重组yEGFP发光酵母细胞检测牛尿中雌激素类药物

用重组人雌激素受体(hER)基因酵母细胞(W303-1A/hER-ERE-yEGFP),分别对成年奶牛和犊牛尿样的雌激素药物残留进行检测测定。该重组酵母细胞是一种发光酵母细胞,其发光度与雌激素化合物具有剂量效应关系。结果显示,成年奶牛尿样中的雌激素类化合物高于犊牛尿样,分别为1.000×10-4和2.518×10-5雌二醇当量,但经统计分析无显著差异(P>0.05)。本研究所建立的方法高效、快速、高通量,可用于牛尿样中雌激素类药物残留分析。

比较两种RAD54启动子调控的全酵母发光细胞对化学诱变原的评价效果

通过分子生物学技术构建2种不同RAD54启动子调控的yEGFP重组报告载体p RAD54-yEGFP和p RAD54S-yEGFP,前者启动子DNA为1.8 kb,后者为0.5 kb,分别转入W303-1A酵母细胞,构建2种启动子调控的发光酵母细胞,用不同化学诱变原作用后,用流式细胞仪和多功能发光仪测定酵母的发光强度。结果发现2种启动子调控的酵母细胞的发光强度均与化学诱变原(甲磺酸甲脂、4-硝基-N-氧化喹啉和5-氟尿嘧啶)有明显的剂量效应关系,但是W303-1A/RAD54-yEGFP剂量效应关系较为明显,产生的最大诱导倍数(5.96、2.19和2.71)明显高于W303-1A/RAD54S-yEGFP所产生的最大诱导倍数(2.53、1.50和1.91),可能与启动子序列中转录因子的数量以及转录因子间协同增效作用有关。同时发现,流式细胞仪测定效果明显优于发光仪测定效果。所以在构建RAD54启动子调控重组酵母细胞筛选诱变时,选用全启动子序列效果较好。