黄杞总黄酮对慢性心力衰竭大鼠AT1/CARP信号通路及心肌自噬的影响

目的探讨黄杞总黄酮对慢性心力衰竭(心衰)大鼠血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)/心肌锚定重复蛋白(CARP)信号通路及心肌自噬的影响。方法SD大鼠随机分成5组:对照组、模型组、缬沙坦组(50 mg/kg)、黄杞总黄酮低、高剂量组(250、500 mg/kg),每组16只。模型组、缬沙坦组、黄杞总黄酮低、高剂量组大鼠建立慢性心衰模型,建模成功后,缬沙坦组、黄杞总黄酮低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组及模型组给予等体积的生理盐水,持续4 w。试验结束后,超声检查测定心功能指标,细胞自噬检测试剂盒检测心肌自噬指数,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌病理结构变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹测定心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,模型组大鼠左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显升高,左心室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)明显降低(P<0.05)。与模型组比较,缬沙坦组、黄杞总黄酮低剂量组、黄杞总黄酮高剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显降低,FS、EF明显升高(P<0.05);且黄杞总黄酮高剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显低于黄杞总黄酮低剂量组,FS、EF明显高于黄杞总黄酮低剂量组(P<0.05)。与缬沙坦组比较,黄杞总黄酮低剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显升高,FS、EF明显降低(P<0.05)。对照组心肌结构正常;模型组心肌横纹紊乱,心肌细胞明显肿胀,出现空泡情况,肌纤维溶解明显,有明显炎症细胞浸润;缬沙坦组及黄杞总黄酮高剂量组心肌炎症细胞浸润减少,心肌纤维排列整齐;黄杞总黄酮低剂量组心肌仍有明显病理变化。结论黄杞总黄酮对慢性心衰大鼠心功能及心脏病理改变有明显保护作用,能明显降低心肌细胞自噬水平;其机制可能与黄杞总黄酮可抑制心肌AT1、CARP mRNA和蛋白水平,进而抑制AT1/CARP信号通路的激活有关。

STAT3、MRP、LRP在肺腺癌A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中的表达及关系的研究

目的:探明STAT3与肺腺癌细胞多药耐药之间的关系。方法:采用免疫组化法测定A549及A549/CARP耐卡铂细胞株中STAT3、LRP、MRP蛋白表达情况。结果:STAT3在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数无显著性差异(t=1.519,P>0.05);LRP、MRP在A549组、A549/CARP组中阳性细胞数有显著性差异(t=3.350,P<0.01)(t=3.747,P<0.01);STAT3、LRP、MRP之间表达均无相关性(r=0.061,P>0.05)。结论:STAT3并未直接参与介导肺腺癌的多药耐药性;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌的耐药,但二者之间无相关性;STAT3信号传导途径与LRP、MRP蛋白的激活机制可能无关。

不同电学参数和水流条件下电栅对鲤(Cyprinus carpio)的阻拦效果

脉冲直流电导阻鱼技术已被广泛应用于阻止入侵物种扩散、驱赶鱼类远离危险区域并将其引导至有利区域,如鱼道。但是脉冲直流电的有效性受多方面因素的影响,其主导因素目前尚未定论。以鲤为研究对象,在静水条件下采用4因素3水平正交实验方法分析了脉冲电压、脉冲宽度、脉冲频率和电极摆放方式的电栅拦鱼效果及其对鱼类受伤尾数的主次影响,然后选择最优组合开展不同流速下(0,0.3,0.5 m/s)的驱鱼实验,分析流速对拦鱼效果的影响。结果表明:在静水工况下,影响拦鱼电栅效率的主要因素为电极布置方式>脉冲宽度>脉冲频率>脉冲电压,电极布置为方式1(垂直水流间距80 cm)、脉冲电压140 V、脉冲频率10 Hz、脉冲宽度10 ms是拦鱼效果最佳的组合。电学参数对鲤的伤害无显著性,平均受伤尾数不超过实验鱼总数的15%。流水条件下,三种流速工况下拦鱼电栅的阻拦率无显著差异,但是随着流速的增高阻拦率呈现先降低后增加的趋势。该研究将为保护鱼类资源和防止入侵鱼类跨区域传播提供依据。

