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Analysis of Genetic Variation of VP2 Gene in 6 FPV Strainsin China 被引量:2
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作者 Jianxin Wen Zhiqiang Wang Jianwei Ren 《Advances in Microbiology》 2021年第4期191-198,共8页
In order to understand the variation of FPV strains in the Jinan area, Shandong Province, China, the VP2 gene of 6 FPV strains was sequenced, and the analysis of the genetic relationship, evolution and main functional... In order to understand the variation of FPV strains in the Jinan area, Shandong Province, China, the VP2 gene of 6 FPV strains was sequenced, and the analysis of the genetic relationship, evolution and main functional site variation was carried out. It was found that FPV-XY2, FPV-XY3 and FPV-XY6 were the same strain with 100% homology, and also close to FPV-XY1, and the homology between FPV-XY4 and FPV-XY5 was close. The homology between the reference strain and the test strain was over 99.3%. According to the evolutionary analysis, the genetic relationship among FPV-XY1, FPV-XY2, FPV-XY3, FPV-XY6 was close, and the genetic relationship between FPV-XY4 and FPV-XY5 was close, and the result was similar to the homologous result. Compared with the VP2 amino acid sequence of the standard strain FPV-CU4, the VP2 protein of all the test strains changed from I to t on the 101st Amino acid, this may be the cause of immune failure in these 6 cases;the change of a to s in the 91st amino acid position of FPV-XY1, FPV-XY2, FPV-XY3, FPV-XY6 may be the cause of enhanced virulence of FPV. This study provides a reference for exploring the epidemic law of FP in the Jinan area, the standard of FP treatment plan and the research and development of FPV subunit vaccine. 展开更多
关键词 Feline Panleukopenia Feline Panleukopenia Virus vp2 gene EVOLUTIONARY
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犬细小病毒CPV-2c型亚洲株分离鉴定及VP2基因序列分析
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作者 李昀真 李双双 +7 位作者 丛培强 曹海旭 鲁荣光 廉士珍 张海玲 李虹晔 胡博 白雪 《特产研究》 2024年第2期1-6,共6页
为探明北京某犬场犬的死亡原因,从患有肠道出血的犬肛拭子中分离出1株犬细小病毒,试验通过PCR、血凝和间接免疫荧光试验方法对毒株进行鉴定,并对VP2基因进行克隆测序和序列分析,确定其遗传分支。结果表明,该分离株属于犬细小病毒CPV-2c... 为探明北京某犬场犬的死亡原因,从患有肠道出血的犬肛拭子中分离出1株犬细小病毒,试验通过PCR、血凝和间接免疫荧光试验方法对毒株进行鉴定,并对VP2基因进行克隆测序和序列分析,确定其遗传分支。结果表明,该分离株属于犬细小病毒CPV-2c型,命名为CPV-BJ21株。应用犬细小病毒单克隆抗体进行间接免疫荧光检测,结果为阳性;基因序列分析表明,分离株与犬细小病毒为同一进化分支,VP2基因核苷酸序列与中国四川的CPV-2c(MH476581.1)同源性达99%,与亚洲分离的犬细小病毒之间亲缘关系较近。VP2氨基酸序列在第A5G、S297A、D426E位出现了氨基酸突变;在F81细胞上传3代后,病毒液的血凝效价稳定于210。本研究可为犬细小病毒的流行情况及新疫苗的研究提供参考依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒 分离鉴定 vp2基因 遗传进化分析
