敲减辅酶Q10B表达对裸鼠食管鳞癌皮下移植瘤细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的探讨敲减辅酶Q10B(COQ10B)表达对裸鼠食管鳞状细胞癌(鳞癌)皮下移植瘤细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法利用慢病毒转染技术将COQ10B的干扰慢病毒及其阴性对照转染至食管鳞癌细胞(KYSE150细胞)中,构建敲减COQ10B表达的KYSE150细胞(sh-COQ10B组)和阴性对照KYSE150细胞(sh-NC组)。选择雌性BALB/c裸鼠20只,随机分入sh-COQ10B组和sh-NC组各10只,分别于裸鼠右前肩胛处皮下接种转染sh-COQ10B和sh-NC的KYSE150细胞,以此构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察接种后不同时间皮下移植瘤生长情况并测量瘤体的体积和质量。接种第26天实验结束后取瘤体组织,采用HE、免疫组化、TUNEL染色法观察裸鼠皮下移植瘤中细胞增殖和凋亡的情况,以Westernblotting法检测移植瘤中EMT相关蛋白(E-cadherin和Vimentin)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达。结果与sh-NC组比较,sh-COQ10B组中COQ10B蛋白表达量低(P<0.05);皮下移植瘤模型构建成功且裸鼠均无死亡。sh-COQ10B组移植后不同时间瘤体体积和质量均小于sh-NC组(P均<0.05)。与sh-NC组比较,sh-COQ10B组肿瘤细胞凋亡率高,瘤体组织内Bcl-2、Vimentin蛋白表达低,Bax、E-cadherin表达高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论敲减COQ10B表达可抑制裸鼠食管鳞癌皮下移植瘤细胞增殖和EMT的发生,促进肿瘤细胞凋亡。

Stathmin siRNA抑制人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长并诱导细胞凋亡

目的:探讨微管解聚蛋白stathmin对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长和细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:将0.1 mL SGC-7901细胞悬液(5×1010/L)接种于裸鼠背部一侧皮下,建立人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:PBS组(PBS治疗)、对照siRNA组(接种对照siRNA,终浓度为100 nmol/L)和stathmin siRNA组(接种stathmin siRNA,终浓度为100 nmol/L),治疗方式均为腹腔注射。连续2周观察荷瘤裸鼠的生长情况,免疫组织化学方法检测增殖抗原Ki-67的表达,采用TUNEL研究肿瘤组织中细胞的凋亡,Western blotting检测裸鼠肿瘤组织中stathmin、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:Stathmin siRNA能明显抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),stathmin siRNA组中裸鼠移植瘤的重量明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。免疫组化结果表明,stathmin siRNA组中Ki-67的增殖指数明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。TUNEL结果显示,stathmin siRNA组的凋亡细胞数显著高于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。Western blotting结果表明,与PBS组和对照siRNA组相比,stathmin siRNA组中stathmin和Bcl-2蛋白的表达显著下调,而Bax蛋白表达明显上升(均P<0.05)。结论:Stathmin在胃癌细胞增殖和细胞凋亡的调控中发挥重要作用,本研究有望为胃癌分子靶向治疗提供理论依据。

圣草酚通过miR-128-3p/MAPK轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的圣草酚是一种重要的类黄酮,普遍存在于植物界,但少有对圣草酚的抗癌活性的报道。该研究旨在探究其对人乳腺癌(breast cancer,BC)的抗癌潜力及可能的机制。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7和人乳腺上皮细胞FR2,通过MTT法检测圣草酚诱导的初始细胞毒性。再次培养MCF-7细胞,MTT法和集落形成实验评估圣草酚对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞术评估圣草酚对MCF-7细胞凋亡和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)的作用;RT-qPCR和Western Blot法检测miR-128-3p和MAPK相关基因(p38 MAPK和HSP27)在圣草酚发挥抗癌功能中的作用。裸鼠体内异种移植模型中分析圣草酚对肿瘤生长的作用,TUNEL法检测圣草酚对细胞凋亡的影响。结果当圣草酚浓度超过12.5μmol·L^(-1)时,MCF-7细胞活力随着圣草酚浓度的增高而逐渐降低(P<0.05);圣草酚干预后,MCF-7细胞活力、集落形成数量和MMP均下调,细胞凋亡率增高(P<0.05);细胞中miR-128-3p水平增高,p38 MAPK和HSP27磷酸化水平均降低(P<0.05)。转染miR-128-3p抑制物在一定程度上可以逆转圣草酚对MCF-7细胞的影响(P<0.05);在转染miR-128-3p抑制物的基础上添加MAPK通路抑制剂可以削弱这种逆转作用(P<0.05)。此外,裸鼠体内异种移植模型实验证明了圣草酚可呈剂量依赖性降低裸鼠肿瘤组织生长,促进细胞凋亡(P<0.05)。结论圣草酚可有效抑制人乳腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,这可能与其调控miR-128-3p/MAPK轴有关。

