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PIAS3绿色荧光蛋白表达载体构建及其对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响
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作者 纪华 李光辉 +2 位作者 王东林 胡义德 陈正堂 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2007年第11期830-833,共4页
目的:构建PIAS3绿色荧光蛋白真核表达载体,探讨外源性PIAS3对胶质瘤细胞U251周期和凋亡的影响。方法:利用RT-PCR扩增人全长PIAS3编码序列,并将其克隆到带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,得到重组质粒pEGFP-N1-PI-AS3。应用脂... 目的:构建PIAS3绿色荧光蛋白真核表达载体,探讨外源性PIAS3对胶质瘤细胞U251周期和凋亡的影响。方法:利用RT-PCR扩增人全长PIAS3编码序列,并将其克隆到带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,得到重组质粒pEGFP-N1-PI-AS3。应用脂质体法转染体外培养的人胶质瘤U251细胞株。荧光显微镜观察蛋白表达,用RT-PCR和Westernblot检测PIAS3的表达,Annexin V2FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞增殖周期变化。结果:转染PIAS3基因的细胞株外源目的基因和蛋白表达增强,瞬时转染48 h后,光镜下可见部分细胞变圆,部分细胞脱落死亡;对照组和未转染组无明显变化。流式细胞仪分析显示,pEGFP-N1-PIAS3转染组凋亡细胞增多,细胞凋亡率显著高于未转染组和pEGFP-N1转染组,P=0.0073;U251细胞转染pEGFP-N1-PIAS3后细胞周期阻滞于S期,S期细胞比例增高,P=0.025,G2期细胞比例降低。结论:外源性PIAS3使U251阻滞在S期,诱导胶质瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 / / pias3
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RNAi抑制PIAS3表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响 被引量:2
2
作者 纪华 余巍 +2 位作者 陈宏 李光辉 王东林 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期94-97,共4页
目的:构建针对PIAS3的RNAi质粒载体,初步探讨抑制PIAS3表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建3个RNAi载体,用脂质体法将其转染胶质瘤细胞系CHG-5,通过半定量RT-PCR筛选干扰效率最高的重组RNAi质粒。将该RNAi质粒转染体外培... 目的:构建针对PIAS3的RNAi质粒载体,初步探讨抑制PIAS3表达对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建3个RNAi载体,用脂质体法将其转染胶质瘤细胞系CHG-5,通过半定量RT-PCR筛选干扰效率最高的重组RNAi质粒。将该RNAi质粒转染体外培养的人胶质瘤U251细胞株,用半定量RT-PCR和Western blot检测PIAS3的表达。Annexin V2 FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞增殖周期变化。结果:转染干扰质粒的细胞株PIAS3基因和蛋白表达均有减弱。流式细胞仪分析,抑制PIAS3表达能够诱导胶质瘤U251细胞拮抗凋亡(P<0.01),同时出现细胞周期改变,表现为G2期细胞比例升高,S期细胞比例降低,具有显著性差异(P<0.05)。结论:下调PIAS3基因表达使U251阻滞在G2期,拮抗细胞凋亡。 展开更多
关键词 pias3 RNAI
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胶质瘤中STAT3通路及其负调控因子PIAS3活化状态和生物学效应的分析 被引量:3
3
作者 张朋 孙铮 +1 位作者 刘哲宇 李阳 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期719-722,727,共5页
