过表达microRNA-29a上调锌脂蛋白91对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡的影响

目的建立高感染效率、稳定过表达microRNA-29a(mi R-29a)的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12),探索miR-29a对PC12细胞凋亡的影响。方法将miR-29a前体表达载体、空白对照载体进行慢病毒包装,用病毒上清感染PC12并进行抗性筛选。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测miR-29a的表达,流式细胞术检测miR-29a稳定过表达组、空质粒对照组以及未感染组PC12细胞的凋亡情况,利用Target Scan 6.0数据库预测miR-29a的关键靶点,RT-qPCR以及Western blot检测预测的miR-29a下游靶基因mRNA以及蛋白表达的变化。结果经抗性筛选后获得稳定表达miR-29a的PC12细胞系,荧光显微镜下观察各组PC12细胞的感染效率均达80%以上,miR-29a过表达组凋亡率为(5.1±0.92)%,空质粒对照组为(1.832±0.26)%,未感染组为(1.667±0.185)%,miR-29a过表达促进PC12细胞凋亡(P<0.01),空质粒对照组与未感染组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义;RT-qPCR检测miR-29a过表达时锌指蛋白91(ZFP91)的表达量升高,miR-29a过表达组ZFP91 mRNA的表达量是空质粒对照组的1.835倍(P=0.000),空质粒对照组与未感染组ZFP91 mRNA的表达量比较差异无统计学意义;Western blot检测的ZFP91蛋白表达量与空质粒对照组比较也升高。结论在PC12中miR-29a过表达促进PC12细胞凋亡,过表达miR-29a也促进ZFP91表达,其机制仍待进一步阐明。