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猪细小病毒7型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
3
作者 吕紫欣 张鑫杰 +3 位作者 薛少华 黄喜荣 刘建奎 戴爱玲 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第14期56-60,共5页
为了表达猪细小病毒7型(PPV7)VP2蛋白(由Cap基因编码)并制备其多克隆抗体,试验从GenBank数据库中下载PPV7 Cap基因序列,选择不同毒株的高频序列作为目的基因序列,使用T4 DNA连接酶将目的基因与pET-32a表达载体连接,将连接产物转化至DH5... 为了表达猪细小病毒7型(PPV7)VP2蛋白(由Cap基因编码)并制备其多克隆抗体,试验从GenBank数据库中下载PPV7 Cap基因序列,选择不同毒株的高频序列作为目的基因序列,使用T4 DNA连接酶将目的基因与pET-32a表达载体连接,将连接产物转化至DH5α感受态细胞中,并使用IPTG对重组菌进行诱导,对表达的重组蛋白进行可溶性分析与纯化并通过Western-blot检测重组蛋白的反应原性,用纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并分别通过间接ELISA方法、Western-blot检测多克隆抗体的效价及其与重组蛋白的反应性。结果表明:诱导后的重组菌在56 ku处出现明显条带,重组蛋白主要以包涵体的形式表达;纯化后的重组蛋白为单一条带,质量浓度为0.46 mg/mL,能与His标签抗体特异性结合;制备的多克隆抗体的效价为1∶51200,能与重组蛋白特异性结合。说明PPV7 VP2蛋白获得了成功表达,该蛋白具有良好的反应原性和免疫原性,所制备的多克隆抗体效价较高。 展开更多
关键词 猪细小病毒7型 vp2蛋白 Cap基因 原核表达 多克隆抗体
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郑州地区犬细小病毒VP2基因遗传进化分析
4
作者 张爱国 温良海 +7 位作者 陈廷毅 王艺格 胡梦真 马琰君 靳双星 黄啟雪 张瑶 宋超 《现代牧业》 2024年第1期1-7,共7页
为了解郑州地区犬细小病毒(CPV)的流行特征及遗传变异情况,采集81份2017—2022年郑州市疑似感染CPV犬的粪便或肛门拭子进行PCR检测。随机挑选出21份经PCR检测的CPV阳性样本,扩增其VP2基因,连接至载体并测序,用MegAlign软件对流行株进行... 为了解郑州地区犬细小病毒(CPV)的流行特征及遗传变异情况,采集81份2017—2022年郑州市疑似感染CPV犬的粪便或肛门拭子进行PCR检测。随机挑选出21份经PCR检测的CPV阳性样本,扩增其VP2基因,连接至载体并测序,用MegAlign软件对流行株进行同源性和氨基酸变异分析,并通过MEGA6.0软件构建基因遗传进化树。结果显示:2017—2018年郑州地区CPV流行基因型为New CPV-2a亚型,2019—2022年则以CPV-2c亚型为主导。21株CPV流行株与疫苗株的核苷酸同源性为98.3%~99.0%,其中CPV-79流行株与疫苗株的核苷酸同源性最低,仅为98.3%,且该毒株在VP2蛋白GH环区出现多位点氨基酸突变;部分CPV-2c亚型流行株第5和370位氨基酸出现A到G和Q到R的变异。研究结果表明:郑州地区当前流行基因型为CPV-2c亚型,虽出现多位点氨基酸突变,但未形成明显的国内进化分支。值得注意的是,New CPV-2a亚型在进化过程中形成了不同分支且存在抗原突变的风险。本研究丰富了郑州地区CPV的分子流行病学调查数据,也为我国CPV流行疫苗株的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2基因 遗传进化分析 郑州地区
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猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定及VP2基因的遗传变异分析
5
作者 张启龙 李振河 +9 位作者 程敏姮 栗云鹏 高晓龙 傅彩霞 王林 高敏 余琦 周德刚 张玮 李志军 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期28-34,共7页
