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麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定 被引量:8
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作者 戎芳 王胜华 +5 位作者 赵小光 郭亮 魏琴 唐琳 徐莺 陈放 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期206-209,共4页
The proteins from endosperm, root, stem, leaf, leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli were hybridized to the seed toxin protein (curcin) of Jatropha curcas L. by western blot. The result showed that the curci... The proteins from endosperm, root, stem, leaf, leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli were hybridized to the seed toxin protein (curcin) of Jatropha curcas L. by western blot. The result showed that the curcin was specifically expressed in the endosperm and its calli, while it was not detected in root, stem, leaf, and leafstalk of Jatropha curcas L. and their calli . This study indicated that calli induced from endosperm can be used to produce curcin. 展开更多
关键词 毒蛋白 愈伤组织 外植体 麻疯树 树种 种子 抗病虫能力 中毒 体动 抗癌药物
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定量PCR和Western blot结合检测回药爱康方对肺癌细胞EGFR、NF-κB的表达影响 被引量:4
2
作者 马科 陈丽军 +4 位作者 姬秀娥 戴永福 陈文 孙媛 林颖 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第12期2831-2835,I0018,共6页
目的:探讨定量PCR和Western blot结合检测对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞表皮生长因子受体(EGFR)、NF-κB表达影响,观察该方对调节癌细胞信号转导作用机制。方法:小鼠自接种瘤株细胞24 h后称重、编号,随机分为8组,每组5只,分别为:1回药高剂量... 目的:探讨定量PCR和Western blot结合检测对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞表皮生长因子受体(EGFR)、NF-κB表达影响,观察该方对调节癌细胞信号转导作用机制。方法:小鼠自接种瘤株细胞24 h后称重、编号,随机分为8组,每组5只,分别为:1回药高剂量组(AKH);2荷瘤模型组(对照组);3回药中剂量组(AKM);4单纯化疗药组(CTX组);5回药中剂量组加化疗组(AKM+CTX);6回药低剂量加化疗药组(AKL+CTX);7回药低剂量组(AKL);8回药高剂量加化疗药组(AKH+CTX)。采用RT-PCR和western blot方法检测小鼠组织样本中EGFR、NF-κBm RNA转录水平和蛋白质表达的变化情况。结果:实时荧光定量PCR结果显示:与模型组小鼠比较,给予回药爱康方,高、中、低剂量干预后,小鼠瘤细胞中EGFR m RNA表达水平显著下调(P<0.01),而低剂量对NF-κBm RNA的表达水平无统计学差异(P>0.05),给予回药爱康方,高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX后,小鼠瘤细胞中EGFR表达水平显著下调(P<0.01),小鼠瘤细胞中NF-κBm RNA表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,给予回药爱康方高、中、低剂量干预后,Lewis肺癌C57小鼠EGFR、NF-κB蛋白表达水平无统计学差异性(P>0.05),给予回药爱康方高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX干预后,Lewis肺癌C57小鼠EGFR蛋白表达水平显著下调、NF-κB蛋白表达水平显著上调(P<0.01或P<0.05)。结论:回药爱康方高、中、低与回药开康方高+CTX、中+CTX、低+CTX、CTX均对EGFRm RNA的表达水平有影响,仅低剂量对NF-κBm RNA的表达水平无影响,同时回药爱康方高、中、低剂量均对EGFR、NF-κB蛋白表达无影响。 展开更多
关键词 PCR western blot 回药爱康方 EGFR NF-ΚB
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黑曲霉葡萄糖氧化酶基因的原核表达及其蛋白产物的Western-blot分析 被引量:5
3
作者 安玉麟 孙瑞芬 +2 位作者 张鹤龄 郭树春 闫素丽 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期84-87,共4页
为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,... 为进一步研究黑曲酶中国株3.758葡萄糖氧化酶(GOD)在大肠杆菌中的表达水平和条件,将黑曲霉中国株3.758的葡萄糖氧化酶(GOD)基因定向克隆于原核表达载体pET-11a上,构建了融合表达的重组质粒pET/GO,转化E.coliBL21(DE3)plysS,用IPTG诱导,超声波粉碎细菌细胞,SDS-PAGE电泳检测,GOD基因获得了表达,表达的融合蛋白相对分子质量为66.5 kDa。用市售葡萄糖氧化酶免疫家兔获得抗血清,酶联法(ELISA)测定其效价为106,West-ern-blot分析证明表达的融合蛋白与兔抗GOD血清有较强的特异性,为黑曲霉3.758葡萄糖氧化酶(GOD)抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉3.758 葡萄糖氧化酶基因 融合表达 抗血清 ELISA western-blot
