雷公藤精(Wilforgine)的2D NMR研究

用2DNMR（1H－1HCOSY，1H－13CCOSY，TOCSY，NOESY和COLOC）技术研究了从雷公藤中分离到的雷公藤精，对1H和13C谱进行了归属．

雷公藤榕碱的结构与分离

目的 研究雷公藤 (TripterygiumwilfordiiHook .f.)的化学成分。方法 应用各种色谱技术进行分离纯化 ,用UV ,IR ,MS ,HRMS ,1 HNMR ,1 3CNMR(COM和OFR) ,1 H 1 HCOSY ,1 H 1 3CCOSY ,2D NOESY ,1 H 1 3CCOLOC鉴定化合物的结构。结果 分离并鉴定了 2个生物碱 :I为wilforgine ,II为雷公藤榕碱 (wilfordlongine)。

HPLC法测定雷公藤提取物中雷公藤甲素及两种生物碱的含量

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定雷公藤提取物中雷公藤甲素、雷公藤精碱和wilfornine F的含量。方法采用YMC-Pack ODS-A(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠水溶液为流动相梯度洗脱,210nm波长处检测,流速1.0mL/min,温度25℃。结果雷公藤甲素、雷公藤精碱和wilfornine F在一定范围内均呈良好的线性关系,平均加样回收率在98.81%～99.84%范围内,RSD≤1.42%(n=6)。结论该方法准确、重复性好,适用于雷公藤提取物的质量评价。

雷公藤茎叶中的生物碱成分研究

本文报道从雷公藤茎叶中分离出3个倍半萜生物碱化合物,雷公藤吉碱 (Wilforgine)(1),雷公藤特碱的(wilfortrine)(Ⅱ)和雷公藤次碱(wilforine)(Ⅲ)。药理实验表明,Ⅱ和Ⅲ有体液免疫抑制作用。Ⅲ是治疗类风湿性关节炎的有效成分。

雷公藤吉碱对粘虫成虫飞行肌结构的影响

【目的】明确雷公藤吉碱对粘虫Mythimna separata成虫飞行肌结构的影响,为进一步探讨其杀虫机理奠定基础。【方法】采用饲喂法测定了雷公藤吉碱对粘虫成虫的胃毒活性及致毒症状。采用光镜和透射电镜技术,从显微和超微水平观察雷公藤吉碱(300μg/mL)对粘虫成虫飞行肌结构的影响。【结果】雷公藤吉碱对粘虫成虫具有较强的胃毒作用,其24 h致死中浓(LC_(50))值为194.53μg/mL;试虫中毒的典型特征为麻痹致死;显微观察显示处理组试虫肌肉组织结构紊乱,肌纤维间距增大,肌膜消解,横纹结构消失,且随中毒程度的加深,病变程度加剧;超微观察显示处理试虫肌细胞结构破坏,肌膜脱落,线粒体肿胀,肌质网扩张,肌原纤维断裂,且随中毒程度的加深,病变呈渐进性加剧。【结论】雷公藤吉碱可致粘虫成虫飞行肌病变,影响肌肉正常收缩,从而引起试虫麻痹致死,其作用靶标可能位于肌肉系统。

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定雷公藤中毒样品中4种毒性成分

建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法快速测定雷公藤中毒样品中雷公藤次碱、雷公藤晋碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯甲4种主要毒性成分的方法。以Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)为分离柱,柱温为40℃,样品室温度为4℃,流动相A为乙腈,流动相B为10 mmol甲酸铵-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,流量为0.3 mL/min,进样体积为10μL,多反应监测(MRM)模式检测。在优化的仪器工作条件下,雷公藤次碱、雷公藤晋碱、雷公藤甲素、雷公藤内酯甲在各自的质量浓度范围内与色谱峰面积线性关系良好,线性相关系数均不小于0.9980,检出限分别为0.24、0.26、0.28、1.25 mg/kg。阴性样品加标平均回收率为83.7%~95.3%,测定结果的相对标准偏差为2.66%~5.71%(n=6)。该方法适用于雷公藤中毒样品的快速检测。

