RNA干扰Tb人舌癌细胞整合素连接激酶基因表达可抑制移植瘤生长

目的研究对Tb舌癌细胞的整合素连接激酶(ILK)进行特异性siRNA沉默后,下游信号分子Akt、GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的变化。方法建立特异性si ILK表达载体和无同源性的对照载体,通过Lipofectamine 2000介导稳定转染人舌鳞癌Tb细胞,然后将Tb、Tb vector和Tb silk 3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤大小和质量,对裸鼠肺及瘤组织行常规病理学检查,用免疫荧光技术检测癌细胞的p-Akt和p-GSK3β等的表达,并对瘤组织内血管生成情况进行观察。结果 Tb组、Tb vector组肺组织均发现自发性转移瘤,Tb si ILK组肺组织未发现自发性转移瘤;Tb si ILK组移植瘤细胞形态较其他二组体积减小,核分裂相较少,核质比例缩小;Tb si ILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他二组均明显下降;Tb si ILK组移植瘤质量(1.68±1.35)g较Tb组(3.58±1.04)g与Tb vector组(3.64±0.65)g分别降低了53.0%和53.8%(P<0.05);Tb si ILK组移植瘤血管[(5.6±2.2)/视野]生成较Tb组[(15.3±2.3)/视野]和Tb vector组[(14.6±1.4)/视野]也明显减少(P<0.05)。结论特异性ILK表达沉默抑制Tb舌癌移植瘤的血管生成和瘤细胞增殖,可能与其抑制下游信号传导分子Akt及GSK3β的磷酸化有关,提示ILK有望成为肿瘤治疗的靶基因。

改良鸡胚尿囊膜肿瘤实验动物模型及其生物学行为观察

目的利用鸡胚尿囊膜建立人移植瘤模型并观察其生物学行为和组织学形态已有报道。但是,在实际工作的过程中仍存在不少的问题。因此,通过改良的方法,获得简单,快捷,可重复的动物模型。方法将人胶质瘤SWO-38细胞滴加到鸡胚尿囊膜上,观察影响鸡胚的存活和成瘤的可能因素、移植瘤的生长特性和形态学特征。结果利用改良的方法成功建立胶质瘤鸡胚尿囊膜的模型;肿瘤组织能够诱导血管生成,镜下形态符合恶性胶质瘤的形态学特征。结论该模型简单,快捷,易于建立。便于观察肿瘤组织的生物学行为,可用于抗肿瘤的药物筛选。

VEGF基因沉默抑制HCT116裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响。方法将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6+27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6+27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型。通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(mi-crovessel density,MVD)改变。结果C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P<0·05)。A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色。C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P<0·05)。C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P<0·05)。VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0·810,P<0·01)。结论应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关。

沉默整合素连接激酶基因对TCA8113舌癌细胞移植瘤生长的影响

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,将3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤质量,对裸鼠肺及瘤组织形态学行常规病理学检查,使用免疫荧光技术检测体外和体内癌细胞p-Akt和p-GSK3β等的表达,并观察瘤组织内血管生成情况。结果 TCA8113组、TCA8113 vector组肺组织均发生自发性转移瘤,TCA8113 siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;TCA8113 siILK组移植瘤细胞形态较其他2组体积减小,核分裂象较少,核浆比例缩小;TCA8113 siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他2组均明显下降(P<0.05);TCA8113 siILK组移植瘤质量较其他2组显著降低(P<0.05),抑瘤率分别为84%和92%;TCA8113 siILK组移植瘤血管生成较其他2组也明显减少(P<0.05)。结论沉默TCA8113舌癌细胞ILK表达可抑制其下游信号传导分子Akt和GSK3β的磷酸化,并抑制移植瘤血管生成,从而抑制移植瘤的生长。