为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,... 为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,分离鉴定到1株FPV,命名为FPVBJ-CP/2022株。对决定病毒宿主范围和抗原性的VP2基因系统进化树分析表明,分离株与FPVJF-3株、FPVBeijing-01/2018聚为一支,与FPV疫苗株、CPV群亲缘关系较远。VP2蛋白主要功能位点分析结果显示,VP2蛋白中决定病毒抗原性和宿主嗜性的10个关键位点氨基酸均未发生突变,但该分离株的VP2蛋白序列与GenBank其他FPV毒株的VP2蛋白相比,91位氨基酸由丙氨酸(A)突变为丝氨酸(S),505位氨基酸由天冬酰胺(N)突变为天冬氨酸(D),该突变是否对FPVBJ-CP/2022株VP2蛋白的功能和生物学特性造成改变,有待于进一步研究。论文通过对毒株的遗传变异分析,为更好地预防和控制FPV感染提供了研究基础。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 分离 鉴定 vp2基因 遗传进化分析
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广西地区犬细小病毒检测及VP2基因序列分析 被引量:1
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作者 吕荞 陈伟月 +6 位作者 刘宇梦 汪伟 于子萍 兰添 闭璟珊 郑敏 孙文超 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第11期71-75,共5页
为了调查广西地区犬细小病毒(CPV)的优势毒株及其遗传变异情况,试验利用PCR方法对采自广西地区的423份犬血清样本进行CPV检测并扩增其VP2基因,利用MegAlign软件进行同源性比对并分析VP2蛋白主要突变的氨基酸位点,同时利用MEGA 7.0软件... 为了调查广西地区犬细小病毒(CPV)的优势毒株及其遗传变异情况,试验利用PCR方法对采自广西地区的423份犬血清样本进行CPV检测并扩增其VP2基因,利用MegAlign软件进行同源性比对并分析VP2蛋白主要突变的氨基酸位点,同时利用MEGA 7.0软件采用邻接法构建遗传进化树。结果表明:共获得55份CPV阳性血清样本,阳性率约为13.0%。PCR扩增得到大小约为1755 bp的VP2基因。55株分离毒株之间的相似性为98.6%~100%;分离毒株与国内外参考毒株的相似性为97.4%~100%,与疫苗株Pfizer/vaccine/06的相似性为98.3%~98.9%。扩增序列的推导氨基酸主要在第5,297,370,426,440位发生变异。在55株分离毒株中,有32株为New CPV-2a亚型毒株,20株为CPV-2c亚型毒株,3株为New CPV-2b亚型毒株。55株分离毒株形成3个主要的流行分支,与国内参考毒株的亲缘关系较近,而与国外参考毒株、猫细小病毒的亲缘关系较远。说明New CPV-2a、CPV-2c、New CPV-2b亚型毒株在广西地区流行广泛,正逐步取代CPV-2a和CPV-2b成为广西地区主要流行的亚型。 展开更多
关键词 犬细小病毒 检测 vp2基因 遗传进化 广西地区
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北京地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析 被引量:1
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作者 董悦欣 张启龙 +6 位作者 程敏姮 王林 栗云鹏 傅彩霞 张永红 崔德凤 张玮 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第9期76-82,共7页
猫泛白细胞减少症病毒(FPV)对猫科动物危害较大,病毒VP2基因在决定其抗原性和宿主范围中起重要作用。为了解FPV的流行状况及其VP2基因遗传变异和进化方向,本研究对北京地区宠物医院疑似感染FPV的猫采样,共采集到16份粪便样品;对FPV VP2... 猫泛白细胞减少症病毒(FPV)对猫科动物危害较大,病毒VP2基因在决定其抗原性和宿主范围中起重要作用。为了解FPV的流行状况及其VP2基因遗传变异和进化方向,本研究对北京地区宠物医院疑似感染FPV的猫采样,共采集到16份粪便样品;对FPV VP2基因进行PCR扩增和测序,得到12条长度1755 bp的VP2序列;利用软件将获得的VP2基因序列与国内外报道的流行株进行同源性比对、遗传进化分析,结果显示,12条VP2序列均属于G1基因群,与参考株M38246相比亲缘关系较远。本研究为北京地区猫泛白细胞减少症的有效防控提供理论依据。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症 vp2基因 遗传进化
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猪细小病毒潍坊株的分离鉴定及VP2基因遗传进化分析 被引量:1
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作者 孙卓 张洪亮 +2 位作者 秦志华 单虎 杨瑞梅 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2023年第2期112-117,共6页
