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Western blot法测定N-cadherin在创伤修复过程中的作用 被引量:1
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作者 耿胜男 郑亚秋 +1 位作者 孟明静 杜钢军 《河南大学学报(医学版)》 CAS 2016年第1期9-13,共5页
〔目的〕测定小鼠创伤后N-cadherin蛋白的表达,探讨N-cadherin在创伤修复中的作用。〔方法〕用皮肤切除法在小鼠背部建立1 cm2小鼠皮肤创伤模型,分为复方组,腺嘌呤组,模型组和正常对照组。复方组小鼠给予中药复方制剂[附子(制)∶三七∶... 〔目的〕测定小鼠创伤后N-cadherin蛋白的表达,探讨N-cadherin在创伤修复中的作用。〔方法〕用皮肤切除法在小鼠背部建立1 cm2小鼠皮肤创伤模型,分为复方组,腺嘌呤组,模型组和正常对照组。复方组小鼠给予中药复方制剂[附子(制)∶三七∶紫草=1∶2∶3];腺嘌呤组给予腺嘌呤;模型组不给药。实验结束后,观察创伤面积及修复的快慢程度变化。创伤组织皮肤提取蛋白,Western blot法测定皮肤组织EMT过程中N-cad在创伤修复中表达的程度高低。〔结果〕复方组小鼠背部创伤恢复最快,其次为模型组,腺嘌呤组小鼠创伤愈合最慢;Western blot法测定显示,创伤后N-钙调素的表达从高到低依次为:腺嘌呤组、模型组、复方组,与正常对照组比较其差异具有统计学意义(P<0.05)。〔结论〕复方组给予的中药复方制剂对小鼠创伤的愈合有促进作用,腺嘌呤组给予腺嘌呤造成小鼠阳虚模型,不利于小鼠创伤愈合;小鼠创伤后N-cad的表达越低,创伤修复越快。 展开更多
关键词 western BLOT n-CADHERIn 创伤修复 小鼠
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Assessment on the Effects of Hepatitis B Prevention and Control Measures in Western China:A Comparison of Three Population-based Serosurveys 被引量:6
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作者 CHEN Hui LIU Nan +6 位作者 JI Zhao Hua PU Zhong Shu GUO Zhi Wen GAO Jie SHAO Zhong Jun LIU Yi Wen YAN Yong Ping 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2020年第10期735-744,共10页
Objective Despite the remarkable progress in efforts to control disease spread,the nationwide elimination of hepatitis B in China is still hindered by the persistently high rate of hepatitis B virus(HBV)infection in W... Objective Despite the remarkable progress in efforts to control disease spread,the nationwide elimination of hepatitis B in China is still hindered by the persistently high rate of hepatitis B virus(HBV)infection in Western China.This study aimed to evaluate the strategy of hepatitis B prevention and control in Western China and identify potential areas and strategies for improvement.Methods Susceptible population vaccination,health education,professional training of doctors,and other prevention and control measures have been implemented in Wuwei city since 2010.Data were obtained from three representative cross-sectional serosurveys conducted in 2010,2013,and 2015.The serum samples were subjected to enzyme-linked immunosorbent assays to detect the following seromarkers:HBV surface antigen(HBsAg),antibody against hepatitis B surface antigen(anti-HBs),and antibody against hepatitis B core antigen(anti-HBc).Estimates of variance were determined using Taylor series linearization methods.Results The three serosurveys revealed decreases in the prevalence of HBsAg(7.19% in 2010 vs.6.51% in 2013 vs.5.87% in 2015)and anti-HBc positivity(43.89%vs.32.87%vs.28.46%)and an increase in the prevalence of anti-HBs positivity(49.07%vs.53.66%vs.53.72%)over time.From 2010 to 2015,the legally reported incidence of hepatitis B in Wuwei city decreased from 686.53/100,000 to 