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赤点石斑鱼诺达病毒的纯化及其衣壳蛋白的Western-blot分析 被引量:9
4
作者 黄剑南 林蠡 +2 位作者 翁少萍 冯娟 何建国 《南方水产》 2005年第5期33-36,共4页
采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分... 采用差速离心,蔗糖(10%~40%,W/V)密度梯度离心和氯化铯(30%~40%,W/W)等密度梯度离心法,对赤点石斑鱼诺达病毒大亚湾株(RGCN)进行了纯化,测定计算其浮密度为1.3102~1.3243g·cm-3。通过Westernblot法检测到的病毒的结构蛋白的分子量为37和31kDa,而以31kDa的蛋白为主。 展开更多
关键词 赤点石斑鱼诺达病毒 衣壳蛋白 纯化 western-blot分析
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组织细胞中胶原蛋白的提取及ECL-Western blot分析 被引量:3
5
作者 刘德莉 徐蓉 +2 位作者 吴娟娟 夏万尧 商庆新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期290-291,297,共3页
目的建立一种可简便、有效的胶原蛋白提取、纯化及型别分析的测定方法。方法用破碎、酶解和盐析3步法提纯胶原,用ECL-Westernblot测定细胞基质胶原(200例)、正常组织及工程化修复组织中的胶原(30例)。结果该法提取胶原的时间周期短,得... 目的建立一种可简便、有效的胶原蛋白提取、纯化及型别分析的测定方法。方法用破碎、酶解和盐析3步法提纯胶原,用ECL-Westernblot测定细胞基质胶原(200例)、正常组织及工程化修复组织中的胶原(30例)。结果该法提取胶原的时间周期短,得率高于传统方法的2.5倍,纯度达到了PAGE纯化的水平。结论该法具有简便、快速、灵敏和无放射性污染等优点,为组织工程胶原的深入研究提供了有价值的测试手段。 展开更多
关键词 Ⅰ型胶原 Ⅱ型胶原 胶原提取 ECL-western blot
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免疫组化、明胶酶谱、Western Blot检测涎腺肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的比较与评价 被引量:10
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作者 田鲲 彭敏 +1 位作者 陈宇 耿宁 《实用医院临床杂志》 2010年第5期17-21,共5页
目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶... 目的评价免疫组化、明胶酶谱、Western blot检测涎腺良恶性肿瘤中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的优点与局限性。方法分别运用免疫组化、明胶酶谱、Western blot对34例涎腺良恶性肿瘤进行MMP-2、MMP-9定位、半定量、定量检测和活性酶含量的分析,比较各方法检测结果的差异。结果免疫组化方法能定位、半定量检测出基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;Western blot能定量说明基质金属蛋白酶在良恶性肿瘤间的差异;明胶酶谱法能检测出MMP-2、MMP-9酶原和活性酶在良恶性肿瘤间的差异。结论免疫组化、Western blot、明胶酶谱三种方法结合,既发挥免疫组化细胞定位的优势,又克服了免疫组化法非精确定量的弱点,并打破其不能辨别酶原与活性酶的局限性,更加客观准确反映各型肿瘤组织中MMP-2、MMP-9的实际表达。 展开更多
关键词 免疫组化 明胶酶谱 westernblot 涎腺肿瘤 基质金属蛋白酶
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拟南芥DBB1a(double B-box 1a)蛋白的表达、纯化及Western blotting检测 被引量:2
7
作者 屠小菊 汪启明 +5 位作者 李秀山 邓克勤 唐东英 罗泽宇 赵小英 刘选明 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第2期224-228,共5页
PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a。15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测。证实目的蛋白以... PCR扩增拟南芥(Arabidopsis thaliana)DBB1a cDNA的保守区段(GenBank登录号:AT2G21320),转化到冷诱导表达载体pCold TF上,构建pCold-DBB1a重组质粒,转化大肠杆菌DH5a。15℃下IPTG诱导表达融合蛋白,并通过SDS-PAGE检测。证实目的蛋白以可溶形式在约20 kD处高效表达,与预期蛋白大小相吻合。表达蛋白经Ni琼脂糖凝胶亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western blotting检测证实纯化后获得高纯度融合蛋白,这为进一步研究DBBl a功能奠定了基础。 展开更多
关键词 DBBla 原核表达 蛋白纯化 western blotTING
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Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性 被引量:1
8
作者 邓灵福 祁超 +2 位作者 李文新 冯玉文 王莹莹 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2006年第1期79-81,共3页
利用Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性,结果显示目标蛋白有明显的显色带.本方法灵敏、准确、简单,适用于重组人纽表位肽12抗原特异性检测.
