植物组织培养脱毒技术研究进展

从茎尖脱毒法、高温脱毒及病毒抑制剂处理等方面介绍了植物组织培养脱毒常用的方法,阐述了无病毒植株的检测方法,并对植物组织培养脱毒技术的研究方向进行了展望。

龙牙百合茎尖脱毒快繁及种球培育技术

当龙牙百合鳞茎在58℃下处理10-20min，再在40℃下处理72h；茎尖大小为0．2～0.4mm时的诱导成活率达60％～66．7％。继代增殖培养基为MS＋1．0mg／LBA＋0．1mg／LNAA时，其增殖系数是3．36。培养基中4．5％～5．5％的食用糖和60d的培养时间利于鳞茎数量和质量的增加。移栽后的小鳞茎培育8个月可达鲜重22g／个以上的脱毒种球。

百合无毒化种球繁育关键技术

病毒对百合造成的危害是严重的,成为制约百合产业健康发展的瓶颈之一,进行百合无毒化种球繁育关键技术研究具有重要意义。本研究以5个感病百合品种种球为试材,应用愈伤组织培养(Ⅰ)、茎尖培养(Ⅱ)、热处理结合茎尖培养(Ⅲ)、病毒唑结合茎尖培养(Ⅳ)、病毒唑加热处理结合茎尖培养(Ⅴ)五种脱毒方法进行百合种球脱除病毒的研究。结果表明病毒唑加热处理结合茎尖培养方法最好,热处理结合茎尖培养和病毒哇结合茎尖培养方法次之。

紫色甘薯的茎尖培养与脱毒

以紫色甘薯品系为试材,研究6-BA和NAA及基因型对紫色甘薯茎尖培养的影响,并采用硝酸纤维素膜—酶联免疫法(NCM-ELISA)和症状法对再生植株进行病毒学检测。结果表明,培养基中6-BA和NAA浓度和配比对紫色甘薯茎尖培养的愈伤组织、不定根和不定芽的诱导有明显影响。6-BA可促进不定芽的诱导,附加1mg/L6-BA的MS培养基为最佳诱芽培养基。基因型对诱芽率也有一定的影响,其中品系B3和B7的诱芽率可达50%。通过病毒学检测,获得12个紫色甘薯品系的脱毒苗,其平均脱毒率为94.7%。

怀地黄试管苗脱毒技术研究

对怀地黄试管苗的脱毒技术进行了研究.结果发现：以MS为基本培养基并附加适宜浓度细胞分裂素（6-BA0.5 mg·L^-1或KT0.5 mg·L^-1）时,茎尖成苗率最高（75%）,出愈率较低（20%）;切离的茎尖大小为0.2-0.5 mm时,既能保证较高的脱毒率又可保证较高的成苗率;两次切离茎尖并与热处理相结合,试管苗的脱毒率最高（96%-100%）,建立了一种有效的怀地黄脱毒方法和技术.

大蒜茎尖脱毒及组织培养研究

采用茎尖分生组织培养技术,获得了大蒜无病毒试管苗。通过激素配比试验,筛选出最佳的培养基组成,进行脱病毒苗的快速繁殖。结果表明:诱导茎尖出芽的最适培养基为MS+6 BA 1.5mg/L+NAA 1.0mg/L,诱导生根的最适培养基为MS+IAA 2.0mg/L.

半夏脱毒技术研究及应用

目的:通过脱毒快繁技术解决半夏因体内病毒积累导致种性退化和品质降低的问题。方法:以半夏叶、叶柄为外植体,采用高温处理(38℃,40 d)结合茎尖培养对半夏进行脱毒技术研究。结果:高温处理40 d左右,88.9%的植株叶片不带斑点;利用1.0 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA诱导茎尖成苗,成苗率可达91.4%;MS附加0.5mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA有利于试管苗生长,附加0.5 mg/L KT、0.5 mg/L NAA诱导形成的单株平均根数和根长指标最好,移栽成活率可达89.5%。结论:建立了可靠的半夏脱毒快繁技术体系。

芋组培脱病毒技术及其增产效益的研究

试验研究了莱阳孤芋茎尖培养脱毒技术及脱毒芋的产量表现。结果表明 ,茎尖大小在0 3～ 0 5mm时 ,成活率在 80 %以上 ,适宜茎尖分化的培养基为MS +BA 1 0mg/L +NAA 0 2mg/L +Spm 2 0mg/L。 3次剥离茎尖培养所得试管苗经酶联免疫检测及电镜观察显示 ,已不带芋花叶病毒。脱毒试管苗定植后 ,植株生长旺盛 ,后代球茎数量达每株 31 2个。小区对比试验表明 ,脱毒原原种芋、原种芋可使球茎数量比对照增加 37 0 %～ 5 2 5 % ,同时使单位面积产量和商品芋产量分别增加 2 0 2 %～ 4 3 9%和 4 9 9%～ 70 0 %。

