花椒毒酚抗炎作用的实验研究

花椒毒酚（xanthotoxol，XT）是从蛇床子中提取出的一种呋喃香豆素。XT对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀、醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高、大鼠角叉菜胶性足跖肿胀均有明显的抑制作用，对小鼠棉球肉牙肿增生也有明显的抑制作用。结果表明XT对急性和慢性炎症模型均有抗炎作用。此外，XT明显降低大鼠角叉菜胶性足跖炎症组织内PGE含量。

花椒毒酚生物活性与药理作用

花椒毒酚属于香豆素类化合物,是伞形科中药植物的主要成分之一,具有多种生物活性以及药理作用。从它的结构与中药植物来源,分离提取工艺以及花椒毒酚的生物活性、药理作用进行综述,以期为临床、基础研究以及药物开发提供参考。

HPLC法测定白芷中4个香豆素类成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定白芷中花椒毒酚、佛手柑内酯、欧前胡素和异欧前胡素含量的方法,比较不同产地白芷的成分含量变化。方法:采用Zorbax SB-C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相组成为乙腈和水,线性梯度洗脱,检测波长300 nm,流速1.0 ml·min^(-1)。结果:在一定的浓度范围内,花椒毒酚、佛手柑内酯、欧前胡素和异欧前胡素的浓度与峰面积线性关系良好且具备良好的加样回收率。结论:本试验建立的HPLC方法简便易行,可用于白芷中4个活性成分的含量测定。

花椒毒酚对离体豚鼠心房肌的钙拮抗作用

目的:研究花椒毒酚(XT)抑制豚鼠心肌收缩力的作用机理。方法:采用张力描记法测定离体豚鼠左房肌的收缩力。结果:XT明显抑制豚鼠左房肌的正阶梯现象和静息后增强效应。钙通道阻滞药维拉帕米对正阶梯现象的抑制作用较XT为强,并可使正阶梯现象翻转,但对静息后增强效应无明显影响。XT对哇巴因的正性肌力作用及随后出现的心肌收缩力降低的毒性反应均有明显的对抗作用。结论:XT通过阻滞豚鼠左房肌的电压依赖性和受体调控性钙通道而发挥抑制心肌收缩力的作用。

花椒毒酚的镇咳、平喘及祛痰作用研究

目的:研究花椒毒酚(XT)对呼吸系统的影响。方法:采用浓氨水诱咳法、酚红排泌法和气管螺旋条法研究镇咳、祛痰和平喘作用。结果:XT能显著延长浓氨水所致小鼠咳嗽反应的潜伏期并减少咳嗽次数;能增加小鼠呼吸道的酚红排泌量;能显著地抑制磷酸组胺及乙酰胆碱所致的豚鼠离体气管平滑肌收缩,且作用强度呈剂量依赖性增强。结论:XT具有镇咳、平喘及祛痰作用。

花椒毒酚抑制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后中性粒细胞浸润和脑水肿

目的研究花椒毒酚对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤后中性粒细胞浸润、细胞粘附分子表达及脑水肿的影响。方法线栓法短暂阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血(2 h)再/灌注(24 h)损伤模型,缺血后1 h和12 h两次腹腔注射花椒毒酚2.5、5和10 mg.kg-1,再灌注24 h,检测大鼠神经功能行为缺陷评分、脑水肿和脑梗死范围,分光光度法测定缺血区脑组织中Na+,K+-ATPase、Ca2+-ATPase和髓过氧化物酶(MPO)的活性,免疫组织化学染色测定大脑皮层细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和E选-择素(E-selectin)的表达。结果花椒毒酚能改善大鼠脑缺血/再灌注后神经功能行为缺陷评分,减轻脑水肿和降低脑梗死范围,增强Na+,K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性,降低脑组织中MPO的活性,抑制ICAM-1和E-selectin表达。结论花椒毒酚对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其机制可能与其抑制炎症反应和减轻脑水肿有关。

