可见植入荧光标记和编码金属标对达乌尔鳇标志效果的初步研究

2011年9月底至2012年5月,采用可见植入荧光标记(VIE)和编码金属标(CWT)标志全长为(28.06±1.79)cm的达乌尔鳇(Huso dauricus),检验了VIE和CWT的标志保持率及其对达乌尔鳇生长和存活的影响。结果显示,经过210 d实验,VIE标志达乌尔鳇吻部腹面,CWT标志达乌尔鳇背部前(第1～2块背骨板间下方肌肉)、中(第6～7块后背骨板间下方肌肉)、后(第11～12块背骨板间下方肌肉)的标志保持率分别为:95.83%、92.00%、92.59%、92.59%。实验中VIE出现破碎、脱落或迁移致使标志可识别性下降;CWT背部中这一标志部位操作最为简便。标志30 d,VIE标志组的保持率较CWT背部不同部位标志组及对照组低,且差异显著(P<0.05),此后31～210 d并无显著性差异。VIE和CWT背部不同部位标志对达乌尔鳇的生长无显著性差异。结果表明,VIE和CWT均可用于标志达乌尔鳇。进行短期大规模达乌尔鳇的标志放流可使用成本相对较低的VIE标志。

中国对虾荧光标记虾的大规模制作与养殖试验

以平均体长为2 cm以上的10 632只中国对虾(Fenneropenaeus chinensis),用红色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾,与10万只非标记的中国对虾在同一池塘养殖。结果表明,VIE标记对虾和非标记对虾经2-3个月的养殖后,在生长发育和成活率等方面没有差异。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为70%以上。红色VIE标记可以用于中国对虾的海洋增殖放流研究。

中国对虾幼虾荧光体内标记技术研究

2004年7月,采用可视嵌入性荧光标记(Visible i mplant elastomer,VIE)对平均体长为4.75cm的中国对虾幼虾进行第6腹节的两部位标记,以研究VIE标记对中国对虾幼虾的适用性。10个家系的幼虾各取30尾,对其中的15尾进行标记,另15尾作为对照,共标记幼虾150尾。本研究分析了标记对虾和对照组的即时死亡率、生长和标记保持率。结果显示,标记对虾和对照组的即时死亡率低,前者为0.6%,后者无死亡。x2检验显示,二者不存在显著差异(P<0.05);通过对30、60d后体长的单因素方差分析,实验组和对照组在体长方面不存在显著差异(P<0.05),表明荧光标记对生长没有影响;标记后30、60d的标记保持率均很高,达到99%以上。2005年7月,对人工定向交尾建立的108个家系(平均体长为4cm)进行了大规模荧光标记,标记后30、60d的标记保持率均在99%以上,越冬后(210d后),对不同标记部位的标记保持情况进行了统计,标记保持率均在90%以上。

幼体中国对虾荧光标记虾的制作

采用经过暂养,平均体长为2cm以上的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)进行试验,用黄色、红色和绿色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾。结果表明,对照组中国对虾与用VIE标记后7个试验组中国对虾在生长发育等方面没有差异,并且各组对虾蜕皮正常。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为95%。3种颜色的荧光染料中,红色荧光标记的效果最好。

荧光标记技术在增殖放流中的应用现状

标志技术是用来区分不同个体或种群的常用方法。自Petersen等[1]利用标志方法估算封闭水体中鱼类的利用率及种群大小后,标志技术在渔业和水产养殖研究中得到广泛的发展和应用,标记技术也不断更新。荧光标记技术是渔业和水产养殖研究中常用标志技术手段之一,其通过特定技术方法在标志对象上形成荧光标记进而通过肉眼或借助仪器发现该标记，主要有将荧光物质注入水生生物皮下形成荧光标记和应用荧光染料在水生生物钙质和骨质结构上形成荧光标记两种技术方法。