响应面法优化鲢鱼鱼糕工艺研究

鲢鱼是我国重要的淡水鱼资源,因其感官品质和凝胶品质均低于海鱼,限制了其深加工产品的开发。该研究以鲢鱼为原料,考察了漂洗次数、盐擂时间、一段热诱导时间、二段热诱导时间对鱼糕的白度、保水率、质构特性、水分迁移、感官品质的影响,并采用响应面法对其加工工艺进行优化。结果表明,当漂洗次数为2次、盐擂时间为9.81 min、二段热诱导时间为19.69 min时,鱼糕的弹性为0.8525±0.02,感官评分为(92.57±0.59)分,与回归方程的预测值相近,说明此优化工艺可行。该研究结果可以提高淡水鱼深加工产品的开发,也为鱼糜制品深加工技术奠定了理论和技术基础。

建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)微卫星DNA亲权鉴定

利用16个微卫星座位对建鲤10个全同胞家系647个子代进行亲权鉴定。Cervus3.0分析表明,16个微卫星位点的平均多态信息含量为0.7025,平均等位基因数为6.63,期望杂合度平均为0.7405。当双亲未知时,累积排除概率为0.999225,已知单亲时的累积排除概率为0.999996,置信度为95%。进一步模拟分析表明,要达到亲权鉴定的要求在双亲未知时通常需要8～12个微卫星位点,已知单亲时需要5～8个微卫星位点。在双亲均未知的情况下进行亲权鉴定,94.6%的后裔找到了其父母本,真实鉴定率低于模拟分析预测值,分析可能是与候选亲本间存在亲缘关系、无效等位基因的存在以及分型错误等因素有关。9个建鲤全同胞家系的鉴定,为今后的遗传图谱构建、QTL定位及分子标记辅助育种研究奠定了基础。

鲤鱼(Cyprinus carpio)生长激素基因克隆及原核表达

采用逆转录—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从鲤鱼脑垂体总ＲＮＡ中扩增出编码鲤鱼生长激素（ＧＨ）成熟肽基因序列．定向克隆至质粒ｐＵＣ１８，克隆的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ不含信号肽序列并以新的起始密码子ＡＴＧ取代鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ第１个密码子ＴＣＡ．序列分析表明，与Ｋｏｒｅｎ报道的鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ相比有两个碱基差异，但推断的氨基酸序列完全一致．将鲤鱼ＧＨｃＤＮＡ定向克隆至原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建成重组鲤鱼ＧＨ基因表达载体ｐＢＶｃＧＨ８．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描分析表明：经４２℃诱导，ｐＢＶｃＧＨ８在大肠杆菌中可表达一分子量约２２０００的特异蛋白，表达量占细胞总蛋白的２９．２％．该基因重组的鲤鱼ＧＨ添加到饲料中投喂罗非鱼。

鲤鱼(Cyprinus carpioL．)头长、眼径、眼间距QTL的定位

用265个AFLP标记、127个微卫星分子标记、37个EST-SSR标记和16个RAPD标记对大头鲤/荷包红鲤抗寒品系的F2雌核发育群体44个个体进行基因型检测,构建鲤鱼遗传连锁图谱。利用软件WinQTLCart2.5采用复合区间作图法对头长、眼径、眼间距3个性状进行了QTL分析。结果显示,共检测到5个与头长性状相关的QTL,分别定位于鲤鱼连锁图谱的LG2(qHS-2-1)、LG3(qHS-3-1)、LG40(qHS-40-1)和LG4(qHS-4-2和qHS-4-3)上。其中qHS-40-1拥有最大的LOD值,为7.94,可解释的表型变异为34.29%。qHS-4-2的LOD值最小,为5.03,可解释的表型变异为11.52%。5个与头长性状相关的QTL加性效应值均为负值。检测到两个与眼径性状相关的QTL,分别定位于鲤鱼连锁图谱的LG39连锁群(qED-39-1)和LG40连锁群(qED-40-1)上,其中qED-40-1的LOD值比较大,为2.76,其加性效应值为负值,可以解释5.62%的表型变异;qED-39-1的LOD值为2.72,加性效应值为正值,可以解释9.77%的表型变异。检测到两个与眼间距性状相关的QTL,分别定位到鲤鱼连锁图谱的LG20连锁群(qEC-20-1)和LG28连锁群(qEC-28-1)上。其中qEC-20-1的LOD值比较大,为3.77,加性效应值为正值,可以解释8.29%的表型变异;qEC-28-1的LOD值为2.79,对应的加性效应值为负值,可以解释8.88%的表型变异。

