地塞米松对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡及fas、bcl-2 mRNA表达的影响

目的:观察地塞米松(DM)对哮喘豚鼠体外不同密度嗜酸性粒细胞(Eos)凋亡及fas、bcl-2mRNA表达的影响,探讨DM促进哮喘Eos凋亡的机制。方法:卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型48h后行支气管肺泡灌洗,分离低密度及正常密度Eos(HEos,NEos)。HEos及NEos分别与地塞米松(DM)(10-10-10-5mol/L)共培养24h,以原位杂交方法检测不同Eos的fas及bcl-2mRNA表达,3’末端脱氧核苷转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷(d-UTP)缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。结果:DM干预24h后,可见Eos细胞凋亡增加的同时,不同密度Eos的fasmRNA表达也增加,bcl-2mRNA表达降低,并与DM浓度呈剂量依赖性。fas表达与Eos凋亡呈正相关(P<0.05),而bcl-2的表达与Eos凋亡呈负相关(P<0.05)。结论:DM可促进不同密度Eosfas表达,抑制其bcl-2表达,促进Eos凋亡。DM可以通过嗜酸性粒细胞fas表达增加及bcl-2表达减少而调节Eos凋亡。

肝癌细胞系Fas/FasL功能与免疫逃逸机制探讨

目的:探讨肝癌细胞通过Fas/FasL途径的免疫逃逸机制。方法:用流式细胞术检测肝癌细胞系HepG2.2.15细胞表面Fas及FasL的表达;用激活性Fas单克隆抗体CH11诱导细胞凋亡法检测肝癌细胞对Fas介导凋亡的抵抗;用HepG2.2.15与Jurkat细胞共培养法检测细胞表面FasL诱导T细胞凋亡的功能。结果:①HepG2.2.15细胞Fas表达低下,CH11不能诱导其凋亡;②FasL的表达率为18.03%,与Jurkat细胞共培养可诱导Jurkat细胞凋亡;③用中和抗体NOK-2封闭HepG2.2.15细胞表面FasL后,Jurkat细胞的凋亡率由21.41%降为8.91%。结论:肝癌细胞能抵抗Fas介导的凋亡,其表面的FasL可抑制T细胞的免疫功能,Fas/FasL途径是肝癌细胞免疫逃逸的重要机制之一,可成为免疫治疗的新靶点。

Fas抗原和caspase-8调控细菌氧化还原蛋白azurin诱导的人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨Fas抗原和caspase-8在细菌氧化还原蛋白azurin诱导人骨肉瘤细胞凋亡中的调控机制及作用。方法:用150mg/L浓度的azurin处理U2OS细胞,分别作用6、12、24和48h。细胞免疫化学法检测Fas抗原的表达。用荧光试剂盒检测caspase-8的活性。流式细胞仪检测azurin和抗-Fas-抗体诱导的骨肉瘤细胞凋亡百分率,以及加入caspase-8活性抑制剂IETD-FMK后凋亡百分率的变化。结果:Azurin诱导U2OS细胞凋亡后,与对照组比较,Fas抗原表达强度增加(P<0.01),caspase-8活性升高(P<0.01)。Fas抗原表达和caspase-8活性随着azurin作用时间的延长而逐渐升高,至24h后达到高峰,然后缓慢下降,但仍显著高于对照组(P<0.01)。Fas抗原的表达与caspase-8活性变化呈显著正相关(r=0.873,P<0.01)。表达增强的Fas抗原具有转导凋亡信号的功能,抗-Fas抗体借此增强azurin诱导U2OS细胞凋亡的作用。Caspase-8活性抑制剂IETD-FMK能阻断caspase-8活化而抑制azurin或抗-Fas抗体诱导的U2OS细胞凋亡,与抑制剂组比较,细胞凋亡百分率显著差异(P<0.01)。结论:Fas依赖途径可能为细菌氧化还原蛋白azurin诱导U2OS细胞凋亡主要机制之一,caspase-8活性上调可能在凋亡过程中发挥重要作用。