目的探讨STAT3信号通路及其负调控因子PIAS3在胶质瘤细胞中的活化状态及生物学效应。方法采用免疫组织化学方法检测胶质瘤中p-STAT3及PIAS3的活化状态;STAT3通路抑制剂60μmol/L AG490作用胶质瘤U118、U87细胞24、48 h,MTT法观察U118、... 目的探讨STAT3信号通路及其负调控因子PIAS3在胶质瘤细胞中的活化状态及生物学效应。方法采用免疫组织化学方法检测胶质瘤中p-STAT3及PIAS3的活化状态;STAT3通路抑制剂60μmol/L AG490作用胶质瘤U118、U87细胞24、48 h,MTT法观察U118、U87细胞增殖能力的变化;免疫荧光检测AG490作用前后细胞p-STAT3及PIAS3蛋白表达的变化。结果 pSTAT3及PIAS3在不同级别胶质瘤细胞胞质和胞核内的表达无统计学差异,但在细胞核内p-STAT3和PIAS3的表达呈负相关;AG490处理细胞后,U118细胞数量无明显改变,U87细胞则表现为生长抑制。免疫荧光结果显示,AG490处理后,U118细胞pSTAT3和PIAS3表达水平均无显著改变,U87细胞p-STAT3核内表达下调,PIAS3出现明显核易位。结论 PIAS3通过核易位调控STAT3信号通路的活性,抑制胶质瘤细胞生长。 展开更多
关键词 STAT3 pias3 AG490
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神经型一氧化氮合酶(nNOS)与SUMO连接酶PIAS3相互作用结构基础鉴定 被引量:6
4
作者 胡露露 杜彩萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1055-1063,共9页
神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在中枢神经系统广泛分布。本课题组前期研究报道,神经活性增强促进神经型一氧化氮合酶SUMO化,继而上调其活性,激活下游ERK1/2信号通路,参与调控兴奋性突触传递。SUMO连接酶PIAS... 神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在中枢神经系统广泛分布。本课题组前期研究报道,神经活性增强促进神经型一氧化氮合酶SUMO化,继而上调其活性,激活下游ERK1/2信号通路,参与调控兴奋性突触传递。SUMO连接酶PIAS3可通过其N-末端AAs 43~86与nNOS结合,参与介导神经型一氧化氮合酶SUMO化。本文进一步筛选和鉴定nNOS中与PIAS3结合的氨基酸序列,深入研究nNOS与PIAS3相互作用的结构基础。采用分子克隆技术,分别构建nNOS缺失结构域突变体(AAs 1~1396、1~756和1~720)的真核表达载体,然后分别与Myc-PIAS3质粒共转染于COS7细胞。结果显示,AAs 1~720与PIAS3共转染组nNOS-PIAS3的结合水平显著低于其他组;Myc-nNOS(AAs 721~756)化学合成小肽与纯化的His-PIAS3在体外也可相互结合。结果表明,nNOS的AAs 721~756(CaM结合结构域,CaMB)可与PIAS3直接结合。GST pull-down进一步证明,nNOS的CaMB与PIAS3 AAs 43~86可直接结合。构建CaMB-pcDNA3.1真核表达载体,共表达nNOS、Myc-PIAS3和CaMB,CaMB共表达组nNOS-PIAS3结合明显降低。结果提示,CaMB通过竞争结合PIAS3从而干预nNOS与PIAS3的结合。将化学合成的穿膜肽Tat融合的CaMB(Tat-CaMB,5μmol/L)与皮质神经元预孵育1 h,用荷包牡丹碱(bicuculline,50μmol/L)诱导化学性长时程增强(long-term potentiation,LTP)。结果显示,Tat-CaMB可显著逆转bicuculline诱导的ERK1/2磷酸化(活化)水平的升高,与荷包牡丹碱处理组相比,下降了29%(P<0.05)。结果表明,Tat-CaMB可通过干预nNOS-PIAS3结合,进而抑制神经型一氧化氮合酶SUMO化及其下游ERK1/2信号通路的活化。通过上述研究,证明nNOS可通过CaM结合结构域(AAs 721~756)与PIAS3结合,并提供了一种鉴定和验证蛋白质间相互作用结构基础的有效方法。 展开更多
关键词 SUMO pias3 CaM
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PIAS3在人脑胶质瘤中的表达 被引量:4
5
作者 纪华 王东林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1240-1242,共3页
