鹅细小病毒NS2基因以及VP1与VP3非重叠序列基因的真核表达

采用pBlueBacHis2A系统筛选鹅细小病毒(GPV)的检测抗原,利用PCR扩增和双酶切方法分别构建了含有NS2基因和VP1与VP3非重复序列基因的重组质粒pBlueBacHis2A-GPV-NS2、pBlueBa-cHis2A-GPV-VP(1-3),分别转染sf9细胞,得到重组病毒,分别表达出了54 ku的NS2融合蛋白和24 ku的VP(1-3)融合蛋白。Western-blotting和Dot-ELISA检测结果证实,表达产物具有特异性;间接免疫荧光试验证实,重组蛋白在细胞中获得了表达。

腺病毒介导HAV结构基因表达及其产物的免疫学性质检测

目的 探讨重组腺病毒免疫实验动物后的抗体反应。方法 利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构蛋白vp3+vpl基因,克隆到穿梭质粒pXCX2 NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将E1缺失的复制缺陷型腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。结果 通过胞内同源重组,经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定表明,获得了复制缺陷型重组腺病毒rAdHAV。纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。昆明种小白鼠口服rAdHAV后,诱导产生了抗HAV IgG。结论 复制缺陷型腺病毒可望成为发展口服病毒疫苗的有效载体系统。

A型口蹄疫病毒AF72株病毒样颗粒制备条件优化及鉴定

为了制备A型口蹄疫病毒AF72株病毒样颗粒,本研究通过优化IPTG浓度、诱导时菌液D600值、诱导温度、诱导时间来提高目标蛋白可溶性表达量,在特定酶切组装液中组装颗粒并调整组装液成分以提高其在体外的组装率,利用SDS-PAGE、蔗糖密度梯度离心、动态光散射、DAS-ELISA、透射电镜等多种方法对其进行鉴定。结果显示,经SDS-PAGE鉴定,VP0、VP1、VP3三条带均存在且符合目的条带大小,纳米粒径在30 nm左右符合口蹄疫病毒粒子大小,DAS-ELISA鉴定VP0、VP1、VP3在体外成功组装成病毒样颗粒,电子显微镜也拍出部分病毒样颗粒。上述结果表明,A型口蹄疫AF72株病毒样颗粒成功制备,为后续建立检测口蹄疫病毒中和抗体的液相阻断ELISA奠定了基础。

衣原体噬菌体的研究进展

噬菌体是一类细菌依赖性的病毒,又称细菌病毒,能在细菌体内快速增殖。现已发现6种衣原体噬菌体Chp1、Chp2、Chp3、Chp4、CPAR39、PhiCPG1。衣壳蛋白Vp1、Vp2、Vp3是衣原体噬菌体的3种主要结构蛋白。衣原体噬菌体的研究为衣原体感染的治疗提供了一条新思路。