利用PCR方法从人染色体DNA中扩增G-CSF基因的研究

以正常中国人脐带血提取的基因组ＤＮＡ为模板，采用ＰＣＲ方法扩增人Ｇ－ＣＳＦ基因组基因．通过优化和筛选扩增条件，使用不同的ＤＮＡ聚合酶，采用碱变性模板和热启动等方法，成功地获得了１．５ｋｂ的Ｇ－ＣＳＦ基因．

利用PCR方法从人染色体DNA中扩增G-CSF基因

利用PCR技术从染色体基因组DNA中扩增大DNA片段具有相当大的难度。本试验采用碱变性模板以及热启动等方法,成功地扩增出1.5kb的人基因组DNA,并讨论了影响扩增大DNA片段特异性和产量的因素。

转rhG-CSF基因鱼腥藻的重组基因及蛋白检测

提取质粒进行PCR和酶切鉴定人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)基因成功转入鱼腥藻7120中,并用酶联免疫方法测得转基因鱼腥藻7120-G-CSF中G-CSF蛋白在第21d表达量达到最大。对转基因蓝藻的生长曲线、叶绿素a含量测定结果表明,rhG-CSF基因转化蓝藻后,对蓝藻前中期的生长影响不大,但21d后生长速度下降,同时外源蛋白表达也达到最大值,这有利于转基因藻的大规模培养。