幼年及成年SD大鼠Barrel脑区的变化

目的研究幼年和成年SD大鼠Barrel脑区的发育及变化。方法应用细胞色素氧化酶组织化学法研究成年SD鼠Barrel脑区的精确定位,及不同年龄段SD大鼠(出生后20d及3月龄成年SD大鼠)Barrel脑区的发育情况。结果成年SD大鼠的Barrel脑区面积明显小于年轻鼠(P<0.01);发育过程中,Barrel脑区各列之间的间距缩小,尤其是D和E列之间的间距;应用Nissl复染后发现,分隔各个Barrel桶之间的间距缩小,且神经元数目减少;成年SD大鼠的Barrel桶中高活性细胞色素氧化酶细胞比例明显高于年轻鼠(P<0.01)。结论啮齿类动物躯体感觉皮层Barrel脑区神经网络的排布精细,其构筑在发育过程中存在着微妙的变化。

SD大鼠Barrel脑区氧化酶活性区域及其特殊细胞构筑研究

【目的】确定控制大鼠胡须感觉的大脑皮质Barrel脑区的氧化酶活性区和该区的细胞构筑，为研究大脑皮质功能奠定基础。【方法】用多聚甲醛固定后的SD鼠脑组织修块、切片，应用氧化酶酶组织化学法及尼氏染色和尼氏复染等方法定位了SD鼠Barrel脑区，并观察了其脑区特殊的细胞构筑。【结果】SD鼠Barrel脑区定位结果表明，控制SD鼠胡须感觉的Barrel脑区高氧化酶活性区域位于皮层下约405～720μm；脑区的神经细胞成特殊的环状分布，通常在控制1根胡须的Barrel桶内同时包括数目不等的亚结构，亦成类似的环状排列，在这些小圆环状亚结构中包含有排布规则的高活性氧化酶细胞。【结论】Barrel脑区的精细排布及其内部存在的圆环状细胞亚结构，提示这些结构在感觉皮层神经网络运作中发挥着重要作用。

淫羊藿苷对脑缺血大鼠PTEN和GAP-43蛋白表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对胡须体觉皮质局灶性脑梗死大鼠PTEN和GAP-43蛋白表达的影响,探究淫羊藿苷促进神经功能恢复的可能机制。方法 24只成年健康雄性SD大鼠,随机分为淫羊藿苷组、局灶性脑缺血模型组以及假手术组各8只,在胡须体觉皮质局灶性脑缺血手术成功后3 d,淫羊藿苷组予淫羊藿苷灌胃,模型组和假手术组每天给予等量的生理盐水灌胃。改为造模前3 d、造模后3 d、治疗后7 d、14 d、21 d分别进行Corner Test进行行为学检测,治疗后21 d进行Western Blot方法检测梗死周边区PTEN、GAP-43蛋白的表达情况。结果胡须体觉皮质局灶性脑缺血后,淫羊藿苷能够明显促进大鼠胡须功能的恢复;Western blot检测显示淫羊藿苷能够明显抑制梗死周边区PTEN的表达,同时明显上调GAP-43的表达。结论淫羊藿苷可能通过抑制PTEN和增加GAP-43的表达而促进脑缺血后神经再生和功能恢复。

去胡须对大鼠行为及桶状皮层的影响

目的:研究外周去胡须后大鼠行为及桶状皮层(barrel cortex,BC)的可塑性变化。方法:SD大鼠随机分组(n=4):正常对照(A组),出生后第2天去除双侧颊脂垫组(B组),出生后第2天去除右侧颊脂垫组(C组),出生后1～5d每天剪右侧胡须,从出生后第5天起不剪由其胡须自由生长组(D组)。出生后第30天时称体重,测量左侧D2胡须长度,观测行为学变化(如狭缝实验、自由探索行为和趋壁行为)。采用细胞色素氧化酶组织化学法研究barrel排列与发育情况。结果:A组能迅速辨别出正确狭缝并钻入,平均用时(5.6±2.3)s;B组大鼠只有当鼻尖碰到狭缝壁时才会钻入狭缝。C组大鼠当其右侧脸颊靠近狭缝时,不能辨别出狭缝,只有当其掉转身体,用左侧胡须探测时才可能迅速钻入正确的狭缝。D组的表现同C组,B、C、D组大鼠进入正确狭缝的所用时间均显著长于A组(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。去除双侧颊脂垫的大鼠其左趋壁时间、右趋壁时间以及总趋壁时间均较正常大鼠短。去除右侧颊脂垫组的大鼠右趋壁时间也显著短于正常(P<0.05)。四组大鼠左侧D2胡须长度以及体重均无显著差异。从出生后第2天时一直剪除右侧胡须的小鼠在出生后第30天时发现其barrel变小,排列较混乱,barrel之间的界限不清,皮层细胞色素氧化酶(CO)反应的灰度明显变淡。结论:外周去传入不引起大鼠体重改变及残留胡须长度的代偿性改变,但可引起其趋触及探索行为方面的改变。外周去传入可导致barrel形状及排列的可塑性变化。