目的通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究。结果正常脑组织中未见... 目的通过观察PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)在不同级别胶质瘤中的表达,研究PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法运用免疫组织化学法对50例胶质瘤标本及5例正常脑组织中PIAS3的表达进行对照研究。结果正常脑组织中未见PIAS3表达,胶质瘤标本中的总阳性率为56%(28/50),两者之间差异有显著性(P<0·01);不同病理级别的阳性率和标记指数随着肿瘤恶性程度的升高而增加,但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤PIAS3阳性率无明显差异(P>0·05),Ⅰ~Ⅲ级与Ⅳ级阳性率之间有显著差异(P<0·01);Ⅰ级与Ⅱ级的标记指数之间、Ⅲ级与Ⅳ级的标记指数之间均无明显差异(P>0·05),低度恶性组(Ⅰ~Ⅱ级)与高度恶性组(Ⅲ~Ⅳ级)之间有显著差异(P<0·05)。结论PIAS3在胶质瘤中有表达,并与肿瘤的病理分级和恶性程度密切相关,提示其可能参与了胶质瘤的发生、发展。 展开更多
关键词 pias3
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PIAS3的表达与人脑胶质瘤恶性程度的关系 被引量:1
6
作者 王栋 吴敏 刘宁 《临床神经外科杂志》 CAS 2011年第5期249-251,共3页
目的探讨PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法收集病理确诊的30例不同恶性程度胶质瘤以及5例正常脑组织手术标本,采用光镜、免疫组化方法检测PIAS3表达水平;提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术验证PIAS3在人不同级别脑胶质瘤组... 目的探讨PIAS3表达与胶质瘤分化程度的关系。方法收集病理确诊的30例不同恶性程度胶质瘤以及5例正常脑组织手术标本,采用光镜、免疫组化方法检测PIAS3表达水平;提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术验证PIAS3在人不同级别脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达,进行比较对照研究。结果 PIAS3在正常脑组织中高表达,在人脑胶质瘤中表达均明显降低,两者之间存在显著性差异(P<0.01)。PIAS3人脑胶质瘤中表达水平呈随胶质瘤级别Ⅰ级,Ⅲ级和Ⅳ级(实体)组织增高而降低趋势,但在Ⅳ级(瘤中心坏死)组织中表达无明显下降,部分甚至高于正常脑组织中表达(P<0.05)。PIAS3在胶质瘤级Ⅱ级和Ⅲ级,Ⅲ级和Ⅳ级(实体)组织中的表达均有明显差异(P<0.01)。结论 PIAS3在胶质瘤组织中低表达并与胶质瘤级别呈负相关,提示其与胶质瘤的发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 pias3 PCR
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Inhibition of Radiation-Induced Lung Adenocarcinoma Cell Metastasis by Adenovirus of PIAS3 Overexpression Driven by Radiation-Inducible Promoter (<i>Ad-pig3RRP-PIAS3</i>)
7
作者 Ling Gao Qinghua Yu +4 位作者 Fengsheng Li Jiangbin Feng Xue Lu Qingjie Liu Xu Su 《Journal of Cancer Therapy》 2014年第14期1362-1365,共4页
Radiotherapy is one of important approaches for pulmonary adenocarcinoma. However, many studies have shown that radiation can also enhance the ability of tumor cells metastasis, although the lung adenocarcinoma could ... Radiotherapy is one of important approaches for pulmonary adenocarcinoma. However, many studies have shown that radiation can also enhance the ability of tumor cells metastasis, although the lung adenocarcinoma