PD-L1/PD-L2对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及耐药研究

目的探讨程序性死亡配体1/2(PD-L1/PD-L2)对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对化疗药物的敏感性。方法在体外食管鳞癌KYSE150细胞系水平上,分别构建PD-L1杂合子敲除细胞系,慢病毒转染PD-L2过表达,将细胞分为WT组(PD-L1野生型)和PD-L1^(+/-)组(PD-L1杂合子敲除)、Ctrl组(对照)和OE-PD-L2组(PD-L2过表达),用RT-qPCR和Western blot验证PD-L1杂合子敲除和慢病毒转染PD-L2过表达效果以用于后续实验。采用EdU、细胞克隆形成实验、Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过CCK8法检测细胞增殖能力并计算抑制率来评估细胞对化疗药物的敏感性。结果与野生型WT组相比,PD-L1^(+/-)组细胞增殖(P<0.001)、迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)明显降低,差异有统计学意义。与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖和迁移能力增加(P<0.05),而侵袭能力无明显差异(P>0.05)。在顺铂药物梯度浓度干预下,与WT组相比较,PD-L1^(+/-)组细胞增殖活力明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。当顺铂药物浓度为20μmol/L时,与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖活力无明显变化(P>0.05),而在40μmol/L药物浓度作用下,与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖活力显著上升,差异有统计学意义(P<0.001)。加入不同浓度的五氟尿嘧啶后发现,与WT组相比,PD-L1^(+/-)组细胞增殖活力显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖活力显著下降(P<0.01)。比较WT组与PD-L1^(+/-)组特异性表达差异的蛋白,共获得25个差异表达蛋白质,其中差异倍数最为显著的上调蛋白为EGFR(Ser1070),下调蛋白为Smad4。结论PD-L1能够促进食管鳞癌细胞的恶性表型;PD-L2可以促进食管鳞癌细胞(ESCC)的增殖和迁移;PD-L1/PD-L2可以影响肿瘤细胞对顺铂和五氟尿嘧啶化疗药物的敏感性。

表达PD-L1/PD-L2的人胎盘间充质干细胞对外周血T细胞分泌IL-17的拮抗作用

目的探讨程序性死亡因子配体1(PD-L1)和PD-L2在人胎盘源性间充质干细胞(hPMSCs)上表达对外周血T细胞分泌IL-17的影响。方法应用酶消化法分离人胎盘间充质干细胞(hPMSCs),并进行表型及分化鉴定;RT-PCR、激光扫描共聚焦显微镜技术(LSCM)及流式细胞术(FCM)检测hPMSCs上PD-L1及PD-L2的表达;应用化学合成的PD-L1 siRNA、PD-L2 siR-NA沉默hPMSCs上PD-L1及PD-L2表达;密度梯度离心法分离纯化人外周血T细胞;细胞胞内因子染色法分析沉默PD-L1或PD-L2后hPMSCs对PMA活化的T细胞分泌IL-17的影响。结果除PD-L1外,hPMSCs高表达PD-L2;siRNA能够有效阻断PD-L1和PD-L2在hPMSCs上的表达;胞内染色结果显示,hPMSCs能够上调T细胞IL-17的分泌,阻断PD-L1或PD-L2后,T细胞IL-17的分泌被进一步上调,且PD-L1和PD-L2具有叠加作用。结论 PD-L1和PD-L2在hPMSCs上表达,可拮抗hPMSCs刺激外周血T细胞分泌IL-17的作用。

系膜增生性肾小球肾炎患者外周血单个核细胞及肾组织PD-L1/PD-L2的表达变化

目的观察系膜增生性肾小球肾炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肾组织活检标本中抑制性协同刺激分子PD-L1/PD-L2表达的变化。方法收集2007年11月-2008年5月在第三军医大学新桥医院住院的25例原发性系膜增生性肾小球肾炎患者作为病例组,另外选择10例正常人作为正常对照组。全血法多色流式细胞染色技术检测两组的PBMC CD4+和CD8+ T细胞上PD-L1和PD-L2的表达水平;免疫组化方法检测肾组织活检标本中PD-L1和PD-L2的表达情况。结果病例组患者PBMC CD4+ T细胞比例(31.78%±8.48%)明显高于正常对照组(22.17%±8.00%,P<0.05),而CD8+T细胞比例(23.06%±10.32%)与正常对照组(21.56%±5.32%)比较差异无统计学意义(P>0.05)。病例组患者PBMC CD4+和CD8+ T细胞上PD-L1表达阳性率(分别为14.21%±11.87%、12.92%±12.86%)均较正常对照组(分别为5.39%±4.92%、5.06%±4.61%)显著升高(P<0.05);而两组PBMC CD4+及CD8+ T细胞上PD-L2的表达很少甚至无表达,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。正常对照组中肾组织PD-L1表达很少甚至无表达,病例组肾小管上皮细胞可见PD-L1阳性表达;两组肾活检组织中均未检测到PD-L2表达。结论系膜增生性肾小球肾炎患者中抑制性协同刺激分子PD-L1表达上调,可能参与了疾病的免疫发病机制。