阿托伐他汀对大鼠局灶性脑缺血后胡须体觉皮层功能的影响及其机制

目的:探讨不同剂量的阿托伐他汀对大鼠局灶性脑缺血后胡须体觉皮层功能的影响及其机制。方法:30只大鼠训练达标后依随机数字表法分为假手术组、对照组(0.1ml/kg生理盐水)、低剂量组(1.0mg/kg)、中剂量组(3.0mg/kg)、高剂量组(6.0mg/kg)。对照组及各剂量组采用显微镜下结扎大脑中动脉数根分支构建局灶性胡须体觉皮层缺血模型并分别于造模后24h开始灌胃,每天1次,连续7天。造模后每天进行胡须依赖实验检测直至达到标准并于术后14天,应用超声多普勒检测缺血区周围的血流量;应用免疫组化检测缺血区周围CD34及VEGF的表达情况。结果:与对照组相比,低、中、高剂量组均增强了胡须依赖辨别能力(P<0.01,P<0.01,P<0.05);同时提高了缺血区周围的血流量(P<0.01,P<0.01,P<0.05);增加了缺血区周围CD34、VEGF阳性细胞数(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。而且中剂量组与低剂量、高剂量组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:阿托伐他汀有助于缺血后胡须依赖辨别能力的改善,其机制可能通过促进VEGF的表达及增加局部的微血管密度从而提高局部血流,且以中剂量效果较好。

脑缺血新模型:大鼠胡须体觉皮层局灶性缺血模型的建立

目的:建立一个简单、可靠的、可以直接研究单一功能变化和组织形态变化之间联系的大鼠胡须体觉皮层局灶性脑缺血模型。方法:大鼠经10%水合氯醛麻醉后,经右侧顶叶皮层处开颅,在显微镜下结扎大脑中动脉的2～3个分支。应用激光多普勒血流仪检测结扎前、后局部脑血流情况,细胞色素氧化酶染色确定胡须体觉皮层和梗死部位的关系,2,3,5-氧化三苯基四氮唑(TTC)染色检测梗死面积大小。胡须依赖实验检测胡须功能。结果:大脑中动脉主要侧支结扎后,梗死中心及周围局部脑血流明显下降。细胞色素氧化酶染色及TTC染色均示梗死区域位于胡须体觉皮层。局灶性缺血3d,测定梗死面积约占全脑面积的15%。梗死形成后大鼠胡须分辨物体纹理的能力下降。结论:选择性的将大鼠具有单一功能的胡须体觉皮层制作成局灶性脑缺血模型,提供了一个较好的研究功能变化和组织形态变化之间联系的脑缺血动物模型。

胡须刺激对大鼠桶状皮质局灶性脑缺血的神经保护作用

目的：研究胡须刺激对大鼠桶状皮质局灶性脑缺血的神经保护作用及可能机制。方法 ：18只雄性SD大鼠先行胡须依赖实验,训练达标后随机分为假手术组、模型组和胡须刺激组。在显微镜下结扎右侧大脑中动脉2~3根分支构建大鼠胡须桶状皮质局灶性脑缺血模型,胡须刺激组于缺血3 d后开始刺激大鼠左侧胡须。造模成功后3组大鼠再次行胡须依赖实验直至再次达标,记录各组所需实验次数,并于术后14 d应用超声多普勒检测缺血区周围的血流量,HE染色观察缺血脑组织形态结构变化,免疫组化检测缺血区周围CD34的表达情况并测量微血管密度。结果：与模型组相比,胡须刺激组能显著减少胡须依赖实验再次达标所需次数（P〈0.01）,提高缺血区血流量（P〈0.01）,改善病理组织学,提高缺血区周围CD34阳性细胞的表达,微血管密度增多（P〈0.01）。结论：胡须刺激对大鼠桶状皮质局灶性脑缺血有保护作用,其机制之一可能与诱导CD34的表达上调,改善脑缺血区的血流灌注有关。

p53基因敲除对小鼠神经行为及桶状皮层神经元数目的影响

目的探究p53基因在小鼠神经行为活动中的作用及对桶状皮层神经元数目的影响。方法45只8~12周龄C57BL/6背景的p53基因敲除(KO)小鼠为实验组,38只同年龄同背景的野生型(WT)小鼠为对照组。通过旷场实验、Y迷宫实验和纹理辨别实验测试小鼠焦虑样行为、自发运动、工作记忆能力及触须敏感性。用尼氏染色法观察桶状皮层II/III层神经元数目变化。结果与WT小鼠相比,p53基因敲除小鼠在旷场中心活动的时间(P>0.05)、旷场中总运动路程(P>0.05)和Y迷宫中自发交替率(P>0.05)、进入臂的总次数(P>0.05)均无显著差异,但对新纹理目标物的探索百分比显著减少(P<0.01);p53基因敲除小鼠桶状皮层II/III层的神经元数目较野生型小鼠显著减少(P<0.01)。结论p53基因缺失不会导致小鼠出现焦虑样行为、也不影响其自发运动及工作记忆能力,但损伤了小鼠对新纹理的辨别能力,即触须敏感性,可能与桶状皮层II/III层神经元数目减少有关。

小鼠胡须体觉皮质局灶性脑缺血模型建立

目的:制作梗死区集中在小鼠大脑胡须体觉皮质的局灶性脑缺血模型。方法:小鼠麻醉后,经右侧顶叶皮质处开颅,显微镜和内在光信号成像下结扎大脑中动脉分支2～3支。应用激光多普勒血流仪检测结扎前、后局部脑血流情况,TTC染色检测梗死面积大小,TUNEL染色标记细胞死亡情况,细胞色素氧化酶染色确定体觉皮质和梗死部位的关系。结果:大脑中动脉分支结扎后,梗死中心及周围局部脑血流明显下降。缺血后3 d,TTC染色示梗死区位于胡须体觉皮质,梗死面积约占脑冠状切面面积的15%,TUNEL染色示死亡细胞位于胡须体觉皮质,不累及白质,细胞色素氧化酶染色示胡须体觉皮质结构破坏。结论:可选择性将小鼠具有单一功能的胡须体觉皮质制作成局灶性脑缺血模型,为脑缺血研究的动物模型提供更多选择。