53.72/100,000.Notably,persistently high HBsAg-positive rates(above 5.40%)were observed among subjects aged 20–69 years old in the three serosurveys;the prevalence of HBsAg was above 1% among children younger than 10 years old.Furthermore,rural subjects had higher rates of HBsAg and anti-HBc positivity than their urban counterparts(6.04%vs.4.83% and 30.26%vs.20.35%,respectively)in 2015 but had a lower rate of anti-HBs positivity(49.68 vs.55.18%).Multivariate regression analysis showed that age,urban and rural areas,and education level were the main factors affecting HBV infection.Conclusion Although vaccine-based prevention and control measures reduced the rate of HBV infection in Wuwei City over time,the hepatitis B infection rate in children younger than 10 years was still higher than the national average level.Therefore,the prevention and control of mother-to-child transmission and the management of the infected should be the focus of future prevention and control work. 展开更多
关键词 Hepatitis B Prevention a n d control measures SEROSURVEY western China
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N2 fixation rate and diazotroph community structure in the western tropical North Pacific Ocean 被引量:1
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作者 Run Zhang Dongsheng Zhang +5 位作者 Min Chen Zhibing Jiang Chunsheng Wang Minfang Zheng Yusheng Qiu Jie Huang 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第12期26-34,共9页
In the present study, we report N2 fixation rate(15N isotope tracer assay) and the diazotroph community structure(using the molecular method) in the western tropical North Pacific Ocean(WTNP)(13°–20°N, 120&... In the present study, we report N2 fixation rate(15N isotope tracer assay) and the diazotroph community structure(using the molecular method) in the western tropical North Pacific Ocean(WTNP)(13°–20°N, 120°–160°E). Our independent evidence on the basis of both in situ N2 fixation activity and diazotroph community structure showed the dominance of unicellular N2 fixation over majority of the WTNP surface waters during the sampling periods.Moreover, a shift in the diazotrophic composition from unicellular cyanobacteria group B-dominated to Trichodesmium spp.-dominated toward the western boundary current(Kuroshio) was also observed in 2013. We hypothesize that nutrient availability may have played a major role in regulating the biogeography of N2 fixation.In surface waters, volumetric N2 fixation rate(calculated by nitrogen) ranged between 0.6 and 2.6 nmol/(L·d) and averaged(1.2±0.5) nmol/(L·d), with <10 μm size fraction contributed predominantly(88%±6%) to the total rate between 135°E and 160°E. Depth-integrated N2 fixation rate over the upper 200 m ranged between 150 μmol/(m^2·d)and 480 μmol/(m^2·d)average(225±105) μmol/(m^2·d). N2 fixation can account for 6.2%±3.7% of the depthintegrated primary production, suggesting that N2 fixation is a significant N source sustaining new and export production in the WTNP. The role of N2 fixation in biogeochemical cycling in this climate change-vulnerable region calls for further investigations. 展开更多