PD-1：PD-L1/PD-L2通路在结核感染中的免疫作用

PD-1:PD-L1/PD-L2通路在肿瘤和某些感染性疾病中发挥免疫抑制作用,而在结核病中的免疫作用尚不明确。结核菌感染后,免疫细胞上PD-1:PD-L1/PD-L2通路高表达,体外实验显示:用该通路的抗体阻断后保护性T细胞增强,而体内免疫作用不明确。PD-1与配体PD-L1结合后可能发挥免疫抑制作用,其中PD-L1表达受Th1细胞因子调控;PD-1与配体PD-L2结合后可能发挥免疫保护作用,其中PD-L2表达受Th2型细胞因子调控。利用Cas9-CRISPR基因敲除方法分别敲除特定免疫细胞上PD-1、PD-L1和PD-L2,可研究PD-1、PD-L1和PD-L2在结核感染中免疫作用及机制,为结核病的防控提供理论依据。

食管鳞状细胞癌(ESCC)中PD-1/PD-L1/PD-L2的表达与临床因素及预后的相关性

目的检验程序性细胞死亡分子1(programmed cell death-1,PD-1)/PD配体1(PD ligand-1,PD-L1)/PD配体2(PD-L2)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者中的表达,并评估其与临床特征及预后的关系。方法收集2007年1月至12月在复旦大学附属中山医院胸外科接受手术治疗的325例食管肿瘤患者的临床数据,通过免疫组织化学染色分析石蜡包埋的肿瘤样品及部分对应的癌旁组织中PD-1、PD-L1和PD-L2的表达,用免疫反应评分并分析其与临床特征及预后的关系。结果 PD-1、PD-L1、PD-L2三者阳性表达率分别为12.0%、52.6%、32.9%,PD-L(P<0.001)、PD-L1(P<0.001)、PD-L2(P=0.023)在癌旁组织和癌组织中的表达有差别。PD-L1的阳性表达与T分期(P<0.001)、术后分期(P=0.006)相关,PD-L2的阳性表达与T分期(P<0.001)、术后分期(P=0.002)及淋巴结转移(P=0.044)相关,与其他临床因素的相关性无统计学意义。PD-1(P=0.500)、PD-L1(P=0.058)、PD-L2(P=0.096)单阳性与患者生存状况均无明显关联。但三者表达均阴性的患者预后要显著优于仅其中一个因子表达阳性(HR=1.669)或二个以上因子表达阳性的患者(HR=1.606)。结论 PD-L1和PD-L2与ESCC患者的多个临床特征有关。虽然PD-1、PD-L1、PD-L2各自与患者预后之间无统计学意义关联,但表达均阴性的患者预后相对较好。

知母皂苷AⅢ通过JAK-2/STAT3/PD-L1信号通路增加A549/DDP对顺铂的敏感性

目的 探索知母皂苷AⅢ(timosaponin AⅢ,TA3)增加非小细胞肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞顺铂敏感性的作用机制。方法 选取A549/DDP细胞作为主要研究对象,利用CCK-8法检测TA3、顺铂以及两药联用对A549/DDP细胞增殖的影响;组别分为空白组、TA3组、顺铂组、TA3+顺铂组;应用细胞克隆形成检测联合用药对细胞增殖的影响;利用流式细胞检测术检测细胞凋亡率和周期分布;qRT-PCR和Western blot检测C-myc, cleaved-caspase-3,caspase-3基因mRNA和蛋白的相对表达量。Western blot检测用药后对细胞中JAK-2/STAT3通路蛋白表达的影响。流式细胞术检测细胞PD-L1的表达。结果 CCK8、克隆形成结果表明TA3组明显增加顺铂对A549/DDP细胞的敏感性;与顺铂组单独使用组相比,TA3和顺铂联用明显增加A549/DDP细胞凋亡率(P <0.05),诱导细胞周期阻滞在G0/G1期,同时抑制抗凋亡蛋白C-myc的mRNA和蛋白表达水平,促进凋亡蛋白caspase-3的mRNA和蛋白表达水平(P <0.05)。Western blot实验结果表明两药联用可以明显下调p-JAK2和pSTAT3蛋白表达水平(P <0.05)。流式细胞术结果显示TA3与顺铂联用能够抑制顺铂诱导的PD-L1的表达。结论TA3能增加A549/DDP对顺铂的敏感性,其机制可能与抑制JAK-2/STAT3信号通路和下调PD-L1的表达相关。