为了分析猪细小病毒(porcine parvovirus virus,PPV)VP2基因遗传情况,从山东省潍坊地区某猪场疑似猪细小病毒病死胎的淋巴结、肝脏中分离到一株病毒,将病料处理后接种PK-15细胞,观察细胞病变,采用血凝和血凝抑制检测、电镜观察及对病毒... 为了分析猪细小病毒(porcine parvovirus virus,PPV)VP2基因遗传情况,从山东省潍坊地区某猪场疑似猪细小病毒病死胎的淋巴结、肝脏中分离到一株病毒,将病料处理后接种PK-15细胞,观察细胞病变,采用血凝和血凝抑制检测、电镜观察及对病毒VP2基因进行PCR扩增并进行遗传进化分析。结果显示:病毒接种到PK-15细胞后产生明显的圆缩、拉网、灶性脱落等病变;分离毒可凝集豚鼠红细胞,能被已知PPV阳性血清中和;电镜观察病毒为近似圆形、无囊膜、大小不一的病毒粒子,直径约20 nm;对病毒的VP2基因用PCR方法扩增后测序并进行遗传进化分析,测序后确定分离株为PPV,将其命名为PPV SD-21。VP2基因进化树发现,PPV SD-21株与Kresse株和NADL-2株等分离株处于同一分支,遗传距离较近,属于PPV基因Ⅰ型,PPV SD-21株与GenBank中PPV基因Ⅰ型中的10株PPV参考毒株的同源性为97.5%~99.8%,其中与NADL-2株的同源性为99.8%。PPV SD-21株的VP2基因序列只是个别碱基发生变化,所编码氨基酸未发生变异。上述实验结果说明该分离病毒为猪细小病毒基因Ⅰ型弱毒株,该毒株的分离鉴定可为猪细小病毒的诊断和流行病学研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒Ⅰ型 vp2基因 分离 鉴定 PK-15细胞
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犬细小病毒河南方城株分离及VP2基因序列分析 被引量:3
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作者 林瑜婷 翟颀 +6 位作者 翟少伦 吕殿红 周秀蓉 贾春玲 霍玮 温肖会 魏文康 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期54-61,共8页
为了解犬细小病毒的临床流行及变异情况,本研究于河南省方城县采集了8份疑似CPV感染犬粪便样品,经过PCR检测、CRFK细胞增殖培养、透射电镜观察和病毒滴度测定后,对其VP2基因进行序列分析。结果表明5株分离株为犬细小病毒,病毒滴度分别为... 为了解犬细小病毒的临床流行及变异情况,本研究于河南省方城县采集了8份疑似CPV感染犬粪便样品,经过PCR检测、CRFK细胞增殖培养、透射电镜观察和病毒滴度测定后,对其VP2基因进行序列分析。结果表明5株分离株为犬细小病毒,病毒滴度分别为10^(-4.22)/0.1 mL(China-HN-01株)、10^(-3.56)/0.1 mL(China-HN-02株)、10^(-3.78)/0.1 mL(China-HN-05株)、10^(-4.4)7/0.1 mL(China-HN-06株)、10^(-4.4)/0.1 mL(China-HN-07株)。VP2基因序列比对和遗传进化树分析结果显示,4株分离株基因型为New CPV-2a,1株分离株基因型为CPV-2c,5株分离株与疫苗株的同源性为97.8%~98.7%,与国内外参考毒株的同源性为94.0%~99.0%,4株New CPV-2a基因型毒株与四川的Canine/China/24/2017株亲缘关系最近,CPV-2c基因型毒株与蒙古国5-MGL分离株位于同一分支,与我国河南地区的3株CPV-2c毒株亲缘关系较远。对河南方城地区CPV毒株的分析,为研究CPV变异株在河南地区的传播和宠物疫病防控提供了理论依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒 分离 vp2基因 进化分析
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猫细小病毒LZ-01株的分离鉴定及其VP2基因克隆和序列分析
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作者 祁国军 委慧玲 +3 位作者 宋晨 李天昊 薛惠文 魏衍全 《动物医学进展》 北大核心 2023年第3期54-57,共4页
为了解猫细小病毒(FPV)在甘肃兰州地区的流行情况,将胶体金试纸条检测FPV阳性的粪便样品接种F81细胞,进行病毒分离鉴定,以FPV阳性病料基因组DNA为模板,对分离的FPV进行VP2基因的克隆和测序,并与国内外参考株进行同源性比较及遗传进化分... 为了解猫细小病毒(FPV)在甘肃兰州地区的流行情况,将胶体金试纸条检测FPV阳性的粪便样品接种F81细胞,进行病毒分离鉴定,以FPV阳性病料基因组DNA为模板,对分离的FPV进行VP2基因的克隆和测序,并与国内外参考株进行同源性比较及遗传进化分析。结果显示,分离得到1株FPV,命名为FPV/LZ-01,其接种F81细胞可引起特异性的细胞病变,从出现细胞病变的F81细胞中提取病毒基因组DNA,用鉴定通用引物进行PCR鉴定,扩增出约为392 bp特异性基因条带;间接免疫荧光试验表明,FPV/LZ-01分离株接种到F81细胞48 h后可观察到特异性绿色荧光;序列比对结果显示,FPV/LZ-01分离株的VP2基因序列与22株国内外参考毒株的核苷酸同源性为99.2%~99.9%;进化树分析显示,FPV/LZ-01分离株与Beijing-01株(MK266797.1)亲缘关系最近,处于同一分支,与其他参考株遗传距离相对较远。研究结果丰富了我国FPV的流行病学资料,为进一步研发FPV疫苗提供了候选毒株。 展开更多