树舌多糖GF对人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响

目的：探讨树舌多糖GF对人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响及机制。方法：人肝癌细胞株MHCC97H接种4~5周鼠龄的雄性BALB/c-nu裸鼠背部2周,建立裸鼠皮下瘤模型。30只荷瘤裸鼠随机分为3组：对照组、生理盐水组及树舌多糖GF组,每组10只。对照组未做处理;生理盐水组腹腔注射生理盐水（0.15ml/只）,连续14天;树舌多糖GF组按50mg/kg,0.15ml/只腹腔注射树舌多糖GF,连续14天。于末次给药24h,处死全部裸鼠,解剖瘤体,比较各组肿瘤体积及重量。Western blot检测各组瘤体Notch细胞信号的胞内段（Notch intracecellar domain,NICD）蛋白的表达情况。结果：给药14天后,树舌多糖GF组的瘤体及瘤重分别为（81.21±25.68）mm3和（1.39±0.41）g,与对照组（1022.14±164.71）mm3和（2.30±0.46）g,以及生理盐水组（983.19±114.27）mm3和（2.11±0.58）g相比较均有统计学差异（P〈0.05）,树舌多糖GF可抑制肿瘤生长及减少瘤重;Western blot结果显示相比对照组及生理盐水组,树舌多糖GF组NICD表达降低。结论：树舌多糖GF抑制人肝癌细胞MHCC97H荷瘤裸鼠肿瘤生长,其抗肿瘤的作用靶点之一可能为Notch细胞信号。

不同浓度复方夏枯草制剂对人非小细胞肺癌细胞移植裸鼠的瘤体生长影响及机制探讨

目的观察不同浓度复方夏枯草制剂对人非小细胞肺癌细胞(NCI-H460)移植裸鼠瘤体生长的影响,并探讨其可能机制。方法取SPF级裸鼠36只,将0.2 mL的NCI-H460细胞悬液注射到裸鼠右后肢皮下制备移植瘤模型,将肿瘤体积长到60～80 mm3的30只裸鼠(其余6只剔除实验)分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性组、模型组各6只,另取6只正常裸鼠作为对照组,高剂量组、中剂量组、低剂量组分别以2.4、1.2、0.6 g/kg的复方夏枯草制剂灌胃,阳性组注射0.025 g/kg的环磷酰胺,对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水;阳性组隔两天给药1次,其他组每天1次。停药次日,测量移植瘤体积,观察瘤组织病理变化;免疫组化法检测瘤组织Bcl-2、Bax、Caspase-3。结果与模型组比较,高剂量组、阳性组给药后瘤体积、瘤重减小(P均<0.05)。模型组癌细胞紧密,核仁体积大;阳性组和复方夏枯草制剂低、中、高剂量组细胞有不同程度坏死,癌细胞数目明显减少,且大小不一,胞质破裂,完整性不好。与模型组比较,高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性组Bax阳性率升高,高剂量组、中剂量组、阳性组Caspase-3阳性率升高(P均<0.05)。结论复方夏枯草制剂对NCI-H460细胞移植裸鼠瘤体生长有抑制作用,高剂量浓度效果最好,其作用机制可能与上调Bax、Caspase-3表达有关。

基因重组心肌肌钙蛋白Ⅰ融合蛋白的抗肿瘤效应

目的研究基因重组心肌肌钙蛋白I与人工短肽的融合蛋白(CIS)对肿瘤生长的作用。方法用MTT法观察CIS体外对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长的作用。利用鸡胚绒毛尿囊膜模型观察CIS对新生血管生长的影响。用6种小鼠肿瘤异位可移植模型观察CIS在体内对肿瘤生长的作用。结果 CIS对HUVEC细胞增殖具有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系;鸡胚绒毛尿囊膜实验显示,CIS浓度为5、10 mg·L^(-1)时,新生血管生成的数量明显减少;荷瘤鼠体内异位移植模型实验显示:CIS(10 mg·kg^(-1))处理组肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,对S180肿瘤瘤重抑制率85.3%,对Lewis肺癌肿瘤瘤重抑制率87.0%,对H22肝癌肿瘤瘤重抑制率84.2%,对人小细胞肺癌H446肿瘤瘤重抑制率60.42%,对人可移植性肝癌SMMC7721肿瘤瘤重抑制率61.62%,对人胃低分化腺癌BGC823肿瘤瘤重抑制率为41.84%。结论 CIS在体外抑制HUVEC细胞的生长,在鸡胚绒毛尿囊膜实验中,CIS对新生血管生成有明显的抑制作用。在体内,CIS融合蛋白可有效抑制小鼠可移植肿瘤细胞的生长。CIS抗肿瘤效应很可能是通过抑制肿瘤组织中血管内皮细胞的增殖,进而减少肿瘤组织中新生血管生成的数量而达到的。

