8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc,wtp53,iNOS基因和EGFR表达的影响

目的 :探讨 8 Br cAMP对Eca 10 9细胞c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 2组 :①实验组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 -5mol/L ,培养 2 4h ;②对照组 :不加 8 Br cAMP ,培养 2 4h。对 2组的细胞涂片和硝酸纤维素膜 (NCM)标本进行c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达检测 ,并对扫描数值进行统计学处理。结果 :原位杂交及免疫组化反应信号皆定位于Eca 10 9细胞的胞质 ,扫描数值显示 :①c mycmRNA :实验组为 3.38± 0 .99,对照组为 5 .18± 1.39;②wtp5 3mRNA :实验组为 2 .74± 0 .83,对照组为 0 .38±0 .2 7;③iNOSmRNA :实验组为 4 .5 2± 0 .74 ,对照组为 2 .6 3± 0 .13;④EGFR IR :实验组为 2 .37± 1.0 5 ,对照组为 4 .38±0 .4 8。以上实验组与对照组比较差异有统计学意义 (P均 <0 .0 5 )。结论 :c myc、wtp5 3和NO均可参与 8 Br

视网膜缺血再灌注损伤后凋亡相关基因表达的变化

目的 研究视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）中凋亡相关基因野生型p53（WTp53）、bax和bcl-2表达的变化，探讨其作用机制。方法 将28只Wistar大鼠随机分为正常组、缺血组，其中缺血组又分为再灌注后1、6、12、24、48和72h等6个组。建立RIRI动物模型，用免疫组织化学链霉亲和素-生物素过氧化物酶复合物（SABC）法检测再灌注后不同时段视网膜组织中WTp53、bax和bcl-2基因表达的变化。结果 缺血组视网膜再灌注后WTp53、Bax蛋白表达增加，与正常组比较．再灌注6～72h差异有显著意义（F=487．19、281．97，q=11．526～52．401，P〈0．05）。缺血组视网膜再灌注后Bcl-2蛋白表达无明显变化，与正常组比较，差异无显著性（P〉0．05）。结论 缺血再灌注损伤引起WTp53、bax基因在视网膜神经节细胞层、神经纤维层与内核层表达增高；WTp53和bax可能通过诱导或促进神经节细胞凋亡参与了视网膜缺血再灌注损伤的发生。

野生型p53/junB融合基因真核表达载体的构建

目的通过构建抑癌基因野生型p53(wtp53)与核转录因子junB的融合基因真核表达载体,为进一步研究联合基因疗法在肝癌中的应用奠定一定的基础。方法运用PCR(polymerase chain reaction)、RT-PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)、基因重组技术构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent protein,EGFP)报告基因的wtp53/junB融合基因真核表达载体pEGFP-C1-wtp53/junB。通过观察绿色荧光定位的方法验证wtp53/junB融合基因的真核表达载体转染人肝癌细胞株HepG2的情况。结果成功地将p53/junB融合基因克隆到pEGFP-C1质粒中,其序列与设计的完全一致;转染人肝癌细胞株HepG2后可观察到绿色荧光定位于细胞核中,证明wtp53/junB融合基因成功转染入肝癌细胞株中。结论成功构建了携带EGFP的pEGFP-C1-wtp53/junB融合基因真核表达载体,并转染入人肝癌细胞核中,为进一步研究两者在肝癌中的协同作用奠定了基础。