共刺激分子PD-L1、PD-L2和B7-H4在人子宫颈癌的表达及意义

目的：研究共刺激分子程序性死亡配体1（Programmed death ligand 1,PD-L1）、程序性死亡配体2（Programmeddeath ligand 2,PD-L2）和B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学PV-6000法检测PD-L1、PD-L2和B7-H4在10例正常人宫颈组织、10例高级别CIN（CINⅡ~Ⅲ级）和67例子宫颈癌中的表达,并分析3种共刺激分子的表达与子宫颈患者临床病理特征的相关性。结果：正常人宫颈组织上皮不表达PD-L1和B7-H4,而基底层细胞微弱表达PD-L2;CINⅡ~Ⅲ的瘤变宫颈上皮微弱表达PD-L1、PD-L2和B7-H4;子宫颈癌细胞表达PD-L1、PD-L2和B7-H4的阳性率分别为70%（47/67）、51%（34/67）和46%（31/67）。统计学分析显示宫颈癌细胞PD-L1的表达与癌细胞浸润深度明显相关（P〈0.01）,与年龄、组织学类型无关;PD-L2的表达与肿瘤的淋巴结转移（P〈0.05）有关;B7-H4的表达与肿瘤的淋巴结转移（P〈0.05）和局部血管内瘤栓形成（P〈0.05）相关。结论：人子宫颈癌细胞异常表达PD-L1、PD-L2和B7-H4,且与肿瘤浸润和转移密切相关。PD-L1、PD-L2和B7-H4可能成为子宫颈癌免疫治疗的潜在靶点。

系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞PD-L2分子的表达及其临床意义

目的:分析系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞PD-L2分子的表达及其与疾病活动程度的相关性。方法:收集26例系统性红斑狼疮患者及38例健康对照组外周血,Ficoll分离单个核细胞后,TRIZOL抽提总RNA,定量PCR分析PD-L2基因的表达,流式细胞仪检测CD14、PD-L2分子的表达。统计学分析其相关性及与疾病活动程度之间的关联。结果:定量PCR结果提示系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞PD-L2基因表达高于健康对照组(P<0.05),流式发现单核细胞上PD-L2高表达(P<0.05),且活动期患者表达高于稳定期,并且与疾病的评分(SLEDAI)呈正相关(P<0.05)。结论:免疫分子PD-L2可能参与系统性红斑狼疮疾病的进程并可能成为疾病预防及治疗的潜在分子。

PD-L1和PD-L2在树突状细胞上的表达及其生物学意义

探讨小鼠髓系DC (CD8α )中PD L1和PD L2的表达及其在T淋巴细胞活化中的作用。采用mCD4 0L CHO和TNF α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载DC 4 8h ;免疫荧光标记检测DC表型 ;RT PCR和realtime PCR检测PD L1和PD L2mRNA转录水平 ;ELISA测定IL 2的分泌水平 ;3 H TdR掺入试验和51Cr释放试验测定DC体外激发T细胞的增殖和细胞毒杀伤率。结果显示 :PD L1和PD L2随着DC的成熟呈上调表达 ,CD4 0配基化DC的PD L1和PD L2均为中度表达 ,TNF α激发的DC为高度表达 ,二者呈现差异性表达 (P <0 0 5 ) ;CD4 0配基化髓系DC分泌IL 2的量明显高于TNF α组 (P <0 0 5 ) ,体外刺激T增殖和激活CTL能力在CD4 0配基化DC组最高 (P <0 0 5 )。提示CD4 0配基化的小鼠髓系DC呈现PD L1和PD L2的中度表达 ,IL 2大量分泌 。

猪PD-1及其配体PD-L1和PD-L2 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测方法的建立及应用

