丹参、赤芍对大鼠Walker 256癌肝转移影响机制的研究

目的 :研究丹参、赤芍对大鼠Walker 2 5 6癌肝转移影响的机制。方法 :ELISA检测实验大鼠中药灌胃后血清VEGF(血管内皮细胞生长因子 )的变化 ,免疫组织化学检测实验大鼠肿瘤组织微血管密度的变化。结果 :大鼠血清VEGF浓度在予丹参、赤芍灌胃后明显升高 ,肿瘤组织微血管密度高于生理盐水组。活血中药 (丹参、赤芍 )组的肝转移率、血性腹水率、腹腔播散率均高于生理盐水组。结论 :丹参、赤芍中药可增强实验大鼠VEGF的表达及肿瘤血管形成 ,促进肿瘤侵袭和转移发生。

大鼠Walker 256癌肉瘤淋巴道转移特性的观察

本实验从大鼠后肢脚掌皮内注入Walker 256癌肉瘤细胞,注入后一小时,即可在腘窝淋巴结的边缘窦内查见癌细胞。最初癌细胞以单个及散在的形式出现于淋巴结的边缘窦内。以后分裂繁殖,逐渐增多,形成癌细胞巢,才形成转移灶。并且在淋巴结的输入淋巴管与门区的输出淋巴管内,均查见了癌细胞。注入脚掌皮内的癌细胞可能通过以下途径与方式进入淋巴管。1.癌细胞以阿米巴样运动方式穿过毛细淋巴管内皮细胞的间隙。2.皮内及皮下的癌细胞可能被组织中强大的淋巴流冲进“开放”状态的毛细淋巴管内。大鼠的肿瘤淋巴道转移模型经过十二天,在腘窝淋巴结中发现癌细胞的阳性率为13/37(35.1%),转移率为9/37(24.3%),阳性率与转移率总合则为22/37(59.4%)。除腘窝淋巴结外,还见到髂动脉旁、肾门及腹股沟等多处淋巴结内有转移灶,其广泛转移率为7/37(18.9%)。淋巴结本身也发生了一系列免疫形态改变,如淋巴滤泡增生扩大;副皮质区增宽以及免疫母细胞增多等重要变化。

用Walker 256大鼠乳腺癌细胞建立大鼠胫骨癌痛模型

目的探讨用Walker 256大鼠乳腺癌细胞建立大鼠胫骨癌痛模型的可行性。方法将36只SD雌性大鼠,随机分为肿瘤组(n=8)、假手术1(n=10)、假手术2(n=10)和正常对照组(n=8)。将含1×105 Walker 256大鼠乳腺癌细胞悬液注入大鼠胫骨上段制备骨癌痛模型,观察疼痛行为学[包括机械缩足反射阈值(mechanical paw with-drawal threshold,MWT)和热缩足反应潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)]、骨放射学和组织学变化。结果疼痛行为学、影像学、组织学观察结果证实,Walker 256大鼠乳腺癌细胞能成功制备大鼠胫骨癌痛模型。肿瘤组造模后第7天开始MWT显著降低,为(37.59±2.02)g,与假手术组1、2和正常对照组比较,P<0.01;第11天PWTL显著降低,为(6.87±1.00)s,与假手术组1、2和正常对照组比较,P<0.01。结论用Walker 256大鼠乳腺癌细胞能够成功建立大鼠胫骨癌痛模型。

THE EFFECT OF PAEONIA RUBRA 801 ON THE OCCURRENCE OF LUNG METASTASES IN WALKER 256 TUMOR

The development of lung nodules from intravenously injected Walker 256 (W256) tumor cells was the model system for metastases formation in this experiment. The influence and inhibitory mechanisms of a synthetic Paecnia rubra 801 (P801) on occurrence of lung metastases were investigated. The results showed that treatment with P801 alone or in combination with decoction of Huangqi (Astragalus root) can significantly reduce the number of lung nodules. The mechanisms responsible for decreased colonyforming potential in the rats treated with P801 were investigated. ADP-induced or W256 tumor cell-induced platelet aggregation was markedly inhibited by P801. It appears that inhibitory effect of P801 on occurrence of W256 tumor lung nodules is mainly due to reduced blood coagulability and inhibition of platelet activation by tumor cells.