花椒毒酚对豚鼠离体心房肌生理特性的影响

目的 :研究花椒毒酚对豚鼠离体心肌生理特性的影响。方法 :采用豚鼠离体心房 ,测定花椒毒酚对豚鼠心房率 ,心肌收缩力 ,左心房的兴奋性的影响。结果 :在心肌收缩力的实验中 ,给花椒毒酚 2 0 ,4 0 ,80 μmol·L-115min后 ,左心房的收缩力分别为0 .85、0 .6 8、0 .4 8g ,与对照组比较 ,花椒毒酚明显抑制豚鼠左心房肌的收缩力 (P <0 .0 5 ) ,并呈浓度依赖性 ;在对心房率的实验中 ,给花椒毒酚 2 0 ,4 0 μmol·L-1,30min后 ,离体右心房的频率从90 .0次·min-1分别下降至 6 0 .2、38.7次·min-1,与对照组比较有显著的统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;花椒毒酚对豚鼠左心房的功能性不应期和左心房兴奋性无明显影响。结论 :花椒毒酚可以降低心房自律性、抑制心房收缩力 ,其负性变频和负性变力效应可能与其抑制心肌细胞外钙内流和内钙释放有关。

花椒毒酚的药效学研究 Ⅰ抗心律失常作用

花椒毒酚（ｘａｎｔｈｏｔｏｘｏｌ，ＸＴ）是从蛇床子乙醇提取物中分离出的一种香豆素。ＸＴ对氯仿诱发的小鼠室颤、氯化钙诱发的大鼠室颤均有明显的预防作用，对乌头碱诱发的大鼠心律失常有显著的治疗效果，且能明显提高兔心室电致颤阈。此外，ＸＴ还能降低蟾蜍离体坐骨神经干的动作电位振幅。这些均表明ＸＴ有抗心律失常的作用。ＸＴ的小鼠ｉｖＬＤ＿（５０）为４７．０ｍｇ·ｋｇ￣（－１）。

中压制备色谱法分离纯化花椒毒酚和蛇床子素

方法：采用90%乙醇对粉碎过的中药蛇床子进行三次超声提取,将得到的粗提物干燥,以此为研究对象直接进行中压制备色谱分离纯化。实验：采用12g和120g的博纳艾杰尔ODS FLASH柱,分别考察了20mg和600mg两种不同上样量下蛇床子提取物的分离纯化效果。结果：20mg上样量下,所制得的花椒毒酚和蛇床子素的HPLC纯度分别为98.9%和99.3%,回收率分别为52.2%和56.8%;600mg上样量下,所得上述物质HPLC纯度分别为97.5%和96.8%,回收率分别为60.4%和61.6%。

花椒毒醇、花椒毒素与欧前胡素的合成

花椒毒醇、花椒毒素与欧前胡素为香豆素类天然活性分子。以2,6-二羟基苯乙酮与溴代乙醛缩二乙醇为原料,经单酚羟基缩合、成环构建呋喃片段,然后在硫酸催化下与苹果酸经Pechmann缩合反应生成吡喃-2-酮骨架,进一步经Baeyer-Villiger氧化合成花椒毒醇,4步总产率为42%,最后分别与碘甲烷、1-溴-3-甲基-2-丁烯缩合生成花椒毒素与欧前胡素,总产率分别为35%与37%,其结构经IR、1HNMR、13CNMR与MS表征。这为合成天然产物花椒毒醇、花椒毒素与欧前胡素提供了一种较为简便的方法,同时为此类化合物的合成与应用提供了参考。

8-O-烯丙基-4,4'-二甲基花椒毒酚的合成及其抗增殖活性

以焦性没食子酸和乙酰乙酸乙酯为原料,经Pechmann反应、Williamson成醚、环化、还原和脱水等反应合成了新化合物8-O-烯丙基-4,4'-二甲基花椒毒酚(5),总收率32.0%,其结构经1H NMR,13C NMR和ESI-MS表征。抗增殖活性测试结果表明:5对人类肝癌细胞Hep G2、结肠癌细胞HCT和子宫癌细胞SA具有一定的抗增殖活性,其中对Hep G2的抑制活性最高,IC50为(27.57±1.00)μmol·L-1。