高龄高度梗阻食管癌患者基因Survivin、Fas和FasL表达与预后的关系

目的:探讨高龄高度梗阻食管癌患者基因Survivin、Fas、FasL的表达与预后的关系。方法:对88例75～92岁高梗阻食管癌患者行内镜治疗,其中42例行内镜下单纯支架置入术,46例联合微波组织凝固、局部注药治疗,同时采用免疫组织化学法检测肿瘤组织的基因Survivin、Fas、FasL的表达。结果:88例患者治疗后进食均显著改善。联合治疗组术后生存时间较单纯支架组明显延长,再狭窄率显著降低(P<0.05),肿瘤组织基因Survivin、Fas、FasL的阳性表达率分别为73.86%、46.59%、54.55%。Survivin和FasL的表达与患者术后生存时间呈负相关(P<0.05)。结论:基因Survivin、FasL可作为预测预后的重要参考指标,其高表达提示食管癌患者预后不良。

职业接触抗肿瘤药物对护士外周血淋巴细胞凋亡及Fas bcl-2基因表达的影响

目的探讨职业接触抗肿瘤药物对护士外周血淋巴细胞凋亡及Fas、bcl-2基因表达的影响。方法选择接触抗肿瘤药物5年以上,每日接触5人次以上的护士为接触组;无抗肿瘤药物接触史的健康志愿者为对照组。抽取接触组及正常对照组外周静脉血各2ml,乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,利用流式细胞仪技术观察外周血淋巴细胞凋亡率及Fas、bcl-2基因的表达。结果接触组外周血淋巴细胞凋亡率明显增高(P<0.05);接触组Fas基因的表达明显增高(P<0.01);而bcl-2基因表达差异无统计学意义。结论抗肿瘤药物能促进职业接触护士外周血淋巴细胞的凋亡和Fas基因的表达。

FasL系统在妊高征胎盘中的表达

目的检测凋亡诱导蛋白Fas及其配体FasL在妊娠高血压综合征(PIH)胎盘中的表达,探讨FasL系统在PIH发病中的作用。方法应用免疫组化法检测10例正常足月孕妇及10例重度PIH孕妇胎盘组织中Fas、FasL的表达,并应用BI-2000医学图像分析系统对其表达进行定量分析。结果两组胎盘绒毛滋养细胞均有Fas、FasL表达,其表达量比较,差异有显著性。PIH组绒毛滋养细胞FasL表达的平均灰度、染色面积比分别为(93·390±7·600)、(0·060±0·019),明显低于正常妊娠组(73·104±7·788)、(0·121±0·019),两组间差异有显著意义(P<0·05);PIH组胎盘绒毛滋养细胞Fas表达的平均灰度、染色面积比分别为(75·212±4·688)、(0·120±0·009),明显高于正常妊娠组(97·445±6·019)、(0·057±0·011),两组差异有极显著意义(P<0·01)。结论PIH时胎盘中FasL表达下调,Fas表达增加。FasL系统表达异常可能参与PIH的发病。

膀胱癌中Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达及意义

目的探讨凋亡调节基因Fas、FasL、Bcl-2及Bax在膀胱移行细胞癌中的表达及其与膀胱癌发生、发展和预后之间的关系。方法采用免疫组化染色法检测40例膀胱移行细胞癌、24例正常膀胱组织中Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达。结果Fas表达于正常组织和膀胱癌组织中,FasL、Bcl-2及Bax仅表达于膀胱癌组织中;Fas的表达与膀胱癌病理分级负相关,FasL、Bcl-2的表达与膀胱癌病理分级正相关;Fas、Bax在初发膀胱癌组织中的表达大于复发膀胱癌。结论Fas、FasL、Bcl-2及Bax的表达,可能与膀胱癌细胞的凋亡及免疫逃避等密切相关,影响膀胱癌的发生、发展和预后。

地鼠颊囊黏膜癌变过程中Fas的表达及意义

目的:研究Fas蛋白在口腔黏膜癌变过程中的表达及变化规律。方法:用DMBA诱导的金黄地鼠颊囊癌变模型,采用免疫组化SP法检测在黏膜上皮癌变过程(正常黏膜、单纯增生、轻度增生、中度增生、重度增生与鳞癌)中Fas蛋白的表达。结果:Fas在正常地鼠口腔黏膜中广泛表达,在黏膜癌变过程的不同阶段中Fas表达下调,尤其在鳞癌组织中明显降低(P<0.05),且表达部位由细胞胞膜转向胞浆内。结论:Fas参与口腔黏膜肿瘤癌变过程,对口腔癌的早期诊断及治疗提供研究方向。

无甲醛固色剂YSZ的合成与应用

研究了无甲醛固色剂 YSZ的合成及其对活性染料、直接染料的固色处理 .