关键词 western-blot SDS-PAGE 抗原特异性
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豆状带绦虫抗原的SDS-PAGE及Western-blot分析 被引量:1
9
作者 张倩 李作磊 +5 位作者 尚清炎 范希萍 苟惠天 韩进欢 韩乐乐 孙晓林 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期11-14,20,共5页
为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明:从豆状带绦虫不同发育阶... 为筛选豆状囊尾蚴的特异性抗原,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western-blot)技术对自然感染的豆状带绦虫成虫、幼虫的头节、囊壁可溶性抗原及囊液抗原进行了分析.结果表明:从豆状带绦虫不同发育阶段的虫体中分离出5~12条主要蛋白区带,分子质量为25~114 ku.以第7周自然感染家兔血清对7种虫体抗原进行的Western-blot分析显示,7种虫体抗原在42、57、63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.以家兔阳性血清中提取出来的 IgG免疫球蛋白对 7种虫体抗原进行的 Western-blot分析显示,7种虫体抗原在63 ku处均能被兔抗豆状囊尾蚴血清识别.说明63 ku蛋白带可作为预防兔豆状囊尾蚴病的候选疫苗抗原.试验初步阐明了豆状带绦虫 7种不同抗原的部分生化特性,为对该抗原的进一步深入研究奠定了基础. 展开更多
关键词 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 免疫印迹 豆状带绦虫 抗原
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运用FQ RT-PCR和Western blot检测Claudin-1在人类大肠癌细胞株的表达 被引量:1
10
作者 陈琳 姜泊 +3 位作者 张亚历 张宏权 龚伟 卢青 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期205-207,共3页
目的:探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)和Western blot,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞株中的表达。结果:Claudin-1在大肠癌Dukes'type C期细胞株SW620强表达,Duk... 目的:探讨密连接蛋白Claudin-1与人类大肠癌进展的关系。方法:采用实时荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)和Western blot,检测Claudin-1在3株不同分期人类大肠癌细胞株中的表达。结果:Claudin-1在大肠癌Dukes'type C期细胞株SW620强表达,Dukes'type B期细胞株SW480次之,Dukes'type A期细胞株SW1116最弱。结论:Claudin-1在人类大肠癌细胞株中有表达,其表达量与大肠癌分期有关。 展开更多
关键词 大肠癌Claudin-1 实时荧光定量RT-PCR western blot
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Western blot法测定N-cadherin在创伤修复过程中的作用 被引量:1
11
作者 耿胜男 郑亚秋 +1 位作者 孟明静 杜钢军 《河南大学学报(医学版)》 CAS 2016年第1期9-13,共5页
〔目的〕测定小鼠创伤后N-cadherin蛋白的表达,探讨N-cadherin在创伤修复中的作用。〔方法〕用皮肤切除法在小鼠背部建立1 cm2小鼠皮肤创伤模型,分为复方组,腺嘌呤组,模型组和正常对照组。复方组小鼠给予中药复方制剂[附子(制)∶三七∶... 〔目的〕测定小鼠创伤后N-cadherin蛋白的表达,探讨N-cadherin在创伤修复中的作用。〔方法〕用皮肤切除法在小鼠背部建立1 cm2小鼠皮肤创伤模型,分为复方组,腺嘌呤组,模型组和正常对照组。复方组小鼠给予中药复方制剂[附子(制)∶三七∶紫草=1∶2∶3];腺嘌呤组给予腺嘌呤;模型组不给药。实验结束后,观察创伤面积及修复的快慢程度变化。创伤组织皮肤提取蛋白,Western blot法测定皮肤组织EMT过程中N-cad在创伤修复中表达的程度高低。〔结果〕复方组小鼠背部创伤恢复最快,其次为模型组,腺嘌呤组小鼠创伤愈合最慢;Western blot法测定显示,创伤后N-钙调素的表达从高到低依次为:腺嘌呤组、模型组、复方组,与正常对照组比较其差异具有统计学意义(P<0.05)。〔结论〕复方组给予的中药复方制剂对小鼠创伤的愈合有促进作用,腺嘌呤组给予腺嘌呤造成小鼠阳虚模型,不利于小鼠创伤愈合;小鼠创伤后N-cad的表达越低,创伤修复越快。 展开更多
关键词 western blot N-CADHERIN 创伤修复 小鼠
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Western blot法检测人脑胶质瘤中组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂-1的表达 被引量:1
12
作者 苏星 施炜 +1 位作者 倪兰春 陈建 《交通医学》 2011年第1期21-23,27,共4页
目的:研究人脑胶质瘤组织中组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂(tPA)及其抑制剂-1(PAI-1)的表达,旨在了解其与人脑胶质瘤恶性生物学行为间关系,探讨其在人脑胶质瘤中的作用及其临床意义。方法:采用增强化学发光蛋白印迹法,测定人脑胶质瘤手... 目的:研究人脑胶质瘤组织中组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂(tPA)及其抑制剂-1(PAI-1)的表达,旨在了解其与人脑胶质瘤恶性生物学行为间关系,探讨其在人脑胶质瘤中的作用及其临床意义。方法:采用增强化学发光蛋白印迹法,测定人脑胶质瘤手术切除标本41例和颅脑外伤10例正常脑组织标本中的tPA及PAI-1蛋白表达水平。结果:tPA蛋白在高级别脑胶质瘤中呈低表达,在低级别的人脑胶质瘤中呈高表达,而正常脑组织中亦有表达。正常脑组织和低、高级别脑胶质瘤组间表达的差异无统计学意义(P>0.05)。tPA蛋白表达与脑胶质瘤病理级别间无明显相关性(P>0.05)。PAI-1蛋白则随着脑胶质瘤级别升高表达水平逐渐升高,而在正常脑组织中水平极低甚至不表达。正常脑组织组、低级别组脑胶质瘤及高级别组间表达差异有统计学意义(P<0.05);PAI-1蛋白表达水平与脑胶质瘤病理级别间呈正相关(P<0.05)。结论:PAI-1蛋白的高表达反映脑胶质瘤恶性生物学行为;tPA蛋白高表达可能是人胶质瘤组织分化良好的表现。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 蛋白印迹 组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂 纤维蛋白溶解酶原激活剂抑制剂-1