天花粉蛋白抑制乳腺癌生长的实验研究

目的探讨天花粉蛋白(TCS)对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞及乳腺癌裸鼠移植瘤的影响。方法四唑盐比色法(MTT)检测TCS处理前后细胞的增殖情况;流式细胞术(FCM)检测TCS处理前后细胞周期变化和凋亡率;将MDA-MB-231细胞接种于裸鼠,成瘤后分为对照组、TCS组和盐水组。检测各组裸鼠移植瘤体积、瘤重和肝、肾功能、血常规变化。结果随着TCS作用时间延长、浓度增大、MDA-MB-231和MCF-7细胞生长受到明显抑制;TCS处理后细胞阻滞于G0/G1期,并可检测到凋亡峰;TCS组裸鼠移植瘤体积和瘤重较对照组明显缩小,TCS对荷瘤裸鼠肾功能、血常规无明显影响,可引起谷丙转氨酶轻度升高。结论TCS可抑制MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞增殖和乳腺癌裸鼠移植瘤生长。

三氧化二砷对肝癌裸鼠移植瘤模型作用的实验研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡以及对骨髓抑制等作用。方法 :建立肝癌裸鼠移植瘤模型 ,应用 TU NEL 法观察不同浓度的 As2 O3对裸鼠移植瘤凋亡指数 (AI)的影响 ;应用免疫组化 SABC法检测不同浓度的 As2 O3对增殖细胞核抗原阳性细胞指数 (PI)的影响 ;检测移植瘤裸鼠的 WBC并进行骨髓涂片检查。结果 :经 As2 O3治疗的移植瘤裸鼠的骨髓有核细胞增生活跃 ,粒红比例正常 ,巨核细胞多见 ;低、中浓度 As2 O3治疗裸鼠移植瘤的 AI高于对照组 (P <0 .0 1和 P <0 .0 5 ) ;高浓度组 AI与对照组比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。低、中浓度组 PI低于对照组 (P <0 .0 1) ;高浓度组 PI与对照组比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :As2 O3通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡而达到其抗肝癌的效果 ,As2 O3对移植瘤裸鼠骨髓无抑制作用。

汉黄芩素经PTEN/PI3K/AKT信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨汉黄芩素对乳腺癌细胞mcf-7与裸鼠移植瘤的影响及其可能涉及的分子机制。方法采用CCK-8检测不同浓度(0、20、50、100μmol/L)汉黄芩素对乳腺癌细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测汉黄芩素对乳腺癌细胞周期分布和凋亡率的影响;运用转录组测序分析汉黄芩素可能影响的信号通路;运用Western blot检测汉黄芩素对相关蛋白的影响;此外,通过裸鼠移植瘤模型的体内实验探究汉黄芩素对裸鼠移植瘤的影响。结果与对照组相比,汉黄芩素可以通过抑制乳腺癌细胞的增殖能力诱导乳腺癌细胞周期阻滞,并且诱导其凋亡,呈时间和浓度依赖性;同时,汉黄芩素处理mcf-7细胞48 h后,增殖标志性蛋白PCNA的表达水平降低,Cleaved-Caspase3蛋白表达水平逐渐升高,Caspase-3蛋白表达水平逐渐降低;此外,汉黄芩素还可以调节PTEN/PI3K/AKT信号通路,抑癌蛋白PTEN表达水平随着浓度升高逐渐增加,p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平随着浓度升高降低;同时,体内实验初步显示汉黄芩素可以抑制mcf-7裸鼠移植瘤的生长。结论汉黄芩素对乳腺癌细胞系mcf-7的增殖具有抑制作用,并且诱导其凋亡,其机制可能与PTEN/PI3K/AKT信号轴的调节有关,为汉黄芩素的抗肿瘤活性提供新的基础。