大鼠FasL阳性Sertoli细胞的分离与鉴定

目的分离鉴定Sertoli细胞,并检测其FasL的表达。方法取雄性Wistar大鼠睾丸,分离Sertoli细胞。培养72h,用多种方法进行形态学观察,做透射电镜进行形态学鉴定,免疫组化检测FasL的表达情况。结果所获得的Sertoli细胞占细胞总数的90%以上,细胞培养72h后FasL仍然高表达。结论本研究分离的Sertoli细胞可以用于细胞联合移植,发挥免疫豁免作用。

氯沙坦对血管紧张素II所致血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的:探讨氯沙坦(LT)对血管紧张素II(AngII)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡和凋亡调控基因的影响。方法:采用流式细胞技术测定在AngII不同浓度和不同作用时间下VSMC凋亡率及凋亡调控基因Fas、bcl-2表达的变化和氯沙坦对其的影响。结果:①随着AngII作用浓度的增加,VSMC凋亡率及Fas,bcl-2基因的表达量均增加(2.35±0.56vs19.71±3.03;Fas:1.36±0.32vs14.67±1.39;bcl-2:2.35±0.51vs16.65±1.42,P<0.01);②LT可促进VSMC的凋亡,促进Fas基因的表达,但可抑制bcl-2基因的表达(19.71±3.03vs27.65±2.11,Fas:14.67±1.39vs20.14±1.41;bcl-2:16.65±1.42vs7.17±1.38,P<0.05);③随着AngII作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas、bcl-2基因的表达均增加(1.43±0.21vs18.56±3.68,Fas:1.21±0.32vs8.62±1.54,bcl-2:2.53±0.71vs15.41±1.63,P<0.01);④随着LT作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas基因的表达均增加,对bcl-2基因的表达则有抑制作用(18.56±3.68vs31.25±2.89,Fas:8.62±1.54vs17.46±1.47;bcl-2:15.41±1.63vs8.45±1.51,P<0.05)。结论:AngII具有促进VSMC凋亡和凋亡调控基因表达作用;氯沙坦可调节AngII对血管平滑肌细胞的作用。

人参皂甙对内毒素性急性肺损伤大鼠的保护作用

目的探讨人参皂甙对内毒素(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法将40只SD大鼠按雌雄对半随机分为正常对照组、LPS组、人参皂甙组和甲强龙组。腹腔注射LPS复制大鼠ALI模型。人参皂甙组实验前3 d腹腔注射人参皂甙,甲强龙组腹腔注射LPS的同时注射甲强龙。测定各组大鼠的氧分压(PO2)、氧合指数(PO2/F iO2)、肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量、肺通透指数(LPI)及肺湿干重比(W/D),观察病理表现及免疫组织化学法检测肺组织中Bc l-2和Fas蛋白水平的表达情况。结果各组PO2、PO2/F iO2、BALF蛋白含量、LPI、W/D及Bc l-2、Fas平均灰度值比较差异均有统计学意义。结论人参皂甙可能通过上调Bc l-2蛋白、下调Fas蛋白在大鼠ALI的发病中发挥一定的作用。

克仑特罗对COPD大鼠膈肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨克仑特罗对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠膈肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas表达的影响。方法将雄性SPF级W istar大鼠随机分为A、B、C三组,各组再分为造模前、造模2周、造模4周三个亚组。A组正常喂养;B、C组用气管注入脂多糖(LPS)加烟熏法造模;C组在造模基础上给予克仑特罗干预。用磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记及免疫组化法检测各组膈肌细胞凋亡率及Fas表达率。结果4周后,经肺HE切片证明B、C组造模成功。随时间推移,A组各亚组间细胞凋亡阳性率及Fas表达率无统计学差异,B、C组造模2周、4周亚组显著高于同期A组(P均<0.01),B、C组各亚组间无统计学差异;C组造模2周、4周亚组细胞凋亡阳性率显著低于同期B组(P<0.05)。结论烟雾、LPS在COPD形成过程中参与膈肌细胞凋亡调控,克仑特罗可能通过抑制氧化应激反应和下调Fas表达减少膈肌细胞凋亡,对COPD所致的膈肌疲劳有一定治疗作用。