本试验旨在研究猪PD-1及其配体在疾病状态下的转录水平,建立检测猪PD-1及其配体的Real-time PCR方法。根据GenBank中猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因序列,分别设计3对特异性引物,PCR扩增目的基因片段,回收目的基因片段与pMD18-T连接后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定正确,作为标准品绘制标准曲线,并进行特异性和重复性检测。结果显示,Real-time PCR的Ct值与模板浓度对数呈良好的线性反比关系,相关系数R2>0.99,熔解曲线出现狭窄单一峰;Real-time PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,呈单一目的条带,无引物二聚体,特异性强;组内和组间重复性检测结果显示,组内和组间的变异系数均小于3%,重复性好;用建立的Real-time PCR方法检测猪自然感染PCV2后PD-1及其配体转录水平,PD-L1和PD-L2转录水平极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05),PD-1转录水平无显著变化(P>0.05)。本试验建立了检测猪PD-1、PDL1和PD-L2mRNA的Real-time PCR方法并进行了初步应用,为猪PD-1、PD-L1和PD-L2基因表达模式研究奠定基础。

人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 克隆到PD L2基因cDNA编码区全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD L2胞外区的原核表达载体 ,并在大肠杆菌表达 ,免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD L2胞外区蛋白 ,相对分子质量Mr 为 2 2 0 0 0 ,与理论值大小相符。结论 成功克隆PD L2基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究PD L2功能提供了条件。

共刺激分子PD-L2在类风湿关节炎组织内的表达

目的探讨共刺激分子PD-L2在牛二型胶原(CII)诱导的类风湿关节炎模型小鼠免疫器官、关节及RA患者滑膜组织内的表达。方法使用牛二型胶原免疫DBA-1/j小鼠,建立小鼠类风湿关节炎模型;免疫组化检测类风湿关节炎标本PD-L2的表达变化;双色免疫荧光分析PD-L2的细胞学定位。结果免疫组化的结果证实,小鼠的骨髓、胸腺、脾脏及淋巴结有中有大量的PD-L2阳性细胞,免疫荧光分析结果表明这些PD-L2+细胞主要为CD68+巨噬细胞及CD31+内皮细胞。但PD-L2表达及分布在CIA小鼠内并没有显著提高。此外RA患者及CIA小鼠的滑膜组织内发现大量PD-L2阳性的细胞。结论 PD-L2高表达于CIA模型小鼠关节滑膜组织内的抗原递呈细胞(包括巨噬细胞及内皮细胞)表面,提示其有可能通过调节浸润于滑膜组织内的T细胞的功能状态并最终调节了关节炎的病理进程。

子宫颈鳞状细胞癌中PD-L2的表达及临床意义

目的探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)组织中程序性死亡配体-2(programmed death-ligand 2,PD-L2)的表达及临床意义。方法采用免疫组化EnVision法检测CSCC及子宫颈腺癌(cervical adenocarcinoma,CAC)组织中PD-L2的表达;分析PD-L2表达与CSCC临床病理特征、无瘤生存期(disease free survival,DFS)和总生存期(overall survival,OS)的关系。结果肿瘤细胞PD-L2的总阳性率为16.8%(24/143),肿瘤浸润性免疫细胞(tumor-infiltrating immune cell,TIIC)PD-L2的总阳性率为66.4%(95/143)。肿瘤细胞PD-L2在CSCC中的阳性率为16.3%(21/129),TIIC PD-L2在CSCC中的阳性率为65.1%(84/129);肿瘤细胞PD-L2在CAC中的阳性率为21.4%(3/14),TIIC PD-L2在CAC中的阳性率为78.6%(11/14)。肿瘤细胞中PD-L2表达与CSCC肿瘤浸润深度有关,其在浸润深度<1/3纤维肌层患者中的表达低于浸润深度>1/3纤维肌层患者(P=0.040);肿瘤细胞中PD-L2表达与CSCC患者年龄、脉管侵犯、肿瘤分化、肿瘤直径、淋巴结转移以及FIGO分期均无关(P均>0.05)。TIIC PD-L2表达与肿瘤分化相关,其在高+中分化肿瘤(75.0%,42/56)中的表达高于低分化肿瘤(57.5%,42/73)(P=0.039);TIIC PD-L2表达与CSCC患者年龄、脉管侵犯、浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移以及FIGO分期均无关(P均>0.05)。肿瘤细胞PD-L2表达与CSCC患者的DFS和OS均无关(P均>0.05)。CSCC中TIIC PD-L2阳性患者比PD-L2阴性患者的DFS(P=0.0072)和OS(P=0.0119)长。Cox单因素和多因素回归分析显示:TIIC PD-L2表达是影响CSCC患者DFS和OS的相关因素,但不是独立的预后因素。结论CSCC肿瘤细胞及TIIC均可表达PD-L2,TIIC PD-L2阳性者比阴性者的DFS和OS长;检测PD-L2的表达状态可为子宫颈癌的免疫治疗提供参考。