皖南蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠体内抑制作用的研究

目的:研究皖南蝮蛇毒抑瘤组分Ⅰ(Agkis-trodon halys venom antitumor component Ⅰ,AHVAC-Ⅰ)对人胃癌细胞SGC-7901荷瘤鼠的体内抑制作用及瘤细胞增殖活性变化,并初步探讨其作用机制。方法:取生长状态良好的浓度为1×107个/mL的SGC-7901人胃癌细胞悬液0.1mL接种于裸小鼠右侧腋窝皮下,待其成瘤后随机分为模型组、紫杉醇阳性对照组、AH-VAC-Ⅰ高、中、低剂量组,隔日连续给药5次,定期观察肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,HE染色观察瘤体形态学变化,免疫组化SP法检测Ki-67增殖指数,原位末端标记技术(TUNEL)法检测细胞凋亡指数。结果:AHVAC-Ⅰ在1.0mg/kg剂量时对SGC-7901细胞有抑制作用,抑瘤率达42.2%;在3.0mg/kg剂量时有显著抑制作用,抑瘤率达78.5%。实验组肿瘤内Ki-67阳性细胞数量下降,凋亡细胞明显增多。结论:AHVAC-Ⅰ能明显抑制裸鼠体内SGC-7901人胃癌细胞的生长,其作用机制可能与诱导胃癌细胞发生凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。

花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应

目的研究花青素对肺癌细胞NCI-H460的体内外抗肿瘤效应。方法采用细胞记数和台盼蓝拒染法观察对细胞增殖和活力的影响;用MTT比色分析法测定细胞生长抑制率,计算出IC50值;DNA琼脂糖凝胶电泳测细胞的凋亡;利用裸鼠肺癌细胞移植瘤模型观察花青素对裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果花青素可以使NCI-H460细胞的活力明显下降,对NCI-H460细胞具有抑制作用,并有时间和剂量依赖性,IC50值为90.8μg/ml;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带;花青素对裸鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用。结论花青素能明显抑制NCI-H460细胞的增殖、诱导细胞凋亡和抑制裸鼠肿瘤的生长。

肿瘤抑素抗肿瘤相关肽对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤作用的研究

目的:研究肿瘤抑素(tumstatin)185～203位氨基酸(19肽)对人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠移植瘤生长抑制和细胞凋亡的影响。方法:建立人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠移植瘤模型,19肽治疗3周后,处死动物剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率,利用TUNEL法研究19肽对卵巢癌细胞生长和凋亡的影响。结果:肿瘤抑素19肽未见明显毒副反应,抑瘤率可达36.47%,肿瘤细胞有明显的凋亡,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肿瘤抑素19肽可有效地抑制裸鼠卵巢癌细胞SKOV3的生长,具有显著的促细胞凋亡作用。

去甲斑蝥素抑制人脑胶质瘤细胞增殖的体内外研究

目的研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体内外对人脑胶质瘤细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和去甲斑蝥素6个剂量组,MTT法检测NCTD对人脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;建立SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组、顺铂阳性对照组以及NCTD 3个剂量组,腹腔注射给药12 d后,取血检测血常规及肝肾功能;处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 NCTD 6个剂量组显著抑制SHG-44细胞的增殖,且呈时间和剂量依耐性;并提高SHG-44细胞的凋亡率;NCTD 3个剂量组可抑制SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤的生长,对移植瘤裸鼠血常规及肝肾功能无明显影响。结论 NCTD体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。