NF-κB圈套寡核苷酸促进肺癌细胞A549凋亡的作用

目的观察NF-κB圈套寡核苷酸对NF-κB活性的影响,研究其在肺癌细胞A549凋亡中的作用机制。方法用转染技术将FITC标记的NF-κB圈套寡核苷酸转入人肺癌细胞A549中,通过荧光倒置显微镜和共聚焦显微镜进行核内定位的观察,凝胶迁移率实验(EMSA)检测转染前后NF-κB活性的变化。生长曲线观察低活性NF-κB对细胞增殖的影响。流式细胞仪、TUNEL检测细胞凋亡率。Westernblot检测NF-κB低活性引起的凋亡相关蛋白Bcl-2和Fas的改变。结果NF-κB圈套寡核苷酸转染后定位于细胞核内,EMSA显示转染后NF-κB活性明显下降。A549细胞对NF-κB圈套寡核苷酸敏感,细胞生长速度减缓。转染NF-κB圈套寡核苷酸的A549细胞凋亡率增加。NF-κB的低活性可以引起凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平下调和凋亡蛋白Fas表达增加。结论NF-κB圈套寡核苷酸具有促进肺癌细胞A549凋亡的作用,其机制可能与NF-κB圈套寡核苷酸通过下调NF-κB的活性使凋亡蛋白Fas表达增加和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达降低有关。

牛膝多糖对糖尿病大鼠肾组织细胞凋亡的影响

目的探讨牛膝多糖(ABPS)对糖尿病大鼠肾组织保护作用及其作用机制。方法将Wistar大鼠随机分为5组,正常对照组、模型组、ABPS300、200、100mg·kg-1·d-1组。8周后,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理变化,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察Bcl-2、Fas基因的表达。结果与模型组比较,ABPS组肾组织形态明显改善,肾组织细胞凋亡明显减少,Bcl-2表达上调,Fas表达降低。结论 ABPS对糖尿病大鼠肾组织有明显保护作用,其机制可能与抑制肾组织细胞凋亡及上调Bcl-2,降低Fas基因表达有关。

诱发口腔鳞癌细胞凋亡嵌合基因表达载体的构建

目的:获取含凋亡基因fas表达调控元件cdc25A片段和fas开放阅读框架的cdc25A-fas嵌合基因,构建和鉴定真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas,为将口腔鳞癌细胞固有的促细胞增殖信号转变为促细胞凋亡信号的研究奠定基础。方法:根据fas基因、cdc25A已知序列设计合成引物,采用PCR技术从pBLF58-1质粒中扩增得到嵌合基因cdc25A-fas;然后定向克隆至真核表达载体pAdTrack-CMV和pAdTrack,分别转化大肠杆菌E.coliDH5α感受态细胞;卡那霉素筛选阳性克隆;进行PCR、酶切鉴定和序列分析。结果:PCR扩增得到特异的1603bp的cdc25A-fas片段;筛选并鉴定得到含pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas的大肠杆菌E.coliDH5α阳性克隆。结论:成功构建了真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas,为下一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定基础。

银杏叶提取物对急性肝衰竭大鼠FADD表达的影响

目的观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对硫代乙酰胺(TAA)损伤的大鼠肝脏的作用及对FADD的影响,并探讨其作用机制。方法实验分5组,GBE低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg)连续灌服GBE 30 d,1次/d,正常对照组和模型组分别给与等体积的生理盐水;模型组、GBE低、中、高剂量组第28 d用TAA(300 mg/kg)腹腔注射,正常对照组腹腔注射等体积的生理盐水。用试剂盒检测血清中AST、ALT的水平,并分别用RT-PCR和Western blot的方法检测各组肝脏FADD在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果模型组与正常组相比,血清中ALT、AST水平明显升高,肝组织中FADD在mRNA和蛋白水平均上调;而GBE组与模型组相比,血清中ALT、AST水平明显降低,肝组织中FADD在mRNA和蛋白水平均下调。结论肝衰竭过程中FADD参与肝细胞的凋亡,GBE可通过FADD抑制急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡,从而对肝脏起到保护作用。

