番鸭肝细胞外泌体miRNA表达谱的研究

为探究育雏阶段番鸭肝脏中外泌体携带miRNA的种类及其涉及的功能,试验采集3周龄雏番鸭肝脏制备原代肝细胞,培养3 d,离心取上清,试剂盒法分离肝细胞外泌体,电子显微镜观察外泌体形态和粒径,免疫印迹法检测外泌体CD81蛋白表达丰度。提取外泌体总RNA,miRNA测序后进行注释、GO和KEGG功能富集分析。结果显示:雏番鸭肝细胞外泌体为直径30~100 nm的囊泡小体,呈“杯托”状;标志性蛋白CD81免疫印迹结果呈阳性表达;miRNA测序共获得了59个新注释miRNA,GO功能富集结果主要涉及单有机体过程、刺激应答、多细胞有机体过程、定位、细胞器、胞外区绑定分子功能等;KGEE功能富集结果显示主要涉及淀粉和蔗糖代谢、MAPK信号通路、氨基糖和核苷酸糖代谢、肌醇磷酸代谢和磷脂酰肌醇信号传导系统等通路。研究表明番鸭肝脏外泌中的miRNA种类丰富,涉及多种生理功能。

饲粮添加艾叶粉对青年期蛋鸭生长性能、抗氧化功能及免疫性能的影响

试验旨在研究饲粮添加不同水平艾叶粉对青年期蛋鸭生长性能、抗氧化功能及免疫性能的影响。试验选取4周龄健康蛋鸭120只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复5只。对照组每天饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础日粮基础上分别添加2%、4%和6%的艾叶粉,预试期7 d,正式期35 d。结果显示:(1)与对照组相比,试验Ⅱ、Ⅲ组末重、总增重和平均日增重(ADG)显著升高(P<0.05),试验组料重比(F/G)显著降低(P<0.05)。(2)与对照组相比,试验Ⅰ、Ⅱ组血清白蛋白(ALB)含量显著提高(P<0.05)、血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),试验Ⅱ组血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性显著提高(P<0.05);试验Ⅰ组血清IgG含量显著提高(P<0.05),试验Ⅱ组血清IgA含量显著提高(P<0.05),试验Ⅰ、Ⅱ组血清IgM含量显著提高(P<0.05),其中试验Ⅱ组IgM含量最高。研究表明,在饲粮添加4%艾叶粉可改善青年期蛋鸭的生长发育、抗氧化功能以及免疫性能。

不同毒力鸭肝炎病毒对雏鸭肝脏抗氧化功能的影响

用不同毒力株鸭肝炎病毒感染雏鸭复制病理模型 ,研究雏鸭感染病毒性肝炎后肝脏抗氧化功能的变化。将 16 0只刚出壳的北京鸭 ,经 1周适应性饲养后 ,随机均分为对照组、弱毒株组、中毒株组和强毒株组。在攻毒组的每只雏鸭背部分别肌肉注射 0 .3m L弱毒株、中毒株和强毒株的稀释液。攻毒后 1、3、5、7d剖杀雏鸭 ,采集其肝组织 ,测定鸭肝组织中过氧化氢酶 (CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)及超氧化物歧化酶 (SOD)的含量。结果表明 ,中毒组和强毒组的 CAT含量在攻毒后 1d便显著或极显著低于对照组 ,但弱毒株组在攻毒后的 5 d才显著低于对照组。攻毒后1d,雏鸭肝组织中 SOD含量开始下降 ,3d后显著或极显著低于对照组。攻毒后 5 d,各攻毒组雏鸭肝组织中的 GSH-Px的含量亦显著降低。这些抗氧化酶含量的降低 ,说明感染鸭肝炎病毒后雏鸭清除自由基的能力下降 ,自由基参与了鸭病毒性肝炎的发病过程。

鸭传染性浆膜炎疫苗的研究

用从浙江省分离鉴定的鸭疫里氏杆菌RA-J、RA-L菌株研制疫苗，采用改进的液体培养和鸭胚培养工艺，抗原含量分别达120-186亿CFU／ml和280-310CFU／ml，免疫0.5ml/只，2MLD强毒攻击，平均保护率达94.2％（48／52），免疫后第7天保护率达80％（16／20），10天达93.8％（15／16），疫苗在4℃-8℃条件下保存7个半月和1年的保护率达90％和85％。野外扩大试验和临床推广试用236万羽份表明，效果良好。

