miR-34a对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、细胞周期及皮下移植瘤生长的影响

目的探讨miR-34a对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、细胞周期及裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法通过慢病毒转染方法构建过表达miR-34a的结肠癌SW480细胞株。实验分2组:miR-34a组(转染过表达miR-34a的慢病毒载体)和NC组(阴性对照组,转染空病毒载体)。分析两组细胞中miR-34a的相对表达量和miR-34a对人结肠癌SW480细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。通过裸鼠皮下注射肿瘤细胞方法构建皮下移植瘤模型,每7天测量移植瘤体积,28d处死裸鼠,测量移植瘤最终重量,绘制肿瘤生长曲线,分析miR-34a对移植瘤生长的影响。结果miR-34a组的miR-34a相对表达量高于NC组(P<0.05)。miR-34a组2d后细胞增殖能力低于NC组(P<0.05);miR-34a组凋亡细胞比率高于NC组(P<0.05);miR-34a组细胞周期G2/M期比率高于NC组(P<0.05)。鼠-miR-34a组皮下移植瘤14d后的生长速度及瘤体最终重量低于鼠-NC组(P<0.05)。结论miR-34a可抑制人结肠癌SW480细胞的增殖、诱导细胞凋亡及G2/M期阻滞,进而抑制裸鼠皮下移植瘤生长,有可能成为结肠直肠癌治疗新的分子靶点。

DR脱细胞异种皮对中厚皮片供皮区愈合的疗效观察

目的探讨DR脱细胞异种皮对中厚皮片供皮区创面愈合的应用价值。方法 64例烧伤需要中厚皮片移植的患者随机分为治疗组和对照组,治疗组供皮区外用DR脱细胞异种皮,对照组供皮区外用凡士林纱布,均用大量无菌纱布覆盖包扎,1周后予以半暴露治疗,观察创面愈合情况。结果治疗组在相同时间内愈合例数明显增多,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论在中厚皮片供皮区外用DR脱细胞异种皮可缩短愈合时间,一定程度上改善愈合后瘢痕情况。

小鼠3LL肿瘤局部高表达GM-CSF增强抗肿瘤免疫的实验研究

背景与目的:粒-单核细胞集落刺激因子(grannulocyte/monocyte-colony stimulating factor,GM-CSF)具有促进未成熟树突状细胞(dendritic cell,DC)成熟、上调其MHC分子和协同刺激分子表达以及增强DC对肿瘤抗原的提呈等作用。本文研究GM-CSF在肿瘤局部的高表达可以促进肿瘤局部DC成熟及亚群改变,从而诱导增强的抗肿瘤免疫效应。方法:以GM-CSF转染小鼠Lewis肺癌细胞株3LL获得3LL-GM,分别以3LL、3LL-vec(空载体对照)和3LL-GM细胞接种C57BL/6小鼠,分离肿瘤局部免疫细胞,流式细胞术检测DC成熟度、DC亚群比例、CD8+效应T细胞的活化及其功能。结果:3LL-GM肿瘤局部GM-CSF浓度高达441.22ng/g肿瘤组织,显著高于母本3LL组的0.53ng/g肿瘤组织(P<0.05)和空载体对照3LL-vec组的0.42ng/g肿瘤组织(P<0.05)。在3LL-GM、3LL和3LL-vec组小鼠肿瘤内浸润的CD11c+DC细胞中,I-Ab+细胞的比例分别为60.62%、19.98%和23.12%(P<0.05),CD80+细胞的比例分别为60.93%、37.43%和47.03%(P<0.05),表明肿瘤局部GM-CSF促进DC成熟;同时,三组小鼠肿瘤内浸润的CD11c+CD8α+CD4-DC亚群比例分别为60.82%、40.00%和29.27%(P<0.05),显示肿瘤局部GM-CSF促使DC分化为CD11c+CD8α+CD4-亚群。3LL-GM组小鼠肿瘤内浸润淋巴细胞(tumor in-filtrating lymphocyte,TIL)中,CD3+CD62Llow细胞比例高达20.84%,显著高于3LL组的6.34%(P<0.05)和3LL-vec组的15.18%(P<0.05);并且分泌IFN-γ的CD8+T淋巴细胞比例为2.77%,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。结论:肿瘤局部高表达GM-CSF,可通过提高DC成熟度及上调CD11c+CD8α+CD4-DC亚群在肿瘤局部的比例,诱导增强的抗肿瘤免疫效应,最终导致肿瘤消退。