培元抗癌汤对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长及细胞凋亡的影响

目的探讨培元抗癌汤对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤生长及细胞凋亡的影响。方法选取30只BALB/c-nu雌性裸鼠,通过皮下注射MDA-MB-231细胞建立人乳腺移植瘤模型。将建模达标的载瘤鼠随机分为对照组、阳性对照组以及低、中、高剂量组,每组6只。低、中、高剂量组分别给予200、300、400 mg/kg培元抗癌汤灌胃,阳性对照组给予皮下注射乌司他丁(3 mg/kg),对照组不做任何干预治疗。给药期间观察各组载瘤鼠的一般情况。连续给药21 d后,处死各组载瘤鼠,取出乳腺肿瘤称重并计算肿瘤的抑制率,苏木精-伊红染色观察肿瘤组织形态学,检测肿瘤组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-9和Caspase-7蛋白表达水平。取人乳腺癌MDA-MB-231细胞,设立细胞空白组、3μmol/L乌司他丁组以及200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L培元抗癌汤组;除细胞空白组外其他组加入相应剂量的药物,干预48 h后检测细胞凋亡率。结果对照组载瘤鼠体重减轻、活动减少、反应迟钝;与对照组比较,各给药组载瘤鼠体重增加、反应较为灵敏。对照组、低剂量组、高剂量组、阳性对照组、中剂量组的肿瘤抑制率依次升高(均P<0.05)。HE染色结果显示,对照组和低剂量组可见明显异形细胞,细胞核增大,核异性明显;高中剂量组和阳性对照组肿瘤细胞出现了不同程度退变,可见细胞核碎片和凋亡细胞,中剂量组肿瘤细胞明显退变。与对照组和低剂量组比较,其他3组的促凋亡蛋白(Bax、Caspase-9、Caspase-7)相对表达量升高,抗凋亡蛋白Bcl-2相对表达量降低(均P<0.05),中剂量组各促凋亡蛋白相对表达量最高、抗凋亡蛋白相对表达量最低(均P<0.05)。其他3组细胞的凋亡率高于细胞空白组和200μmol/L培元抗癌汤组,300μmol/L培元抗癌汤组细胞凋亡率高于400μmol/L培元抗癌汤组和3μmol/L乌司他丁组(均P<0.05)。结论培元抗癌汤能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植肿瘤生长,并调控凋亡相关蛋白的表达,从而诱导肿瘤细胞发生凋亡。

异甘草素对小鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用研究

目的探究异甘草素对小鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用及其作用机制。方法将40只成功构建乳腺癌移植瘤的小鼠随机分为对照组和低、中、高剂量实验组(分别灌胃给予10、20、40 mg·kg^(-1)异甘草素),每组10只,共给药10 d。每隔7 d用游标卡尺测量肿瘤大小,并计算肿瘤体积,28 d后处死小鼠取肿瘤组织称重后,用免疫组化法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,用原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞凋亡情况,用蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cl-caspase-3)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Notch1蛋白(Notch1)、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白的表达水平。结果对照组和低、中、高剂量实验组的28 d肿瘤体积分别为(895.62±65.14)、(701.19±46.33)、(495.67±51.40)和(408.96±30.62)mm^(3),抑瘤率分别为0、(13.17±6.94)%、(35.33±10.38)%和(43.84±4.96)%,VEGF平均光密度值分别为74.90±8.08、59.86±5.63、50.80±2.99和39.15±3.73,细胞凋亡率分别为(3.44±0.27)%、(10.34±0.96)%、(14.60±1.48)%和(21.34±2.15)%,Bax蛋白相对表达水平分别为0.46±0.03、0.61±0.05、0.68±0.06和0.91±0.08,E-cadherin蛋白相对表达水平分别为0.35±0.04、0.51±0.06、0.66±0.08和0.92±0.06,Notch1蛋白相对表达水平分别为0.88±0.10、0.73±0.08、0.58±0.07和0.49±0.05。低、中、高剂量实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);中、高剂量实验组的上述指标与低剂量实验组比较,中剂量实验组的上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异甘草素可显著抑制乳腺癌小鼠肿瘤生长及上皮间质转化,这可能与抑制Notch1通路有关。