高效液相色谱法测定人血浆中花椒毒酚的浓度

目的 建立用高效液相色谱法测定人血浆中花椒毒酚浓度的方法。方法 本试验血浆样品用乙酸乙酯进行液液萃取,S-美芬妥英为内标,色谱柱为Hypersil BDS C18,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长为300nm。结果 内标物质和花椒毒酚分离度良好,人血浆中的内源性物质不干扰测定。在0.01~2μg/m L浓度范围内花椒毒酚和内标物的色谱峰面积比值线性关系良好（r=0.999 2）;花椒毒酚的最低定量限为0.01μg/m L,样品日内日间精密度的RSD均小于6%,提取回收率为84.5%~92.1%,方法回收率99.5%~102.5%。结论 本实验建立的HPLC方法操作简便宜行,重现性好、灵敏度高,可用于人血浆花椒毒酚浓度测定及药代动力学的进一步研究。

HPLC法同时测定康妇软膏中异土木香内酯、土木香内酯、花椒毒酚、氧化前胡素、欧前胡素和蛇床子素

目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定康妇软膏中异土木香内酯、土木香内酯、花椒毒酚、氧化前胡素、欧前胡素和蛇床子素的含量。方法:以Agilent TC-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.9 ml·min^(-1),检测波长分别为220 nm和300 nm,柱温35℃。结果:异土木香内酯、土木香内酯、花椒毒酚、氧化前胡素、欧前胡素和蛇床子素分别在6.16~123.20μg·ml^(-1)、3.78~75.60μg·ml^(-1)、1.87~37.40μg·ml^(-1)、4.06~81.20μg·ml^(-1)、9.27~185.40μg·ml^(-1)、13.89~277.80μg·ml^(-1)范围内线性关系良好,相关系数分别为0.999 4,0.999 8,0.999 6,0.999 5,0.999 9和0.999 7;平均加样回收率分别为98.04%(RSD=1.06%),97.10%(RSD=1.53%),96.73%(RSD=0.90%),98.92%(RSD=1.36%),99.12%(RSD=0.83%)和100.27%(RSD=0.58%)。结论:该方法简便、准确,可用于康妇软膏质量标准的提高。

参苓健体粉指纹图谱和含量测定方法的研究

目的:建立高效液相色谱法同时测定参苓健体粉中欧前胡素、异欧前胡素、花椒毒酚、茯苓酸、去氢茯苓酸、去氢土莫酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ9个成分的含量,并建立HPLC指纹图谱。方法:采用Agilent Zorbax SB-C_(18)(250 mm×4. 6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为0. 8 ml·min-1,柱温为30℃,切换波长300 nm、210nm、220 nm及275 nm。以去氢土莫酸为参照峰,用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)对12批参苓健体粉进行相似度分析。结果:欧前胡素、异欧前胡素、花椒毒酚、茯苓酸、去氢茯苓酸、去氢土莫酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的线性范围分别为4. 15～83. 00μg·ml^(-1)(r=0. 999 9)、5. 06～101. 20μg·ml^(-1)(r=0. 999 8)、6. 88～137. 60μg·ml^(-1)(r=0. 999 7)、8. 87～177. 40μg·ml^(-1)(r=0. 999 9)、4. 03～80. 60μg·ml^(-1)(r=0. 999 5)、7. 32～146. 40μg·ml^(-1)(r=0. 999 8)、3. 84～76. 80μg·ml^(-1)(r=0. 999 7)、3. 81～76. 20μg·ml^(-1)(r=0. 999 8)和5. 37～107. 40μg·ml^(-1)(r=0. 999 6),平均加样回收率分别为98. 9%,99. 3%,99. 8%,100. 8%,101. 1%,100. 3%,101. 3%,100. 5%和99. 9%。12批样品中9个有效成分的含量范围分别在0. 125 8～0. 127 9 mg·g^(-1)、0. 134 7～0. 136 7 mg·g^(-1)、0. 172 6～0. 174 1 mg·g^(-1)、0. 226 6～0. 228 1 mg·g^(-1)、0. 102 6～0. 104 5 mg·g^(-1)、0. 200 7～0. 202 2 mg·g^(-1)、0. 120 0～0. 121 2 mg·g^(-1)、0. 120 4～0. 122 0 mg·g^(-1)和0. 146 0～0. 147 9 mg·g^(-1)。12批参苓健体粉的相似度均在0. 98以上。结论:本研究建立了参苓健体粉的指纹图谱及多指标成分含量的测定方法,为该制剂的质量控制及深入研究奠定了基础。