关键词 猫细小病毒 病毒分离 vp2基因
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观赏动物犬细小病毒的鉴定及VP2基因的序列分析
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作者 庞卓 黄学喆 +4 位作者 左珂菁 陈绚姣 罗均 郭霄峰 黄勉 《广东畜牧兽医科技》 2023年第6期46-49,共4页
为了对疑似感染犬细小病毒(canine parvovirus;CPV)的海狸鼠和狞猫等观赏动物进行确诊及了解遗传进化情况,将其肛拭子和粪便提取基因组DNA,通过PCR方法鉴定,并对VP2进行基因扩增与测序,和国内外参考株进行遗传进化树分析。结果表明,送检... 为了对疑似感染犬细小病毒(canine parvovirus;CPV)的海狸鼠和狞猫等观赏动物进行确诊及了解遗传进化情况,将其肛拭子和粪便提取基因组DNA,通过PCR方法鉴定,并对VP2进行基因扩增与测序,和国内外参考株进行遗传进化树分析。结果表明,送检的15份样品均扩增出约为756 bp的特异性条带,与FPV标准株CU-4株序列比对后确定为CPV,阳性率达100%;遗传进化树显示,分离株与北京地区分离得到的CPV-2a、CPV-New2a亚型毒株遗传关系较近,与其他参考株遗传距离相对较远。该研究结果丰富了观赏动物犬细小的研究资料以及该病的遗传和预防提供了参考。 展开更多
关键词 观赏动物 犬细小病毒 vp2基因 遗传分析
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犬细小病毒吉林流行株的分离鉴定及VP2基因的遗传进化分析
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作者 李紫仟 赵新宇 +4 位作者 李向南 冯楚楚 李子树 蔡佳希 薛向红 《特产研究》 2023年第5期92-98,共7页
从吉林省长春市某动物医院采集了3份CPV阳性宠物犬粪便样品,经PCR鉴定,使用F81细胞进行盲传,同时对病毒进行血凝、电镜观察及间接免疫荧光等检测后,对其VP2基因进行序列分析。结果显示,3株CPV分离株为CPV-2c型犬细小病毒(命名为CPV-JL21... 从吉林省长春市某动物医院采集了3份CPV阳性宠物犬粪便样品,经PCR鉴定,使用F81细胞进行盲传,同时对病毒进行血凝、电镜观察及间接免疫荧光等检测后,对其VP2基因进行序列分析。结果显示,3株CPV分离株为CPV-2c型犬细小病毒(命名为CPV-JL21-L1、CPV-JL21-L2、CPV-JL21-L3),第20代病毒滴度均在10^(-7)~10^(-7.5)TCID50/0.1 mL之间,第20代血凝效价结果均保持在210~211。VP2基因序列遗传进化分析显示,3株CPV分离株与3株疫苗株VP2基因的同源性为98.6%~99.0%,与其他参考毒株同源性为98.6%~99.9%。此外,分离株CPV-JL21-L1和CPV-JL21-L3在80 L、101 T、267 Y、297 A、300 G、324 I、375 D、426 E和555 V位点与国内流行株相同,CPV-JL21-L2在267位点氨基酸发生了变异。本研究为吉林省CPV分子流行病学的调查提供理论依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒 犬细小病毒2c型 vp2基因 分离鉴定 进化分析
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Effect of Chicken Akirin2 Gene on Immune Response Induced by VP2 DNA Vaccine of Infectious Bursal Dis-ease Virus
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作者 Liu Chuangao Zhong Chuhong +6 位作者 Ren Guangcai Zhu Jiaojiao Zhao Dawei Ye Junxian Zhao Bing Wen Lianghai Chen Ruiai 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2017年第2期86-90,97,共6页