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旋毛虫成虫可溶性抗原SDS-PAGE及Western-blot分析 被引量:1
13
作者 申丽洁 申元英 朱声华 《大理医学院学报》 2000年第1期7-8,共2页
目的 :初步分析旋毛虫成虫可溶性抗原的蛋白组份及免疫原性。方法 :采用SDS -PAGE和氨银染色对该抗原进行蛋白组份的分析 ,采用Westerm -blot分析该抗原的免疫原性。结果 :SDS -PAGE可显示40条多肽 ,其中主带8条 ;抗血清可特异性地识别1... 目的 :初步分析旋毛虫成虫可溶性抗原的蛋白组份及免疫原性。方法 :采用SDS -PAGE和氨银染色对该抗原进行蛋白组份的分析 ,采用Westerm -blot分析该抗原的免疫原性。结果 :SDS -PAGE可显示40条多肽 ,其中主带8条 ;抗血清可特异性地识别16条多肽抗原 ,其中有3条主带。结论 :实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原的蛋白组份及抗原性均较复杂。 展开更多
关键词 旋毛虫 旋毛虫抗原 免疫印迹试验 SDS-PAGE
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茶树叶片类脱水素蛋白的Western-blot分析 被引量:3
14
作者 舒锡婷 欧阳娜 +2 位作者 江昌俊 邓威威 李叶云 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2448-2454,共7页
为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示:(1)茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,... 为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示:(1)茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,满足茶树Western-blot技术要求。(2)在不同季节及越冬期中发现14~95kD共9种不同分子量的茶树类脱水素蛋白,其中95、65、48、37、34和14kD等6种蛋白表达量较为稳定,季节与越冬期变化不明显;58kD脱水素仅在冬季表达,越冬期不断上升,2月份增加到最高,表达丰度高;28kD脱水素蛋白在冬季表达量高,越冬期与茶树抗寒力变化规律一致;21kD脱水素在夏季和越冬期后期有较高的表达。研究表明,这3种脱水素可能在茶树抗逆中起着重要作用。 展开更多
关键词 茶树 脱水素 蛋白质提取 蛋白质印迹法
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叶用莴苣幼苗幼叶总蛋白SDS-PAGE和Western-blot方法的优化 被引量:3
15
作者 李洋 韩莹琰 +1 位作者 范双喜 陈曙红 《中国农学通报》 CSCD 2012年第31期153-156,共4页
为建立一套适合叶用莴苣(Lactuca sativeL.)热激蛋白研究的SDS-PAGE和Western-blot方法。以叶用莴苣W7为材料,采用改进的TCA/Acetone法提取叶片蛋白,比较了2种电压下SDS凝胶分离蛋白质的效果,使用4℃保存2周的抗体稀释液,并且得到了较... 为建立一套适合叶用莴苣(Lactuca sativeL.)热激蛋白研究的SDS-PAGE和Western-blot方法。以叶用莴苣W7为材料,采用改进的TCA/Acetone法提取叶片蛋白,比较了2种电压下SDS凝胶分离蛋白质的效果,使用4℃保存2周的抗体稀释液,并且得到了较清晰的热激蛋白70和内参蛋白Rubisco条带,初步确定了叶用莴苣叶片热激蛋白的western-blot实验条件。 展开更多
关键词 叶用莴苣 热激蛋白 western-blot
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B7-2分子在肝硬化患者肝脏组织中表达的Western blot检测方法研究
16
作者 杨权 钟备 +1 位作者 高翔 殷国庆 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2006年第4期259-261,共3页
目的:建立肝硬化患者肝组织B7-2分子W estern b lot检测方法。方法:设置不同的一抗稀释比,筛选合适一抗稀释比。设置阳性对照、阴性对照,确认目的蛋白。结果:在一抗稀释比从1∶50到1∶200的范围内,蛋白显影灰度逐渐增加,随着一抗稀释比... 目的:建立肝硬化患者肝组织B7-2分子W estern b lot检测方法。方法:设置不同的一抗稀释比,筛选合适一抗稀释比。设置阳性对照、阴性对照,确认目的蛋白。结果:在一抗稀释比从1∶50到1∶200的范围内,蛋白显影灰度逐渐增加,随着一抗稀释比从1∶200到1∶1 000的进一步递减,蛋白显影灰度却逐渐减弱。结论:在一抗稀释比为1∶200条件下,B7-2分子在肝硬化患者肝脏组织中呈强阳性表达。 展开更多
关键词 B7—2蛋白 western blot 肝硬化
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Analysis of Protoscoleces-specific Antigens from Echinococcus Granulosus with Proteomics Combined with Western Blot 被引量:7
17
作者 LI Zong Ji and ZHAO WeiDepartment of Medical Genetics and Cell Biology, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China Center of Scientific Technology of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China The medical scientific institute of Ningxia, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2012年第6期718-723,共6页
