人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备

为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示:蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105,腹水的抗体效价为1×107;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。

β族胸腺素研究进展

胸腺素(Thymosins)主要是由胸腺产生的一种淋巴细胞生长因子,目前β族胸腺素(β-Thymosins, Tβ)越来越引起人们的关注。尽管其分子水平作用机制尚未阐明,但Tβ却与人类的许多生理及病理过程关系密切。随着研究的进一步深入,Tβ家族的潜在临床应用价值将被开发,这对某些疾病的诊断、治疗及预后均具有重要意义。现详细综述近5年国内外关于Tβ的最新研究进展,包括其与肌动蛋白、肿瘤、炎症反应、细胞调亡、血管生成及创伤愈合的关系。

尼罗罗非鱼MyD88基因荧光定量PCR检测方法的建立

为了准确分析尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)在天然免疫反应中的作用,根据MyD88EST序列(GenBank登录号:GR679416.1)和β-actin基因序列(GenBank登录号:AB037865.1),分别在保守区域设计并合成引物。实验利用5倍系列稀释的尼罗光罗非实鱼时肝定脏量cPDCNRA检样测品方构法建。标应准用曲2线-ΔΔ并Ct分进析行方融法解初曲步线检分测析了,建尼立罗尼罗罗非罗鱼非肝鱼脏M、脾yD脏88、的血S液Y和BR肌G肉re等en不Ⅰ荧同组织中的MyD88相对表达量。扩增结果表明,MyD88和β-actin基因标准曲线CT值检测范围分别为24～35和19～30,扩增效率分别为100%和96.7%,相关系数分别为0.998和0.995;熔解曲线分析显示产物均形组织成肝单脏一、特脾异脏峰和,血Tm液值中分高别丰为度78表.5达℃和。77.5℃。定量分析结果显示。

淫羊藿苷对小鼠破骨细胞β-肌动蛋白、抗酒石酸酸性磷酸酶、核因子-κB受体活化因子mRNA表达的影响

目的观察淫羊藿苷对体外培养小鼠破骨细胞β-肌动蛋白、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、核因子-κB受体活化因子(RANK)mRNA表达的影响。方法用浓度分别为25、30μg/L、1×10^(-8)mol/L的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)、1,25(OH)_2VitD3体外诱导培养小鼠骨髓源性破骨细胞,分别加入0、1×10^(-5)mol/L的淫羊藿苷,培养48 h后,抽提总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测破骨细胞中β肌动蛋白、TRAP、RANK mRNA表达的变化。结果与空白对照组比较,1×10^(-5)mol/L的淫羊藿苷可明显下调β-肌动蛋白、RANK mRNA的表达(P值均<0.05),但对TRAP mRNA的表达无明显影响(P>0.05)。结论淫羊藿可以通过下调β-肌动蛋白、RANK基因表达,从而抑制破骨细胞的分化形成及骨吸收。