关键词 western tropical north Pacific Ocean(WTnP) n2 fixation 15n isotope tracer assay unicellular diazotroph
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血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎小鼠海马神经元的保护作用及机制 被引量:1
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作者 陈琳 闫丽敏 +3 位作者 邢槐杰 陈敏 黎晓艳 曾超胜 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第3期268-275,共8页
目的探讨血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎小鼠的治疗作用及对辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)变化的影响。方法实验分组:对照组、模型组、低剂量血必净组、高剂量血必净组,每组10只小鼠,除对照组外,其余3组小鼠采用... 目的探讨血必净对抗N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)脑炎小鼠的治疗作用及对辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)变化的影响。方法实验分组:对照组、模型组、低剂量血必净组、高剂量血必净组,每组10只小鼠,除对照组外,其余3组小鼠采用抗原注射与免疫刺激建立抗NMDAR脑炎模型,低、高剂量血必净组的小鼠分别通过腹腔注射5 ml/kg、10 ml/kg血必净注射液,12 h注射1次,连续3 d;2周后,HE染色观察小鼠脑组织病理学改变,尼氏染色观察小鼠神经细胞形态变化,TUNEL染色检测小鼠神经细胞凋亡情况,ELISA检测小鼠血清和脑脊液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)含量,免疫组织化学染色与Western blotting检测脑组织IFN-γ、IL-4表达情况,流式细胞术检测外周血Th1、Th2细胞比例分布,并计算Th1/Th2比值。结果与模型组比较,低剂量血必净组和高剂量血必净组的小鼠海马组织损伤得到改善,神经细胞形态变化较小,尼氏小体形态较为完整且数目增加,神经细胞的TUNEL阳性率降低,血清和脑脊液中TNF-α、IL-1β、IFN-γ含量均减少而IL-4含量增加,脑组织内IFN-γ阳性细胞百分比与蛋白相对表达量降低,IL-4阳性细胞百分比与蛋白相对表达量升高,外周血分化簇(CD)4^(+)IFN-γ^(+)标记的Th1细胞比例、Th1/Th2比值降低,且高剂量血必净组小鼠外周血CD4^(+)IL-4^(+)标记的Th2细胞比例升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与低剂量血必净组比较,高剂量血必净组小鼠的上述各项检测指标改善效果更为明显,且差异也均具有统计学意义(P<0.05)。结论血必净能够改善抗NMDAR脑炎小鼠海马神经元损伤,该作用可能与减少IFN-γ表达、促进IL-4表达进而维持Th1/Th2细胞平衡有关。 展开更多
关键词 n-甲基-D-天门冬氨酸受体脑炎 血必净 TH1细胞 TH2细胞 免疫印迹法 小鼠
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Nitrate isotope dynamics in the lower euphotic-upper mesopelagic zones of the western South China Sea
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作者 Zixuan Li Chao Xu +5 位作者 Minfang Zheng Mengya Chen Yusheng Qiu Hantao Zhou Min Chen Run Zhang 《Acta Oceanologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2023年第1期1-11,共11页
The dual isotopes(N and O)of nitrate were measured using a denitrifier bacterial method in the western South China Sea(WSCS)during September 2015 to elucidate key information during N transformation in the lower eupho... The dual isotopes(N and O)of nitrate were measured using a denitrifier bacterial method in the western South China Sea(WSCS)during September 2015 to elucidate key information during N transformation in the lower euphotic zone(LEZ)-upper mesopelagic zone(UMZ,down to 500 m in this study)continuum,which is a vital sub-environment for marine N cycle and sequestration of atmospheric CO_(2)as well.The N isotopic