花椒毒酚对大鼠心脏移植物血管病的作用及机制研究

目的:探讨花椒毒酚对大鼠心脏移植物血管病(CAV)的作用及相关机制。方法:以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,采用胸主动脉腹腔移植法将大鼠随机分为模型组和药物组(再分为空白对照、7天组、28天组和56天组)。药物组花椒毒酚10 mg/(kg·d)灌胃给药,模型组同剂量生理盐水灌胃。各时间点取出移植动脉,常规行HE染色和免疫组织化学染色,并计算各组细胞粘附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA),转化生长因子-β1(TGF-β1)和核因子-κB(NF-κB)/P65表达的平均光密度值。结果:模型组在7天时动脉管壁出现大量炎症细胞浸润,56天时内膜增厚明显,而药物组比同期各模型组炎症细胞浸润明显减少、内膜增厚程度明显减小(均P<0.05);与同期各模型组相比,药物组ICAM-1、TNF-α、TGF-β1、NF-κB/P65的平均光密度值均有不同程度降低,α-SMA均有不同程度升高(均P<0.05)。结论:花椒毒酚能降低大鼠CAV中ICAM-1、TNF-α、TGF-β1的表达,保留部分平滑肌细胞的收缩表型,改善血管形态,缓解病情进展,其作用可能与部分抑制NF-κB/P65活化相关。

金属离子对花椒毒酚结合牛血清白蛋白体系的影响

运用荧光猝灭光谱(FS)、圆二色光谱(CD)研究了花椒毒酚(XAL)对牛血清白蛋白(BSA)的相互作用以及不同金属离子对XAL-BSA体系的影响。在290、297和304 K的温度下扫描XAL-BSA体系荧光光谱,采用Stern-Volmer方程计算得到各相应温度下XAL对BSA的猝灭速率常数(kq)分别为6.316×10^(13)、4.402×10^(13)和3.554×10^(13)L/(mol·s)。研究结果表明:XAL能够猝灭BSA的荧光强度,且猝灭机理为XAL与BSA形成复合物的静态猝灭。在297 K温度下,XAL与BSA的结合常数为3.47×105L/mol,加入金属离子后对XAL与BSA的结合常数均有不同程度的影响。F9ster偶极-偶极非辐射能量转移理论得出:BSA中色氨酸残基与XAL的作用距离(r)为5.29 nm,当加入金属离子后,BSA中色氨酸残基分别与XAL的r均不同程度的降低。圆二色光谱(CD)表明XAL与BSA相互作用后改变了BSA的二级结构,α-螺旋结构的百分比减少,当加入金属离子后,进一步诱导BSA的二级结构变化,α-螺旋结构的百分比进一步减少。

