龙趸石斑鱼肝脏维生素A的形态分布及其对干眼症细胞模型的影响

为探究龙趸石斑鱼肝脏中天然维生素A的形态分布特征及其与合成维生素A对干眼症改善效果的差异,采用水浴皂化法结合反相色谱法测定龙趸石斑鱼肝脏各脂质组分中维生素A含量,并从中性脂中分离得到天然维生素A棕榈酸酯含量较高的F3组分,分别研究了F3组分与合成维生素A棕榈酸酯对苯扎氯铵诱导的干眼症细胞模型的影响及二者的差异。实验设置角膜上皮细胞正常组(NC)、干眼症细胞模型组(MC)、F3实验组[低剂量组(LF3)、中剂量组(MF3)、高剂量组(HF3)]及合成维生素A棕榈酸酯标准品对照组[低剂量组(LVAP)、中剂量组(MVAP)、高剂量组(HVAP)]。采用CC K-8法检测细胞活性及毒性,采用实时荧光定量法检测细胞内炎症因子(I L-6、I L-1β及TNF-α)的基因表达。结果表明:龙趸石斑鱼肝脏中99.57%的维生素A以结合态形式存在,主要是维生素A棕榈酸酯,且在肝脏中性脂中含量最多。从中性脂中分离纯化得到了含天然维生素A棕榈酸酯的F3组分,当F3组分质量浓度高于286.00 pg/mL时,HC E-T存活率显著下降。F3组分及合成维生素A棕榈酸酯均能显著提高苯扎氯铵诱导的干眼症细胞存活率,降低其凋亡率,且低、中剂量的F3组细胞活力高于高剂量F3组及低、中、高剂量的合成维生素A棕榈酸酯组。在白介素(I L-6)相对表达量中,低、中剂量的F3组及低剂量的合成维生素A棕榈酸酯组显著高于中、高剂量的合成维生素A棕榈酸酯组(P<0.05);在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对表达量中,低、中、高剂量的F3组显著低于低剂量合成维生素A棕榈酸酯组(P<0.05)。F3组分及合成维生素A棕榈酸酯均能下调苯扎氯铵诱导的干眼症细胞模型中I L-6及TNF-α的基因表达(P<0.05),缓解干眼病导致的炎症。

去势雄兔干眼病模型角膜上皮细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 探讨去势雄兔干眼病模型角膜上皮细胞凋亡及相关基因表达与组织损伤的关系。方法 制作 6只去势雄兔干眼病模型 ,采用原位末端标记及免疫组织化学方法 ,对模型兔及 6只对照兔角膜上皮细胞中的凋亡细胞及Fas、FasL、Bax和bcl 2等相关基因蛋白的表达进行检测。结果 干眼病模型兔角膜上皮细胞凋亡数为 ( 5 2 3± 2 67)个 /高倍视野 ;对照兔为 ( 0 5 8± 0 13 )个 /高倍视野 (P <0 0 1)。模型兔角膜上皮细胞中 ,Fas、FasL及Bax阳性表达的细胞数均明显高于对照组 (P <0 0 1) ,与凋亡细胞数呈正相关 (r=0 78,0 82 ,0 76,P <0 0 5 ) ;bcl 2阳性表达的细胞数明显低于对照组 (P <0 0 1) ,与凋亡细胞数呈负相关 (r =-0 72 ,P <0 0 5 )。结论 去势雄兔角膜组织中上皮细胞凋亡可能是导致角膜变薄、干燥 ,进而功能丧失的原因之一 ;Fas、FasL及Bax的增加及bcl 2的减少均与促进细胞凋亡有关。