HPLC法测定湿疹净中雷公藤吉碱和苦参碱的含量

目的 建立湿疹净喷雾剂的质量控制标准。方法 采用HPLC法同时测定样品中雷公藤吉碱和苦参碱的含量。色谱条件 :HypersilODS色谱柱 (4.6× 2 5 0mm ,5 μm) ;流动相 :乙腈 - 0 .0 2mol·L-1磷酸二氢钠水溶液 (6∶4 ) ;流速 1ml/min ;检测波长2 10nm ;柱温 2 0℃ ;进样量 1～ 6 μl。结果 线性范围分别是 :雷公藤 0 .6 2 4～ 3.74 4 μg ,r =0 .9995 ;苦参碱 0 .88～ 5 .2 8μg,r =0 .9996。平均回收率 :雷公藤吉碱为 97.4 % ,RSD =1.5 1% ;苦参碱为 97.5 % ,RSD =1.15 %。结论 本方法测定结果准确、灵敏。

正交试验优选雷公藤药材生物碱的提取工艺

目的:建立雷公藤药材生物碱的最佳提取工艺。方法:以雷公藤总生物碱、雷公藤吉碱、雷公藤次碱和浸膏得率为指标,采用正交设计优选提取工艺参数。结果:最佳工艺条件:药材提取前浸泡1h,分别用12、10倍量的80%乙醇回流提取2次,每次1h,调pH为4。结论:此工艺合理可行,适用于雷公藤药材生物碱的提取。

雷公藤生物碱乳油中雷公藤次碱和吉碱的分析测定

雷公藤次碱和吉碱是雷公藤生物碱杀虫剂的主要活性成分。试验采用高液相色谱法对雷公藤生物碱乳油中的雷公藤次碱和雷公藤吉碱进行了分析测定，色谱条件为：Microsorb-100 C18反相色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），以乙腈和0．02mol/L磷酸二氢钾水溶液作为流动相，梯度进行洗脱：1～8min时从30：70到100：0，最后保持乙腈洗脱2min，进样量10μl，流速为1ml／min，检测波长为254nm，柱温为35℃。方法的线性相关性为0．9996—0．9998；二种生物碱的加样回收率分别为98．9％，99．8％，RSD分别为0．86％，0．54％。

基于谱-效相关的雷公藤抗炎药效物质的研究

目的:基于谱-效相关分析方法,对雷公藤体外抗炎药效物质进行初步筛选。方法:运用LC-Q/TOFMS技术表征不同产地雷公藤的化学成分并初步指认其成分;以小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)为模型,检测细胞上清液中的白介素-6和白介素-10及诱导性一氧化氮合成酶,评价雷公藤的体外抗炎效应。采用相关回归分析方法分析效应与成分之间的关系。结果:指认出雷公藤的10个有效成分;确认BMDM模型可以有效评价雷公藤体外抗炎效应,并通过简单及多元相关回归分析可知雷公藤甲素、雷公藤晋碱应对雷公藤抗炎效应有较大相关。结论:雷公藤晋碱可能与雷公藤抗炎效应相关性较高。

Partial Synthesis of Macrolide Alkaloid Euonine

The macrolide alkaloid euonine 1 with pharmacologic activity was prepared from the alkaloid wilforgine 2. Their structures were confirmed by IR, NMR, MS and optical rotation.