微小RNA-301a介导高血糖对前列腺癌细胞裸鼠移植瘤的促生长作用

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-301a介导高血糖对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的促生长作用。方法以40mg／kg链脲佐菌素连续5d腹腔注射建立高血糖裸鼠模型，以慢病毒构建miR-301a过表达载体（LV-miR-301a）及其阴性对照，并构建miR-301a抑制剂载体（LV-miR-301a—inhibitor）及其阴性对照，转染PC3细胞，得到稳转细胞株。将上述稳转细胞（5×10 6个）分别接种到高血糖及正常糖裸鼠的皮下，成瘤后连续观察移植瘤的生长。5周后处死裸鼠，剥离瘤体组织，实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）检测miR．301a的表达。结果接种空白PC3细胞后，高血糖组裸鼠瘤体组织miR-301a的表达量是正常组的（30．83±5．42）倍（P〈0．01），且前者最终瘤体体积[（850．46±72．54）mm3]明显比后者瘤体体积[（430．35±49．56）mm3]大（P〈0．01）。在正常组中，过表达miR-301a的移植瘤体积为（925．26±83．43）mm3，明显大于其阴性对照组瘤体（461．25±58．74）mm3（P〈0．01）。在高血糖组中，miR-301a抑制型移植瘤体积为（550．13±55．12）mm3显著小于其阴性对照组的（830．16±64．86）mm3（P〈0．01）。结论高血糖可以通过上调前列腺癌细胞miR-301a的表达，促进肿瘤生长，抑制miR-301a的表达，可以部分阻断高血糖对前列腺癌细胞的促生长作用。

表皮生长因子联合5-氟尿嘧啶对裸鼠胃癌移植瘤的作用

目的 观察表皮生长因子（EGF）联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对胃癌裸鼠移植瘤的疗效,探讨其作用机制.方法 建立裸鼠胃癌SGC7901细胞株移植瘤模型.分为对照组、EGF组、化疗组及EGF＋化疗组.观察比较各组成瘤及肿瘤抑制率,检测各组细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达及肿瘤干细胞标志物CD133阳性细胞比例.结果 EGF＋化疗组肿瘤抑制率明显高于化疗组,肿瘤抑制率分别为70.9％与44.0％,EGF＋化疗组与化疗组肿瘤Ki-67表达分别为（44.58±8.38）％和（35.25±4.67）％,EGF＋化疗组处于增殖期的肿瘤细胞增加,EGF＋化疗组肿瘤干细胞标志物阳性比例明显高于化疗组,分别为（7.34±0.92）％和（4.21±0.65）％.联合治疗组与对照组及化疗组比较差异均有统计学意义（P =0.000、0.039、0.011）.结论 EGF可增强5-Fu对胃癌细胞的敏感性.机制可能与EGF诱导处于静止期肿瘤细胞增殖相关.

表皮生长因子联合顺铂对裸鼠肺癌移植瘤的作用

目的观察表皮生长因子（EGF）联合顺铂（CDDP）对肺癌裸鼠移植瘤的疗效，探讨其作用机制。方法建立裸鼠肺癌A549细胞株移植瘤模型，分为对照组、EGF组、化疗组及EGF＋化疗组。比较各组成瘤及肿瘤抑制率，检测各组细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达及肿瘤干细胞标志物CD133阳性细胞比例。 结果EGF＋化疗组肿瘤抑制率明显高于化疗组，肿瘤抑制率分别为74.7%与48.5%，EGF＋化疗组与化疗组肿瘤Ki-67表达水平分别为（45.38±7.98）%和（34.45±5.43）%，EGF＋化疗组处于增殖期的肿瘤细胞增加，EGF＋化疗组肿瘤干细胞标志物阳性比例明显高于化疗组，分别为（8.52±0.87）%和（4.19±0.56）%。联合治疗组与对照组及化疗组比较差异均有统计学意义（P值分别为0.000、0.031和0.019）。 结论EGF可增强CDDP对肺癌细胞的敏感性，其机制可能与EGF诱导处于静止期肿瘤细胞增殖相关。