维生素A缺乏干眼症兔泪腺凋亡及相关基因的表达

目的 探讨维生素A缺乏兔干眼症模型泪腺上皮细胞凋亡及相关基因表达与组织损伤的关系。方法 制作 6只维生素A缺乏兔干眼症模型 ,采用原位末端标记及免疫组织化学方法 ,对模型兔及 6只对照兔泪腺组织上皮细胞中的凋亡细胞及Fas、FasL、Bax和bcl 2等相关基因蛋白的表达进行检测。结果 干眼症模型兔泪腺上皮细胞凋亡数为每高倍视野 (18.17± 5 .33)个 ,对照兔为每高倍视野 (3.5 6± 1.18)个 ,P <0 .0 0 1。模型兔泪腺导管及腺泡上皮细胞中 ,Fas、FasL及Bax阳性表达的细胞数 [每 10 0 0个细胞(416 .33± 112 .0 9)个、(45 8.6 7± 12 0 .5 2 )个及 (32 8.74± 89.0 8)个 ]均明显高于对照组 [每10 0 0个细胞阳性数为 (98.83± 5 1.2 3)个、(12 6 .88± 5 4 .0 9)个及 (87.75± 4 3.33)个 ],P <0 .0 0 1,与凋亡细胞数呈正相关 (r =0 .86 ,0 .91,0 .88;P <0 .0 1)。bcl 2阳性表达的细胞数[每 10 0 0个细胞阳性数为 (113.37± 72 .4 5 )个 ],明显低于对照组 [每 10 0 0个细胞阳性数为 (396 .6 7± 98.73)个 ],P <0 .0 0 1,与凋亡细胞数呈负相关 (r =- 0 .73,P <0 .0 5 )。结论 维生素A缺乏兔泪腺组织中上皮细胞凋亡可能是导致腺体破坏进而功能丧失的原因之一 ;Fas、FasL及Bax增加及bcl 2的减少均与促进细胞?

去势雄兔干眼模型泪液分泌和泪膜稳定性的改变及局部雄激素治疗效果观察

目的观察去势雄兔泪液分泌、泪膜稳定性改变和结膜、泪腺病理组织学变化以及局部应用雄激素的治疗效果。方法健康成年雄兔18只,随机分为正常组、干眼组和治疗组,每组6只。干眼组和治疗组行双侧睾丸及附睾切除制作干眼模型。分别于去势前和去势后1、2、3、4、6、8、12周检测各组Shirmer试验、泪膜破裂时间、虎红染色;测定去势前后血清睾酮含量;同时应用光镜进行结膜、泪腺的病理组织学观察。治疗组去势后4周给予3%睾酮点双眼。结果实验6周后治疗组泪液分泌增加,泪膜破裂时间延长,与干眼组相比差异有统计学意义(P<0.01)。局部应用睾酮治疗对血清睾酮水平无明显影响(P>0.05)。治疗组泪腺及结膜组织中淋巴细胞浸润明显减少。结论去势后雄兔睾酮水平明显低下是造成干眼的原因之一,局部雄激素治疗对该型干眼有效且对全身雄激素水平无明显影响。

局部环孢霉素A对去势雄兔干眼模型疗效观察

目的观察去势雄兔泪液分泌、泪膜稳定性改变和结膜、泪腺病理组织学变化以及局部应用环孢霉素A的治疗效果。方法健康成年雄兔18只,随机分为正常组、干眼组和治疗组,每组6只。后两组行双侧睾丸及附睾切除制作干眼模型。治疗组去势后4周给予1%环孢霉素A点双眼,分别于去势前和去势后1、2、3、4、6、8、12周检测各组Shirmer试验、泪膜破裂时间、虎红染色;同时应用光镜进行结膜、泪腺的病理组织学观察。结果实验6周后治疗组泪液分泌增加,泪膜破裂时间延长,与干眼组相比有显著性差异(t=9.08,P<0.01;t=6.93,P<0.01)。治疗组泪腺及结膜组织中淋巴细胞浸润明显减少。结论去势后雄兔睾酮水平明显低下是造成干眼的原因之一,局部环孢霉素A治疗对该型干眼有效。