雷公藤中雷公藤甲素、雷公藤吉碱和次碱的高效液相色谱-电喷雾串联质谱分析方法

建立了一种高效液相色谱-电喷雾串联质谱法（HPLC-ESI-MS/MS）测定雷公藤提取物中雷公藤甲素（triptolide）、雷公藤吉碱（wilforgine）和雷公藤次碱（wilforine）3种活性物质的分析方法,比较了雷公藤不同植株部位和不同组织培养产物中3种活性物质的含量差异。分别采用回流和超声两种方法提取。回流提取中,样品经V（甲醇）：V（乙腈）=1：1溶液回流,采用Supelclean LC-Si固相萃取小柱净化;超声提取中,样品经乙醇超声,用OASIS HLB固相萃取柱净化。采用C18色谱柱分离,乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱,采用HPLC-ESI-MS/MS测定。结果显示：在雷公藤植株中,雷公藤甲素含量最高的是不定根,发状根、根皮中含量次之,茎、叶中含量很少;雷公藤次碱含量最高的是发状根,其次是根皮,叶中未检测出;发状根和根皮中雷公藤吉碱的含量相当。在0.01~2 mg/kg添加水平下,3种活性物质的回收率在81%~109%之间,相对标准偏差（RSD）为0.4%~1.8%（n=5）。检出限在0.08~0.12μg/m L之间。该方法可以准确、快速地对雷公藤提取物及其产品进行质量监控。

雷公藤生物碱的分离鉴定

我们从雷公藤（ＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍＷｉｌｆｏｒｄｉｉＨｏｏｋ．ｆ．）中按常法分离得到总碱后经ＨＰＬＣ分析出现８个峰，经硅胶柱层析及硅胶ＲＰ－１８反相中压柱层析分离得到５个生物碱，由化学方法和光谱分析证明为雷公藤吉碱（Ｗｉｌｆｏｒｇｉｎｅ２０）．雷公藤次碱（Ｗｉｌｆｏｒｉｎｅ２１），雷公藤春碱（Ｗｉｌｆｏｒｔｒｉｎｅ２２），雷公藤碱戊（Ｗｉｌｆｏｒｉｄｉｎｅ２３），呋喃南蛇碱（Ｃｅｌａｆｕｒｉｎｅ１６）。ＨＰＬＣ分析指出含量最高为雷公藤吉碱，其次为呋喃南蛇碱。

UPLC法同时测定雷公藤药材中4种生物碱的含量

目的建立超高效液相色谱法同时测定雷公藤药材中雷公藤春碱、雷公藤晋碱、雷公藤定碱和雷公藤次碱的含量,研究不同产地雷公藤药材中这4种生物碱的含量差异情况。方法采用BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱分离,甲醇-水为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),检测波长230 nm,柱温30℃,进样量1μL。结果雷公藤春碱、雷公藤晋碱、雷公藤定碱、雷公藤次碱4种成分在相应的范围内,呈良好的线性关系(r≥0.9999);各成分的平均加样回收率(n=6)在99.51%~99.61%之间,RSD<小于2%。其中,湖北黄石产(批号:A)的雷公藤中这4种生物碱含量均最高。结论该法可同时测定雷公藤药材中4种生物碱含量,分析速度快,溶剂用量少,重复性好,为雷公藤药材的质量评价提供参考。另外不同产地的雷公藤药材中4种生物碱的含量差异较大,在临床用药时应引起重视。