人乳腺癌中共刺激分子PD-L1、PD-L2的表达及其临床意义

目的探讨共刺激分子PD-L1、PD-L2在人乳腺癌的表达及其与临床病理特征、预后的相关性。方法采用免疫组化SP两步法检测PD-L1、PD-L2在10例正常乳腺组织、18例乳腺导管内癌和40例乳腺浸润性导管癌中的表达,并分析两种共刺激分子的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果正常人乳腺腺上皮不表达PD-L1和PD-L2,乳腺导管内癌弱表达PDL1和PD-L2,乳腺浸润性导管癌中PD-L1和PD-L2的阳性率分别为45%(18/40)、35%(14/40),显著高于PD-L1和PD-L2在乳腺导管内癌的表达。统计学分析结果显示PD-L1和PD-L2表达与乳腺癌淋巴结转移(P<0.05)密切相关。PD-L1和PD-L2表达与ER、PR表达(P<0.05)有相关性,但PD-L1、PD-L2表达与乳腺癌其他临床病理特征无相关性。PD-L1和PD-L2表达在ER、PR、HER-2均阴性的乳腺癌患者中高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人乳腺癌癌细胞异常表达PD-L1和PD-L2,且与淋巴结转移密切相关;PD-L1和PD-L2有望成为乳腺癌免疫治疗的潜在靶点。

抗原修复液pH值和抗体浓度对免疫组织化学技术检测PD-L2染色结果的影响

目的:探讨不同浓度抗体和不同pH值的抗原修复液对免疫组织化学反应结果的影响,以提高免疫组织化学染色阳性率。方法:采用3种不同抗体浓度作预处理后,分别在pH值6.0和pH值9.0条件下,进行免疫组织化学SP法检测PD-L2分子在食管磷状细胞癌组织中的免疫组织化学染色效果。结果:PD-L2抗体稀释浓度1∶400的免疫组化染色效果优于抗体浓度1∶800;pH值9.0的抗原修复液处理后的免疫组化染色效果优于pH值6.0的抗原修复。结论:PD-L2抗体稀释浓度1∶400,pH值9.0抗原修复液处理后的免疫组化染色效果最佳,既可提高免疫组织化学反应阳性表达率,又能提高制片质量,是理想的检测PD-L2分子免疫组织化学反应的优化方案。

人PD-L2(B7-DC)基因的克隆及其IgV+C段的原核表达

目的 克隆hPD L2 (B7 DC)基因并表达其IgV +C段。 方法 从人外周血细胞中分离出外周单个核细胞 ,诱导树突细胞 (DC)后通过RT PCR扩增出全长的PD L2基因片段 ;经DNA序列测定证实 ;用聚合酶链反应(PCR)技术克隆其胞外段hPD L2 (IgV +C) ,构建原核表达载体PGEX 4T 3/hPD L2 (IgV +C) ,并在大肠杆菌BL2 1 RIL中表达。结果 构建了其PD L2 (IgV +C)片段的原核表达载体 ;将转化菌BL2 1 RIL诱导表达后经SDS PAGE电泳分析显示在 5 0kd处有hPD L2 (IgV +C) /GST (GlutathioneS transferase)融合蛋白的高效表达。结论 PD L2 (B7 DC)基因的克隆及其胞外段PD L2 (IgV +C)的克隆和表达为PD L PD

PD-L1mRNA与PD-L2mRNA在口腔扁平苔藓中的表达特点及可能作用

目的:研究PD-L1mRNA、PD-L2mRNA在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者外周血与损害组织,以及在不同临床类型与病理分型中的表达特点。方法:采用实时定量PCR方法检测60例OLP患者(斑纹型35例,充血糜烂型25例;不伴异常增生38例,伴轻度异常增生22例)PD-L1mRNA、PD-L2mRNA表达水平,并以10名正常人外周血与黏膜组织作为对照,比较不同临床类型和病理类型OLP患者间PD-L1mRNA、PD-L2mRNA表达水平差异,并分析PD-L1mRNA、PD-L2mRNA在OLP患者外周血与损害组织中表达的相关性。利用SAS6.12软件包中的非配对两样本均数比较的Wilcoxon秩和检验,比较不同组别间的差异。结果:PD-L2mRNA在OLP患者外周血中表达降低,损害组织中表达升高,且在不同临床类型OLP患者之间存在显著差异(P<0.05)。PD-L1mRNA在OLP组与正常对照组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PD-L2分子可能在OLP患者全身与损害局部对OLP的发生、发展产生不同的影响。