兔脂肪肝内VX2移植瘤及炎性假瘤超声造影血流灌注及血管生成的对比研究

目的对比分析脂肪肝内VX2移植瘤、炎性假瘤（IPL）超声造影（CEUS）血流灌注及血管生成的表达情况。方法建立兔脂肪肝内VX2移植瘤、IPL模型。应用QontraXt超声造影定量分析软件分析脂肪肝内vx2移植瘤、IPL血流灌注情况，免疫组化技术检测肿瘤微血管密度（MVD）及血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。结果成功建立兔脂肪肝内VX2移植瘤及IPL结节各20个。兔脂肪肝内VX2移植瘤达峰时间、峰值强度、曲线下面积分别为（24．16±6．58）s、（52．29±13．24）dB、6．09±2．61；炎性假瘤分别为（29．86±6．75）s、（41．36±9．50）dB、3．86±1．00。兔脂肪肝内VX2移植瘤与IPL相比，造影剂达峰时间早，峰值强度及曲线下面积高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。兔脂肪肝内VX2移植瘤MVD计数为45．21±8．80、VEGF表达为4．00±0．86；炎性假瘤分别为21．10±3．31、2．00±0．86。兔脂肪肝内VX2移植瘤与脂肪肝内IPL相比，MVD计数高，VEGF蛋白表达水平高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论兔脂肪肝内VX2移植瘤CEUS灌注效应、MVD计数及VEGF蛋白表达水平均较IPL高。低机械指数超声造影结合QontraXt定量分析，可准确反映脂肪肝背景下良恶性病变的血流灌注情况及恶性肿瘤的血管生成。

冷冻消融后残存肿瘤血管生成的实验研究

目的观察冷冻消融后残存肿瘤组织中微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,探讨肿瘤血管生成的机制及意义。方法建立肺腺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型18只,待肿瘤最大直径达1 cm随机分为3组:对照组、顺铂(DDP)组、冷冻消融组。冷冻消融后第21天处死裸鼠,取出肿瘤组织,免疫组织化学SP法检测肿瘤组织MVD及VEGF表达水平。结果对照组、DDP组、冷冻消融组的肿瘤体积分别为(1.48±0.14)cm3、(1.03±0.12)cm3、(0.99±0.06)cm3(P<0.01);MVD值分别为(21.10±0.86)、(24.70±0.72)、(29.17±0.96)(P<0.01);VEGF阳性表达水平分别为(36.17±1.72)%、(39.00±1.79)%、(50.83±2.14)%(P<0.01)。MVD与VEGF阳性表达之间呈正相关关系(r=0.928,P<0.01)。结论冷冻消融能够有效地控制肿瘤生长,但残存肿瘤内新生血管明显增多,VEGF的高表达对残存肿瘤血管生成起到了重要作用。

基于人源肿瘤组织异种移植模型研究萘普替尼的抗肿瘤药效

目的:以表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor, EGFR)野生型肺腺癌人源肿瘤组织异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)模型为研究对象,探索萘普替尼的抗肿瘤活性。方法:本研究将临床手术切除的新鲜EGFR野生型肺腺癌组织经无菌条件处理后移植到高免疫缺陷小鼠的皮下。并将第一代PDX模型(F1)肿瘤组织在裸鼠体内传代~第4代(F4),分别将F1~F4代裸鼠的肿瘤组织进行HE染色和免疫组织化学检测,验证人源肿瘤组织在裸鼠体内传代过程中组织结构和生物活性表达的稳定性。将F4代EGFR野生型肺腺PDX模型小鼠随机分为模型组、阿法替尼、萘普替尼-LD、萘普替尼-HD组,分别连续灌胃(ig)给予生理盐水、阿法替尼10 mg·kg^-1、萘普替尼0.7和2.1 mg·kg^-1 28 d,qd。每周2次测量体重、肿瘤体积,计算相对肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线。给药结束后脱颈椎处死各组小鼠,摘取肿瘤组织,称量肿瘤湿重,计算肿瘤湿重抑制率。结果:F1~F4代的肺腺癌PDX模型的肿瘤组织分别进行HE染色及IHC检测,肿瘤组织中细胞异形性明显,并且出现病理性核分裂现象和局部组织的坏死,免疫组化中TTF-1,CK7,NAPsina IHC检测均呈阳性反应,证明了人源肿瘤组织在免疫缺陷小鼠体内稳定遗传,肺腺癌PDX模型建立成功。药效实验结果显示,阿法替尼、萘普替尼-LD、萘普替尼-HD组肿瘤体积生长均显著低于模型组,给药28 d后,阿法替尼、萘普替尼-HD组,萘普替尼-LD组的相对肿瘤增殖率均低于40%,同时连续给药28 d中实验组体重与模型组比较无显著差异。连续给药28 d后摘取肿瘤称重,并计算肿瘤湿重抑制率,阿法替尼、萘普替尼-LD、萘普替尼-HD组分别为(69.26±13.82)%,(38.98±42.64)%,(65.85±20.43)%,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:萘普替尼对EGFR野生型肺腺癌PDX模型在2.1 mg·kg^-1给药剂量即可产生与进口药物阿法替尼10 mg·kg^-1剂量相同的抗肿瘤药效,且用药期间未产生对小鼠的毒性作用,具有较好的临床应用前景。