血管生成抑制剂TNP-470抑制Walker 256肉瘤生长的实验研究

ＴＮＰ－４７０是半合成的烟曲霉素类似物，具有较强的抗血管生成活性，为了验证其抗癌作用，本文将Ｗａｌｋｅｒ２５６肉瘤细胞接种于Ｗｉｓａｔｒ大鼠皮下，将５０只大鼠随机分成Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ５组。第二天起分别给予生理盐水。ＴＮＰ－４７０、ＣＴＸＳ．Ｃ．，ｑ．ｏ．ｄ．第九天时，Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ各组皮下瘤重分别为３．８８±１．２４、２．２０±０．２５、０．８６±０．３０，１．１７±０．３３克。

应用Walker-256细胞建立大鼠骨癌痛模型

目的:应用Walker-256细胞建立大鼠骨癌痛模型。方法:将4×104个W256癌细胞注入SD大鼠胫骨上段骨髓腔内,利用大鼠热板法和足跖加压法分别测量热刺激和机械刺激痛阈的变化,X线摄片进行放射学评估骨质破坏程度,同时,组织切片HE染色观察肿瘤生长和骨结构的破坏情况。结果:造模动物在12天左右开始出现热刺激和机械刺激痛阈明显下降(痛觉过敏),并呈渐进性发展;胫骨X线摄片显示14天即有明显的骨破坏,第21天时出现病理性骨折;组织切片显示骨髓腔内肿瘤生长活跃,向外侵蚀破坏骨皮质。结论:从疼痛行为学、放射学、组织学等方面的研究结果显示,应用Walker-256细胞成功建立了大鼠骨癌痛模型。

中药黄芪加三七对大鼠Walker256癌肝转移影响机制的研究

目的:探讨中药黄芪加三七抑制大鼠Walker256癌肿瘤血管生成及肝转移的机制。方法:Walker256癌细胞接种于Wistar大鼠脾脏建立肝转移模型,分成对照组、三七组、三七+黄芪组,每组10只,分别于接种Walker256癌细胞第2天开始予相应的生理盐水,三七水煎剂及三七加黄芪水煎剂灌胃,每日2次,每次0.3mL。造模后2d及14d,分别用ELISA法检测各组大鼠血清Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、HIF-1α水平变化,并于实验结束后取肝组织,免疫组织化学方法检测大鼠肿瘤组织内微血管密度的变化。结果:与对照组比较,三七组、三七加黄芪组Ang-1表达水平均增加(P<0.05),而Ang-2、Tie-2、VEGF、HIF-1α(P<0.05)水平均下降,以三七加黄芪组更为显著。结论:黄芪+三七更利于抑制大鼠Walker256癌抑制肿瘤生长和肿瘤血管生成,可能是将来中药联合抗肿瘤的新方向之一。