composition(δ^(15)N)of nitrate generally decreased from 500 m toward the base of the euphotic zone(∼100 m),reaching a value of∼4.6‰(vs.air N_(2))at the base of the LEZ,suggesting the imprint of remineralization(nitrification)of isotopically light N from atmospheric source.Theδ^(15)N andδ18O of nitrate only generally conform to a 1:1 line at 50 m and 75 m,suggesting that nitrate assimilation is a dominant process to shape nitrate isotope signature in this light-limited and relatively N-replete lower part of the euphotic zone.The fractionation factors of N and O isotopes during nitrate fractionation(15εASSIM,18εASSIM)using a steady-state model were estimated to be 4.0‰±0.3‰and 5.4‰±0.3‰,respectively.The occurrence of nitrification at the base of the LEZ and most of the UMZ is corroborated by the decoupling ofδ^(15)N and the oxygen isotopic composition(δ18O)of nitrate.Our results will provide insights for better understanding N cycle in the South China Sea from a perspective of present and past. 展开更多
关键词 n and O isotopes nitrate assimilation nITRIFICATIOn western South China Sea
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CpOGA^(D298N)与核心链霉亲和素Stv13融合表达用于检测蛋白质O⁃GlcNAc修饰
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作者 黎先感 杨明 +4 位作者 鲁莹 李玲 马骞 李静 张连文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期513-519,共7页
氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用,也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径,但是常用于O-GlcNA... 氧连接的β-N-乙酰葡萄糖胺修饰(O-GlcNAc修饰)是一种发生在蛋白质丝氨酸、苏氨酸羟基上的一种动态、可逆的翻译后修饰。O-GlcNAc修饰在细胞的许多关键过程中发挥重要作用,也是研究阿尔茨海默病和糖尿病等的重要途径,但是常用于O-GlcNAc蛋白检测的抗体特异性或者检测分子量范围仍存在问题且耗时(~36 h)过长,对后续研究造成困扰。在本研究中,我们设计构建了产气荚膜梭菌OGA(O-GlcNAcase)突变体(CpOGA^(D298N))与核心链霉亲和素Stv13融合表达质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13。将质粒pET28a-CpOGA^(D298N)-Stv13转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,获得了融合蛋白质CpOGA^(D298N)-Stv13。通过CpOGA^(D298N)特异性结合O-GlcNAc的能力及生物素-亲和素特异性亲和作用,设计了Far-Western blot(Far-WB)用于检测蛋白质O-GlcNAc修饰,利用sOGT(short form O-GlcNAc transferase)、去O-GlcNAc修饰sOGT、细胞裂解液样本及人肝细胞核因子1A(hepatocyte fuclear factor 1A,HNF1A)对该方法进行验证。本研究成功构建了一种蛋白质O-GlcNAc修饰检测方法,耗时相对O-GlcNAc特异性抗体缩短至5~7 h,丰富了蛋白质O-GlcNAc修饰的检测方法,为其后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 氧连接的β-n-乙酰葡萄糖胺修饰 CpOGA^(D298n)-Stv13 生物素 Far-western blot
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猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的表达与纯化 被引量:2
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作者 姚瑶 宋杰 +1 位作者 赵宝华 赵洪明 《河北师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2012年第3期301-306,共6页
根据GenBank报道的PRRSV VR2332基因序列设计引物,经RT-PCR扩增,得到大小约为390 bp的阳性产物;利用BamHⅠ,EcoRⅠ位点将N蛋白基因片段克隆到pET-28a载体,构建原核重组表达质粒pET-N,转化BL21(DE3)并进行SDS-PAGE,Western blot分析.结... 根据GenBank报道的PRRSV VR2332基因序列设计引物,经RT-PCR扩增,得到大小约为390 bp的阳性产物;利用BamHⅠ,EcoRⅠ位点将N蛋白基因片段克隆到pET-28a载体,构建原核重组表达质粒pET-N,转化BL21(DE3)并进行SDS-PAGE,Western blot分析.结果表明:克隆的N蛋白基因与GenBank报道的VR2332基因同源性为93.83%;重组菌株经IPTG诱导后,N蛋白基因得到了高效表达;经筛选得到最佳诱导条件,即1 mmol/L IPTG诱导6 h,蛋白表达量可达菌体蛋白总量的52.635%,SDS-PAGE后切胶回收可得到纯化的N蛋白,为进一步制备免疫胶体金试纸条或ELISA试剂盒提供基础. 展开更多