Objective To establish and optimize the proteomic analysis of protoscoleces-specific antigens from Echinococcus granulosus. To provide a foundation for identifying specific antigens in the soluble proteins of E. granu... Objective To establish and optimize the proteomic analysis of protoscoleces-specific antigens from Echinococcus granulosus. To provide a foundation for identifying specific antigens in the soluble proteins of E. granulosus protoscoleces for further research. Methods Brood capsules were collected aseptically from fertile E. granulosus cysts from the livers of an infected patient. The fertile E. granulosus cysts were fractured, and protoscoleces were collected by centrifugation. The soluble proteins of protoscoleces were acquired using the 2D Quant kit according to the manufacturer's instructions. We employed two-dimensional electrophoresis (2-DE) combined with immunoblot assay (Western blot) to analyze the soluble components of E. granulosus protoscoleces antigens. The 2-DE and immunoblot maps obtained were analyzed with PDQuest 8.0 image analysis software. Results About 233 soluble protein spots were identified with Coomassie-stained gels. Most of the proteins had a molecular weight of 16 000 Da to 117 000 Da, and an isoelectric point value of 3.0 to 10.0. 2-DE immunoblot was conducted and 57 specific antigen spots were observed, among which 23 spots were identified. Conclusion 2-DE combined with Western blot is the key to successful proteomic analysis and presents a new possibility for searching the specific E. granulosus protoscoleces antigens. 展开更多
关键词 Echinococcus granulosus protoscoleces PROTEOMICS Specific antigen Two-dimensionalelectrophoresis (2-DE) western blot
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果梅CCoAOMT蛋白Western-blot体系建立与优化
18
作者 张勇 侍婷 +1 位作者 吴欣欣 高志红 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期977-982,共6页
[目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较... [目的]本文旨在建立一套适合于果梅(Prunus mume)Western-blot的蛋白质提取和技术体系。[方法]以果梅品种‘小绿萼’花芽为试验材料,以咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCo AOMT)为目标蛋白,分别采用Tris-HCl法和SDS上样缓冲液直接提取法,比较2种提取方法的优劣,并通过设置不同的蛋白上样量(20、30、40、50及60μg)、转膜时间(40、60及90 min)、一抗稀释比例(1∶500、1∶1 000、1∶2 000及1∶5 000)以及一抗孵育时间(室温1 h、室温2 h及4℃过夜)等组合,研究适合果梅花芽CCo AOMT蛋白Western-blot的最佳体系。[结果]成功建立了快速、灵敏、特异的Western-blot体系,确定了果梅花芽CCoAOMT蛋白的Western-blot试验条件。SDS上样缓冲液直接提取法提取蛋白快速、高效,最佳条件为以蛋白上样量30μg、转膜1 h、一抗稀释比例1∶1 000以及一抗孵育2 h。[结论]本试验建立了简单、快速和重复性好的SDS上样缓冲液直接提取法以及优化的上样量、转膜时间和抗体浓度等Western-blot体系,为梅等木本植物开展Western-blot研究提供依据。 展开更多
关键词 果梅 花芽 蛋白提取 咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT) western-blot
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Study of penetration mechanism of labrasol on rabbit cornea by Ussing chamber, RT-PCR assay, Western blot and immunohistochemistry 被引量:3
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作者 Pan Guo Nan Li +8 位作者 Lili Fan Jun Lu Boying Liu Bing Zhang Yumei Wu Zhidong Liu Jiawei Li Jiaxin Pi Dongli Qi 《Asian Journal of Pharmaceutical Sciences》 SCIE CAS 2019年第3期329-339,共11页
