象，而且机制尚不清楚，因此乙烯菌核利致胚胎发育毒性及遗传毒性研究已引起人们关注。该文就乙烯菌核利的生殖遗传毒性研究进展进行综述。

高效液相色谱法测定乙烯菌核利的含量

[目的]建立一种使用高效液相色谱测定乙烯菌核利的定量分析方法。[方法]采用高效液相色谱,使用Eclipse XDB C8色谱柱,以乙腈-水(体积比80∶20)为流动相,流速为1 mL/min,在205 nm波长下对乙烯菌核利进行定量分析。[结果]当乙烯菌核利质量浓度在1～50 mg/L范围内,方法的线性相关系数为0.99995;标准偏差为0.122,变异系数为0.126%,平均回收率为99.63%。[结论]方法快速、准确,适用于乙烯菌核利的定量分析。

Hippo信号通路在乙烯菌核利致小鼠尿道下裂中的作用

目的观察Hippo信号通路在乙烯菌核利致小鼠尿道下裂中的作用。方法将8周龄ICR孕鼠随机分为实验组和对照组,每组各10只,实验组在孕12~18 d连续7天经口给予400 mg/(kg·d)乙烯菌核利,对照组给予等体积的大豆油。分别于子鼠出生后第60天随机取实验组和对照组小鼠阴茎各20条,采用实时荧光定量PCR检测Hippo信号通路的关键基因Mst1、Lats1、Taz、Yap及雄激素受体基因Ar的表达丰度,Western blot方法检测Hippo信号通路下游Yes相关蛋白(Yap)的表达及其磷酸化水平。结果与对照组雄性子鼠相比,实验组雄性子鼠的肛门生殖器距离明显缩短[(9.2501±2.5504)vs.(16.1253±1.3562) mm,P<0.05]、阴茎质量明显较轻[(0.0293±0.0075)vs.(0.4731±0.004) g,P<0.05]、阴茎长度缩短[(5.3875±0.4524)vs.(12.4688±1.2290) mm,P<0.05],阴茎直径也较对照组小鼠小[(1.5513±0.1158)vs.(2.6013±0.1469) mm,P<0.05]。对照组小鼠阴茎中Hippo信号通路的关键基因Mst1、Lats1、Taz、Yap及雄激素受体基因Ar均表达;实验组Yap、Ar未表达,Mst1、Lats1的表达丰度高于对照组(6.6097±1.3188 vs. 0.3517±0.1524, 5.7071±2.7210 vs. 0.1235±0.0658,P<0.05),Taz的表达丰度低于对照组(0.3937±0.1519 vs. 3.2329±0.4339,P<0.05)。实验组小鼠阴茎Yap表达量降低(0.3348±0.0639 vs. 0.8023±0.4275,P<0.05)、磷酸化程度高于对照组(3.9940±0.2177 vs. 0.3128±0.0867,P<0.05)。结论乙烯菌核利致小鼠尿道下裂模型中,Ar未表达,Hippo信号通路被激活,Yap磷酸化增加,该通路可能在乙烯菌核利致雄性小鼠尿道下裂中起重要作用。