[ Abstracts ] In order to investigate the effect of chicken Akirin2 gene on the immune response induced by VP2 DNA vaccine of infectious bursal disease virus (IBDV). [ Methods] The 14-day-old SPF chickens were immun... [ Abstracts ] In order to investigate the effect of chicken Akirin2 gene on the immune response induced by VP2 DNA vaccine of infectious bursal disease virus (IBDV). [ Methods] The 14-day-old SPF chickens were immunized with recombinant plasmids expressing VP2 protein and Akirin2 protein, and strength- ened immunization was conducted at the 14'~ day after the first immunization. Finally, test chickens were challenged with IBDVBC6-85 virulent strain. [ Resultss ] Test results showed that Akirin2 gene could enhance the specific immune response induced by VP2 DNA vaccine, improve the proliferation of peripheral blood lym- phocytes and 'affect the expressing of cytokines TNF-a, IFN-Y, IL-1β, IL-2, IL-4, IL 6, IL-9, IL-10, IL-17 and IL-18. Effects of recombinant plasmids co-ex- pressing Akirin2 protein and VP2 protein on cytokine expression showed some differences with the recombinant plasmids expressing Akirir/2 protein or VP2 protein along. [ Conclusions] Chicken Akirin2 gene could significantly enhance the humoral immune response and cellular immune response induced by VP2 DNA vaccine of IBDV. 展开更多
关键词 Chicken Akirin2 gene Infectious bursal disease virus vp2 DNA vaccine Immune response
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犬细小病毒VP2基因的比较及分型研究 被引量:25
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作者 邱薇 范泉水 +6 位作者 李作生 杨美峰 郑颖 尹惠琼 王双印 李江 夏咸柱 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期69-72,共4页
为查明我国CPV的流行变异情况及为进一步的免疫研究奠定基础,对我国不同地区分离到的9株细小病毒毒株进行了VP2基因的扩增和序列分析,并与CPV的参考毒株进行了比较分型, 9 株CPV 中有6 株属CPV 2a,3株属CPV 2b,但未分离到CPV 2c变异株,... 为查明我国CPV的流行变异情况及为进一步的免疫研究奠定基础,对我国不同地区分离到的9株细小病毒毒株进行了VP2基因的扩增和序列分析,并与CPV的参考毒株进行了比较分型, 9 株CPV 中有6 株属CPV 2a,3株属CPV 2b,但未分离到CPV 2c变异株,结果表明我国目前仍以CPV 2a流行为主。 展开更多
关键词 vp2基因 犬细小病毒 分型 CPV 免疫研究 序列分析 病毒毒株 参考毒株 变异株 流行 分离
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犬细小病毒分离株VP2基因的克隆与序列分析 被引量:23
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作者 杨玲 徐向明 +3 位作者 殷俊 宗卫峰 陈璐 李厚达 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 2002年第3期12-14,共3页
以犬细小病毒 (Canine parvovirus,CPV)扬州分离株病毒的 DNA为模板 ,根据基因库 CPV-d序列设计合成了VP2基因的 1对特异引物 ,进行聚合酶链式反应 ,扩增出约 1 .7kb的片段 ,按常规方法克隆进 p UC1 8载体 ,经 Eco R 和Sal 双酶切筛选... 以犬细小病毒 (Canine parvovirus,CPV)扬州分离株病毒的 DNA为模板 ,根据基因库 CPV-d序列设计合成了VP2基因的 1对特异引物 ,进行聚合酶链式反应 ,扩增出约 1 .7kb的片段 ,按常规方法克隆进 p UC1 8载体 ,经 Eco R 和Sal 双酶切筛选到阳性质粒 ,进一步对该片段进行序列分析。结果表明 :所扩增基因片段长度为 1 740 bp,与美国参考株 CPV-d (type 2 )、CPV-1 5 (type 2 a)、CPV-3 9(type 2 b)相比较 ,核苷酸同源性分别高达 99.5 %、99.7%、99.7%。 展开更多
