大肠杆菌O157:H7中编码vt2基因的噬菌体的分离与鉴定

根据GenBank中VT1、VT2毒素的基因序列设计合成2对引物,以大肠杆菌O157:H7菌株DNA为模板,扩 增vt1、vt2。诱导只扩增出vt2的菌株释放噬菌体,利用多种指示菌经双层琼脂平板法来分离纯化VT2噬菌体,观 察噬菌斑的特征,提纯病毒粒子进行电镜观察,并对噬菌体中vt2基因检测、克隆和序列分析。结果显示VT2噬菌 体感染MC1061在双层琼脂平板上形成的噬菌斑小而混浊,多呈磨玻璃样;而首次感染大肠杆菌CC118(λpir),此 后用MC1061分离的噬菌体,再以MC1061为指示菌,在双层琼脂平板上形成小而清晰透明的噬菌斑。电镜下噬 菌体头部呈六边形外廓,尾部细长无尾鞘结构。以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增,检测到vt2特异性DNA 带,克隆的vt2基因序列与GenBank中编码VT2毒素的核苷酸序列(X07865,NC_002655,BA000007,AF291819) 的同源性分别达到99％,确定编码VT2毒素的基因位于噬菌体上,并获得VT2噬菌体(?)HY。

大肠杆菌O157:H7VT2毒素基因的克隆及测序

目的 克隆出血性大肠杆菌O15 7:H7的VT2毒素基因。方法 利用PCR技术从出血性大肠杆菌O15 7:H7染色体基因组中扩增出VT2毒素基因 ,并连接至pGEM -T载体上 ,构建重组质粒pGVT2并进行序列测定。结果与结论 酶切分析表明重组质粒含有VT2毒素基因 ,核苷酸序列分析表明 ,其序列与GenBank上O15

大肠杆菌O-157产生的VT2对中性粒细胞自发性凋亡的抑制作用

目的研究毒源性大肠杆菌VETCO-157产生的外毒素-VT2对中性粒细胞自发性凋亡的影响,探索VETC感染后并发的溶血性尿毒症HUS及相关疾病的发病机理。方法运用形态学观察、流式细胞仪FACS技术和DNA分离技术进行研究。结果在无VT2存在的情况下,经过24h体外培养,65%左右的中性粒细胞发生了凋亡,而浓度为10-6M的VT2使其凋亡发生率降至20%左右。结论VT2延长了中性粒细胞的功能性生命期限,使其胞浆内细胞毒性物质有更多的机会损伤肾小球血管内皮细胞,促进微血栓的形成,因而中性粒细胞可能参与了HUS的形成过程。

大肠杆菌O157噬菌体中vt2基因A、B亚单位的克隆与序列分析

根据GenBank中毒素基因vt1、vt2序列设计合成4对引物，以大肠杆菌O157菌株DNA为模板，扩增vt1、vt2，从只含有vt2的菌株中诱导释放噬菌体，以噬菌体DNA为模板进行PCR扩增，获得vt2、vt2-A、vt2-B3条特异性DNA带；将vt2-A、vt2-B扩增产物纯化后，分别插入pMD18-T载体，测序结果与相应序列比较，vt2-A和vt2-B亚单位的基因序列与GenBank中编码VT2毒素的A、B亚单位的核苷酸序列(X07865，NC_002655，：BA000007，AF291819)的同源性分别为98％～99％、96％～100％，确定vt2位于噬菌体，并为进一步研究大肠杆菌O157中VT噬菌体的毒力转导、VT2毒素的表达和应用奠定基础。

大肠杆菌VT2噬菌体的分离与溶源转染

本试验利用指示菌MC1061,经双层琼脂法纯化和PCR扩增vt2基因,分别从大肠杆菌O157菌株、牛粪、鸡粪和污水中分离获得5株含vt2基因的噬菌体。这些噬菌斑透明,直径为0.5-2mm,对指示菌的感染效价均在109PFU/mL以上,抵抗氯仿和56℃30min的作用。将噬菌体分离株SHφW1感染MC1061后,经PCR鉴定获得一株溶源菌株(MC1061/SHφW1)。溶源株的LB培养滤液对Vero细胞产生了显著的病变效应,而MC1061在同等条件下培养的滤液无细胞病变,表明VT2噬菌体通过溶源将vt2毒力基因水平转移,证实了VT2噬菌体的转染与细菌毒力相关。