微小RNA-200a在前列腺癌组织的表达及临床意义

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-200a在前列腺癌组织中的表达及与临床参数的相关性,并在体内研究miR-200a对裸鼠移植瘤生长的影响及机制。方法应用荧光原位杂交(FISH)技术检测2018年1月至2019年8月在徐州医科大学附属医院接受手术切除的54例经病理证实的前列腺癌的组织标本及前列腺增生组织标本中miR-200a的表达,并分析与病理分级、Gleason评分、前列腺特异抗原(PSA)水平、年龄之间的相关性;建立小鼠皮下移植瘤模型(购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司),分3组:转染miR-200a高表达质粒的DU145细胞组、转染表达miR-200a+特异性核基质结合区结合蛋白1(SATB1)的DU145细胞质粒组、未转染的DU145细胞组,取0.2 ml细胞悬液接种于小鼠右后臀部皮下,每隔5 d测量皮下移植瘤体积,绘制裸鼠移植瘤生长曲线,采用χ^2检验及t检验,分析3组移植瘤体积的统计学差异;免疫组织化学和蛋白质印迹法(Western blot)法检测移植瘤SATB1的表达变化。多样本间比较采用单因素方差分析,组间比较采用t检验。结果miR-200a在前列腺癌组织中的阳性率为27.8%(15/54),在前列腺增生组织中的阳性率为90.0%(9/10),差异有统计学意义(χ^2=11.409,P<0.05),且前列腺癌组织中miR-200a表达强度与前列腺癌的病理分级和临床分期及转移呈负相关,接种细胞后,对照组的移植瘤的SATB1的表达量高于miR-200a高表达组,转染miR-200a高表达质粒组的移植瘤最终体积为(615.39±31.05)mm^3,而未转染的DU145细胞组瘤体体积为(1489.09±192.54)mm^3,差异有统计学意义(t=7.759,P<0.05),说明在体内实验裸鼠皮下成瘤中miR-200a能够显著抑制前列腺癌裸鼠移植瘤的生长,且免疫组织化学实验结果提示miR-200a高表达组和miR-200a+SATB1共表达组的SATB1表达较未转染组低,表明miR-200a可以抑制SATB1蛋白表达,亦表明SATB1是miR-200a的靶基因。结论miR-200a在前列腺癌组织中呈低表达,与前列腺癌的临床进展及转移相关,且miR-200a能够下调SATB1的表达,抑制肿瘤生长。

腺样囊性癌TrkC差异表达的PDX模型的建立与鉴定

目的:建立并鉴定腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)关于原肌球蛋白受体激酶C(trypomyosin-receptor kinase C,Trk C)差异表达的人源肿瘤异种移植模型(patient-derived tumor xenograft,PDX)。方法:收集北京同仁医院头颈外科收治的腺样囊性癌患者的新鲜肿瘤组织,皮下接种至免疫缺陷鼠体内,并不断传代至新一批的小鼠体内直至肿瘤稳定生长。分析患者ACC肿瘤组织在免疫缺陷动物体内自然生长状态下的组织病理特征。结果:本次实验共收集ACC标本10例,其中5例成功建立PDX模型,3例完成鉴定。建立的PDX模型病理形态和组织结构与患者肿瘤组织保持一致;3例PDX模型Trk C表达呈现不同的特点。结论:PDX模型可以很好地保留患者的肿瘤异质性,有助于深入研究ACC发病机理,为以Trk C为靶点的临床前药物筛选提供动物模型。