雷公藤多苷片生物碱类成分抗肝癌作用网络药理学探讨及诱导肝癌细胞毒性验证

目的 基于网络药理学结合分子对接技术探讨雷公藤多苷片(TPT)生物碱类成分抗肝癌作用机制以及细胞实验验证TPT生物碱类成分诱导肝癌细胞毒性的作用。方法 利用Swiss Target Prediction和Targetnet数据库预测TPT中9个生物碱类成分[雷公藤晋碱、雷公藤次碱、雷公藤春碱、雷公藤定碱、雷公藤宁碱A、18-O-(3-糠酰)雷公藤春碱、卫矛碱、peritassine A、雷公藤新碱]的作用靶点。借助Genecards、OMIM和TTD数据库检索肝癌的相关靶点,将两者输入Venny在线工具交集得到生物碱类成分治疗肝癌的作用靶点,通过Cytoscape软件构建“雷公藤多苷片-活性成分-靶点-肝癌”相互作用网络。运用String数据库对交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,并使用Metascape数据库进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路和基因本体(GO)富集分析。借助AutoDockTools和PyMol软件对核心靶点及9种生物碱类成分进行分子对接验证。通过体外人肝癌HepG2细胞CCK-8实验验证TPT种9种生物碱的细胞毒作用。结果 经筛选得到TPT生物碱成分潜在作用靶点119个,肝癌疾病靶点1 168个,交集靶点23个。经PPI分析筛选出10个关键靶点,包括EGFR、CASP3、HSP90AA1等,KEGG富集分析主要涉及通路有Pathways in cancer、Prostate cancer、PI3K-Akt signaling pathway等。GO富集发现TPT生物碱类成分促肝癌细胞凋亡与改变细胞形态和调节蛋白激酶活性有关。分子对接显示多种成分与多个关键靶点有较好的结合能力。细胞验证实验发现5种生物碱[雷公藤晋碱、雷公藤次碱、雷公藤宁碱A、18-O-(3-糠酰)雷公藤春碱、peritassine A]对HepG2细胞均具有细胞毒性。结论 TPT中9种生物碱类成分可能通过作用于EGFR、CASP3、HSP90AA1等关键靶点和调节APAF1/CASP9/CASP3信号通路,从而降低肝癌细胞增殖、激活体内内在凋亡途径,最终促进肝癌细胞凋亡,具有潜在的抗肝癌活性。

雷公藤多苷片中6个活性成分在正常和佐剂性关节炎大鼠体内药代动力学比较研究

该研究考察雷公藤多苷片中6个主要入血成分(雷公藤甲素、雷酚内酯、雷公藤晋碱、雷公藤次碱、雷公藤红素、雷公藤内酯甲)在正常和佐剂性关节炎模型大鼠体内的药代动力学特征。通过注射弗氏完全佐剂建立关节炎模型大鼠,建立液相色谱-质谱联用方法(LC-MS)定量分析正常大鼠和模型大鼠分别灌胃雷公藤多苷片后血清中6个主要入血成分,并比较6个活性成分的药代动力学差异,探讨佐剂性关节炎对雷公藤多苷片主要成分的影响。研究结果建立了同时检测6个有效成分的LC-MS方法,该方法专属性、线性关系、准确度、精密度、稳定性、提取回收率及基质效应均符合要求。药代动力学比较结果显示,与正常大鼠相比,佐剂性关节炎可显著延长雷公藤晋碱在大鼠体内的t_(1/2)和MRT_(0-∞),而显著缩短雷公藤内酯甲在大鼠体内的t_(1/2)和MRT_(0-∞),但对其他4个成分的体内药代动力学特征没有显著影响,表明佐剂性关节炎对雷公藤多苷片不同活性成分的体内药代动力学过程的影响存在差异。该研究阐明了雷公藤多苷片多种主要成分在正常和佐剂性关节炎大鼠体内的药代动力学特征,以期为雷公藤多苷片的临床合理应用及其相关产品的二次开发提供指导参考。