华蟾素对肺癌NCI-A549移植瘤裸鼠的抑制作用及机制研究

目的:研究华蟾素抗肺癌细胞NCI-A549的抗肿瘤活性及机制。方法:40只小鼠被随机分为4组:正常组、模型组、华蟾素组和顺铂组,检测各组小鼠的体质量变化、抑瘤率、血液和肝肾功能,应用Western blot分析凋亡相关蛋白表达情况。结果:华蟾素可显著抑制A549移植瘤的生长,对小鼠血液及肝肾功能无明显影响,各组抑瘤率分别为58. 0%和82. 3%,Western blot结果显示华蟾素可以显著上调Bax/Bcl-2的表达,促进cleaved-Casp3和cleaved-PARP的表达并抑制pAKT(ser473)的表达。结论:华蟾素可以显著抑制肺癌A549移植瘤的生长,其分子机制可能与抑制PI3K/AKT通路的活化,从而促进肿瘤细胞凋亡相关。

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对脊髓损伤大鼠比目鱼肌FasL及Caspase-3表达的影响

目的观察用微囊化兔坐骨神经组织细胞移植治疗脊髓损伤对比目鱼肌凋亡相关蛋白FasL及Caspase-3表达的影响,探讨微囊化异种组织细胞移植治疗脊髓损伤的可能机制。方法家兔8只用于制备兔坐骨神经组织细胞悬液。成年SD大鼠80只按随机数字表法分为A组(正常组8只)、B组(微囊化兔坐骨神经组织细胞移植组24只)、C组(兔坐骨神经组织细胞移植组24只)和D组(单纯损伤组24只)。B、C及D组大鼠于T10脊髓行左半横断伤后,立即于损伤处分别植入明胶海绵吸附的10μL微囊化坐骨神经组织细胞、明胶海绵吸附的10μL坐骨神经组织细胞以及空明胶海绵。分别于术后1、3、7、14 d(每个时相取6只大鼠)取损伤侧比目鱼肌肌腹,A组(每个时相取2只大鼠)取相应部位的比目鱼肌肌腹。应用HE染色观察肌细胞微观形态、免疫组织化学染色观察比目鱼肌凋亡相关蛋白FasL及Caspase-3的表达情况。结果脊髓半切损伤后B组肌纤维萎缩始终不明显,而C、D组随时间的进展肌萎缩越来越明显。脊髓损伤1 d后比目鱼肌FasL及Caspase-3阳性表达升高,至第7天达高峰,第14天维持在较高水平;B组FasL及Caspase-3的表达明显低于同时间点的C组及D组(P<0.01)。结论微囊化兔坐骨神经组织细胞移植治疗脊髓损伤可抑制比目鱼肌FasL及Caspase-3的表达,并延缓肌萎缩。