甜樱桃茎尖培养脱毒研究

以甜樱桃(PrunusaviumL.)嫩梢芽为外植体进行了茎尖组培脱毒研究,筛选出的增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA30.5mg/L+AgNO35.0～10.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,丛生芽增殖数达到6个以上;确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L,生根率达75.1%,移栽成活率可达80.5%以上;利用生物学方法对甜樱桃试管苗进行了初步病毒鉴定,结果表明,0.5～0.8mm茎尖培养对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和李矮缩病毒(PDA)的脱毒率达39.4%和48.1%;0.5mm以下茎尖培养对ACLSV和PDA的脱毒率达75.8%和78.6%,证明甜樱桃试管苗0.5mm以下的小茎尖培养能有效脱除ACLSV和PDA病毒。

金边瑞香茎尖脱毒及快繁技术

报道了金边瑞香顶芽在MS＋0，05mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA培养基中预培养20d，再在34℃（11h）＋23℃（13h）的昼夜温度交替下处理30d后，剥离0．2-0．3mm大小的茎尖在MS＋0，1mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA培养基中的诱导成活率为80．0％，并获得脱毒苗。继代和增殖培养基为MS＋0．5-1．0mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA，增殖系数4，1。试管苗在适宜培养条件下平均生根率为82．6％，在珍珠岩：泥炭=2：1基质中生根苗移栽成活率达到96．46％。

杭白菊茎尖组织培养及试管苗繁殖技术研究

采用茎尖组织培养技术,建立了杭白菊中大洋菊(ChrysanthemummorifoliumRamat.)的无菌试管苗体系。通过基本培养基和激素配比实验,筛选出杭白菊试管苗快速繁殖的最佳培养基组成。结果表明:最适宜的外植体为直径0.3mm的茎尖;诱导丛生芽的最适培养基为:MS+6 BA0.1mg·L-1+IAA0.02mg·L-1;诱导试管苗生根的最适培养基为:1/2MS+IAA0.7mg·L-1。用电子显微镜进行病毒检测后,筛选出2个脱病毒株系,脱病毒试管苗可作为今后提供优质种苗的种源。

罗汉果组培苗脱毒方法研究

采用热处理结合茎尖技术对罗汉果组培苗进行脱毒培养，并用间接酶联免疫法和电镜观察法对脱毒效果进行检测．结果表明．组培苗经38．5℃热处理10d后，剥取0．2～0．5mm微茎尖培养或切取1．0～1．5mm茎尖进行二次茎尖脱毒培养，茎尖苗的脱毒率均为100％，建立了两种有效的罗汉果组培苗脱毒方法。

上饶早梨主栽品种病毒种类分析及其茎尖脱毒技术效率比较

对上饶早梨3个主栽品种的病毒种类进行分析,并对其不同茎尖脱毒技术的效率进行比较。结果表明,花厅六月雪和田墩六月雪没有检测到苹果茎痘病毒(ASPV),花厅黄皮消检测到ASPV,田墩六月雪、花厅六月雪和花厅黄皮消均检测到苹果茎沟病毒(ASGV)和苹果锈果类病毒(ASSVd),但均未检测到苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果花叶病毒(Ap MV)。对于上饶早梨3个主栽品种来说,超低温疗法的脱毒效率显著高于常规茎尖培养,在3种超低温疗法脱毒技术中,包埋玻璃化法超低温疗法的脱毒效率最高。SSR荧光标记毛细管电泳检测表明,常规茎尖培养和3种超低温疗法脱毒技术均能保证上饶早梨3个主栽品种的遗传稳定性。该研究有助于上饶早梨种苗病毒病害的检测鉴定和实时监控检疫,同时也可为建立上饶早梨种质资源超低温库和生产无毒苗提供一定的技术支撑。

甘薯济黑1号茎尖脱毒与快繁技术研究

以甘薯(Ipomoea batatas L.)济黑1号为试材,对济黑1号茎尖脱毒和脱毒苗快繁技术进行研究,并用指示植物法对再生植株无性系进行病毒检测。结果表明,在薯块出芽30 d内,外植体的处理中采用2%的NaClO溶液处理最好,接种于含有1 mg/L 6-BA的MS培养基中,取材污染率最低,成苗率最高。快繁过程中普通MS培养基中加入0.02 mg/L IAA对快繁更加有利。