原花青素对人胆管癌细胞QBC939抑制的体内外研究

目的研究原花青素(PC)体内外对人胆囊癌细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和PC组。MTT法检测PC对人胆囊癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;建立QBC939细胞裸鼠异种移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、5-Fu阳性对照组及PC 3个剂量组,每日腹腔注射给药,每隔3 d测肿瘤大小;12 d后,处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 PC 3个剂量组显著抑制QBC939细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性;将细胞周期阻滞在S期,并诱导QBC939细胞凋亡;PC可抑制QBC939细胞裸鼠异种移植瘤的生长。结论 PC体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。

杨梅素对肝癌细胞Bel-7402裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 研究杨梅素（Myr）体内外对人肝癌Bel-7402细胞增殖、凋亡及机制的影响。方法 体外培养人肝癌Bel-7402细胞,MTT和SRB法检测细胞增殖抑制率;采用25只SPF级BALB/C-nu裸鼠建立Bel-7402细胞裸鼠异种移植瘤模型,分为5组,对照组,5-氟尿嘧啶（5-Fu,25 mg/kg）阳性对照组以及Myr（20、40、80 mg/kg）三个剂量组。腹腔注射给药3周后,处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡;FACS检测肿瘤组织细胞周期;免疫组织化学法检测Bax和Bcl-2含量。结果MTT和SRB法检测显示,Myr可以抑制Bel-7402细胞体外增殖并呈剂量依赖。腹腔注射给药3周后,Myr各剂量组瘤质量与模型组比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;Myr体各剂量组Bel-7402细胞凋亡率与对照组比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）,Myr将细胞周期阻滞在G2-M期。Myr可以促进Bax蛋白表达（P〈0.05或P〈0.01）,抑制Bcl-2蛋白表达（P〈0.05或P〈0.01）。结论 杨梅素可抑制Bel-7402细胞的增殖,诱导其凋亡,其凋亡机制涉及Bcl-2家族。

维胺酸对体外转化人支气管上皮细胞及体内构建人支气管上皮组织的抑制作用

癌前改变是肿瘤演变过程中的关键阶段。许多研究显示维甲类化合物对动物肿瘤及体外恶性细胞系具有抑制作用,但尚未见其对肺癌前病变作用的实验室研究报道。人类肺癌的绝大部分起源于支气管上皮,为研究维胺酸对体外转化人支气管上皮M细胞系以及在大鼠气管构建后移植到裸鼠体内生长的具有癌前病变特点的人支气管上皮组织的抑制作用,采用上皮细胞无血清培养技术,人支气管上皮组织大鼠气管内构建/裸鼠皮下移植生长技术,流式细胞学分析,免疫组化、凋亡细胞原位末端标记以及病理学检查等研究方法发现,维胺酸可抑制体外培养的转化人支气管上皮细胞的增殖,使S期细胞比例下降,以及细胞增殖标志Ki-67、mpm-2阳性反应细胞比例下降;明显诱导细胞凋亡。裸鼠腹腔注射给予维胺酸也可使大鼠气管内构建后移植到裸鼠体内生长的癌前期人支气管上皮组织的生长率明显降低,病变程度明显减轻;同样可以诱导细胞凋亡。研究结果提示,维胺酸对体外培养的转化人支气管上皮细胞系及大鼠气管构建/裸鼠体内移植生长的人支气管上皮组织均有明显的抑制作用,是有希望的肺癌化学预防药物。

珍香胶囊抗人宫颈癌作用及其机制研究

目的探讨珍香胶囊对人宫颈癌的抗癌作用及其机制。方法建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,分别应用TUNEL法和免疫组化SABC法观察不同浓度的珍香胶囊对裸鼠移植瘤凋亡指数(AI)增殖细胞核抗原阳性细胞指数(PI)的影响。结果经珍香胶囊治疗后,高浓度组和中浓度组AI分别为(2．83±1．52)％和(2．50±1．43)％均明显高于阴性对照组的(0．78±0．31)％(P＜0．01,P＜0．05),而低浓度组AI为(0．87±0．27)％与对照组比较,差异无显著性(P＞0．05)；高浓度组和中浓度组PI分别为(63．58±9．31)％和(68．83±9．04)％均低于阴性对照组(84．42±9．25)％(P＜0．01),而低浓度组PI为(79．25±8．53)％与对照组比较,差异无显著性(P＞0．05)。结论珍香胶囊通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡而达到其抗人宫颈癌作用。