关键词 n蛋白 诱导条件 western BLOT
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禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定 被引量:2
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作者 李子璇 韦莉 +7 位作者 王菁 朱姗姗 张春燕 柳舒航 全荣 阎旭 陈武 刘爵 《北京农学院学报》 2014年第4期49-53,共5页
利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白进行表达,并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组真核表达载体,然后将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检... 利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白进行表达,并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建重组真核表达载体,然后将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检测N蛋白的表达,并用Western blot检测表达蛋白的抗原性。结果显示,禽偏肺病毒核衣壳N蛋白主要表达在细胞浆中,在转染后48h后表达量最高;与抗N蛋白抗体有抗原性,所表达核衣壳N融合蛋白大小为72kDa左右,与预期结果一致。结论,本试验成功应用哺乳动物表达系统表达了禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白,表达蛋白具有抗原性,为与禽偏肺病毒核衣壳N蛋白的相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽偏肺病毒核衣壳n蛋白 哺乳动物细胞表达系统 显微镜观察 western BLOTTInG
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N-乙酰-L-色氨酸具有对新生鼠脑缺血/缺氧损伤的保护作用 被引量:3
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作者 蒋吉英 姜桂兰 +4 位作者 李磊 赵金岭 史才兴 于树娜 齐安东 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期451-455,共5页
目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对新生鼠脑缺血/缺氧损伤的保护作用。方法出生第7天的沙土鼠90只,随机分为正常对照组、缺血/缺氧组和L-NAT组。制备脑缺血/缺氧损伤模型,L-NAT组在造模前30min腹腔注射L-NAT(5mg/kg)。用Fluoro-Jade B(F... 目的探讨N-乙酰-L-色氨酸(L-NAT)对新生鼠脑缺血/缺氧损伤的保护作用。方法出生第7天的沙土鼠90只,随机分为正常对照组、缺血/缺氧组和L-NAT组。制备脑缺血/缺氧损伤模型,L-NAT组在造模前30min腹腔注射L-NAT(5mg/kg)。用Fluoro-Jade B(FJB)染色法观察细胞的死亡情况;用免疫荧光染色、Westernblotting观察活化的Caspase-3和Caspase-9在各组的表达。结果 L-NAT可使缺血/缺氧损伤后FJB阳性细胞数量减少,并抑制缺血/缺氧后Caspase-3和Caspase-9的活化。结论 L-NAT对新生鼠脑缺血/缺氧损伤动物模型具有保护作用。 展开更多
关键词 n-乙酰-L-色氨酸 缺血/缺氧损伤 免疫荧光 免疫印迹法 新生沙土鼠
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小反刍兽疫病毒N基因的原核表达 被引量:9
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作者 阮洋 秦峻岭 +8 位作者 高玉伟 孙玮 张涛 杨玉姣 杨松涛 王承宇 王铁成 黄耕 夏咸柱 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期21-25,共5页
目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中... 目的是表达出小反刍兽疫病毒的核蛋白,并鉴定其活性。根据GenBank发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列,对其进行基因优化并合成。设计引物,利用PCR的方法扩增PPRV-N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-28a-N。阳性质粒转化原核表达宿主菌Transetta(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间、温度。通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析确定表达蛋白的表达量和活性。扩增出PPRV-N基因,构建的原核表达载体pET-28a-N和原核表达菌,表达了N蛋白,表达蛋白能与PPRV阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒n基因 原核表达 SDS-PAGE电泳 western-BLOT
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蓝藻抗病毒蛋白-N在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备 被引量:1