维生素A缺乏兔干眼病模型角膜上皮细胞凋亡及相关蛋白表达的关系

目的探讨维生素A缺乏兔干眼病模型角膜上皮细胞凋亡与相关蛋白表达的关系。方法制作维生素A缺乏兔干眼病模型,采用原位末端标记及免疫组织化学法,对兔模型组及对照组各12只24眼角膜上皮细胞中的凋亡细胞及Fas、FasL、Bax和bcl-2等相关蛋白的表达进行检测。结果兔干眼病模型组每高倍视野角膜上皮细胞凋亡数为4.69±1.06,对照组为0.25±0.13,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组角膜上皮细胞中,每1 000个细胞阳性蛋白表达的细胞数分别为Fas 207.67±56.17、FasL 228.33±61.09、Bax 175.03±43.23,均明显高于对照组Fas 64.45±37.23、FasL68.35±35.88、Bax47.77±29.32(P<0.01),与凋亡细胞数呈正相关(r=0.87,0.94,0.90);bcl-2阳性表达的细胞数为56.19±36.67,明显低于对照组190.83±52.07(P<0.01),与凋亡细胞数呈负相关(r=-0.81)。结论维生素A缺乏兔角膜组织上皮细胞Fas、FasL及Bax增加及bcl-2的减少均可促进细胞凋亡。

干眼症动物模型和药效评价研究进展

干眼症是一种局部或全身多因素引起的泪腺低分泌而导致泪膜异常、眼表上皮干变的常见眼科疾病。开发治疗干眼症新药是眼科药物开发的热点。本文综述了干眼症的实验动物模型和药效评价指标的研究进展,旨在为治疗干眼症新药非临床有效性研究提供思路。

兔泪液生成不足型干眼模型建立及玻璃酸钠治疗效果评价

目的建立兔泪液生成不足型干眼模型,评价玻璃酸钠滴眼液对模型干眼症状的疗效及对泪液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法取18只健康新西兰兔,左眼为实验组,右眼为对照组,左眼手术摘除泪腺、第三眼睑及哈氏腺,右眼不做任何处理。在术前、术后第7天及第14天分别进行SchirmerⅠ实验、泪液蕨样变实验及角膜荧光素染色,检验建模是否成功。建模后第14天将手术实验组随机分为模型组、基础液组及玻璃酸钠组3个组,每组6只兔眼,并开始用药治疗。模型组不做任何治疗;基础液组予以含0.75%NaCl的5 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5)点眼3次/日,每次2滴;玻璃酸钠组予以0.1%玻璃酸钠滴眼液点眼3次/日,每次2滴;各给药组均持续点眼28 d。在给药前及给药后7、14、21和28 d分别进行SchirmerⅠ实验、泪液蕨样变实验及角膜荧光素染色。给药28 d后处死动物,光镜观察角膜病理学改变,免疫组化法测定角膜炎症因子TGF-β1、TNF-α表达。结果术后第14天,与正常对照组相比,手术实验组SchirmerⅠ实验值显著降低(P<0.01);泪液蕨样变实验结晶评级显著升高(P<0.01);荧光素钠染色评分显著升高(P<0.01);提示已成功建立泪液生成不足型干眼模型。用药第28天,与模型组及基础液组相比,玻璃酸钠组SchirmerⅠ实验值显著升高(P<0.05),而泪液结晶评级及角膜荧光染色评分显著降低(P<0.05),角膜上皮组织学结构更接近正常形态,TNF-α含量显著降低(P<0.05),TGF-β1含量显著升高(P<0.05)。结论通过手术摘除兔泪腺、第三眼睑及哈氏腺可成功建立泪液生成不足型干眼模型,玻璃酸钠滴眼液对该干眼模型具有明确治疗效果,并能在一定程度上缓解眼表炎症反应。

去势雄兔干眼症模型泪腺组织NFκB p65亚基及NOS_2表达

目的检测NF-κB p65亚基(NFκB p65)和诱导型一氧化氮合成酶(NOS2)在去势雄兔干眼症模型泪腺组织的表达,探讨其与干眼症发病的关系。方法制作6只去势雄兔干眼症模型,采用免疫组织化学SP方法对模型兔及6只对照兔泪腺组织中NFκB p65及NOS2蛋白的表达进行检测。结果与正常对照组相比,干眼症模型兔泪腺组织NFκB p65、NOS2的表达明显增多(t′=9.38、9.16,P<0.01)。结论去势雄兔干眼症模型泪腺组织中的免疫炎症反应可能是导致干眼症的主要发病机制,NFκB p65和NOS2在这一过程中可能起主要作用。