DHV对雏鸭肝组织中SOD和GSH-Px活性的影响

用不同毒力株鸭肝炎病毒人工感染雏鸭 ,分别于 1、3、5、7天测定雏鸭肝组织中超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH_Px)的活性 ,研究SOD和GSH_Px在鸭病毒性肝炎 (DVH)发病过程中的作用。结果表明 ,雏鸭感染不同毒力株鸭肝炎病毒后 1天 ,肝组织匀浆中的SOD和GSH_Px活性均下隆 ;3天时弱毒株组 ( 1 78.1 9± 1 7.5 9) ,和中毒株组 ( 1 65 .73± 1 7.2 1 )肝组织中SOD活性都显著低于对照组 ( 1 98.0 2± 8.64) ,强毒株组 ( 1 5 5 .1 1± 1 4.3 4)则极显著低于对照组 ;5天时实验组肝组织中SOD和GSH_Px活性均显著或极显著低于对照组。

鸭传染性浆膜炎灭活疫苗比较研究

将重庆地区分离鉴定的 2株鸭疫里氏杆菌培养、灭活 ,加入佐剂制成蜂胶、氢氧化铝和油乳剂灭活疫苗 ,分别免疫5日龄雏鸭。结果表明疫苗是安全的 ,经一次免疫后 10天的保护率分别是 70 %、5 0 %、75 % ,15天后的免疫保护率分别是80 %、75 %、10 0 % ;经 2次免疫后 7天的保护率分别是 10 0 %、10 0 %、89% ,10天后的保护率均达到 10 0 %。

鸭传染性浆膜炎流行病学与病原特性研究

１９９４年以来，浙江省杭州、桐乡等地的小鸭群中发生一种传染病，其死亡率为６～５７％。经病理剖解病变为纤维素性心包炎、气囊炎、肝周炎等。经流行病学调查，临床症状和病变观察及病原分离鉴定，确诊为小鸭传染性浆膜炎，病原为鸭疫巴氏杆菌。该菌易在巧克力琼脂含ＣＯ２的烛缸中生长，用４种途径人工接种感染１０～２１日龄小鸭均易复制该病，不同菌株对药物敏感性有差异。

鸭传染性浆膜炎蜂胶疫苗研制

从重庆病鸭中分离到 2株细菌 ,经细菌形态学、生理生化指标鉴定 ,证明为鸭疫里氏杆菌 (Riemerella anatipes-tifer,RA)。用改良的血清酵母肉汤进行增菌培养 ,将 2菌株菌液混合 (1∶ 1,体积比 ) ,经甲醛灭活后 ,加入蜂胶佐剂 ,制成蜂胶灭活疫苗。用其免疫 5～ 7日龄雏鸭 ,一免后 7、10、15 d皮下注射 RA混合菌液攻毒 (0 .2 m L /只 ) ,平均保护率达 6 6 .6 7% ;10 d后二免 ,二免后 7、10 d攻毒 (0 .2 m L/只 ) ,平均保护率达 94.47%

番鸭白点病发病机理的研究

用番鸭白点病病毒人工感染雏番鸭后第 1、3、5、7、1 0、1 4d分别采集免疫器官和消化器官进行病理剖检和病理组织学观察 ,并测定血浆中的丙二醛 (MDA)和一氧化氮 (NO)含量 ,以研究白点病的发病机理。结果 ,感染后第 1d ,胸腺、脾、腔上囊开始出现肿大、出血和充血的现象 ,第3～ 7d病变较严重。胸腺以淋巴细胞坏死和减少为主要病变 ;脾除了淋巴细胞坏死和减少外 ,还有单核细胞浸润和髓窦红细胞淤积现象 ;腔上囊以淋巴细胞坏死和单核细胞浸润为主要病变。染毒后第 3d ,食管、腺胃、肝、胰、小肠等开始出现少量炎性细胞和红细胞浸润 ,第 5d时各消化器官都有不同程度的变性和坏死 ,随着病程的发展 ,炎性细胞和红细胞逐渐增多。第 1 0d时病变开始减轻 ,炎性细胞和红细胞浸润减少。血浆MDA含量在感染后第 3d开始升高 ,到第 5d时感染组显著高于对照组。血浆NO水平在感染后第 1d就开始升高 ,至第 7d达顶峰。试验结果提示 。

雏番鸭胰腺和肠道消化酶活性变化规律研究

本试验以 0～ 3周龄雏番鸭为研究对象 ,分别测定 0 ,1,4 ,7,10 ,14 ,17和 2 1日龄雏番鸭胰腺和肠道中脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶和总蛋白酶活性的变化。结果表明 :在胰腺中脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶和总蛋白酶的活性分别在 4 ,14 ,10和 17日龄达到峰值 ;在肠道中 ,脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶和总蛋白酶的活性分别在 10 ,14 ,17和 14日龄达到峰值。从消化酶的发育规律显示 10～