舟山海域黑鲷标志放流试验

2004年-2006年分别采用金属线码标记、荧光色素可见式标记(荧光标记)和挂牌标记三种方法,在舟山海域进行黑鲷(Sparus macrocephalus)标志放流试验,三年内共放流标志黑鲷17 616尾,平均体长131.9 mm,平均体重46.46 g。结果表明:挂牌标记的死亡率和脱标率最高,荧光和挂牌标志鱼只获得当年回收,回捕率分别为0.16%和0.64%,没有捕获金属线码标志鱼,说明在开放性的水域,总体回捕结果不佳,金属线码标记法不适合黑鲷放流;标志黑鲷移动范围不大,最远不超过15海里,栖息地具有明显的区域性;标志鱼放流后2个月左右生长缓慢,此后生长加快。本试验基本达到标志放流的预期目的。

可视荧光硅橡胶标志用于西伯利亚鲟幼鱼标志的初步评价

在渔业和水产养殖的研究中,常采用标记（Marking） 或标志（Tagging）方法来区分不同的个体或种群.标志技术在鱼类个体生长、存活和种群补充和生产力研究中广泛应用,标志回捕（Mark recapture）已成为评估渔业资源状况和洄游习性研究中的重要研究手段.此外,标志技术在选择育种上也得到了应用,用以快速有效地区分不同选育群体.如何提高标志榆测率和保持率,以及怎样 减少标志操作对研究对象生长和存活影响,是研究和选择标志方法时应考虑的主要问题.

三疣梭子蟹的两种标记技术

本研究采用注射可视嵌入性荧光、剪附肢两种手段对不同期别的三疣梭子蟹进行标记,以研究标记的适用性及对个体生长的影响。对不同发育阶段三疣梭子蟹进行两个部位荧光注射,统计蜕壳后可识别率。结果显示,Ⅱ、Ⅲ期幼蟹适合腹面区域注射,Ⅳ期以后幼蟹适合游泳足基节和头胸甲背面的薄膜关节注射;标记后,经过两次蜕壳,识别率在80%以上,但经3次蜕壳后,识别率较低;根据标记组、未标记组生长数据,通过单因素方差分析发现,标记对三疣梭子蟹个体生长无显著性影响。Ⅶ期以后的幼蟹,更适合剪附肢法,该法操作简单、识别率高,对个体生长、存活无显著性影响(P>0.05)。

喀什河新疆裸重唇鱼标记方法的研究

2019年12月—2020年9月,对1+~2+龄体质量(3.06±1.18)g、2+~3+龄体质量(51.15±8.43)g和3+~4+龄体质量(124.21±22.87)g新疆裸重唇鱼(Gymnodiptychus dybowskii)眼后缘的透明表皮下,采用可见植入荧光标记(VIE)5 mm、在背鳍前皮下肌肉用金属线码标法(CWT)标记、用浓度100 mg/L茜素红S侵泡荧光标记法(ARS)和背鳍正下方的皮下肌肉中的被动集成应答器标记(PIT),以探究不同标记方法对新疆裸重唇鱼的适用性。标记后各组鱼单独饲养,ARS法的鱼养殖90 d,VIE、CWT和PIT标记法的鱼养殖270 d。首月后,2个月采样一次,测定各组的生长、存活率、标记保持率等。结果表明:ARS标记各组90 d的标记保持率在95%以上,但检测需解剖标记鱼;CWT组小型鱼270 d存活率为76%,存活个体主要为较大个体,对中、大型组存活率影响小;VIE组对小型鱼存活率的影响显著(P<0.05),对中、大型鱼影响小,270 d存活率在97%及以上;PIT组对小型鱼存活率影响显著(P<0.05),对中型鱼生长有一定影响。存活率、标记保持率及生长对比表明,今后大规模标记放流体质量5 g以下的新疆裸重唇鱼应选择ARS浸泡;5 g以上放流可选择CWT;40 g以上短期(150 d)标记可选择VIE;100 g以上小规模放流可选择PIT。