全反式维甲酸对Walker-256肝癌细胞分化及凋亡的诱导作用

目的:观察ATRA对Walker-256肝癌细胞的分化诱导及促进凋亡作用,探讨其作用机制.方法:在肝癌细胞Walker-256细胞株中加入不同浓度的ATRA(100、10、5、1μmol/L),培养2d,荧光倒置显微镜观察细胞形态学变化;MTT比色法检测Walker-256细胞的增殖抑制;流式细胞术分析不同DNA含量的细胞分布,计算细胞凋亡百分率;RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2mRNA的表达;Western blot检测Caspase3、8蛋白的表达.结果:随着ATRA浓度的递增,Walker-256细胞表现出细胞分化及凋亡的形态学上的改变.ATRA可明显抑制细胞增殖,5和10μmol/LAT R A对细胞增殖抑制最为明显,24、48、72h的增殖抑制率分别为21.86%、57.39%、68.17%和27.23%、80.09%、92.15%,呈浓度及时间依赖性.5和10μmol/L ATRA对细胞的凋亡诱导率与对照组相比,差异有统计学意义(t=9.61,11.38,P<0.05,0.01).ATRA作用Walker-256细胞后上调Fas表达,下调bcl-2的表达,10μmol/L ATRA对Fas及bcl-2的调节与对照组相比,差异有统计学意义(t=12.33,10.78,均P<0.05).与对照组相比,10μmol/LATRA作用48h后对Caspase3及Caspase8酶原剪切活化明显(t=9.76,10.21,均P<0.05).结论:ATRA对Walker-256肝癌细胞具有分化诱导及促进其凋亡的作用.

^(153)Sm-乙二胺四亚甲基膦酸对 Walker 256癌荷瘤大鼠骨侵袭骨溶解的抑制作用

目的研究１５３Ｓｍ－乙二胺四亚甲基膦酸（１５３Ｓｍ－ＥＤＴＭＰ）对荷瘤大鼠骨侵袭、骨溶解的抑制作用。方法运用Ｘ线骨骼照片和胫骨病理切片，观察Ｗａｌｋｅｒ２５６癌大鼠模型的肿瘤骨侵袭和骨溶解情况。结果荷瘤大鼠静脉注射１５３Ｓｍ－ＥＤＴＭＰ７４，１４８ＭＢｇ／ｋｇ后，遭受Ｗａｌｋｅｒ２５６癌侵袭及发生骨溶解的胫骨数减少近一半，３７ＭＢｇ／ｋｇ组对癌的骨侵袭和骨溶解仍有抑制作用。但各组大鼠的移植瘤重量没有差异。结论１５３Ｓｍ－ＥＤＴＭＰ能抑制Ｗａｌｋｅｒ癌模型大鼠骨侵袭和骨溶解，但对移植瘤生长无抑制作用，故其抗癌骨侵袭、骨溶解的作用不是通过抑制动物移植瘤生长来实现的。

Walker-256大鼠移植性肝癌模型探讨

目的 Walker-256细胞质肝内接种制备大鼠移植性肝癌模型。方法取体重150～180g雄性Spraque-Dawley(SD)大鼠72只,随机分为实验组和对照组:实验组(n=60)肝内接种Walker-256细胞质;对照组(n=12)肝包膜下注射相同剂量的生理盐水,1周后观察肿瘤大小、并进行病理学检测。结果实验组大鼠共有15只大鼠死亡,而移植瘤肝癌模型出瘤率为100%(45/45),大多数大鼠伴有肺以及腹腔转移,并且均经过病理学证实。结论 Walker-256细胞质肝内接种可以成功建立适宜临床研究的肝癌模型。

大鼠Walker-256皮下移植瘤模型的建立及其超声评价

目的探讨建立大鼠Walker-256皮下移植瘤模型两种方法的有效性及三维超声在监测肿瘤生长特性中的价值。方法24只SD大鼠随机分两组,每组12只,分别采用浓缩腹水注射法和肿瘤组织块皮下包埋法建立皮下肿瘤模型,三维容积探头观察成瘤率、肿块大小及声像图特征。三维能量多普勒显像(3D-PDI)反映两组移植瘤血管指数(VI)的变化。结果浓缩腹水注射组接种成功率100%,高于组织块皮下包埋组(75%,P<0.05),且肿瘤生长速度快于组织块皮下包埋组。浓缩腹水注射组和组织块皮下包埋组建立的移植瘤血管指数分别于16d、20d时达峰值。结论两种方法均可有效地建立皮下移植瘤模型,浓缩腹水注射法成瘤率高于组织块皮下包埋法。三维超声可作为监测肿瘤体积及血流的有效手段。