邮票植皮联合异种ADM治疗大面积深度烧伤疗效观察

目的观察邮票植皮联合异种脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)治疗大面积深度烧伤创面的临床疗效。方法对2014年4月至2017年4月毕节市第一人民医院烧伤整形手外科收治的14例大面积深Ⅱ度及Ⅲ度烧伤患者采用邮票植皮联合异种ADM治疗,分别于术后第3、6、12、15天观察创面ADM的湿度、弹性及与创面的贴附情况,以及皮片成活情况、创面愈合时间及愈合效果。结果所有患者均顺利完成邮票植皮联合异种ADM治疗,其中深Ⅱ度烧伤创面及部分Ⅲ度烧伤创面于1次植皮后被完全覆盖,皮片完全成活;部分Ⅲ度烧伤创面于2~3次植皮后被完全覆盖,皮片成活良好。术后第3、6天,深Ⅱ度及Ⅲ度烧伤创面的ADM均较湿润、弹性良好、紧贴创面;术后第12天,深Ⅱ度烧伤创面的大部分ADM干燥、弹性较差、少许与创面分离,Ⅲ度烧伤创面的大部分ADM湿润、弹性尚可、贴附良好;术后第15天,深Ⅱ度烧伤创面的ADM均较干燥、弹性较差、大部分与创面分离,Ⅲ度烧伤创面的大部分ADM湿润、弹性尚可、贴附良好。所有患者创面均完全愈合,其中深Ⅱ度烧伤创面平均愈合时间为15 d,Ⅲ度烧伤创面愈合时间为15~35 d。患者出院后随访4~12个月,部分深Ⅱ度烧伤创面愈后留有轻度色素沉着和(或)扁平瘢痕,部分Ⅲ度烧伤创面愈后留有增生性瘢痕。结论邮票植皮联合异种ADM治疗大面积深度烧伤创面,可通过观察ADM的湿度、弹性及与创面的贴附程度初步判断创面修复情况;邮票植皮联合异种ADM治疗深Ⅱ度烧伤创面,可有效促进创面修复,缩短创面愈合时间,疗效显著,是修复深Ⅱ度烧伤创面较为理想的方法,值得临床推广应用;而邮票植皮联合异种ADM治疗Ⅲ度烧伤创面,虽然最终治疗效果欠佳,但能有效保护创面不受外界细菌侵袭,促进肉芽组织生长,为Ⅲ度烧伤创面的修复打下良好的基础。

大肠癌裸鼠移植瘤实验模型的建立及T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1封闭载体的治疗作用

目的通过建立大肠癌SW620细胞裸鼠皮下移植瘤模型，观察T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1（Tiaml）封闭载体在动物体内的治疗作用。方法构建编码一条短发夹RNA的Tiaml质粒表达封闭载体，并用之转染SW620细胞；应用Hoechst33342荧光染色技术观察细胞形态学变化。将皮下接种SW620细胞的裸鼠分为3组，每组8只，在接种后第2周分别瘤内注射生理盐水（对照组）、HK错配链（HK组）和Tiaml封闭载体（Tiaml组）。第16天处死各组裸鼠，取出移植瘤移重。结果通过DNA测序证实封闭载体构建成功。SW620细胞经Tiaml封闭载体转染后，细胞核可见凋亡小体。对照组平均移植瘤重量（2．84±0．27）g，HK组（2．89±0．18）g，Tiaml组（1．47±0．20）g，Tiaml组与其他2组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而HK组和对照组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论所构建的Tiaml封闭载体能有效抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长。

临床前毒理学研究中恒河猴眼球一致性制片方法的建立

目的建立临床前毒理学研究中能充分涵盖正常恒河猴眼球解剖组织学结构和恒河猴眼球实施异种角膜内皮植片移植后包含角膜及异种角膜内皮植片的一致性组织制片方法。方法成年恒河猴10只为对照组,10只为模型组,模型组右眼实施异种角膜内皮植片移植手术。动物剖检时,摘取眼球,采用Davidson's液固定。左侧正常眼球:在平行于颞侧睫状后长动脉及视神经上方1 mm处,使用取材刀片沿视神经、黄斑(中心凹)与角膜作一切面,切片经常规脱水、包埋、切片、染色后进行镜检。右侧眼球:从睫状体后方切取角膜及虹膜,摘除晶状体,然后使角膜面向上,间隔2.5 mm切取角膜及虹膜,将切取的组织以切面向下按顺序放入分格包埋盒中,剩余眼球组织再切3个横切面并放入包埋盒,然后组织经脱水、包埋、切片和HE染色及Masson染色,最后对正常眼球、角膜及异种角膜内皮植片的解剖及组织学结构特点进行确认。结果所制备的正常眼球切片可清晰显示眼球所有组织结构,染色鲜艳,眼球形态真实。实施异种角膜内皮植片移植后,眼球角膜及异种角膜内皮植片结构清晰,且能良好地展示异种角膜内皮植片与角膜的贴合状态。所制备的组织切片表面平整,未见人工假象。结论通过自主建立的制片方法,可获得包含所有眼球组织结构特征的正常眼球切片,以及包含完整角膜、异种角膜内皮植片及眼球其他组织的良好切片。所建立的眼球制片方法简单易行,并且一致性较高,可用于临床前毒理学研究中眼部用药及实施异种角膜内皮植片移植后眼部的病理学评价。