could be killed. The increased metastasis induced by radiation is associated with the activation of STAT3?in lung adenocarcinoma cells. Based on the importance role of?STAT3?in cell proliferation and survival, we can construct an adenovirus vector of?PIAS3 overexpress driven by radiation-induced promoter to inhibit the activation of STAT3 specifically. In this way, when?STAT3 was activated by radiation, the expression of?PIAS3 will be increased at the same time;this lead to the inhibition of invasion and metastasis caused by?STAT3 in lung adenocarcinoma cells. These researches are expected to develop a novel target and method for radiotherapy and molecular therapy of lung adenocarcinoma. 展开更多
关键词 Radiation Adenocarcinoma Metastasis Promoter pias3
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PIAS3的Myc融合蛋白真核表达重组质粒的构建
8
作者 李江 甄园丽 +3 位作者 杨南扬 张俊芳 王中南 李晓萌 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期201-204,共4页
目的:构建PIAS3(活化型STAT3抑制蛋白)的Myc融合蛋白真核表达重组质粒,并表达融合蛋白Myc-PIAS3。方法:采用PCR方法,扩增鼠PIAS3基因全长cDNA编码区序列。将该1851bp的特异性片段连接到T载体上,将其亚克隆至pCMV-Myc真核表达载体的SalⅠ... 目的:构建PIAS3(活化型STAT3抑制蛋白)的Myc融合蛋白真核表达重组质粒,并表达融合蛋白Myc-PIAS3。方法:采用PCR方法,扩增鼠PIAS3基因全长cDNA编码区序列。将该1851bp的特异性片段连接到T载体上,将其亚克隆至pCMV-Myc真核表达载体的SalⅠ和NotⅠ位点之间。将pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染前列腺癌PC3细胞,利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达。结果:重组pCMV-Myc-PIAS3质粒通过酶切和测序鉴定了其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定时有4357和1318bp2条带,XbaⅠ酶切鉴定时有3291bp和2384bp2条带,与预期结果一致。测序结果显示,13个氨基酸Myc在N端,然后是阅读框架正确的PIAS3的基因序列。pCMV-Myc-PIAS3重组质粒转染PC3细胞,利用Myc抗体通过Western blotting法检测融合蛋白Myc-PIAS3的表达,在相对分子质量68000处检测到特异的蛋白表达条带。结论:成功构建pCMV-Myc-PIAS3重组质粒,并表达融合蛋白Myc-PIAS3。 展开更多
关键词 pias3 Myc
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PIAS3抑癌效应研究进展
9
作者 鄢明果 刘亮明 张吉翔 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期1016-1019,共4页
肿瘤是一种基因病,涉及到癌基因的激活和/或抑癌基因的失活。在这些基因中,某个或某些基因可能起了关键作用,其通过对下游细胞信号分子或网络的影响,进一步影响细胞的增殖和凋亡过程,造成失控性细胞增殖,最终形成肿瘤。近年来由于对PIAS... 肿瘤是一种基因病,涉及到癌基因的激活和/或抑癌基因的失活。在这些基因中,某个或某些基因可能起了关键作用,其通过对下游细胞信号分子或网络的影响,进一步影响细胞的增殖和凋亡过程,造成失控性细胞增殖,最终形成肿瘤。近年来由于对PIAS3生物学功能的进一步认识,其在肿瘤发生发展中的作用也正日益受到了国内外学者的重视。文章将就PIAS3在肿瘤方面的研究进展作一简要介绍。 展开更多