关键词 细小病毒 分离株 vp2基因 克隆 序列分析
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犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量:17
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作者 李慕瑶 姜骞 +3 位作者 刘家森 司昌德 韩凌霞 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期218-222,共5页
根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具... 根据GenBank上发表的犬细小病毒(CPV)VP2蛋白基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增VP2基因全长。将其克隆到pET-30a载体中,构建了原核表达载体pET-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白,Western-blotting证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为15.8 ng/孔,血清的最佳稀释倍数为1∶100,建立了检测CPV血清抗体的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 vp2基因 原核表达 纯化 间接ELISA
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近期引起免疫失败的传染性腔上囊病病毒VP2基因的分子特征 被引量:17
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作者 王永山 欧阳伟 +5 位作者 潘群兴 范红结 张海彬 王忠灿 唐雨德 谭维国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1013-1019,共7页
用RT-PCR方法从2007年12月在安徽境内发生的两起传染性腔上囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡腔上囊组织样品AH1与AH2中扩增出了传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析表明,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1 350 nt,编码450 aa,七肽基序均... 用RT-PCR方法从2007年12月在安徽境内发生的两起传染性腔上囊病(IBD)免疫预防失败的病鸡腔上囊组织样品AH1与AH2中扩增出了传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2基因。序列分析表明,AH1与AH2病毒VP2基因长度均为1 350 nt,编码450 aa,七肽基序均为S-W-S-A-S-G-S,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、QI、、D、AI、和S,具有IBDV强毒的分子特征,AH1和AH2感染的20日龄雏鸡产生明显IBD病变,死亡率为25%(1/4)。同源性分析表明,26个血清Ⅰ型IBDV毒株VP2基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为90.7%~99.6%和95.5%~100%,不同IBDV毒株VP2基因的七肽基序、特征性氨基酸残基以及高变区的亲水性有差异。在进化树上,26个血清Ⅰ型IBDV毒株可分为数组,其中的15个中国分离IBDV毒株不在同组,毒株之间的亲缘关系与分离地区或分离时间没有明显的联系。AH1和AH2与现行商品疫苗毒株B87的VP2基因核苷酸序列的差异率分别为5.3%和5.2%,这也进一步佐证了IBDV野毒VP2基因变异所引起的毒力变化和VP2抗原表位的漂移是导致当前IBD疫苗免疫预防失败的主要原因。 展开更多
关键词 传染性腔上囊病病毒 序列分析 vp2基因 分子特征
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鹅细小病毒vp2基因片段在原核系统中的表达及多克隆抗体的制备 被引量:9
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作者 侯秋莲 王静 +3 位作者 刘胜旺 孔宪刚 韩宗玺 冉多良 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第4期383-387,共5页