翼状胬肉术后复发Nomogram预测模型的构建与评估

目的分析甘南少数民族地区翼状胬肉患者术后复发的危险因素,根据结果构建Nomogram预测模型并进行评估。方法以随机整群抽查的方式在甘南少数民族地区选取296例(296眼)经翼状胬肉切除术治疗的患者进行回顾性研究,根据患者术后1年复发情况分为复发组和未复发组。采用单因素及多因素Logistic回归模型分析影响翼状胬肉复发的危险因素。在此基础上构建Nomogram预测模型,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及H-L拟合度曲线以评估模型的区分度及有效性。结果本研究共纳入296例患者,其中术后1年复发者45例,复发率为15.20%。多因素Logistic回归模型分析结果显示,日间户外活动时间较长、内直肌止端距角膜缘距离较短、泪膜破裂时间短、合并干眼症是影响甘南少数民族地区翼状胬肉患者术后复发的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线的曲线下面积为0.901,敏感度、特异度分别为86.67%、88.84%(95%CI为0.826~0.924);H-L拟合度曲线显示拟合度良好(χ^(2)=6.421,P=0.431)。结论日间户外活动时间较长、内直肌止端距角膜缘距离较短、泪膜破裂时间短、合并干眼症是影响甘南少数民族地区翼状胬肉患者术后复发的独立危险因素。据此构建的Nomogram预测模型具有较好的区分度及有效性,可作为临床评估甘南少数民族地区翼状胬肉患者术后复发风险的有效工具。

基于ROY适应模式的护理在干眼症患者中的应用效果

目的:观察基于ROY适应模式的护理在干眼症患者中的应用效果。方法:选取90例干眼症患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组(n=45)和研究组(n=45)。对照组实施常规护理,观察组在对照组基础上实施基于ROY适应模式的护理,比较两组护理前后焦虑[焦虑自评量表(SAS)]评分、应对方式[医学应对方式问卷(MCMQ)]评分、社会支持度[社会支持评定量表(SSRS)]评分和护理满意度。结果:护理后,研究组SAS评分低于对照组,SSRS评分高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组屈服和回避评分均低于对照组,面对评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组护理满意度为97.78%(44/45),高于对照组的82.22%(37/45),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在常规护理基础上实施基于ROY适应模式的护理可提高干眼症患者SSRS评分和护理满意度,降低SAS评分,改善应对方式评分,效果优于单纯常规护理。

摘除主泪腺干眼病鼠泪液功能变化与凋亡相关基因蛋白的表达

目的建立摘除主泪腺干眼病鼠动物模型，探讨动物模型眼表组织凋亡相关基因的表达与眼表干变及组织损伤的关系。方法选择健康成年Wistar大鼠20只，随机分为实验组和正常对照组，每组10只，制作摘除主泪腺干眼病动物模型鼠10只（实验组），于术前和术后3d，1、2、4及8周行SehirmerⅠ试验、泪膜破裂时间检测、角膜上皮荧光素染色检测；采用免疫组织化学方法对10只模型鼠和10只正常对照鼠角膜、结膜上皮细胞及睑板腺腺泡细胞中Bax和Bcl-2等相关基因蛋白的表达进行检测。结果实验组于术后1～2周起SchirmerⅠ试验、泪膜破裂时间明显小于手术前，且随观察时间的延长而更加缩短（P＜0．05），角膜上皮荧光素染色实验后显示阳性。实验组角膜、结膜上皮及睑板腺腺泡细胞中，Bax阳性表达的细胞数[每1000个细胞中（503．47±343．73）、（586．36±296．47）、（436．61±246．96）个]均明显高于对照组[每1000个细胞中阳性数（241．71±130．12）、（311．03±142．33）、（202．16±109．29）个]（P均＜0．05）；Bcl-2阳性表达的细胞数[每1000个细胞中（237．32±87．07）、（236．07±81．24）、（251．79±89．93）个]均明显低于对照组[每1000个细胞中阳性数（474．24±167．62）、（342．81±114．57）、（320．42±153．32）个]（P均＜0．05）。结论摘除主泪腺干眼病鼠角膜、结膜上皮及睑板腺腺泡细胞中均有凋亡的发生，细胞凋亡可能是干眼病鼠眼表组织破坏损伤的原因之一。