草鱼不同月龄性腺组织学观察及性别特征基因cyp19a1a和amh的表达分析

为探讨草鱼(Ctenopharyngodon idella)性腺发生、性别分化及发育规律,本研究对1、2、3、4、5、6、12、24、36和48月龄草鱼性腺组织结构以及性别特征基因cyp19a1a和amh的表达差异进行了分析。组织切片结果显示,2月龄时,首次在生殖嵴中观察到原始生殖细胞,标志原始性腺形成。3月龄时,雌性草鱼性腺中观察到卵巢腔和卵巢小叶。4月龄时,观察到卵原细胞,表明其在3月龄时出现解剖学分化,4月龄时出现细胞学分化。4月龄雄性草鱼在性腺中观察到输精导管,5月龄时观察到精原细胞,表明其在4月龄出现解剖学分化,5月龄出现细胞学分化。12、24、36和48月龄草鱼卵巢分别处于发育的第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期,精巢则分别为发育的第Ⅱ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期。荧光定量结果显示,雌性特征基因cyp19a1a在卵巢中的表达量总体呈先上升后下降再上升的趋势,2月龄时显著上调(P<0.05),3、6和48月龄时处于峰值。雄性特征基因amh在精巢中表达量总体呈先上升后下降的趋势。2月龄时显著上调(P<0.05),5月龄时达到峰值。综上,草鱼性腺发育启动时间约为2月龄,雌雄性腺分化时间分别约为3月龄和4月龄,至4龄时雌雄性腺发育成熟。本研究结果丰富了草鱼的繁殖生理学资料,也为其性别调控技术研究奠定了基础。

一种求解多车型CARP问题的高效进化算法

对传统遗传算法的染色体编码机制和种群结构进行了改进,并借鉴单亲遗传算法和Memetic Algorithm(MA)算法的优秀思想,设计了一种解决CARP(Capacitated ArcRouting Problem)问题的高效算法HEGA。新算法不但有效解决了使用现有算法无力解决的多车型CARP问题,并且应用于一般的单车型CARP问题在求解效率和求解精度上也比现有MA算法效果更好。结合洒水车路径优化问题,通过一组真实的数据集合对文中算法在该问题上的求解能力做出评测。

石油钻井噪声与振动对鲤鱼(Cyprinus carpio)能量收支的影响

应用现场模拟实验方法测定了石油钻井噪声与振动对鲤鱼能量收支的影响。结果表明,该污染对鲤鱼摄食、生长、代谢和排泄等各能量收支组分均有显著影响,但其影响程度和趋势却不尽相同。鲤鱼摄食、生长和生长转换效率均随噪声与振动强度增大呈减小趋势;其中摄食较为敏感,但生长的受影响程度却显著大于摄食。与摄食和生长的变化趋势不同,在受到显著影响范围内,排泄能和代谢能随噪声与振动强度增大呈U型变化趋势;其敏感程度与摄食相同,受影响程度也显著低于生长。钻井噪声与振动对鲤鱼影响可分两个阶段;第一阶段为,鲤鱼能量摄入量降低导致各能量支出水平不同程度的下降;第二阶段为,噪声与振动进一步增强,除使摄食量继续减小外,同时造成体内代谢量和排泄量的增大,这两种影响的协同作用使鲤鱼生长大幅度降低。通过所建立的不同钻井噪声与振动强度下鲤鱼的能量收支模型,可以看出,鲤鱼生长大幅度降低总是与代谢量和排泄量增大相对应。

饲粮中添加刺梨渣对鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学的影响

[目的]探究饲粮中添加刺梨渣(Rosa roxburghii Tratt. residue)对鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学的影响,以期为刺梨渣饲料在贵州山区农村稻田养鱼中的推广应用提供科学依据。[方法]选取180尾健康无病、初始体重为25 g±1 g的鲤鱼,随机分为正常组(基础饲料中不添加刺梨渣)和刺梨渣饲喂组(基础饲料中添加0.4%刺梨渣),每组设3个重复,每个重复30尾,试验期60 d。试验结束后,采集鲤鱼中段肠道,通过显微镜观察、ELISA检测和基于液相色谱的代谢组学技术分析鲤鱼肠道组织形态、抗氧化能力、免疫力及代谢组学。[结果]与正常组相比,饲喂刺梨渣对鲤鱼肠道的正常结构无不良影响,且肠道绒毛长度和肌层厚度均极显著增加(P<0.01);刺梨渣饲喂组鲤鱼肠道中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低(P<0.05);刺梨渣饲喂组共显著富集到2-酮丁酸、L-(+)-乳酸、丙酸、琥珀酸、D-天冬氨酸、D-谷氨酰胺、黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶和D-焦谷氨酸等85种差异代谢物,这些代谢物主要富集到丙酸盐代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢,嘌呤代谢,嘧啶代谢等代谢通路。[结论]饲粮中添加刺梨渣可提高鲤鱼肠道组织抗氧化性能和免疫指标,可通过影响嘌呤和嘧啶代谢以及相关代谢物D-谷氨酰胺、黄嘌呤核苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、2′-脱氧尿苷-5′-单磷酸盐和尿嘧啶等来改善鲤鱼肠道健康,进而提高机体免疫力。