DHV对雏鸭肝组织中SOD活性和MDA含量的影响

用不同毒力株鸭肝炎病毒人工感染雏鸭 ,分别于 1 ,3 ,5 ,7天测定雏鸭肝组织中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,并研究MDA和SOD在鸭病毒性肝炎 (DVH)发病过程中的作用。结果表明 :雏鸭感染不同毒力株鸭肝炎病毒后 ,强毒株组雏鸭肝组织MDA含量均显著或极显著高于对照组 ,而弱毒株组和中毒株组的肝组织MDA含量只在感染的中后期即分别在 5天和 3天以后才显著高于对照组 ;中毒株组和强毒株组的肝组织SOD活性均显著或极显著低于对照组 ,弱毒株组肝组织SOD活性在 3天以后才显著低于对照组。

日粮锌水平对雏番鸭免疫器官中细胞凋亡及Fas表达的影响

为了探讨微量元素锌对雏番鸭主要免疫器官中细胞凋亡及Fas表达的影响,选取135只1日龄体况一致的健康番鸭随机分成3组,A组为低锌组,B组为对照组,C组为高锌组,分别饲喂含锌20、40和200mg/kg的日粮,试验期45d,通过TUNEL法和免疫组织化学法观察15、30、45日龄3组雏番鸭胸腺、法氏囊和脾脏中细胞凋亡的变化规律及Fas的表达情况。结果表明,15d时,胸腺、法氏囊中细胞凋亡数,A组极显著高于B组(P<0.01),B组显著高于C组(P<0.05);脾脏中细胞凋亡数A组显著高于B组(P<0.05),B组极显著高于C组(P<0.01);30d时,胸腺、法氏囊、脾脏中细胞凋亡数A组仍最多,与B、C组差异极显著(P<0.01),胸腺、法氏囊中细胞凋亡数C组和B组差异不显著(P>0.05),脾脏中细胞凋亡数C组显著地低于B组(P<0.05);45d时,胸腺和法氏囊中细胞凋亡数C组均显著高于B组(P<0.05),而脾脏则仍表现为C组最少(P<0.01)。Fas的表达情况与细胞凋亡规律具有一致性,但略有不同,主要表现为Fas蛋白表达的变化早于细胞凋亡。提示,低锌能够诱导雏番鸭免疫器官细胞凋亡,试验早期高锌抑制细胞凋亡,但是较长时间的添加高锌反而会诱导免疫细胞凋亡。细胞凋亡的死亡因子Fas的表达情况进一步表明,日粮锌对雏番鸭主要免疫器官中细胞凋亡的影响是通过Fas/Fas-L途径来调控的。

一株安徽株雏鸭肝炎病毒的分离与鉴定

从安徽省芜湖某养殖户送检的疑似鸭病毒性肝炎(DHV)的发病雏鸭肝等组织中分离到一株病毒,单称WHD。通过鸭胚接种分离到病毒。经动物试验显示,该病毒分离株的致死率达到70%。经过观察临床表现、剖检变化、血清被动保护试验,初步确诊所采集的病料均为鸭肝炎病毒。经和鸭胚中和试验证明,该病毒的血清型为Ⅰ型。

感染“白点病”番鸭抗氧化功能的变化

用“白点病”病毒人工感染雏番鸭 ,于感染后第 1、3、5、7、10和 14d测定了雏番鸭血浆中丙二醛 (MDA)的含量、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)的活性。结果 ,雏番鸭感染“白点病”病毒后血浆中MDA的含量、SOD和GSH Px活性发生明显变化 ,其中攻毒组雏番鸭在攻毒后第 3dMDA含量开始升高 ,第 5和第 10d显著高于对照组 ;攻毒组雏番鸭SOD活性在攻毒后第 3d开始显著低于对照组 ,随后在低于或显著低于对照组的范围内波动 ;GSH Px的活性在攻毒后第 7d开始下降 ,攻毒后第 10d攻毒组显著低于对照组。提示 ,自由基可能在雏番鸭“白点病”的发病过程中起关键作用。

雏鸭病毒性肝炎卵黄抗体的研制

选取鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)分离株BZ-Ⅰ株作为疫苗株制备灭活苗,多次免疫蛋鸡制备卵黄抗体。经鸡胚中和试验法测定卵黄抗体的中和效价为29.6;经动物试验证实卵黄抗体可有效预防和治疗雏鸭对鸭病毒性肝炎(duckviral hepatitis,DVH)强毒的攻击,为雏鸭DVH的防治提供了新的技术手段。