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作者 黄小花 章军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1117-1121,共5页
目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构... 目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构建到原核表达载体pET-His中,氨苄青霉素平板筛选及PCR、酶切鉴定,挑选出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS分析鉴定,采用透析法重折叠复性,亲和层析分离纯化得到分子量为12700的带有组氨酸标签的重组CV-N融合蛋白。用亲和层析分离纯化后的CV-N融合蛋白作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫昆明小鼠,经过31天的免疫,获得抗CV-N的多克隆抗体。结果:成功地获得了CV-N基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,表达量高达42.0%。用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测得抗体效价超过1∶8000,Westernblot检测结果显示,该抗体能特异性地与CV-N抗原产生明显免疫亲和反应。结论:建立原核高效稳定表达CV-N系统,获得具有生物学活性的CV-N蛋白,所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 抗病毒蓝藻蛋白-n 克隆表达 酶联免疫吸附反应 western BLOT
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肝癌中NDRG2、AKT2 mRNA及其磷酸化蛋白的表达 被引量:6
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作者 吴国强 秦海明 王大全 《解放军医药杂志》 CAS 2015年第1期73-77,共5页
目的检测不同病理级别原发性肝细胞癌中N-myc下游调节基因2(NDRG2)和蛋白激酶B2(AKT2)mRNA及其磷酸化蛋白的表达水平。方法收集不同病理级别原发性肝细胞癌组织及癌旁正常肝组织标本各30例,检测标本中NDRG2、AKT2 mRNA及其磷酸化蛋白的... 目的检测不同病理级别原发性肝细胞癌中N-myc下游调节基因2(NDRG2)和蛋白激酶B2(AKT2)mRNA及其磷酸化蛋白的表达水平。方法收集不同病理级别原发性肝细胞癌组织及癌旁正常肝组织标本各30例,检测标本中NDRG2、AKT2 mRNA及其磷酸化蛋白的表达情况,并对其间的相互关系进行分析。结果 30例原发性肝细胞癌组织中NDRG2 mRNA表达低于瘤旁组织(P<0.05),AKT2 mRNA与瘤旁组织无明显差异(P>0.05),两者均与病理级别无关(P>0.05),且NDRG2与AKT2表达无相关性(P>0.05)。在高表达474位丝氨酸磷酸化的AKT2蛋白(P-AKT2-SER474)分子的标本中,两个NDRG2磷酸化分子多为低表达,相反,在低表达P-AKT2-SER474分子的标本中,两个NDRG2磷酸化分子多为高表达。结论在mRNA表达水平,还不能认为NDRG2与AKT2之间有相关性。在蛋白质水平,NDRG2的磷酸化不依赖于AKT2的磷酸化,且NDRG2与AKT2的磷酸化作用可能存在竞争关系。 展开更多
关键词 nDRG2 原癌基因蛋白质c-akt 肝细胞 实时聚合酶链反应 印迹法 蛋白质
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N-乙酰半胱氨酸对气道上皮细胞核因子-κВ表达的影响的实验研究 被引量:7
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作者 莫红缨 徐军 +1 位作者 郑劲平 钟南山 《现代临床医学生物工程学杂志》 1999年第4期253-255,共3页
目的:探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对炎前性细胞因子TNF-α刺激正常人气道上皮细胞株(16HBE)和肿瘤病人气道上皮细胞株(H292)的核因子-Кβ(NF-Кβ)表达的影响及作用机理.方法:采用Western-Blot免疫印迹电泳法:提取胞核蛋白,经SDS-... 目的:探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对炎前性细胞因子TNF-α刺激正常人气道上皮细胞株(16HBE)和肿瘤病人气道上皮细胞株(H292)的核因子-Кβ(NF-Кβ)表达的影响及作用机理.方法:采用Western-Blot免疫印迹电泳法:提取胞核蛋白,经SDS-PAGE凝胶电泳分离,以抗NF-КB抗体P50 ,P65作探针来确定NF-КB蛋白的存在.观察16HBE细胞和H292细胞的NF-КB在不同剂量(100,1000u/ml)和不同作用时间(1,2,4,6hrs)的TNF-α刺激下的表达;以及在相同TNF-α(1000u/ml,2hrs)刺激条件下,不同剂量NAC(4,8,16,32mM)对NF-КB活化抑制作用.结果:TNF-α在体外能刺激激活人气道上皮细胞16HBE和H292的NF-КB表达;同时发现:NAC能以一种剂量依赖方式抑制由TNF-α刺激激活的NF-КB.结论:NAC通过抑制上皮细胞激活NF-КB的途径,可能在哮喘的炎症控制中起着一定作用. 展开更多
关键词 n-乙酰半胱氨酸 气道上皮细胞 nF-KB Tn western-BLOT 哮喘
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胚胎小鼠大脑c-jun N-末端激酶表达的定量分析 被引量:2
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作者 包翠芬 刘霞 +2 位作者 魏嘉 梁佳 秦书俭 《数理医药学杂志》 2009年第2期152-153,共2页