不平衡氨基酸疗法及化疗对大鼠Walker-256癌肉瘤增殖的影响

目的 探索低缬氨酸高亮氨酸不平衡氨基酸TPN及 5 FU化疗对大鼠Walker 2 5 6癌肉瘤增殖的影响。方法 荷Walk er 2 5 6癌肉瘤的大鼠 ,随机分为 4组 ,A组 (平衡氨基酸TPN组 ) ,B组 (低缬氨酸高亮氨酸不平衡氨基酸TPN组 ) ,C组 (平衡氨基酸TPN +化疗组 ) ,D组 (低缬氨酸高亮氨酸不平衡氨基酸TPN +化疗组 ) ;以大鼠体重 ,血清白蛋白、前白蛋白 ,肝脏病理 ,肿瘤重量 ,及肿瘤细胞周期作为观察指标。结果 处理前后 ,A组和B组大鼠体重均有增加 (P <0 .0 5 ) ;A组和B组的血清白蛋白、前白蛋白 ,脂肪肝的发生率无差异 (P >0 .0 5 ) ;A ,B ,C ,D组的瘤重依次下降 (P <0 .0 5 ) ,G0 /G1期比例依次增高 (P<0 .0 5 ) ,S期比例依次下降 (P <0 .0 5 )。结论 低缬氨酸高亮氨酸TPN能够改善荷瘤大鼠营养状况 ,抑制肿瘤生长 ,并能够加强 5 FU的化疗作用 ,未发现低蛋白血症。

不同浓度Walker-256癌性腹水腹腔接种对大鼠免疫功能的影响

目的观察不同浓度肿瘤腹水接种后,Wistar大鼠腹水产生的情况与其本身免疫功能的关系。方法24只大鼠被接种不同浓度的Walker-256肿瘤腹水0.3 ml,另外12只大鼠腹腔注入生理盐水0.3 ml作为对照组,8d后观察各组大鼠产生腹水的数量及细胞免疫及体液免疫功能各指标。结果高浓度腹水接种后产生腹水的大鼠只数少于稀释后接种的大鼠只数,各组免疫指标均具有统计学意义,P<0.05,其中高浓度腹水接种组免疫功能最好,稀释后接种的大鼠免疫功能最差。结论不适当地增加含肿瘤腹水的浓度并不能增加产生腹水的可能性,相反确有可能激活大鼠本身的细胞和免疫功能消灭腹水内肿瘤细胞,使得产生腹水的可能性降低。

RI与TACE联合栓塞对大鼠Walker-256肝移植模型肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究核糖核酸酶抑制因子(RI)与TACE联合栓塞Walker-256肝移植模型对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法将60只Walker-256荷瘤大鼠于移植后第14天随机分成肝动脉灌注化疗栓塞组(TACE组)、RI与TACE联合栓塞组和对照组,每组20只。各组分别经肝动脉注入:超液态碘油0.5 ml加5-Fu 20 mg/kg;RI 200单位加5-Fu 20mg/kg加超液态碘油0.5 ml;生理盐水0.5 ml。于术后第7天用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡率,用免疫组化法检测肿瘤细胞PCNA增殖率、平均染色强度。结果PCNA增殖率和平均染色强度TACE组为44.98±7.92,168741.41±25410.37;联合栓塞组为45.02±8.42,168539.41±19675.98;对照组为35.43±6.75,137313.01±17380.59。TACE组、联合栓塞组PCNA增殖率和染色强度显著高于对照组(P<0.01),而联合栓塞组与TACE组差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤细胞凋亡率TACE组为16.88±2.48;联合栓塞组为23.50±5.33;对照组为11.70±2.76,TACE组、联合栓塞组显著高于对照组(P<0.01),联合栓塞组显著高于TACE组(P<0.01)。结论RI与TACE联合栓塞与TACE相比可显著提高肿瘤细胞的凋亡率。