整合素连接激酶在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其对KYSE-150细胞增殖、凋亡及裸鼠移植瘤生长的影响

目的:分析整合素连接激酶(ILK)基因在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及其与患者临床病理特征之间的关系,探讨其对KYSE-150细胞增殖、凋亡和裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:选取2012年1月至2014年12月手术切除并经病理证实的75例ESCC患者的癌组织和其配对的癌旁组织标本,用组织芯片技术及免疫组织化学染色法检测ESCC组织和癌旁组织中ILK的表达情况;qPCR法检测ESCC细胞ECA109、TE-1、EC9706、KYSE-150中ILK mRNA的表达,选用ILK表达最高的KYSE-150细胞进行后续细胞功能学研究。使用ILK干扰慢病毒感染KYSE-150细胞下调ILK的表达,qPCR和WB法检测ILK基因敲降效率;MTT实验、克隆形成实验和FACS检测干扰ILK表达对KYSE-150细胞增殖能力和凋亡水平的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测干扰ILK对KYSE-150细胞移植瘤生长的影响。结果:ESCC组织中ILK蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),且ILK高表达与淋巴结转移有关联(P<0.05)。ILK干扰慢病毒感染的KYSE-150细胞中ILK mRNA表达明显受到抑制(P<0.05),ILK蛋白水平表达下调,以上结果提示ILK敲降成功。与感染阴性对照病毒的KYSE-150细胞相比,ILK干扰慢病毒感染的KYSE-150细胞的增殖能力、克隆形成数均显著降低(均P<0.05),但细胞凋亡率升高(P<0.05)。与对照组相比,干预组裸鼠移植瘤生长缓慢,移植瘤的质量及体积均较小(均P<0.05)。结论:ESCC组织中ILK的表达高于癌旁组织,且ILK高表达与患者发生淋巴结转移有关联;抑制ILK基因可导致KYSE-150细胞增殖能力降低,促进细胞凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长。

环靶明在体内及体外可抑制人胶质母细胞瘤A172细胞的生长

目的研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)在体内及体外对人胶质母细胞瘤A172细胞生长的影响。方法用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测环靶明对A172细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测环靶明处理前后Smoothened蛋白(Smoothened,SMO)、GLI家族锌指蛋白1(GLI-Kruppel family member 1,GLI1)在A172中的mRNA表达及变化,免疫印迹法(Western Blot)检测环靶明处理前后SMO、GLI1在A172中的蛋白表达及变化;环靶明对A172裸鼠皮下移植瘤生长的影响。结果环靶明抑制A172细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性;经不同浓度的环靶明作用48 h后A172细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P<0.01),并存剂量依赖性。SMO、GLI1的mRNA和蛋白均在A172中表达,环靶明下调A172的SMO、GLI1表达。环靶明可抑制A172裸鼠皮下移植瘤的生长。结论在体内及体外阻断Hedgehog信号通路可抑制人胶质母细胞瘤细胞A172的生长。

抗癌生物活性肽对实验性胃癌PCNA、caspase-8基因表达的影响

目的:探讨抗癌生物活性肽作用于荷胃癌裸鼠后,对其增殖及凋亡相关基因表达变化的影响。方法:将裸鼠接种胃癌MGC-803细胞后使之致瘤。实验随机分为3组,对照组11只,脾肽实验组12只,肝肽实验组11只;分别尾静脉注射生理盐水0.4mL、脾肽0.4mL(0.15mg/mL)、肝肽0.4mL(0.05mg/mL)。连续处理35d,停药4d后处死裸鼠,取肿瘤,以4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,4μm切片。应用免疫组化SABC法检测PCNA、caspase-8蛋白在实验组与对照组中的表达情况。结果:PCNA蛋白在对照组(NS组)肿瘤中阳性表达较强,在P组、G组裸鼠肿瘤中PCNA蛋白的表达均比对照组的表达弱,且有显著性差异(P<0.01);caspas-8蛋白在对照组(NS组)肿瘤中阳性表达较弱,P、G组裸鼠肿瘤中caspas-8蛋白的表达均比对照组表达强,且有显著性差异(P<0.01)。结论:抗癌生物活性肽能降低胃癌移植瘤细胞的增殖活性,并能促进其凋亡。