甘薯茎尖培养与脱毒技术研究

以红姑娘2号甘薯为材料,研究6-BA、NAA、GA3不同配组对茎尖培养的影响,并采用温水钝化法及适宜的茎尖大小来提高红薯病毒脱毒率,用指示植物法对再生植株无性系进行病毒检测。研究结果表明,培养基中的6-BA、NAA、GA3不同浓度配比对红姑娘2号甘薯茎尖培养不定芽、不定根的诱导有明显的影响。在诱导产生愈伤组织和丛芽阶段,培养基MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.01mg/L+GA3 0.1mg/L效果较好。而1/2MS+NAA 0.2mg/L是红姑娘2号试管苗的适宜生根培养基。通过指示植物法检测90个无性系,平均脱毒率为96.7%。

嘉定白蒜茎尖脱毒技术研究

以嘉定白蒜为试材 ,采用茎尖分生组织培养技术获得无病毒植株。结果表明 :以带有一片叶原基、大小为 0 .2～ 0 .5mm的茎尖外植体 ,接种在附加BA0 .1mg L和IBA 0 .1mg L的MS培养基上 ,成苗率达 90 % ;不定芽增殖培养基以MS添加 6 BA0 .5mg L和IAA 0 .2mg L效果最好 ;筛选出生根最适培养基为MS +NAA0 .8mg L ,生根率达 70 %以上 ,组培苗经电镜检测脱毒率为 85% ,初步建立起脱毒嘉定白蒜繁殖体系。

一种简易快速获得脱毒马铃薯幼苗的方法

马铃薯是中国第四大粮食作物,其安全生产直接关系到中国农业经济的稳定增长.马铃薯系无性繁殖材料种植,在连年的种植过程中,通常会受到病毒的侵害,从而影响其产量和品质.分离茎尖组织培养脱毒马铃薯是目前解决这一问题的常见且行之有效的方法之一.通过实验探索出了一种简单易行的分离茎尖组织、培养脱毒马铃薯幼苗的体系,为快速获得脱毒马铃薯幼苗奠定技术基础.

甘蔗茎尖胚状体脱毒苗快繁技术研究

以甘蔗新台糖22号为材料,比较茎尖胚状体、茎尖与腋芽3种分化成苗繁育方法在不同时期接种、不同激素水平下的组培苗增殖速度、苗素质及脱毒效果。试验结果表明：组培苗繁殖速度以茎尖胚状体分化苗最快,增殖5代后扩繁2589倍,茎尖297倍,腋芽104倍,培养基以6-BA 1.5mg/L＋NAA 0.01-0.1mg/L增殖效果最好;组培苗质量与繁殖速度相反;出现不正常生长的苗类型有白化苗、细弱小苗、玻璃化苗、疯长苗4种,茎尖胚状体苗发生率1.77%,茎尖苗1.56%,腋芽苗0.31%;不同处理间组培苗生根及移栽成活率差异不显著,生根率茎尖胚状体苗75.3%、茎尖苗76.9%、腋芽苗76.6%,移栽成活率茎尖胚状体苗94.8%、茎尖苗95.4%、腋芽苗95.1%,生根培养基以NAA7.5mg/L＋ABA 2.5mg/L最好;去除RSD、花叶病方面,以茎尖胚状体苗最好,RSD去除率95%、花叶病去除率100%,茎尖苗RSD去除率70%、花叶病75%,腋芽苗未能去除RSD、花叶病。应用茎尖胚性细胞再生植株,脱毒效果好,繁殖速度快,可克服目前脱毒苗生产中试管苗扩繁量小、成本高的难题。

蝴蝶兰茎尖脱毒再生体系建立与优化

以蝴蝶兰茎尖为外植体进行组织培养,研究培养基中无机盐浓度、糖浓度、激素比例及外植体大小对其茎尖生长点成活率及脱毒效果的影响。结果表明,蝴蝶兰茎尖组培脱毒外植体大小为0.2~0.4 mm,并附带1个叶原基,可脱除ORSV病毒。适当降低培养基中无机盐与6-BA浓度有利于提高茎尖生长点的成活率。培养基中添加15 g/L的绵白糖有利于茎尖的成活及生长。1/3MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为最适宜的蝴蝶兰茎尖培养基。