维生素A治疗苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的实验研究

目的通过随机对照实验探讨维生素A对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的治疗作用。方法实验研究。选用BALB＆小鼠50只，使用0．25％的苯扎氯铵溶液局部点眼以诱导干眼。在第21天时根据泪膜破裂时间（BUT）、角膜荧光素钠染色、炎症指数等参数选择干眼表现程度相近的小鼠30只（60眼）并随机分为A、B、C三组，每组10只（20眼）。A、B组分别使用5000IU／（g·mD维生素A微乳剂和空白微乳剂滴眼，C组为空白对照组。在治疗的第0、1、3、5、7天检测BUT和角膜上皮荧光素钠染色、眼表炎症程度及基础泪液分泌量。7d治疗结束后取出小鼠眼球，进行HE及过碘酸．希夫（PAS）染色，角蛋白10（K10）免疫荧光标记，以及WesternBlot检测角膜组织中K10表达水平。对数据采用单因素方差分析。结果在药物治疗的第0、1、3、5天各项临床指标差异无统计学意义。治疗第7天时，A、B、C组BUT值分别为（4．20±0．89）s、（3．32±1．01）s和（3．28±0．74）s；其中A组的BUT值较B组和C组长，差异有统计学意义（F=6．825，P=-0．002）。A、B、C组角膜荧光素钠染色评分分别为3．74±1．31、5．47±1．81和5．83±1．54，其中维生素A微乳组较空白微乳组和空白对照组角膜荧光素钠染色分级轻．差异具有统计学意义（F=8．853，P〈0．01）。各组间的角膜炎症指数评分、基础泪液分泌量差异均无统计学意义。组织病理检查示维生素A组与空白微乳组和空白对照组比较，其角膜上皮形态较规整；PAS染色示维生素A组杯状细胞数量更接近正常小鼠。维生素A组的角膜上皮层几乎均不表达K10．而空白微乳组及空白对照组呈阳性表达。Westem Blot检测示维生素A组角膜中的K10水平低于空白微乳组和空白对照组。结论维生素A可以延长苯扎氯铵诱导的干眼小鼠的BUT，降低角膜上皮染色程度，抑制角膜上皮鳞状化生，并能增加结膜杯状细胞数量，有望用于干眼治疗。

多种干眼动物模型建立方法研究进展

干眼症是临床常见的多因素眼表疾病,其发病机制复杂,其中免疫机制至关重要,但目前关于免疫炎症反应中发生的信号传导通路了解甚少,因此,建立合适的动物模型对其机制的研究尤为重要。现有的动物模型可模拟干眼症的多种组织病理特征,但尚无一种模型能准确模拟干眼症频繁发生、逐渐恶化、机制复杂的特点。文章就几种常见干眼症动物模型建立方法及其优缺点进行综述,为研究人员提供参考。

干眼症的动物模型研究进展

干眼症又名角结膜干燥症,是世界范围内主要视力问题之一,是由于眼部和/(或)全身多种因素引起的泪腺分泌少而导致眼睛干涩、眼痒、痛灼热感、分泌物黏稠甚至角结膜病变,影响视力。其病因涉及到遗传和环境因素共同作用。现有的动物模型可以重现干眼症的很多组织学特征,但未有模型能够涵盖人类干眼症的所有症状,尚缺乏合适的动物模型用于干眼症机制研究。本文就几种常见干眼症模型及其特点进行综述,为研究人员选择合适的动物模型提供参考。