Fas和Bax蛋白表达与食管鳞癌放疗敏感相关性的研究

目的:探讨Fas和Bax蛋白在食管鳞癌术前放疗前后的表达及其与放疗敏感性的关系。方法:采用免疫组化SP法检测56例放疗前胃镜活检标本及放疗后食管癌根治性切除术后标本Fas和Bax蛋白的表达水平。结果:放疗前后食管癌组织中Fas蛋白表达分别为0.47±0.23和0.61±0.17,差异有统计学意义,P<0.05;放疗前后食管癌组织中Bax蛋白表达为0.44±0.20和0.54±0.21,差异无统计学意义,P>0.05。放疗前后Fas和Bax蛋白表达呈正相关,P<0.05。放疗前Fas和Bax蛋白表达与放疗后X线分级呈负相关,P<0.05;而放疗后Fas和Bax蛋白表达与放疗后X线分级无明显相关性,P>0.05。结论:Fas和Bax蛋白是反映中晚期食管鳞癌肿瘤细胞的放射敏感性和判断术前放疗效果的重要指标。

结直肠癌组织中胃泌素的表达与Fas／FasL和天冬半胱氨酸蛋白酶的关系

目的了解胃泌素（GAS）mRNA及其蛋白在结直肠癌组织中的表达情况，并探讨其与结直肠癌细胞凋亡指数（AT）和凋亡调控基因Fas／FasL、天冬半胱氨酸蛋白酶（easpases）的关系。方法采用巢式RT-PCR方法检测79例结直肠癌组织中GAS的mRNA表达．用TUNEL法检测细胞凋亡情况，结直肠癌组织中GAS、Fas／FasL、caspase-3、caspase-8的蛋白表达采用免疫组织化学SP法。结果结直肠癌组织中GASmRNA与其蛋白表达呈正相关（rGAS=0．99，P〈0．01）．高、中分化结直肠癌组织中GASmRNA及其蛋白的表达明显低于低分化者（χ^2，（高与低）=10．47、10．23，均P〈0．01；χ^2（中与低）=6．68、4．95，均P〈0．05）；GASmRNA及其蛋白在乳头状腺癌、管状腺癌的阳性表达率明显低于黏液印戒细胞癌及未分化癌（χ^2（乳与黏印）=4．80、6．22，χ^2（乳与未）=5．44、8．43，χ^2（管与黏印）=4．40、4．38．χ^2（管与未）=4．92、6．43，均P〈0．05）；DukesA、B期的GASmRNA及其蛋白阳性表达率明显低于C、D期（χ^2=4．84、4．45，均P〈0．05）。GAS高、中表达组的细胞AI明显低于低表达组，差异有统计学意义（q（高与低）=6．71，q（中与低）=4．60，均P〈0．01）；FasL阳性表达率在GAS低、中、高表达3组间相比。差异具统计学意义（χ^2=9．35，P〈0．011，其中FasL在GAS高、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组（χ^2（高与低）=6．24．χ^2（中与低）=4．74，均P〈0．05）：结论GAS对结直肠癌细胞凋亡的调控可能与Fas／FasL的表达失衡及其功能和信号系统的紊乱有关。GAS的检测可作为临床结直肠癌生物学行为的评估指标之一．

造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病发生与颗粒酶B、穿孔素及FasL基因表达的相关性

目的探讨白血病患者造血干细胞移植后体内 Fas 配体(FasL)、穿孔素(Perforin)及颗粒酶 B(Granzyme B)基因转录水平的动态变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生及发展的关系。方法应用竞争性定量 RT-PCR 方法检测17例白血病患者造血干细胞移植后 Granzyme B、Perforin 及FasL 的基因表达水平。结合临床,分析 FasL、Perforin 及 Granzyme B 基因表达动态变化与 aGVHD 的相关关系。结果 14例发生 aGVHD 的患者,诊断前与诊断时 Granzyme B、Perforin 和 FasL 基因表达水平分别为4.6±0.2,4.5±0.1,1.4±0.1和98.7±2.5,91.8±3.4,61.5±2.2,诊断时均比诊断前明显升高(P<0.05);Granzyme B、Perforin 和 FasL 基因表达水平先于 aGVHD 临床症状出现升高的例数分别为13例、14例和12例,并可根据变化趋势提示 aGVHD 预后。结论 aGVHD 发生时 Perforin、FasL、Granzyme B 基因表达水平明显升高。Perforin、FasL、Gralnzyme B 基因表达水平在一定程度上能够预示 aGVHD 的发生,并可提示 aGVHD 严重程度及预后。