关键词 pias3
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PIAS3与转录调控的研究进展 被引量:1
10
作者 吴敏 陶春 《内蒙古民族大学学报(自然科学版)》 2013年第4期458-462,共5页
PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)是PIAS蛋白家族中的一员,此蛋白家族最初是作为活化的STAT的转录活性抑制蛋白被发现的.PIAS3具有特殊的功能和结构域,因此影响了许多转录因子的活性.随着对PIAS3研究的增多,更多的PIAS3对... PIAS3(protein inhibitor of activated STAT3)是PIAS蛋白家族中的一员,此蛋白家族最初是作为活化的STAT的转录活性抑制蛋白被发现的.PIAS3具有特殊的功能和结构域,因此影响了许多转录因子的活性.随着对PIAS3研究的增多,更多的PIAS3对转录因子的作用机制被发现.现对PIAS3的转录调控方面的研究进展做一综述. 展开更多
关键词 pias3 SUMO
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增强PIAS3表达对CHG-5细胞生物学效应的影响 被引量:1
11
作者 纪华 余巍 +2 位作者 李光辉 王东林 陈宏 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2015年第17期1341-1346,共6页
目的探讨增强人胶质瘤CHG-5细胞内的活化STAT3抑制蛋白(protein inhibitor of activated STAT3,PIAS3)表达对CHG-5细胞增殖及凋亡等生物学效应的影响。方法构建PIAS3真核表达载体pEGFP-N1-PIAS3,使用脂质体法瞬时转染人CHG-5胶质瘤细胞... 目的探讨增强人胶质瘤CHG-5细胞内的活化STAT3抑制蛋白(protein inhibitor of activated STAT3,PIAS3)表达对CHG-5细胞增殖及凋亡等生物学效应的影响。方法构建PIAS3真核表达载体pEGFP-N1-PIAS3,使用脂质体法瞬时转染人CHG-5胶质瘤细胞,同时设置空白对照组和阴性对照组,转染48h后用RT-PCR、蛋白质印迹法和免疫组化法分别在核酸和蛋白水平检测目的蛋白表达,采用流式细胞技术检测转染后的胶质瘤细胞凋亡和细胞增殖变化。结果转染后的CHG-5细胞可见PIAS3绿色荧光蛋白表达,显微镜观察发现细胞形态改变,坏死细胞增多。转染组PIAS3mRNA的积分密度值为523 414.50±34 502.89,与空白对照组的135 668.00±6 693.66和阴性对照组的154 511.67±8 266.89相比,转染组PIAS3mRNA表达增强,χ2=13.053,P=0.01。转染组PIAS3蛋白的积分密度值为30.13±3.76,与空白对照组的13.83±0.77和阴性对照组的15.02±0.87比较,CHG-5细胞转染PIAS3基因后,PIAS3蛋白表达增强,χ2=14.193,P=0.001。提示转染后PIAS3mRNA和蛋白表达增加。转染组的早期细胞凋亡率为(12.5±1.9)%,较空白对照组的(6.4±1.1)%和阴性对照组的(5.4±1.8)%升高,χ2=7.407,P=0.005;转染组的活细胞率为(86.9±2.2)%,较空白对照组的(92.1±1.2)%和阴性对照组的(93.1±2.0)%降低,χ2=4.775,P=0.019。转染组S期细胞百分率为(35.2±4.2)%,高于空白对照组的(24.5±5.1)%和阴性对照组的(23.0±3.7)%,χ2=8.179,P=0.003;转染组G2期细胞百分率为(10.7±5.4)%,高于空白对照组的(21.3±4.0)%和阴性对照组的(27.8±5.2)%,χ2=17.121,P<0.01。结论外源性增强PIAS3表达,引起CHG-5胶质瘤细胞生长缓慢,出现S期阻滞,并促进细胞凋亡发生。 展开更多
关键词 pias3
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阿托伐他汀对房颤细胞模型中ATBF1/PIAS3/STAT3通路的影响 被引量:3
12
作者 张瑜丽 蒋奇 +1 位作者 周阳 汤依群 《药物生物技术》 CAS 2016年第1期17-21,共5页