目的:探讨c-jun N-末端激酶(JNK)在胚胎小鼠脑发育中的作用。方法:按受孕时间将昆明小鼠随机分为6组,分别为胚龄10(E10)、12(E12)、14(E14)、16(E16)、18d(E18)组、新生组(P0),采用免疫印迹技术和光密度分析法对各组小鼠脑JNK进行定量检... 目的:探讨c-jun N-末端激酶(JNK)在胚胎小鼠脑发育中的作用。方法:按受孕时间将昆明小鼠随机分为6组,分别为胚龄10(E10)、12(E12)、14(E14)、16(E16)、18d(E18)组、新生组(P0),采用免疫印迹技术和光密度分析法对各组小鼠脑JNK进行定量检测,以测得的JNK最大量为1(100%),计算蛋白相对含量。结果:免疫印迹法测得E10、E12、E14、E16、E18及P0组JNK1含量分别为24.57%、46.62%、62.99%、82.06%、100%、89.65%,JNK2/3含量分别为58.89%、51.37%、28.67%、20.33%、6.54%、5.03%。结论:JNK在胚胎发育期间呈明显的变化规律,提示JNK可能在小鼠大脑的发生与发育中起重要作用。 展开更多
关键词 小鼠 JnK 免疫印迹
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多肽∶N-寡糖酶在小鼠人工隐睾中表达下调
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作者 赵国杰 冯芝恩 +3 位作者 唐上明 赵翔 张页 张丽君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期480-486,共7页
真核多肽∶N-寡糖酶(peptide∶N-glycanase或PNGase)可切除错误折叠糖蛋白上的N-寡糖链,并可与内质网关联降解(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)途径中的多种关键成分相结合.然而,对于PNGase的生理功能及其与疾病的... 真核多肽∶N-寡糖酶(peptide∶N-glycanase或PNGase)可切除错误折叠糖蛋白上的N-寡糖链,并可与内质网关联降解(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)途径中的多种关键成分相结合.然而,对于PNGase的生理功能及其与疾病的关系尚无明确报道.本研究利用重组技术表达和纯化了包含人PNGase N末端片段的融合蛋白,并经融合蛋白免疫与亲和层析纯化家兔抗血清,制备了PNGase的特异性抗体.利用该抗体和Western印迹技术研究了PNGase在小鼠组织中的表达.结果显示PNGase在7种小鼠组织(脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸)中均有不同程度的表达,其中表达量最高者为睾丸;PNGase表达水平在不同品系小鼠(C57BL/6N、BALB/cAnN和昆明小鼠)间有显著差异.在小鼠单侧隐睾模型中首次观察到,与对照侧阴囊内的正常睾丸相比,隐睾内PNGase含量明显下降,提示PNGase在睾丸生精过程中可能有重要作用. 展开更多
关键词 多肽 n-寡糖酶 免疫印迹 隐睾 小鼠品系
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N-甲基-D-天冬氨酸受体-丝裂原活化蛋白激酶信号通路对心脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的调控作用及其机制 被引量:1
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作者 廖伟 黎云鹏 +2 位作者 潘亮发 余俊键 刘子由 《中国当代医药》 CAS 2023年第2期20-25,F0004,共7页
目的探究N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对心脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的调控作用及其机制。方法选择健康SD大鼠40只,采用随机数字表法将其分为对照组、心脏骤停/复苏组、地卓西平马来酸盐(MK801)干... 目的探究N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对心脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的调控作用及其机制。方法选择健康SD大鼠40只,采用随机数字表法将其分为对照组、心脏骤停/复苏组、地卓西平马来酸盐(MK801)干预组、MEK特异性抑制剂(U0126)干预组、联合干预组,每组各8只。除对照组外,其余组大鼠建立心脏骤停-心肺复苏模型,在复苏72 h取各组血样本进行血清白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肌酸激酶(CK)活性、丙二醛(MDA)测定,并测定各组大鼠脑梗死面积占比、心肌细胞凋亡率以及脑组织和心肌组织的N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(NMDAR-1)、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达情况。结果心脏骤停/复苏组的脑梗死面积占比、心肌细胞凋亡率高于对照组、MK801干预组、U0126干预组、联合干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合干预组的脑梗死面积占比、心肌细胞凋亡率低于MK801干预组、U0126干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合干预组复苏72 h后的血清IL-1β、TNF-α、CK-MB、MDA低于MK801干预组、U0126干预组、心脏骤停/复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合干预组复苏72 h后的心肌组织、脑组织NMDAR1、p38MAPK、p-JNK、p-ERK蛋白表达低于MK801干预组、U0126干预组、心脏骤停/复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NMDA受体-MAPK信号通路可能参与介导心脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的调控过程,其机制是通过调节机体炎症反应实现的。 展开更多
关键词 心脑缺血再灌注损伤 n-甲基-D-天冬氨酸受体-丝裂原活化蛋白激酶信号通路 细胞凋亡 免疫蛋白印迹法