CARP问题的小环路启发式求解方法

弧路径规划问题(Arc Routing Problem,ARP)来源于回收垃圾,清洒街道,扫雪以及投递邮件等实际问题.CARP是车辆带有容积限制的ARP问题.本文研究了CARP与CVRP的转换,并提出了一种小环路方法来求解CARP.该方法先将CARP中所有弧分割为不同区域,每个区域会形成一个小环路,从而转换为CVRP问题进行求解.然后将CVRP求解结果释放为CARP的初始解,再用Tabu禁忌搜索方法进行优化.通过一个假设例子和两组标准算例的求解,结果验证了该算法的求解效率和精度,并为实际应用奠定了基础.

丙氨酰-谷氨酰胺对德国镜鲤幼鱼(Cyprinus carpio L.)血清生化指标及体组成的影响

选用270尾初始体重(12.97±0.18)g的德国镜鲤幼鱼,随机分为6组,每组3个重复,每个重复15尾。I组为对照组,饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组为试验组,分别饲喂在基础日粮中添加丙氨酰-谷氨酰胺(Aln-Gln)0.25,0.5,0.75,1.0和1.5%的日粮,试验期为12周,观察Aln-Gln对镜鲤血清生化指标及营养组成的影响。结果显示:与对照组相比,各试验组血清总蛋白和球蛋白含量显著升高(P<0.05);添加高剂量Aln-Gln(1.5%)试验组血清白蛋白显著提高(P<0.05);各组的血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及碱性磷酸酶活性差异不显著;各试验组全鱼粗蛋白质含量升高,其中Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组显著升高(P<0.05);各组的粗水分、粗脂肪和灰分含量差异不显著。结果表明,日粮中添加一定量的Aln-Gln能够显著促进鲤鱼幼鱼营养代谢,提高全鱼蛋白含量。

鲤鱼(Crprinus carpio)体细胞系的建立及其生物学特性分析(简报)

动物细胞的培养技术是1907年哈里逊[1]在淋巴块中对蛙的神经板培养成功开始的,其后近一个世纪以来,陆续成功地培养了哺乳动物、昆虫等各种动物细胞,并广泛用于生物科学的各个分支.鱼类的细胞培养的系统研究和建系实践大约起始于60年代,被公认的真骨鱼类的第一个永久性的细胞系--虹鳟性腺细胞系(RTG-2)是由Wolf[2]建立的.

恩诺沙星对湘云鲫(Triploid crucian carp)组织转氨酶(GPT、GOT)活性的影响

采用胸腔注射法,研究了恩诺沙星对湘云鲫(Triploid crucian carp)组织谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活性的影响。结果显示,给药后5 d,各试验组GPT、GOT酶活性均升高,与对照组之间呈显著差异水平(P<0.05);给药后10 d,各浓度组GPT酶活性有所降低,而GOT酶活性则继续升高,鳃的GOT酶活性达到了最大值;给药后15、20 d,各浓度组GPT酶活性继续下降,而肝脏、肾脏GOT酶活性在给药后15 d时达到最大值,之后开始下降;给药后25 d,鳃的GPT酶活性除200 mg/kg组外都恢复至正常水平,而肝脏、肾脏各浓度组的GPT酶活性显著低于对照组(P<0.05),肝脏的GOT酶活性恢复到了正常水平,而鳃和肾脏的GOT酶活性略高于对照组水平。

砷、铜、苯酚对鲤鱼(Cyprinus carpio Linn.)的联合毒性研究

应用微核试验、聚丙烯酰胺凝胶电泳和酯酶活性测定技术 ,比较和分析了 42d内饲养于 ρ(Cu2 +) 0 .0 1mg/L、ρ(As3 +) 0 .1mg/L、ρ(Phe) 0 .0 0 5mg/L及其二二组合物和三组合物溶液中鲤鱼嗜多染红细胞微核率 ,肝、肾脏酯酶活性和同工酶谱 .结果显示 ,ρ(Cu2 +) 0 .0 1mg/L对鲤鱼嗜多染红细胞微核无诱发作用 ,肝、肾脏酯酶活性无抑制作用 ;ρ(Phe) 0 .0 0 5mg/L和 ρ(As3+) 0 .1mg/L溶液中鲤鱼随时间延长其微核率相应升高 ,其肝、肾脏酯酶活性减弱 ,同工酶带减少 .砷、铜、苯酚间协同作用增大鲤鱼微核诱发效应 ,肝、肾脏酯酶活性减弱 ,同工酶带减少 .因此 ,建议对现行渔业水质标准应作进一步验证实验 ,要充分考虑污染物间协同效应 ,以便使渔业水质标准更符合实际 .图 3表 3参