不平衡氨基酸肠内营养联合5-氟尿嘧啶对大鼠Walker-256癌肉瘤生长的影响

目的:探讨富含亮氨酸和精氨酸的不平衡氨基酸肠内营养(EN)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对大鼠Walker-256癌肉瘤生长的影响。方法:SD大鼠空肠造瘘,皮下接种Walker-256癌肉瘤,36只接种成功的大鼠随机分为A组(平衡氨基酸+生理盐水组)、B组(平衡氨基酸+5-Fu组)、C组(富含亮氨酸及精氨酸的不平衡氨基酸+5-Fu组)。测定各组治疗后肿瘤重量、抑瘤率、PCNA指数、凋亡指数、肿瘤细胞周期及大鼠生存时间。结果:A、B、C组G0/G1期比例依次增高(P<0.01);凋亡指数依次增高(P<0.05或P<0.01);生存时间依次延长(P<0.05或P<0.01);S期比例依次下降(P<0.01);PCNA指数依次下降(P<0.01);瘤重依次下降(P<0.01)。结论:富含亮氨酸及精氨酸的不平衡氨基酸EN能明显抑制肿瘤生长,并能增强5-Fu的抗肿瘤效应。

磁感应热疗联合免疫佐剂对Wistar大鼠Walker-256肿瘤的异位效应的研究

目的观察不同加热温度及联合免疫佐剂对大鼠Walker-256肿瘤生长及CD4+T细胞和CD8+T细胞表达的影响。方法建立大鼠双侧腋下皮下移植Walker-256肿瘤模型,接种后7d随机分成6组:Ⅰ组(单纯植入热籽对照);Ⅱ组(42～46℃单纯热疗);Ⅲ组(42～46℃热疗+免疫佐剂);Ⅳ组(50～55℃单纯热疗);Ⅴ组(50～55℃热疗+免疫佐剂);Ⅵ组(单纯免疫佐剂对照)。每3d测双侧肿瘤大小的变化,治疗后14d取肿瘤组织行HE染色,免疫组织化学方法检测肿瘤组织CD8+T细胞的表达,免疫荧光法检测CD4+T细胞的表达。结果热疗后14d,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组两侧肿瘤体积均有不同程度缩小,Ⅴ组治疗侧及对侧肿瘤体积分别缩小34.6%、60.1%,并有3只大鼠对侧肿瘤完全消退,与Ⅰ组、Ⅵ组2个对照组比较,有显著性差异(q=4.552,P<0.05;q=4.400,P<0.05)。组织学检查肿瘤细胞呈凋亡、坏死性改变,伴大量淋巴细胞浸润,V组还可见大量吞噬细胞,对侧未见明显坏死肿瘤细胞,淋巴细胞浸润较明显。免疫学检查加热后CD4+T细胞和CD8+T细胞较对照组(Ⅰ、Ⅵ组)明显增多,差异具有显著性(P<0.05),其中均以V组表达最多(P<0.05)。结论50～55℃瘤内局部加热不仅能抑制乳腺癌生长,还可增强机体的细胞免疫功能并具有异位效应,免疫佐剂能增强其抑瘤作用及异位效应。

大鼠Walker-256、小鼠H22肿瘤模型建立及应用

目的研究大鼠Walker-256及小鼠H22两种肿瘤模型的成瘤性和稳定性,并探讨其应用。方法建立大鼠Walker-256及小鼠H22两种皮下肿瘤模型,1周后观察其出瘤率和肿瘤大小,观察并绘制肿瘤生长曲线,实验结束后进行病理学检测。结果1周后两种鼠肿瘤模型出瘤率分别为98.57%、97.14%(P>0.05);肿瘤直径分别为(9.61±2.90)mm、(8.25±1.89)mm(P>0.05);大鼠Walker-256模型有肿瘤自然消退现象,而小鼠H22模型肿瘤生长稳定且少数出现肺转移;病理学检测支持上述现象。结论小鼠H22皮下肿瘤模型较大鼠Walker-256模型稳定,可用于抗肿瘤疗效评价。

