Study on In-vitro Production Technology of Embryos from Young Dorper Sheep

This study was conducted to investigate the in-vitro production technology of embryos from young Dorper sheep, so as to provide technical support for the utilization of ovarian follicles in young Dorper sheep. Tests were conducted from the induction of Dorper sheep of 4 to 8 weeks old using follicle stimulating hormone(FSH) and pregnant horse serum(PMSG), collection of oocytes, in-vitro oocyte maturation-fertilization-zygote cultivation and 2-4-cell-stage fertilized ovum transfer. The results showed that 585 oocytes were collected from eight Dorper sheep at the age of 4 and 8 weeks, with an average of 73.13 oocytes/sheep. 346 of the 2-4-cell-stage fertilized eggs were obtained, whose cleavage rate was 59.15%. 77 in-vitro fertilized eggs at 2-4-cell stage were transplanted into 17 recipient sheep, seven of which were pregnant and gave birth to 13 "test-tube sheep" with a conception rate of 41.18%. It is indicated that the hormone induction technique, in-vitro oocyte maturation-fertilization-zygote cultivation technique and 2-4-cell-stage fertilized ovum transfer technique used in this study can serve as effective techniques for the in-vitro production of embryos from Dorper sheep of 4-8 weeks old.

‘西林3号’核桃体细胞胚胎诱导与增殖的影响因素

【目的】筛选最佳的‘西林3号’核桃体细胞胚胎诱导和增殖培养条件。【方法】通过进行不同消毒方法、不同外植体、不同采样时期、不同激素浓度配比、不同蔗糖与谷氨酰胺浓度处理,对核桃胚性愈伤组织的诱导情况进行研究,筛选最佳诱导条件;同时对比不同激素浓度对核桃体细胞胚胎增殖率的影响,筛选最佳增殖培养基。【结果】雄花(花药)、种子、幼胚的最佳消毒方法分别为70%乙醇15 s+10%NaClO浸泡4 min、70%乙醇30 s、70%乙醇5 min,培养4 d后的存活率高,污染率低。幼胚是诱导胚性愈伤组织的最佳材料,5月31日是最佳的采样时间,诱导率分别为(65.00±7.07)%和(85.83±1.17)%。以愈伤组织为材料时,诱导胚性愈伤组织的最佳激素浓度配比为改良DKW培养基添加1.0 mg/L 6-BA、2.0 mg/L KT、0.01 mg/L IBA,诱导率为(37.94±1.33)%。以愈伤组织为材料时,诱导胚性愈伤组织的最佳蔗糖质量浓度为30 g/L,诱导率为(82.67±0.94)%,谷氨酰胺不是诱导胚性愈伤组织的影响因素。体胚增殖的最佳激素浓度配比为改良DKW培养基添加0.5 mg/L 6-BA、1.0 mg/L KT、0.005 mg/L IBA,增殖率为98%。【结论】外植体和采样时间的选择直接影响体胚诱导的结果,对于幼胚这类果实内部材料来说,仅进行简便快捷消毒即可。激素和碳源是胚性愈伤组织诱导与发生的关键因素,谷氨酰胺不是胚性愈伤组织诱导的影响因素。在进行体胚继代增殖培养时,适当添加激素可以抑制体胚成熟,提高增殖率。

花生幼胚RNA提取方法研究

花生(ArachishypogaeaL.)幼胚体积很小,不易剥取且富含多糖、酚类等化合物,因此以花生幼胚为材料提取RNA时会遇到很大困难.采用改进的Trizol法和异硫氰酸胍一步法成功提取出了高质量的花生幼胚总RNA,后续实验证明具有良好的逆转录活性.介绍了花生幼胚快速剥取的方法.

幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油（木奈）幼胚为材料，研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2，4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响，结果表明，长轴为5—7．9mm低温处理18h的幼胚，诱导胚性愈伤组织的效果最好；使用山梨醇（浓度为3％）为碳源、含氮量低的WPM培养基，胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基；幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2，4-D浓度为2．0mg／L，培养基中附加5．0mg／LAgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。

青钱柳幼胚愈伤组织的诱导

以青钱柳幼胚为外植体,研究了不同幼胚期、基本培养基种类、植物生长调节剂种类及其浓度配比对愈伤组织诱导的影响。结果表明,不同发育期的幼胚诱导出的愈伤组织在形态上差异较大,青钱柳种子发育至子叶胚中期较适合愈伤组织的诱导。青钱柳幼胚愈伤诱导时基本培养基以改良DKW效果最佳,诱导率达到了88.89%,且无褐化现象;含2,4-D与KT组合的培养基较适宜愈伤组织的诱导,其中2,4-D(0.5 mg/L)+KT(2.0 mg/L)和2,4-D(1.0 mg/L)+KT(1.0 mg/L)的组合对青钱柳幼胚诱导愈伤组织效果最佳,诱导率分别为80.00%和78.33%。