探讨阿托伐他汀对心房颤动细胞模型中ATBF1/PIAS3/STAT3信号通路的作用。通过高频电刺激(5 ms,25 Hz,7 V/cm)HL-1心房肌细胞系构建房颤细胞模型,并采用CCK-8实验检测梯度浓度阿托伐他汀(0.01,0.1,1,10,50和100μmol/L)干预下心房肌... 探讨阿托伐他汀对心房颤动细胞模型中ATBF1/PIAS3/STAT3信号通路的作用。通过高频电刺激(5 ms,25 Hz,7 V/cm)HL-1心房肌细胞系构建房颤细胞模型,并采用CCK-8实验检测梯度浓度阿托伐他汀(0.01,0.1,1,10,50和100μmol/L)干预下心房肌细胞系HL-1细胞活性,以筛选出阿托伐他汀的药物安全浓度,同时应用Western blotting实验测定以上每组p-STAT3和STAT3蛋白表达情况来选择最佳给药浓度,并分别检测在对照组、房颤组和药物实验组3组中ATBF1/PIAS3/STAT3信号通路中各个蛋白表达水平。实验结果证明,CCK-8实验筛选阿托伐他汀的药物安全浓度为0.1-50μmol/L。房颤细胞模型中,ATBF1的蛋白表达量显著下调,PIAS3蛋白水平降低,p-STAT3水平明显升高,差异均具有统计学意义(P〈0.05),但总STAT3的表达水平并无显著性改变(P〉0.05)。阿托伐他汀药物干预后,p-STAT3蛋白与STAT3蛋白比值随浓度升高,在1μmol/L时达到最大。在此药物浓度下,房颤模型中ATBF1和PIAS3表达上调,p-STAT3表达下调,有统计学差异(P〈0.05),而总STAT3无显著性差异(P〉0.05)。提示阿托伐他汀抗心房颤动的分子作用机制可能与其抑制ATBF1/PIAS3/STAT3信号通路有关。 展开更多
关键词 ATBF1/pias3/STAT3通路
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PIAS3在结肠癌组织和细胞中的表达及意义 被引量:1
13
作者 李和平 熬建萍 杨政 《肿瘤学杂志》 CAS 2017年第2期106-110,共5页
[目的]观察PIAS3在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨PIAS3在结肠癌发生发展中的作用。[方法]采用免疫组织化学染色法检测60例结肠癌及同源癌旁组织中PIAS3蛋白的表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测人结肠癌SW480、SW620及C... [目的]观察PIAS3在结肠癌组织及细胞中的表达,探讨PIAS3在结肠癌发生发展中的作用。[方法]采用免疫组织化学染色法检测60例结肠癌及同源癌旁组织中PIAS3蛋白的表达,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测人结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中PIAS3 m RNA及蛋白表达水平。[结果 ]结肠癌组织中PIAS3蛋白表达显著高于癌旁正常组织(χ~2=8.543,P=0.006);且表达强度随肿瘤病理分化程度的降低、Dukes分期的增高及肿瘤体积的增大而逐渐增高,差异有统计学意义(P均<0.05);PIAS3在结肠癌SW480、SW620及COLO205细胞株中均有表达,其中COLO205细胞株中PIAS3蛋白及m RNA表达高于SW480和SW620细胞株(P<0.05)。[结论 ]PIAS3的表达水平以及活性与结肠癌的发生发展有关,可能为结肠癌的早期诊断及靶向治疗提供新的分子靶点。 展开更多
关键词 pias3 COLO205
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PIAS3在人膀胱癌及正常膀胱上皮中的表达及其意义
14
作者 王扬 何旺 +2 位作者 程志强 张纪恒 李鸣 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2009年第4期344-346,共3页
目的:探讨活化STAT3蛋白抑制蛋白(protein inhibitor of activated STAT3,PIAS3)在不同分级分期的人膀胱癌及正常膀胱上皮中的表达情况及其临床意义。方法:利用SP三步法免疫组织化学技术检测PIAS3在膀胱癌及正常膀胱上皮中的表达。结果:... 目的:探讨活化STAT3蛋白抑制蛋白(protein inhibitor of activated STAT3,PIAS3)在不同分级分期的人膀胱癌及正常膀胱上皮中的表达情况及其临床意义。方法:利用SP三步法免疫组织化学技术检测PIAS3在膀胱癌及正常膀胱上皮中的表达。结果:PIAS3在正常膀胱上皮的表达率和表达水平均显著低于膀胱癌组织(P=0.0000002;P=0.000003);且表达水平随分化程度的降低而升高(P=0.00001);在浸润性膀胱癌(T2~T4)中的表达水平显著高于其在表浅膀胱癌(Tis^T1)中的表达(P=0.02)。结论:试验结果提示,PIAS3蛋白异常表达可能与膀胱癌的发生发展关系密切;它可能成为具有潜在价值的膀胱癌标志物或者基因治疗新靶点。 展开更多
关键词 pias3