花椒毒酚的药效学研究──Ⅲ镇痛作用

花椒毒酚（ｘａｎｔｈｏｔｏｘｏｌ，ＴＸ）是从蛇床子中提取的一种呋喃香豆素。ＸＴ明显抑制醋酸引起的小鼠扭体反应。ＸＴ显著提高热板法致痛小鼠的痛阈，此作用不被阿片受体拮抗剂纳络酮所拮抗。此外，ＸＴ明显降低大鼠角叉菜胶足跖炎症组织内ＰＧＥ含量。这些结果表明ＸＴ确有镇痛作用，其镇痛机制涉及抑制ＰＧ的合成而非激动阿片受体。

基于活性成分比例一致性的白芷药材质量评价数据挖掘

目的白芷药材有效成分多且复杂,单一质量标准或者单一成分控制难以有效地衡量白芷药材的质量。通过探究白芷药材有效成分比例一致性,对白芷药材的质量进行评价和控制。方法提取78篇文献中的1297个白芷药材样本中的有效成分:欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、佛手柑内酯、水合氧化前胡素、白当归素、花椒毒酚的含量数据。对符合《中国药典》质量标准的1118个样本进行各有效成分含量比例一致性分析。结果发现各个香豆素类有效成分与标志性成分欧前胡素含量比值在一定范围内波动,例如异欧前胡素和欧前胡素含量比值在0.08~1.08,氧化前胡素和欧前胡素含量比值在0.02~2.00,佛手柑内酯和欧前胡素含量比值0.02~0.29,含量比值在范围之外的白芷药材一般为不合格药材。然后将各个香豆素类有效成分与标志性成分欧前胡素含量比值作正态分布曲线,发现各含量比值以均数为中心呈正态分布,例如异欧前胡素和欧前胡素含量比值以0.451为中心,氧化前胡素和欧前胡素含量比值以0.719为中心,佛手柑内酯和欧前胡素含量比值以0.0903为中心,越靠近中心则含量比值越稳定,药材质量越好。结论单一的外观性状鉴别并不能全面反映出白芷药材质量,甚至白芷药材中的有效成分含量与按外观划分的等级相反,因此可以从有效成分的种类、组分比例和含量3个角度准确评价白芷药材质量,通过兼顾外观性状指标和化学质量指标,综合评价白芷药材的规格等级。

都梁软胶囊中5个香豆素类成分的HPLC法测定

都梁软胶囊主要成分为白芷、川芎,临床用于祛风散寒、活血通络。临床研究表明都梁软胶囊对风寒头痛的疗效显著,对鼻塞不通有确切疗效,对外感风寒患者的中医证候有明显改善,且对血、尿、大便常规,心、肝、肾功能无明显影响,未见不良反应[1,2]。

6个线型呋喃香豆素类化合物在人源肠Caco-2细胞模型的吸收转运研究

目的研究花椒毒酚(1)、花椒毒素(2)、欧前胡素(3)、异欧前胡素(4)、8-甲氧基异欧前胡素(蛇床灵,5)和异茴芹素(6)6个线型呋喃香豆素类化合物在人源肠Caco-2细胞单层模型的吸收特性。方法应用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型测试6个香豆素类化合物从绒毛面(AP端)到基底面(BL端)、BL端到AP端2个方向的转运过程。应用偶联紫外检测器的高效液相色谱法对上述6个香豆素进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(Papp),并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较。根据1～6、补骨脂素(7)、佛手酚(8)、佛手酚葡萄糖苷(9)、佛手内酯(10)、紫花前胡苷(11)、紫花前胡苷元(12)、前胡苷V(13)、伞形花内酯(14)、甲氧基欧芹素(15)、当归醇-A(16)、当归醇-B(17)在Caco-2细胞单层模型的吸收特性,总结这些香豆素类化合物结构、亲脂性与吸收的规律。结果 6个香豆素类化合物双向转运的Papp值皆在10?5 cm/s数量级,与在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的普萘洛尔的Papp值在同一数量级,且皆通过被动吸收机制通过Caco-2细胞单层。结论 6个香豆素皆属于吸收良好的化合物。香豆素1～17的lg Papp AP→BL与lg D(pH 7.35)呈显著S型相关,主要通过被动扩散机制吸收转运。