茶树幼胚培养萌发率与再生途径影响因素研究

从激素浓度与组合、基本培养基和蔗糖浓度等几个方面进行了茶树幼胚培养中萌发率和再生途径的影响因素研究。试验结果表明,茶树幼胚的萌发需要有一定量的生长素的剌激作用,但较强烈的细胞分裂素的作用对茶树幼胚的萌发有抑制作用;所使用的激素种类对于胚的再生途径有较大的影响,在MS+KT2.0+IBA0.1+GA31.0mg/L培养基上,80%以上的幼胚可以继续发育成熟并萌发成苗;而高糖浓度则会诱导产生较多的胚性愈伤组织并从而导致不定胚的形成。

玉米组织培养体系的研究

以玉米的幼胚为外植体 ,初步研究了培养基、幼胚大小及幼胚的放置方式对愈伤组织诱导的影响。得到了“A 1 88”II型愈伤组织 ,经分化得到再生植株 ,再生植株的成活率比较高。建立了完善的“A 1 88”

胚发育时间和禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚愈伤组织诱导及幼苗分化的影响

以3个小麦品种为材料，研究了幼胚发育时间和禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性的影响。结果表明，胚发育时间对小麦幼胚离体培养有较大影响，花后10～13d的小麦幼胚诱导产生的愈伤组织质量较好，胚性愈伤组织诱导率较高，是适宜的取材时间；禾谷镰刀菌粗毒素对不同小麦品种幼胚愈伤组织、胚性愈伤组织和苗分化的影响趋势相同，粗毒素为6．0g／L时，对小麦幼胚愈伤组织诱导有明显抑制，低于6．0g／L时有一定的促进作用；粗毒素在0～6．0g／L对胚性愈伤组织形成及苗分化的影响随浓度增高抑制作用增强，在6．0g／L时胚性愈伤组织的形成能力较低或丧失；适宜的粗毒素筛选浓度为1．5～4．5g／L。

大豆幼胚培养直接成苗影响因素研究

为建立大豆幼胚培养直接成苗方法,分别研究了大豆幼胚胚龄、幼胚预处理方法、培养基及大豆品种对大豆幼胚培养直接成苗的影响。结果表明:15 d胚龄的幼胚平均萌发率为23%,20 d及以上胚龄的幼胚萌发率高于70%,20 d胚龄的幼胚虽能萌发,但芽和根的正常生长较为困难。在低温(4℃)、高温(37℃)和GA(100 mmol.L-1)预处理幼胚2 d再进行培养条件下,高温预处理平均成苗率达75%;而低温和GA预处理的成苗率只有4%。所试几种培养基对幼胚成苗效果没有显著影响。不同品种中,极早熟品种日本晴和台农292成苗率分别为74%和72%,早熟品种台湾75和苏早1号成苗率均为64%,夏大豆临豆8号成苗率(54%)最低。

向日葵未成熟胚体细胞胚胎发生的研究

以不同基因型向日葵未成熟胚为材料,从幼胚的大小、蔗糖浓度、碳水化合物(糖类)、激素(2,4-D和6-BA)等方面探讨了向日葵体细胞胚胎发生的影响因素.结果表明:幼胚≤2 mm时,体细胞胚胎发生频率较高(45.5%);体细胞胚胎发生的适宜培养基为MS+0.4 mg/L 2,4-D+120 g/L蔗糖.

三种花生幼胚蛋白质提取方法比较研究

植物组织(或细胞)的蛋白质提取效率与效果直接影响蛋白质双向凝胶电泳等实验的结果。为探索建立适用于花生幼胚蛋白质(双向凝胶电泳用)提取的最佳条件,尝试了磷酸缓冲液直接提取法、改良的荔枝胚胎蛋白提取法和Trizol(附加)提取法等3种提取方法,根据蛋白提取得率、试剂成本、双向电泳图谱的质量(蛋白质斑点的丰度、分布特点)进行初步评价。结果表明,磷酸缓冲液直接提取法简单但总体效果较差,改良的荔枝胚胎蛋白提取法综合评价最好,与双向凝胶电泳条件更兼容。

利用离体诱变技术选育小麦大粒种质的研究

以鲁麦１２等为材料进行幼层培养，转分化前辐照１０００ｒａｄ，在Ｒ２代调查千粒重变异情况，结果表明，后代千粒重发生了显著变化，变异范围为３９．５—６８．５ｇ．突变率高达６３．０８％，最高千粒重超过对照４０．９５％。已选出一批大粒材料应用于生产．其中核生二号新品种千粒重６５ｇ，杂交后代表明，大粒变异多为显性突变。

油茶优良无性系幼胚和子叶高效再生体系的建立

以油茶(Camellia oleifera Abel.)优良无性系的幼胚和子叶为外植体,采用正交试验设计方法,研究了基本培养基、IBA、6-BA和NAA等植物激素共4个因素的不同组合对其幼胚再生体系及子叶胚性愈伤组织诱导的影响,并进一步研究了不同植物激素对体细胞胚再生体系的影响。结果表明,植物激素的选择对幼胚再生体系的建立起着关键作用,NAA促进了幼胚再生苗的形成,IBA的添加反而阻碍了该体系的建立;由数据分析综合评定法,得出幼胚再生植株诱导最适培养基的理论值为WPM+2.0mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA;子叶胚性愈伤组织诱导的最适培养基为WPM+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;子叶胚性愈伤组织的最适分化培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.01mg/L NAA。

禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性及再生R_1、R_2代植株的抗赤霉病性影响

研究了禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性的影响和再生R1、R2代植株的抗赤霉病性变异,结果表明,粗毒素对3个不同基因型幼胚的愈伤组织诱导、胚芽萌发及胚性愈伤组织形成和绿苗分化的影响有相同的趋势。①毒素浓度为6.0g/L时,愈伤组织生长受明显地抑制,但胚芽萌发生长受到促进,低于此浓度时,毒素对愈伤组织的生长有一定的促进作用;②毒素对胚性愈伤组织形成和苗分化均有较大的抑制作用,其中对前者的抑制作用最强;③适宜的粗毒素筛选浓度为1.5￣4.5g/L,在这一浓度范围内对愈伤组织形成无影响,而对胚性愈伤组织和苗分化有明显抑制,但又能使其保持有一定的分化能力。④经毒素筛选的抗耐毒素细胞系再生R1代植株中,抗病穗的比例明显提高,R2代再生植株的抗赤霉病性分离,并趋向于感病方的分离。

一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法（英文）

笔者采用改良CTAB法从富含多酚的无核荔枝幼胚中提取总RNA，并用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对所提RNA质量进行检测，旨在为多糖、多酚含量较高的植物材料RNA的提取提供一种有效方法。

睡莲不同杂交组合幼胚愈伤组织诱导研究

以睡莲3个杂交组合的幼胚为外植体，研究了胚龄、基本培养基、植物生长调节剂配比对愈伤组织诱导的影响。结果表明：1／2MS为最适的基本培养基；3个杂交组合在1／2MS＋2，4-D2．0mg／L＋6-BA2．0mg／L培养基中愈伤组织的平均诱导率均最高，分别为56．4％、21．5％和47．9％；授粉后13—18d为幼胚培养的最佳时期。

紧穗野生稻幼胚愈伤诱导、分化及生根苗的体系建立

以紧穗野生稻幼胚为实验材料,采用N6和MS为基本培养基,研究不同浓度激素配比对紧穗野生稻幼胚愈伤诱导、分化和生根的影响。结果表明,以N6为基本培养基,2,4-D浓度为5.0 mg/L的培养基诱导出愈率最高,达到100%。以N6为基本培养基,6-BA浓度为4.0 mg/L,添加NAA 0.3 mg/L、KT 2.0 mg/L、ZT 2.0 mg/L的培养基分化率最高,达到88%。较好的胚性愈伤在最适合分化的培养基中能够获得较高的分化率,以N6为基本培养基,IAA浓度为0.3 mg/L的培养基生根率最高,达到96%。

枣幼胚体细胞胚发生发育的组织学观察

为深入研究枣体细胞胚胎发生的形态建成过程,以‘小梨枣’幼胚为材料,采用苏木精-伊红法染色和石蜡切片技术对体细胞胚发生、发育进行了组织学观察。结果表明:胚型愈伤组织细胞体积小,细胞核大,细胞质浓,细胞排列紧密;而非胚性愈伤组织细胞体积大,细胞核小,细胞质稀薄。体细胞胚产生于幼胚愈伤组织的表层细胞或内部细胞,且发生不同步,其发育过程与合子胚发育过程相似,即经历球形期、心形期和鱼雷期,最终形成子叶形胚。

镰刀菌粗毒素的特性及对小麦幼胚愈伤组织生长的影响

对镰刀菌粗毒素特性的研究表明,粗毒素能强烈抑制植物种子发芽,并随毒素处理浓度的增大,时间的增长而增强;毒素具有一定的热稳定性,对小麦幼胚愈伤组织有强烈的杀伤力。

枣幼胚体细胞胚的发生及植株再生

以小梨枣胚龄30~40d的幼胚为外植体,研究不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、脱落酸(ABA)及其组合对幼胚胚乳看护培养效果、体细胞胚发生、成熟及萌发的影响。结果表明,适宜小梨枣幼胚(30~40d)胚乳看护培养的培养基为MS+IBA0.2mg·L^(-1)+BA0.5mg·L^(-1)+NAA 0.1 mg·L^(-1),成胚率达62.07%;诱导胚性愈伤组织较适宜的培养基为MS+TDZ 0.6mg·L^(-1)+IBA1.5mg·L^(-1)+NAA 0.1mg·L^(-1),诱导率为53.32%;在MS+6-BA 0.3mg·L^(-1)+NAA0.02mg·L^(-1)组合下有利于体细胞胚的发生,发生率可达71.43%;ABA可促进体胚的正常发育,质量浓度为0.5mg·L^(-1)时,体细胞胚结构完整,体胚成熟率为21.83%;将成熟的体胚转接到含有IBA 0.03mg·L^(-1)+GA30.03mg·L^(-1)的培养基中,体细胞胚萌发形成完整植株。