中华绒螯蟹可视荧光标记应用研究

采用红色可视嵌入性荧光(visible implant elastomer,VIE)标记中华绒螯蟹(Eriocheir Sinensis),观察了荧光标记在中华绒螯蟹中的保持率和对其存活、生长、发育及繁殖的影响。荧光标记幼蟹不同部位在室内饲养并观察8周,结果表明,在中华绒螯蟹幼蟹不同部位的标记保持率均为100%,对照组和各试验组幼蟹的存活率无显著性差异(P>0.05)。荧光标记幼蟹螯掌节和腕节间的关节膜后移入室外养殖池养殖,中华绒螯蟹室外养殖的生长和发育速度与对照组也无显著差异(P>0.05)。挑选标记后经室外池塘养成的中华绒螯蟹进行小水体繁育实验,抱卵率为83.3%,平均抱卵量30×104egg·ind-1,与未标记中华绒螯蟹小水体繁育实验结果比较,抱卵率、平均抱卵量无显著性差异,荧光标记不影响中华绒螯蟹交配抱卵。本文结果表明,VIE可视荧光标记可作为中华绒螯蟹个体识别标记,应用于育种、资源调查等研究和生产实践。

新疆维吾尔自治区土著鱼类标记放流现状

2018年,新疆首次对额尔齐斯河、伊犁河及塔里木河水系3种代表性土著鱼种(高体雅罗鱼、新疆裸重唇鱼以及扁吻鱼)开展标记放流,放流地点为托洪台水库、伊犁河、博斯腾湖及克孜尔水库,标记方法有荧光浸染、色素注射及PIT射频芯片标记,标记数量分别为8.0万,1.1万和1.4万尾,共计10.5万尾。标记试验结果表明:3种标记方式成活率均高于98.5%,标记检出率高于92.0%;低于400mg·L^-1浓度的茜素红S(ARS)未见对扁吻鱼造成明显损伤;扁吻鱼荧光色素注射标记颜色以红色最佳,标记位置可选择上额、眼眶后缘及鳃盖膜下缘;扁吻鱼PIT玻璃芯片标记最佳位置为背鳍下侧。该研究为新疆土著鱼类的增殖放流工作提供参考。

准噶尔雅罗鱼标记放流评价

为了积极救护准噶尔雅罗鱼的种质资源,2019年首次在新疆精河入艾比湖三角洲开展准噶尔雅罗鱼标记放流,放流地点为艾比湖南岸湖滨区,标记方法有4种,分别是PIT频射芯片、色素注射、CWT线码和荧光(ARS)浸染标记,2019—2020年共标记3.2万尾。结果表明:准噶尔雅罗鱼PIT频射芯片标记伤口使用100 mg·L^(-1)的高锰酸钾溶液涂抹消毒,有利于损伤组织迅速结痂,减少损伤处病原体感染;色素注射标记颜色以绿色为佳,植入鱼类上额的皮下组织,标记横向长度为10~12 mm;CWT线码标记的植入位置为上额的皮下组织;荧光浸染标记中茜素红S(ARS)浓度160~180 mg·L^(-1)对准噶尔雅罗鱼未造成明显损伤;4种标记成活率均高于98.8%,标记保持率均高于93.7%,说明4种方法适合准噶尔雅罗鱼的放流标记。该结果可为准噶尔雅罗鱼的增殖放流及效果评估工作提供科研基础。

应用于花斑裸鲤增殖放流效果评价的两种标记方法对比研究

为探讨适应高原鱼类规模化增殖放流效果评价的标记方法,本研究选取黄河上游典型的规模化放流品种花斑裸鲤(Gymnocypris eckloni)为试验对象,对比可见植入荧光标记法和金属线码标记法标记花斑裸鲤的效果。结果显示:可见植入荧光标记的保持率是100%,死亡率3%,金属线码标记的保持率是85%,死亡率17%;单人标记速度可见植入荧光标记法大约是金属线码标记法的3倍;两种方法标记鱼类与未标记鱼类的体长体重均没有显著差异。3年的回捕监测显示,两种标记均可长期保留。鉴于可见植入荧光标记检测方法较金属线码标记保持率高,标记更为快捷,且检出率高,建议对高原鱼类的增殖放流效果评价采用可见植入荧光标记。