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运用新型的反向PCR策略高效构建基因的点突变体 被引量:3
15
作者 程龙 韩白玉 +9 位作者 侯莎 韩永健 徐小洁 蒋凯 李法曾 杨智洪 窦京涛 吕朝晖 张浩 叶棋浓 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第4期378-382,共5页
基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,如何高效、经济地构建基因点突变体是许多分子生物学研究遇到的棘手问题.以PIAS3点突变体的构建为对象,设计了新型的以反向PCR为基础的点突变构建流程,获得的点突变体质粒经测序... 基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,如何高效、经济地构建基因点突变体是许多分子生物学研究遇到的棘手问题.以PIAS3点突变体的构建为对象,设计了新型的以反向PCR为基础的点突变构建流程,获得的点突变体质粒经测序后均与预期相符,并在293T细胞内得到了正确表达.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础. 展开更多
关键词 PCR pias3
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PLAS3过表达抑制人脑胶质瘤U251细胞生长 被引量:1
16
作者 周金方 贡伟一 石磊 《临床神经外科杂志》 CAS 2011年第6期292-295,共4页
目的探讨PIAS3过表达对人脑胶质瘤U251细胞生长的作用及其可能的机制。方法通过实时荧光定量PCR检测PIAS3在正常脑细胞和脑胶质瘤U25 1细胞中的表达情况。转染PIAS3过表达载体,提高U251细胞中PIAS3表达水平,通过噻唑蓝(MTT)试验检测细... 目的探讨PIAS3过表达对人脑胶质瘤U251细胞生长的作用及其可能的机制。方法通过实时荧光定量PCR检测PIAS3在正常脑细胞和脑胶质瘤U25 1细胞中的表达情况。转染PIAS3过表达载体,提高U251细胞中PIAS3表达水平,通过噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖情况。Western Blot验证PIAS3表达与增殖相关基因PI3K及Akt间关系。结果 PIAS3在正常脑组织中相对高表达,而在人脑胶质瘤U251细胞中表达明显下降(P<0.01)。体外转染PIAS3过表达载体能明显抑制U251细胞生长,并且有效抑制PI3K活性及p-Akt表达,但对总的Akt无明显影响。结论胶质瘤U251细胞中异常低表达的PIAS3发挥着重要的增殖促进作用,过表达PIAS3可通过抑制PI3K/Akt通路有效抑制U251细胞增殖。 展开更多
关键词 pias3
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应用酵母双杂交技术筛选与p53相互作用的蛋白质
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作者 苏桂英 李慧艳 +5 位作者 潘欣 张佩景 靳宝锋 李卫华 张学敏 赵海泉 《科学技术与工程》 2006年第6期675-677,共3页
应用酵母双杂交技术筛选与p53发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在肿瘤发生、发展中发挥重要作用的调控机制。采用酵母双杂交技术,以p53C末端(62-393aa)作为诱饵筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用报告基因... 应用酵母双杂交技术筛选与p53发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在肿瘤发生、发展中发挥重要作用的调控机制。采用酵母双杂交技术,以p53C末端(62-393aa)作为诱饵筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用报告基因等实验提供的信息,经过重复验证排除假阳性以确定最后的阳性克隆。以p53C末端(62-393aa)作为诱饵最终筛选出了一个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这一个阳性克隆为:PIAS3(Protein inhibitor of activated stat3)。说明TPIAS3蛋白能与p53(62-393aa)发生特异性的相互作用。 展开更多
关键词 P53 NAS3
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