鲤鱼(Cyprinus carpio L.)体重和体长QTL的定位

利用265个AFLP标记、127个微卫星分子标记、37个EST-SSR标记和16个RAPD标记(共445个标记)对大头鲤/荷包红鲤抗寒品系的F2代雌核发育群体44个个体进行基因型检测,构建鲤鱼(Cyprinus carpio L.)遗传连锁图谱;利用软件WinQTLCart2.5采用复合区间作图法对体重和体长两个性状进行了QTL定位分析。结果共检测到与两个与体重性状相关的QTL,分别定位到LG24连锁群(qBWh-24-1)和LG20连锁群(qBWh-20-1)上,可解释的表型变异分别为7.98%和20.05%;检测到两个与体长性状相关的QTL,分别位于LG2连锁群(qFS-2-1)和LG20连锁群(qFS-20-1),可解释的表型变异分别为5.69%和12.69%,4个QTL的加性效应均为负值。

六个繁育场异育银鲫的克隆系鉴定及特征分析

为了厘清湖北省异育银鲫(Carassius gibelio)繁殖群体的种质资源现状,研究以湖北省6个苗种繁殖场的异育银鲫亲本为研究对象,比较不同群体的生物学特征和品质性状的差异,利用基因组重测序进行品种与克隆系鉴定和遗传多样性分析。研究结果表明,根据180尾异育银鲫全基因组重测序的SNPs,共鉴定出10个异育银鲫克隆系,其中2个异育银鲫“中科3号”亚克隆系,5个异育银鲫“中科5号”亚克隆系和3个其他克隆系。遗传多样性分析表明,单核苷酸密度(SNP/kb)、单核苷酸多态性(p)、多态信息含量(PIC)和观测杂合度(H_(o))分别为11.17、0.0050、0.4332和0.5612。系统发育树和主成分分析结果显示,不同群体之间表现出中度到高度的遗传分化,同时也存在较为显著的交叉聚类现象,结合异育银鲫克隆系分布,表明除了梁子湖和正大群体外的繁殖亲本存在一定的种质混杂现象。不同克隆系之间的形态上存在差异,体高/体长和头长/体长可以作为初步判断异育银鲫形态的两个参考指标。异育银鲫“中科5号”和异育银鲫“中科3号”的肌肉营养成分中粗脂肪含量差异显著,而粗蛋白含量无明显差异。不同克隆系间的肌肉中17种脂肪酸含量均存在显著差异,DHA+EPA总量在不同克隆系之间也存在差异。研究不仅有利于异育银鲫种质资源的合理开发与保护,而且有助于异育银鲫新品种选育和养殖产业的可持续发展。

水温和盐度对鲤鱼(Cyprinus carpio L.)胚胎和前期仔鱼发育的影响

采用正交设计表〔L25(56)〕设计、分析实验,发现在适温范围(17～25℃)内,盐度为影响鲤鱼(CyprinuscarpioL.)胚后发育的主要因素,其次是温度,并且二者有显著的交互作用。胚胎发育所需时间与水温成负相关关系,相关方程为y=-3.9x+169.4,水温对鲤鱼胚胎发育速度的影响肌肉效应期之后较肌肉效应期之前大。盐度与鲤鱼胚胎孵化率呈负相关关系。经方差分析,鲤鱼胚胎和前期仔鱼发育的最佳孵化盐度为1‰左右,温度为21℃左右。

鲤鱼（Cyprinus carpio）生长激素基因的亚克隆及其序列分析

本文对ＰＣＲ扩增的６６８ｂｐ的ＤＮＡ片段进行了亚克隆，，然后以Ｓａｎｇｅｒ双脱氧中止法为原理，利用美国ＡＢＩ公司３７０Ａ自动核酸序列分析仪，确定了６６８ｈＰ的核苷酸序列。序列分析表明鲤鱼生长激素基因的开放读框含有６３０ｂｐ，并推测其中包括２２个氨基酸的信号肽和１８８个氨基酸的成熟多肽。鲤鱼生长激素基因的酶切图谱和序列分析的结果都证明我们已获得了全长的鲤鱼生长激素基因。