PD-L2在小鼠未成熟树突状细胞上的表达及其生物学意义

目的探讨PD-L2分子在小鼠未成熟DCs上的表达及其在T细胞活化中的作用。方法采用GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导小鼠髓系DCs,采用FITC-Dextran吞噬实验和3H-TdR掺入试验鉴定未成熟DCs;采用流式细胞术检测未成熟DCs和经抗原负载及TNF-α刺激成熟的DCs上PD-L2、CD80和CD86的表达;混合淋巴细胞反应(MLR)和抗PD-L2单抗阻断试验分析未成熟DCs表达的PD-L2分子对T淋巴细胞的共刺激效应;3H-TdR掺入试验检测未成熟DCs对T淋巴细胞的促增殖效应;ELISA测定各组MLR反应上清中IL-2的分泌水平。结果经GM-CSF和IL-4联合方案体外诱导5～6d天的DCs抗原吞噬能力最强,且CD80和CD86的表达为中等水平,刺激T细胞增殖能力较TNF-α作用48h的DCs显著低下,其可视为未成熟DCs,未成熟和成熟DCs均表达PD-L2分子,但未成熟DCs的表达较为低下,且未成熟DCs表面PD-L2分子可抑制T细胞的增殖,抑制T细胞分泌IL-2。结论PD-L2分子表达在未成熟DCs可通过下调T细胞分泌IL-2介导未成熟DCs免疫不应答效应。

肿瘤免疫治疗的PD-L2视角

免疫检查点抑制剂的出现为恶性肿瘤的治疗带来了跨时代的革新。PD-1/PD-L1虽然是免疫检查点抑制剂的主要靶点,但机体免疫系统与肿瘤的交互作用极为复杂,免疫检查点分子如PD-1、PD-L1、CTLA-4存在多类结合蛋白,且亲和力不同,并介导不同的细胞生物学及免疫反应。因此在考察PD-1/PD-L1单抗的免疫效应时,不应简单地理解为阻断免疫检查点以激活免疫系统,可能还需考虑封闭PD-1/PD-L1后对其他配体、结合蛋白的作用及连带效应。PD-L2作为PD-1第二类配体,其免疫调节作用复杂而具争议。早期研究仅将PD-L2作为PD-1的次要配体而未给予足够关注,但越来越多的研究显示,PD-L2在肿瘤患者临床预后及PD-1单抗疗效预测方面显示出一定潜力。本文就PD-L2在肿瘤免疫治疗中的作用作一简述。

PD-L2在人胎盘间充质干细胞上的表达及其生物学意义

目的探讨PD-L2在人胎盘间充质干细胞黏附和迁移过程中的生物学意义。方法应用消化法分离、培养人胎盘间充质干细胞,体外扩增培养3代后用于实验;RT-PCR检测PD-L2在人胎盘间充质干细胞上的表达;应用化学合成的PD-L2 siRNA阻断PD-L2在人胎盘间充质干细胞上的表达;细胞计数法检测人胎盘间充质干细胞的黏附能力;Transwell法检测人胎盘间充质干细胞的迁移能力。结果人胎盘间充质干细胞高表达PD-L2分子,PD-L2 siRNA能有效阻断人胎盘间充质干细胞对PD-L2的表达;细胞计数结果显示,接种后0.5 h阻断组人胎盘间充质干细胞的黏附率与正常对照组相比无显著升高,在接种后1 h和3 h,阻断组人胎盘间充质干细胞的黏附率均明显高于正常对照组;Transwell检测结果显示,与正常对照组相比,在DMEM-LG、含SDF-1α的DMEM-LG、人胎盘间充质干细胞培养上清三种培养条件下,阻断组细胞迁移率均显著降低。结论 PD-L2表达在人胎盘间充质干细胞,且在人胎盘间充质干细胞的黏附和迁移中发挥重要作用。