Labrasol, as a non-ionic surfactant, can enhance the permeation and absorption of drugs, and is extensively used in topical, transdermal, and oral pharmaceutical preparations as an emulsifier and absorption enhancer. ... Labrasol, as a non-ionic surfactant, can enhance the permeation and absorption of drugs, and is extensively used in topical, transdermal, and oral pharmaceutical preparations as an emulsifier and absorption enhancer. Recent studies in our laboratory have indicated that labrasol has a strong absorption enhancing effect on different types of drugs in vitro and in vivo. This study was performed to further elucidate the action mechanism of labrasol on the corneal penetration. In this research, the fluorescein sodium, a marker of passive paracellular transport of tight junction, was selected as the model drug to assess the effect of labrasol on in vitro corneal permeability. To investigate the continuous and real-time influence of labrasol on the membrane permeability and integrity, the Ussing chamber system was applied to monitor the electrophysiological parameters. And, furthermore, we elucidated the effect of labrasol on excised cornea at the molecular level by application of RT-PCR, Western blot, and immunohistochemical staining. The results indicated that labrasol obviously enhance the transcorneal permeability of fluorescein sodium, and the enhancement was realized by interacting with and down-regulating the associated proteins, such as Factin, claudin-1 and β-catenin, which were contributed to cell-cell connections, respectively. 展开更多
关键词 Enhanced CORNEAL PERMEATION Tight junctions associated proteins LABRASOL Ussing chamber western blot IMMUNOHISTOCHEMISTRY
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Expression of Elk-1 in Non-Small Cell Lung Cancer Detected by Western Blot and Tissue Microarray
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作者 张曙光 李放 +2 位作者 李文雅 卢玮 张林 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2007年第1期7-11,共5页
Objective: The aim of this study was to investigate the Elk-1 (Ets like transcription factor-1) expression in non-small cell lung cancer (NSCLC) and normal lung tissues and the relationship between its expression... Objective: The aim of this study was to investigate the Elk-1 (Ets like transcription factor-1) expression in non-small cell lung cancer (NSCLC) and normal lung tissues and the relationship between its expression and clinicopathological characters. Methods: To observe Elk-1 expression, western blot and immunochemistry (IHC) on tissue microarray (TMA) containing 118 lung cancers and their corresponding normal tissues were used. Results: In western blot and IHC on TMA, Elk-1 was highly expressed in NSCLC, while its expression was almost undetectable in normal lung tissues. Elk- 1 expression in NSCLC had no relationship with the patients' age, gender, smoking status and histological type, but had relationship with the differentiation degree, clinical stages and lymphonode metastasis. The expression was lower in early stage group (Ⅰ+Ⅱ) than in advanced stage group (Ⅲ), and lower in well-moderately differentiated group than in poorly differentiated group. The same trend was seen with lymphonode metastasis. Conclusion: The progression of NSCLC may be related with the increased Elk-1 expression, and Elk-1 may be regarded as a prognostic factor for NSCLC tissues. 展开更多
关键词 Elk-1 Non-small cell lung cancer western blot Tissue microarray
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