丙戊酸长期给药对抑制PC3细胞系裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨丙戊酸(VPA)长期给药抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的效应。方法建立PC3细胞裸鼠移植瘤模型,实验组给予含0.4%丙戊酸钠饮用水,对照组给予纯的饮用水,给药4周,每隔2 d测量肿瘤体积1次。取裸鼠移植瘤组织,免疫组化检测p21WAF/CIP和Ki67,Western blot检测p21WAF/CIP和乙酰化H3(Ac-H3)蛋白的表达,Tunnel法检测肿瘤细胞的凋亡。结果对照组肿瘤体积大于实验组,肿瘤生长抑制率为77.27%。实验组p21WAF/CIP表达强于对照组(P<0.01),而Ki67表达弱于对照组。实验组Ac-H3表达增加(P<0.01)。实验组平均每个视野中凋亡细胞数高于对照组(P<0.01)。结论VPA长期给药对PC3细胞移植瘤生长抑制作用明显,该作用是通过抑制细胞增殖、诱导凋亡实现的。

靶向sKDR对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察靶向可溶性血管内皮生长因子受体(sKDR)对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨KDR基因作为膀胱癌基因治疗靶点的可行性和有效性。方法:将人膀胱癌细胞T24分为sKDR转染组、未转染组和对照组,构建靶向sKDR真核分泌型表达质粒PCI-KDR,经LipofctamineTM2000转染T24细胞,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测能否与VEGF结合,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测稳定表达sKDR的T24细胞KDR基因表达水平,噻唑蓝比色法(MTT)检测sKDR对T24细胞增殖的作用,转移酶末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率,裸鼠皮下移植稳定表达sKDR的T24细胞,观察其成瘤性的改变。结果:与未转染组比较,转染组稳定表达sKDR的T24细胞其KDRmRNA表达水平升高了4.16倍,细胞增殖抑制率增加了55.1%(P<0.01),细胞增殖速度明显缓慢并出现显著的凋亡峰。在裸鼠体内转染组与未转染组上述各项指标比较差异有显著性(P<0.01),转染组肿瘤生长明显缓慢,成瘤能力受抑。结论:靶向sKDR能够在很大程度上抑制膀胱癌T24细胞增殖并促进其凋亡。

茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用

目的探讨茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用。方法(1)取对数生长期SMMC-7721细胞,给予0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL和600μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,检测SMMC-7721细胞的存活率;给予0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,观察SMMC-7721细胞形态学,同时行Hoechst染色后于倒置荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并应用流式细胞术检测细胞的凋亡率。(2)取24只裸鼠,皮下注射SMMC-7721细胞建立移植性肝癌模型。待肿瘤体积达到100 mm^3时,将裸鼠随机分为模型组和茅苍术麸炒品低、中、高剂量组,每组6只。低、中、高剂量组裸鼠分别每天灌胃0.8 g/kg、1.6 g/kg、3.2 g/kg的茅苍术麸炒品,模型组灌胃等体积的磷酸缓冲盐溶液。14 d后剥取肿瘤组织称质量,计算抑瘤率,并检测肿瘤组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关性X蛋白(Bax)和Survivin的蛋白表达水平。结果(1)100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL和600μg/mL茅苍术麸炒品干预后细胞的存活率均低于0μg/mL,且随浓度增加细胞存活率依次下降(均P<0.05)。细胞形态学观察和Hoechst 33258染色可见,不同浓度茅苍术麸炒品干预后,细胞皱缩,并生成凋亡小体。0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL茅苍术麸炒品干预后细胞凋亡率依次升高(均P<0.05)。(2)模型组、茅苍术麸炒品低、中、高剂量组的肿瘤质量、Bcl-2和Survivin蛋白表达水平依次降低(均P<0.05),而抑瘤率、Bax蛋白表达水平均依次升高(均P<0.05)。结论茅苍术麸炒品能抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖并诱导细胞凋亡,同时其能够抑制裸鼠移植瘤的生长,而这可能与其上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。