大渡河安谷水电站流域4种增殖放流鱼苗标记方法的初步研究

为了探明适宜大渡河安谷水电站流域增殖放流鱼类标志的方法,在安谷水电站鱼类增殖放流站使用T-tag锚标法(T-tag)、金属线码标法(CWT)和荧光胶体标记法(VIE)分别对四种放流鱼苗(胭脂鱼Myxocyprinus asiaticus、长薄鳅Leptobotia elongate、唇■Hemibarbus labeo和黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco)进行标记。每种鱼苗选择大、小两种规格进行试验。在标记后40 d分别统计了鱼苗的存活率、标记保持率和生长等数据。结果表明:(1)40 d短期标记条件下,CWT和VIE对四种鱼苗的存活率负面影响较小,T-tag对存活率负面影响较大。其中,CWT和VIE对体长50～110 mm小规格放流鱼苗的存活无显著影响,而T-tag导致小规格放流鱼苗存活率显著下降;(2)四种放流鱼苗CWT和VIE标记保持率均显著高于T-tag,其中,除50～80 mm的小规格长薄鳅VIE组标记保持率略低于CWT外,其它各实验组均表现出VIE组大于CWT组;(3)CWT和T-tag标记保持率与标记鱼类生活习性相关性较大,胭脂鱼、长薄鳅标记保持率相对高于唇■、黄颡鱼;(4)三种标记对鱼苗都具有一定的损伤,但与对照组相比标记组存活的鱼苗生长状况均不受影响,其中,四种鱼苗相比唇■的生长速度最快。(5)考虑到T-tag标记具备操作简单、标记快、易辨认等特点,建议使用T-tag标记时鱼苗的全长应大于170 mm。

中华鳖稚鳖荧光标记技术研究

采用红色和绿色荧光可视植入胶体(Visible Implant Elastomer,VIE)对刚孵化的中华鳖稚鳖前肢腹面进行了标记养殖实验.红色、绿色和对照组稚鳖在第30天、第60天、第90天和第120天平均体重分别为(15.18±0.73)g、(15.54±0.82)g、(15.33±0.79)g;(40.37±1.50)g、(40.94±1.60)g、(40.70±1.66)g;(75.64±2.97)g、(74.59±3.27)g、(75.45±2.80)g和(122.01±7.27)g、(124.15±8.06)g、(124.76±7.28)g.红色、绿色和对照组稚鳖第120天成活率分别为96.0%、95.0%和95.3%.红色标记在整个实验期间保持率为100%.绿色标记在第30天和第60天保持率为100%,第90天和第120天保持率分别为96.7%和95.0%.研究结果表明:VIE标记对稚鳖的生长发育和成活率影响小,标记保持率较高,是一种适合刚孵化稚鳖的标记方法.

应用可视嵌入性荧光标记技术研究中国鲎幼体野外放流后的生境选择

2013年4月于中国鲎天然栖息地西背岭潮问带的总长度3km放流区域设定30个放流点，每个放流点投放500只用可视嵌入性荧光标记的中国鲎二龄稚鲎。55d后于放流潮间带开展稚鲎放流效果评估工作。在标记稚鲎分布密度高（〉2个／100m。）、密度低（1～2个／100m^2）、无分布（0个／100m^2）区域各定3个站位，共9个站位。对每个站位环境因子（水温、盐度、溶解氧、酸碱度）进行测定，并开展底质粒径分析。初步结果显示，盐度、水温、溶解氧和酸碱度等因子对标记稚鲎分布没有呈现决定性影响。而标记稚鲎的扩散能力以及放流区域的底质颗粒大小是决定人工放流稚鲎分布的主要因素。

两种标记方法对异齿裂腹鱼幼鱼的标记效果研究

异齿裂腹鱼(Schizothorax oconnori)是仅分布于雅鲁藏布江中游的高原特有鱼类。本研究在室内水泥池条件下探讨了可见植入荧光(VIE)标记和T型标志牌对异齿裂腹鱼幼鱼的短期(30 d)标记效果。共设置3个处理组,分别为VIE标记组、T型标志牌组和对照组。VIE标记的标记部位为试验鱼的头部表皮,T型牌的标记部位为试验鱼的背鳍基部。试验期间的水温为10. 1~11. 7℃,溶解氧为3. 65~7. 54 mg/L。结果显示,各标志处理组在试验期间没有显著生长,各组间的全长也没有显著性差异。VIE标记组、T型牌组和对照组的平均存活率分别为95. 8%、92. 0%和97. 5%。VIE标记组和T型牌组的平均标志保持率分别为100%和88. 95%。本研究表明,VIE标记是适宜异齿裂腹鱼幼鱼的短期标记方式。