基于代谢组学与琥珀酸/血管内皮生长因子信号通路的雷公藤煨制增效机制研究

目的观察雷公藤Tripterygium wilfordii煨制前后对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型大鼠的影响,并基于代谢组学与琥珀酸/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)炎症信号通路共同探索雷公藤煨制的增效机制。方法采用大鼠尾根部皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂复制CIA大鼠模型,分别给予醋酸地塞米松、雷公藤生品总提取物、雷公藤煨制品总提取物治疗20 d。通过大鼠足肿胀度、关节炎评分、血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平、滑膜病理组织切片评估药效;采用代谢组学技术对各组间的代谢差异进行表征;检测滑膜中琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活力以及琥珀酸和富马酸的含量;采用免疫组化法检测滑膜组织VEGFA、血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)表达。结果与模型组比较,雷公藤生品总提取物组和煨制品总提取物组大鼠足肿胀度和关节炎评分显著降低(P<0.05),血清中IL-1β水平显著降低(P<0.05),滑膜组织病理改变明显减轻,滑膜中琥珀酸含量显著降低(P<0.05),SDH活力无明显改变,滑膜组织VEGFA和CD31表达均显著下调(P<0.05)。与生品总提取物组比较,煨制品总提取物组SDH活力无明显改变,其余各项指标明显更向对照组接近(P<0.05)。代谢组学结果表明,从模型组中共筛选出15个差异代谢物,经煨制总提取物治疗后,6个差异代谢物较模型组明显回调(P<0.05),且与生品总提取物组相比明显更接近对照组(P<0.05)。这些代谢物的变化涉及了缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成、色氨酸代谢、能量代谢、花生四烯酸代谢。结论煨制可显著提高雷公藤对CIA模型大鼠的治疗效果,其增效作用机制可能与调控缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,色氨酸代谢,能量代谢,花生四烯酸代谢途径有关。雷公藤可通过调节琥珀酸/VEGF信号通路改善类风湿关节炎,煨制可增强雷公藤对该信号通路的调控从而发挥增效作用。

雷公藤多苷主要有效成分的含量研究

目的:测定雷公藤多苷中雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤晋碱、雷公藤次碱、雷公藤红素、雷公藤内酯甲6个有效成分的含量,为雷公藤多苷的质量评判以及组分与药效、毒性之间的关系探讨奠定基础。方法:采用高效液相色谱法同时测定雷公藤多苷中6个有效成分的含量,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸-0.2%三乙胺为流动相梯度洗脱,流速0.75 mL.min-1,柱温35℃,检测波长225 nm(0～65 min)、210 nm(65～80 min)。结果:在所选择的分析条件下,较好地定量了样品中的各组分。6个有效成分雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤晋碱、雷公藤次碱、雷公藤红素、雷公藤内酯甲的线性范围分别为0.005～0.10 mg.mL-1(r=0.9998)、0.01～0.06 mg.mL-1(r=0.9995)、0.10～0.20 mg.mL-1(r=0.9993)、0.10～0.20 mg.mL-1(r=0.9997)、0.0025～0.20 mg.mL-1(r=0.9995)、0.015～0.07mg.mL-1(r=0.9997);平均加样回收率为98.74%(RSD=1.5%)、96.85%(RSD=1.3%)、98.66%(RSD=2.4%)、95.61%(RSD=2.6%)、99.26%(RSD=1.9%)、99.25%(RSD=2.7%)。结论:所建立的方法可用于雷公藤多苷有效成分的定量分析;不同厂家生产的雷公藤多苷化学组成存在着较明显的差异。

一测多评法同时测定雷公藤药材及制剂雷公藤多苷片中7个质控成分

目的 为提高雷公藤质量控制水平,建立同时测定雷公藤药材及制剂雷公藤多苷片中7个成分的一测多评(quantitative analysis of multi-components with a single-marker,QAMS)方法。方法 采用HPLC法,以雷酚内酯为参照物,计算其它6种成分雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷公藤晋碱、雷公藤次碱、雷公藤红素和雷公藤内酯甲的相对校正因子(fk/s),并对fk/s进行耐用性考察。搜集不同产地、厂家及不同批号的9批雷公藤药材和10批雷公藤多苷片,分别采用外标法和QAMS法测定7个成分含量,比较两者的差异。结果 各个成分的fk/s重复性良好,对19批样品运用QAMS法和外标法得到的各成分含量无显著性差异(相对平均偏差<3%);不同厂家、不同批号及不同产地来源的雷公藤多苷片及雷公藤药材中7个成分含量均存在较大差异,说明应提高雷公藤中药的质量控制标准。结论 所建立的QAMS法准确性高,可用于雷公藤药材及其相关制剂的多成分同时定量分析,为雷公藤中药的全面质量控制提供方法参考。