大鼠Walker-256移植性肺癌模型的建立

目的建立大鼠Walker-256移植性肺癌模型,探讨应用Walker-256癌细胞建立大鼠移植性肺癌模型的可行性。方法 SD大鼠经尾静脉注射高、中、低三种不同细胞浓度的大鼠Walker-256细胞悬液,观察大鼠的生存时间、体重变化、移植性肺癌模型的成模率,其他脏器转移情况及病理形态学变化情况。结果注射癌细胞后14 d,模型组大鼠均出现体重下降、摄食减少等体征,与正常对照组比较体重明显降低(P<0.05);注射癌细胞后21d,高浓度组大鼠开始出现死亡;高、中、低三组不同细胞浓度的移植性肺癌成模率分别为100%、80%、30%,模型组大鼠肝脏系数和肺脏系数均高于正常对照组。病理结果显示,模型组大鼠肺部可见明显的癌症病灶,而其他脏器未发现明显异常。结论注射高浓度Walker256癌细胞(3×105个细胞/只)能成功复制移植性肺癌模型,为移植性肺癌模型的建立和应用提供实验依据。

树突状细胞疫苗对大鼠Walker-256肿瘤抑制作用

目的建立Walker-256大鼠种植瘤模型,探讨树突状细胞(DC)疫苗抑制肿瘤生长的机制。方法从大鼠骨髓细胞中利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)在体外定向诱导分化出DC,液氮冻融法提取Walker-256肿瘤细胞抗原后刺激DC制备负载抗原的DC疫苗。ELISA法检测培养液中IL-12的浓度。雌性SD大鼠,皮下注射Walker-256肿瘤细胞制备种植瘤模型,成瘤大鼠按照体重配对,分为肿瘤治疗组和肿瘤对照组。10只体重分别相对应的雌性SD大鼠作为正常对照组。肿瘤治疗组大鼠皮下注射负载抗原的DC细胞悬液,肿瘤对照组和正常对照组大鼠皮下注射等量PBS。分别检测大鼠血IL-12浓度和肿瘤最大径。结果得到大量具备典型光镜和电镜形态特征的DC,表达大鼠DC特异性标志OX62、OX6。负载抗原前后DC产生IL-12的水平存在明显差异(P<0.05)。肿瘤治疗组大鼠肿瘤最大径显著小于肿瘤对照组(P<0.01)。肿瘤对照组与正常对照组比较,IL-12明显下降(P<0.05),肿瘤治疗组与肿瘤对照组比较,IL-12明显上升(P<0.01)。肿瘤治疗组的肿瘤最大径与IL-12呈显著负相关(r=-0.826,P<0.01)。结论增强Th1介导的抗肿瘤细胞免疫可能是树突状细胞疫苗抑制肿瘤生长的机制之一。

Walker-256腹水大鼠单个核细胞IFN-γ、IL-4基因表达研究

探讨Walker-256腹水型大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mono-nuclear cell PBMC)中Thl和Th2类细胞因子IFN-γ、IL-4基因表达水平,进一步了解恶性肿瘤机体免疫状态的变化。建立Walker-256腹水型大鼠模型,观察其生存状态。两周后分离PBMC,用RT-PCR法检测IL-4、IFN-γ的表达水平。结果表明,腹水大鼠IL-4基因表达水平较对照组升高(分别为0.48±0.06、0.33±0.04,p<0.05),而IFN-γ基因表达水平较对照组降低(分别为0.24±0.02、0.37±0.02,p<0.05)。结论为:腹水型肿瘤大鼠Th1/Th2平衡被打破,向Th2漂移,通过检测IL-4和IFN-γ基因表达可了解肿瘤机体免疫状态。