卵母细胞特异表达φC31整合酶载体pZP3-INT的构建及其在小鼠卵母细胞中的表达

链霉菌噬菌体φC31整合酶是一种位点特异性重组酶(Site-specific recombinase,SSR),可介导链霉菌噬菌体attP位点(Phage attachment site)和链霉菌基因组attB位点(Bacterial attachment site)间的单向重组。为探讨它能否应用于卵母细胞特定基因的重组,文章采用卵巢针刺取卵法采集生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,将卵透明带糖蛋白3(ZP3)启动子驱动的φC31整合酶表达载体pZP3-INT和检测φC31整合酶位点特异性重组功能的重组质粒载体pBCPB+,通过显微注射导入到小鼠卵母细胞中。培养48h后,RT-PCR检测φC31整合酶mRNA表达以及PCR检测pBCPB+载体发生重组的情况。结果表明:载体pZP3-INT在卵母细胞中表达φC31整合酶mRNA;并且pBCPB+载体发生了位点特异性重组,提示φC31整合酶在卵母细胞中可以介导位点特异性重组反应。

细胞因子GM-CSF对犬透明带3DNA疫苗免疫小鼠抗生育效果的研究

目的粒细胞-臣噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating fac-tor，GM-CSF）作为免疫佐剂，能够影响犬透明带3（CZP3）DNA疫苗的免疫效果，有助于研制有效降低流浪犬生育的犬透明带3DNA疫苗。方法采用RT-PCR和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法，分析GM-CSF对小鼠肌肉注射部位的抗原提呈细胞（antigenpresentingcells，APCs）成熟和富集的影响。然后通过电脉冲刺激小鼠肌肉，将分子佐剂pcDNA3-GM-CSF与DNA疫苗pcDNA3．CZP3单独或联合免疫接种雌性BALB／c小鼠。ELISA方法检测了小鼠血清和生殖道中抗体IgG和sIgA（secretaryIgA）的水平以及血清中IL4和IFN-1，的含量，MTT方法检Nd,鼠脾脏T细胞的增殖，间接免疫荧光验证血清中CZP3抗体与小鼠卵细胞结合的能力，抗生育实验分析免疫不育效果。结果GM-CSF与peDNA3．CZP3共免疫小鼠能够显著促进CD80、CD83和CD86的表达，促进pcDNA3-CZP3免疫接种小鼠血清中IgG和生殖道中sIgA抗体水平的显著升高（P〈0．0k）。免疫小鼠的IL-4和IFN-γ的含量均显著增加（P〈0．05），MTF法证明脾脏T细胞增殖显著（P〈O．05），间接免疫荧光结果表明小鼠卵细胞表面的荧光强度和致密度与免疫组血清中抗体的水平成正相关．抗生育实验表明GM-CSF显著性（P〈0．05）地降低DNA疫苗pcDNA3-CZP3免疫小鼠的产仔数目。结论GM-CSF作为免疫佐剂能够显著增强犬透明带3DNA疫苗的免疫不育效果，可以作为增强犬透明带3DNA免疫不孕疫苗的有效佐剂。