美国邦纳 无线振动温度传感器QM42VT2

近日,美国邦纳发布了无线振动温度传感器的新型号QM42VT2,体现了邦纳传感器的智能化和网络化优势。QM42VT2是一款支持Modbus协议的新款振动和温度传感器,通过RS-485连接Modbus网络作为从站工作。支持无线或有线Modbus网络进行连接。

大肠杆菌O157VT2 B亚基基因的克隆与表达

目的对大肠杆菌O157VT2毒素B亚基基因进行克隆、表达与鉴定,为VT2毒素的抗原、抗体大规模制备及疾病的预防、诊断和疫苗研究打下基础。方法设计寡核苷酸引物,利用PCR技术从出血性大肠杆菌O157的染色体基因组中扩增出VT2毒素B亚基基因,连接到表达载体pET-28a以构建重组质粒。将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞,通过IPTG诱导进行表达,对表达蛋白进行SDSPAGE电泳分析和Western检测。结果用PCR方法扩增出了预期大小的VT2B亚基基因,克隆得到重组质粒pET28aVT2B,转化后宿主菌成功表达分子量为8kD的目的蛋白,用特异抗体经Western检测该条带为阳性反应。结论目的基因成功克隆到宿主菌内,目的蛋白得到高效表达,最佳诱导时间为4h,目的蛋白表达量可达总蛋白量45.72%。

多重PCR快速鉴定大肠杆菌O157

目的根据GenBank中编码大肠杆菌16SrRNA的基因、rfbE(O157抗原基因)、vt1(Vero毒素1基因)、vt2(Vero毒素2基因)和eaeA(紧密素基因)5种基因的特异性序列,设计合成5对引物,建立了快速鉴定大肠杆菌O157的多重PCR方法。该方法的检测敏感度为细菌纯培养物为104CFU/ml,含菌3-4CFU/g鸡肉组织样品经预增菌8h后能检出。用此方法检测2000-2004年间从动物组织和粪便中临床分离的64株菌株,结果10株鉴定为大肠杆菌O157,与血清凝集试验结果完全吻合。其中8株能扩增上述5条特异性条带,与预期产物完全一致,2株能扩增出除vt1基因外的4条特异性条带,其它54株菌株只能扩增出大肠杆菌16SrRNA。该方法能直接鉴定产多种毒力因子的大肠杆菌O157,特异性强,为检测和鉴定大肠杆菌O157提供了一个新方法。

大肠杆菌vpr基因突变株的构建及其特性鉴定

将重组自杀性质粒 p YYvpr转化到含全 vpr基因的 E.coli MC10 6 1感受态细胞中 ,利用卡那霉素抗性筛选到 6个菌落 ,经 PCR和 Southern blot进一步验证 ,得到一个可靠的 vpr同源基因突变株 ,即 MC10 6 1△ vpr。该突变株与亲本 MC10 6 1具有相似的生长特征。噬菌体裂解试验表明 ,突变株对 VT2噬菌体 C43b不敏感 ,而 MC10 6 1敏感 ,可见大量的蚀菌斑。噬菌体溶原试验表明 ,MC10 6 1和突变株 MC10 6 1△vpr对噬菌体的敏感性无差别。所有这些表明 ,vpr基因与 VT2噬菌体的裂解性有关 ,可能是编码 VT2噬菌体受体蛋白的基因。

空客320系列飞机黄电动泵意外工作分析

空客320系列机型的货舱门正常开关使用黄液压系统供压。当操作货舱门时,黄电动泵自动工作提供开关舱门所需的液压压力。此时黄系统液压压力被禁止供向飞控系统的各种舵面以防止其意外作动并且抑制PTU工作。在近期工作中,维修人员发现在卸载厨房供电时,黄电动泵竟意外工作,查阅手册并无相关解释说明,此现象给维护人员造成了很大困扰。经过对事件进行反复重演,发现在对厨房供电进行卸载时,黄电动泵工作且飞控舵面未有压力,同时黄电动泵仅仅工作10秒后便自动停止,其现象与开关货舱门的黄电动泵延时工作10秒完全吻合。进一步检查发现,此现象只在前后货舱门开启状态下出现,任一货舱门关闭后,均不出现。此外,在拔出LGCIU2的供电跳开关后,黄电动泵亦不在工作。文章就此现象进行基于理论上的分析,以期找出答案。

v_t^2-v_0~2=2as在解物理题中的应用

高一物理教材中根据匀变速运动的速度公式和位移公式推出了一个很有用的公式:vt2-v02=2as.这个公式直接表明了初速度、末速度、加速度和位移的关系,在许多问题中用起来很方便.下面略举几例加以说明.