根据鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖。筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用NcoI酶切后回收... 根据鹅细小病毒(Gooseparvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖。筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用NcoI酶切后回收目的片断,进行定向连接,产物转化入感受态DH5α,重组质粒经酶切和测序证实目的基因正确克隆到表达载体的预期位点且插入方向正确,构建了含有HG5/82主要结构基因vp25’端969bp片段的原核表达载体。经IPTG诱导后表达出与预期大小相符的约36kDa的融合蛋白,表达形式为包涵体。薄层扫描结果表明表达产物约占菌体总蛋白的21.4%。包涵体通过6mol/L盐酸胍裂解后,利用镍离子亲和树脂进行纯化,用纯化的分子量为36kDa的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗鹅细小病毒部分结构蛋白多克隆抗体。Westernblot分析表明该多克隆抗体与HG5/82毒株具有反应性,说明该融合蛋白具有抗原性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 vp2基因 克隆 表达 多克隆抗体
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不同时期8株IBDV地方株VP2基因变异分析 被引量:5
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作者 张春杰 赵德明 +3 位作者 程相朝 李银聚 吴庭才 白东英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期428-433,共6页
对分离于洛阳地区1991和2001年前后间隔达10年之久的两个时期的8株IBDV进行了VP2基因的克隆与序列分析。结果发现,8个地方株虽均属于IBDV超强毒株,但各个毒株间也有一定的差异。根据它们的核苷酸和氨基酸同源性高低可明显分为3群,分别... 对分离于洛阳地区1991和2001年前后间隔达10年之久的两个时期的8株IBDV进行了VP2基因的克隆与序列分析。结果发现,8个地方株虽均属于IBDV超强毒株,但各个毒株间也有一定的差异。根据它们的核苷酸和氨基酸同源性高低可明显分为3群,分别位于系统进化树上超强毒区的3个小分支上。第1群包括1991年分离的L912、L914和L916三株;第2群包括L913、L017和L018三株;第3群包括2001年分离的L015和L016二株。群内各毒株间同源性较高,在98.3%~100%之间;群间各毒株的同源性则相对较低,在95%~97.9%之间,其中最低的为L015和L017、L016和L018二对,同源性均只有95%。进一步的序列分析表明,8个地方分离株均具有vvIBDV所具有的特征。其中,1991年的4株在各亲水区和七肽区的氨基酸和经典株及传统的超强毒株相比均无明显的变化;而2001年的4个分离株虽仍符合超强毒株的特点,但在相应亲水区均有1~2个氨基酸发生替换,特别是L015和L016株还出现了4个其它各毒株均没有的氨基酸位点变化。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 地方株 vp2基因 基因变异 传染性法氏囊病 禽类
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猪博卡病毒VP2基因的克隆与原核表达 被引量:8
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作者 李彬 杜露平 +11 位作者 何孔旺 温立斌 茅爱华 张雪寒 倪艳秀 郭容利 王小敏 周俊明 吕立新 俞正玉 胡屹屹 于洋 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期796-799,共4页
为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)... 为研究猪博卡病毒VP2蛋白的功能及其在疫病诊断中的作用,对其基因进行了克隆和原核表达。根据猪博卡病毒基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了1对引物,采用PCR方法扩增猪博卡病毒的VP2基因,并将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a-VP2,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为49 000的融合蛋白,蛋白质表达量较高,且以可溶性形式存在于菌体中。表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好。Western blot结果显示,表达的VP2蛋白能与His抗体发生特异性免疫反应。说明该试验成功克隆了猪博卡病毒的VP2基因并进行了原核表达,为研究该蛋白的功能及建立血清学诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪博卡病毒 vp2 基因 克隆 原核表达
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