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鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究
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作者 李广兴 李兰兰 +7 位作者 潘龙 洪琴 张恒 杨巍 黄小丹 马德星 张瑞莉 杨贵君 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期24-31,共8页
试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p... 试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸡氨肽酶n 多克隆抗体 免疫印迹 间接免疫荧光
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JNK/c-Jun信号通路在大鼠胸主动脉瘤模型中的表达及意义
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作者 范军 柏树令 +4 位作者 李想 阎亚伟 田晓红 侯伟健 佟浩 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期690-693,共4页
目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义。方法将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉。用免疫... 目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义。方法将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组。采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉。用免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁JNK和c-Jun的表达。结果免疫组织化学显示,磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)主要表达于动脉瘤中膜,而对照组表达很弱。Western blotting显示,动脉瘤组织中p-JNK和p-c-Jun表达均强于对照组。结论 p-JNK和p-c-Jun在动脉瘤中表达强于对照组,JNK/c-Jun信号通路可能在动脉瘤形成过程中起重要作用。 展开更多
关键词 C-JUn氨基末端激酶 C-JUn 胸主动脉瘤 免疫组织化学 免疫印迹法 大鼠
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人ppGalNAc-T2的原核表达、纯化及其蓖麻蛋白样结构域的结构预测
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作者 金美芳 丁向明 +4 位作者 仇灏 吴士良 周嘉梁 郭向红 潘浩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期476-481,共6页
多肽∶N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)是催化O糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAcT2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌BL21... 多肽∶N乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)是催化O糖基化的起始酶,在O聚糖的形成中起着关键的作用.为更好地研究该家族酶的结构与功能,采用PCR技术从pDONR201T2得到ppGalNAcT2全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pGEX4T1,转化大肠杆菌BL21,获得相应表达产物,用谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析柱进行纯化,并进行了Western印迹检测和初步的酶活测定.为进一步研究其功能还在结构研究上利用网络结构模拟SWISSMODEL服务器对ppGalNAcT2的蓖麻蛋白样结构域进行结构模拟.成功构建了原核表达载体pGEX4T1T2,获得有效表达和纯化,并初步鉴定了其活性,同时预测了其可能的三维结构和活性位点. 展开更多
关键词 多肽:n-乙酰氨基半乳糖转移酶 融合表达 谷胱甘肽S-转移酶亲和柱 蛋白印迹 蓖麻蛋白样结构域 结构模拟
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早期妊娠兔子宫液WGA和PNA结合糖蛋白的变化
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作者 陈素珍 曹咏清 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第6期603-608,共6页
本文利用凝集素为探针,以蛋白质免疫印渍分析法(Western Blot)研究了早期妊娠(D_1至D_(12),交配日定为D_0)兔子宫液中,WGA和PNA两种凝集素结合糖蛋白的动态变化规律,并用凝胶扫描仪对定性结果进行了定量分析。结果表明,着床前后(D_6、D_... 本文利用凝集素为探针,以蛋白质免疫印渍分析法(Western Blot)研究了早期妊娠(D_1至D_(12),交配日定为D_0)兔子宫液中,WGA和PNA两种凝集素结合糖蛋白的动态变化规律,并用凝胶扫描仪对定性结果进行了定量分析。结果表明,着床前后(D_6、D_7和D_9)子宫液中出现分子量分别为42kd和28kd的两种特异WGA结合糖蛋白,妊娠后出现大量分子量为75kd的PNA结合糖蛋白,于着床前(D_6)达高峰,着床后逐渐减少,至D_(12)消失。可见这三种子宫液糖蛋白均为阶段特异性糖蛋白,与着床关系密切。 展开更多
关键词 兔子宫液 糖蛋白 着床
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