维生素D对笼养育成蛋鸭生长及血液指标的影响

选用健康的体重相近的5周龄金定鸭150只,随机分为30组.每组5只鸭,饲粮中添加的VD_3水平分别为0,400,1500,3000,5000 IU·kg^(-1),且每个水平饲喂6组鸭。研究维生素D不同水平对笼养育成鸭生长性能及血液生化指标的影响。试验结果表明,饲粮VD水平影响育成蛋鸭日增重、采食量及料重比。随着VD水平的升高,对钙磷、总蛋白、白蛋白、总胆固醇含量和碱性磷酸酶活性影响显著(P<0.05),对球蛋白和尿素氮含量影响不显著(P<0.05),但都有随着饲粮VD水平的升高而增加的趋势。对血清肌酐、葡萄糖、尿酸、甘油三酯含量和淀粉酶、谷草转氨酶活性的影响差异不显著(P<0.05)且无规律。对谷丙转氨酶和肌酸激酶活性的影响差异不显著(P<0.05),但有随着饲粮VD水平的升高先降低后增加的趋势。本试验结果分析表明,蛋鸭在育成阶段1500～3000 IU·kg^(-1)的VD的添加量为适宜水平。因此,建议蛋鸭在笼养条件下育成阶段VD的适宜添加量为1500～3000 IU·kg^(-1)。

低温和维生素E对育成期笼养蛋鸭生产性能及血液生化指标的影响

试验选用健康的13周龄金定母鸭144只,采用2×3两因素有重复试验设计,研究低温及维生素E(VE)对育成期(13～18周龄)笼养蛋鸭生产性能及生化指标的影响。研究结果表明,①低温使日采食量和饲料转化率显著升高,日增重显著降低(P<0.05)。VE水平对日采食量影响不显著(P>0.05),但是显著提高了日增重(P<0.05),使饲料转化率显著降低(P<0.05)。②低温对总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)影响不显著(P>0.05),但添加VE使TP浓度显著提高(P<0.05);低温有使尿酸(URIC)、尿素氮(BUN)升高的趋势,但差异不显著(P>0.05),VE水平的提高使BUN浓度显著降低(P<0.05)。③低温使肌酸激酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、谷丙转氨酶活性显著升高(P<0.05);VE水平提高显著降低谷丙转氨酶活性(P<0.05),对其它酶活性的影响不显著,但有降低趋势(P>0.05)。④低温对T3、T4影响不显著(P>0.05),但有使T3升高的趋势;VE水平提高使T3显著降低(P<0.05)。低温使孕酮(P)浓度显著降低(P<0.05),VE水平的提高使孕酮浓度显著上升(P<0.05)。

复合酶制剂对樱桃谷肉仔鸭小肠黏膜的形态及DNA、RNA含量的影响

试验选用180只体重为(59.46±0.09)g的1日龄樱桃谷肉仔鸭,随机分为4组,每组3个重复(栏),每栏15只鸭,分别饲喂玉米-豆粕型、稻谷-玉米-豆粕型和稻谷-玉米-豆粕型日粮+500mg/kg或1000mg/kg复合酶制剂日粮。在试验的第7和14天,每重复选取体重相近的5只肉仔鸭进行屠宰,在十二指肠远端、空肠中端和回肠中端分别截取5cm和10cm的两段相邻肠段,观测了小肠绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度,并测定了黏膜DNA和RNA含量。结果表明,在1～14d肉仔鸭稻谷型日粮中添加复合酶制剂可使十二指肠的绒毛高度显著增加,而对小肠黏膜DNA和RNA的含量无显著性影响;在8～14d,添加1000mg/kg复合酶制剂可显著增加空肠和回肠的绒毛高度。

鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制

用DVH弱毒疫苗和DVH油乳剂苗免疫健康高产蛋鸡制备高免卵黄抗体,研究了高免卵黄抗体治疗雏鸭DVH的疗效。结果表明,高免卵黄抗体治疗DVH的疗效取决于卵黄抗体的中和效价、治疗时间和免疫途径。卵黄抗体的中和效价应达28.5以上,并且在感染DVH 24 h以内对雏鸭进行肌肉注射,免疫效果最好。

菜籽粕在雏鸭日粮中添加量的研究

试验选用1日龄雏鸭750只,随机分为5个组,每组150只,每组设5个重复,每个重复30只鸭,公母各半。对照组饲喂不含菜籽粕的基础日粮,处理组饲喂分别添加3%、6%、9%、12%菜籽粕的饲料。结果表明:在21日龄中,6%、9%菜籽粕组及12%菜籽粕组日均采食量、日均增重差异显著(P<0.05);12%菜籽粕组耗料增重比与对照组相比,差异显著(P<0.05);各菜籽粕试验组公母鸭能量沉积率及粗蛋白沉积率均与对照组无显著性差异(P>0.05)。