化痰祛瘀方联合咽三针治疗脑卒中吞咽障碍并发肺部感染疗效观察

目的:观察化痰祛瘀方联合咽三针治疗脑卒中后吞咽障碍并发肺部感染的临床疗效。方法:60例脑卒吞咽障碍并发肺部感染患者,随机分为两组,每组各30例。对照组采用国家脑卒中规范化治疗,治疗组在对照组的治疗基础上加用中药化痰祛瘀方雾化吸入、保留灌肠配合咽三针治疗,2周后统计治疗效果。结果:治疗组在改善吞咽、咳嗽咯痰无力等方面优于对照组(P<0.05)。结论:化痰祛瘀方配合咽三针治疗脑卒中后吞咽障碍并发肺部感染,能有效控制饮水呛咳、吞咽困难、咳嗽咯痰等症状,缩短抗生素使用的时间,降低抗生素的级别,减少患者就医费用,提高患者生活质量。

化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢的影响

目的基于CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢探讨化瘀祛痰方防治血脂异常的机制。方法32只SPF级SD大鼠分为空白对照组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组8只。除空白对照组外,其他各组给予高脂饲料喂饲,建立高脂血症模型。于第13周开始,化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀灌胃,空白对照组、模型组给予相应体积的生理盐水灌胃,每日1次,灌胃4周。采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;HE染色观察肝脏组织病理变化;Elisa检测各组大鼠肝脏14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acid,14,15-EET)水平;Real time RT-PCR检测肝脏组织细胞色素P450表氧化酶2J3(Cytochrome P450 oxidase 2J3,CYP2J3)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(Carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)mRNA水平;Western blot法检测肝脏组织CYP2J3、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-actived protein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase,ACC)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、CPT-1蛋白水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.05);肝脏脂质沉积显著,可见大量脂滴;肝脏组织内14,15-EET含量显著降低(P<0.01);肝脏CYP2J3、CPT-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经化瘀祛痰方及辛伐他汀干预后,大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.05);肝脏脂质沉积情况明显改善,脂滴数明显减少;肝脏组织内14,15-EET水平显著升高(P<0.01);肝脏CYP2J3、CPT-1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方可有效改善高脂血症大鼠血脂异常,减轻肝脏脂质沉积情况,其机制可能与CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢密切相关。

化痰祛瘀方联合硝苯地平对高血压中医证候、血液流变学及血栓前状态的影响

目的探讨化痰祛瘀方联合硝苯地平对高血压病患者中医证候、血液流变学及血栓前状态的影响。方法选取诊治的高血压病患者120例,随机分为对照组和观察组,每组60例,两组患者均给予硝苯地平片口服,观察组在以上用药基础上联合化痰祛瘀方治疗,均连续治疗4周,观察患者治疗前后中医证候积分变化,血液流变学指标血浆黏度(MP)、高切全血黏度(MH)、低切全血黏度(ML)、红细胞压积(HCT)、红细胞聚集指数(AI)变化,血栓前状态相关指标血小板a颗粒膜蛋白(GMP)、血管性血友病因子(vWF)、D二聚体(D-D)、凝血酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)变化,血压变化。结果两组治疗前中医证候积分、血液流变学、血栓前状态指标及血压水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);两组治疗后中医证候积分低于治疗前,且观察组低于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后MP、MH、ML、HCT、AI水平低于治疗前,且观察组低于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后GMP、vWF、D-D、PAI-1水平低于治疗前,且观察组低于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后收缩压及舒张压水平低于治疗前,且观察组低于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论化痰祛瘀方联合硝苯地平治疗高血压能有助于症状的改善及促进血压降低,改善患者血液流变学指标及血栓前状态,疗效明显。

基于AMPK调控ACC/CPT1信号通路介导脂肪酸代谢探究化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响

目的 观察化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响,并探究其作用机制。方法 采用1 mmol/L油酸棕榈酸混合液诱导HepG2细胞24 h构建脂质沉积模型,分别给予化瘀祛痰方含药血清、AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase, AMPK]抑制剂及抑制剂+中药联合干预,油红O染色观察脂质沉积情况,试剂盒检测细胞中甘油三酯(triglyceride, TG)含量,蛋白印迹法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase, ACC)、p-ACC、肉碱棕榈酰基转移酶-1(Carnitine Palmitoyltransferase-1,CPT1)蛋白相对表达量,以及实时荧光定量法检测细胞中AMPK、ACC、CPT1 mRNA相对表达水平。结果 与模型组相比,化瘀祛痰方含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,细胞中p-AMPK、CPT1蛋白及CPT1 mRNA相对表达量升高,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),AMPK蛋白及基因相对表达水平无明显差别(P>0.05);AMPK抑制剂组细胞中脂滴及TG含量升高,AMPK、CPT1蛋白及mRNA相对表达量降低,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量升高(P<0.05或P<0.01);与AMPK抑制剂相比,抑制剂+中药含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,AMPK、p-AMPK蛋白及AMPK mRNA相对表达水平无显著差异(P>0.05),ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量降低、CPT1则相对表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论 化瘀祛痰方含药血清可能通过激活AMPK使其磷酸化,并调控ACC/CPT1信号通路,抑制脂肪酸合成,促进脂肪酸氧化,从而降低HepG2细胞内的甘油三酯水平及脂质沉积。

扶正解毒化痰祛瘀方对肝癌介入术后肝脏微循环及肝纤维化指标影响

目的探讨扶正解毒化痰祛瘀方对肝癌介入术后肝脏微循环及肝纤维化指标的影响。方法选择2015年1月—2020年12月收治的肝癌患者110例,按随机数表法分为对照组55例和观察组55例,对照组给予肝癌介入治疗,在此基础上,观察组给予扶正解毒化痰祛瘀方治疗,两组均治疗2个周期后,对比两组疗效、中医证候评分、肝脏微循环、肝纤维化指标及健康状况与生活质量[生活质量量表(SF-36)]。结果观察组治疗总有效率78.57%高于对照组57.14%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组黄疸加深、高热烦渴、神昏谵语评分均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组袢周状态、管袢状态分及流态分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ、LN指标均降低,且观察组HA、PC-Ⅲ、C-Ⅳ和LN水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组健康状况均好转,观察组KPS评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组生理功能、心理功能、躯体疼痛、总体健康、活力、社会功能、情感职能、精神健康评分均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论给予肝癌介入术后患者扶正解毒化瘀祛痰方有助于改善肝循环,抑制肝纤维化,提高患者健康状况与生活质量。

化痰祛瘀方治疗缺血性脑卒中临床观察

目的:评价化痰祛瘀方治疗缺血性脑卒中恢复期的有效性。方法:对照组采用西内科常规治疗,治疗组除西医常规治疗外加以化痰祛瘀方,治疗后对两组患者临床疗效、神经功能缺损程度评分进行疗效判定,并进行统计学分析。结果:治疗组总有效率93%、对照组总有效率73%,两组比较有显著差异,治疗组优于对照组。对疗后两组患者的NIHSS量表评分进行比较,两组比较有显著差异,治疗组均优于对照组。结论:化痰祛瘀方可明显改善缺血性脑卒中恢复期患者症状,提高患者的生活质量,减少患者致残率。

当归六黄汤加减联合化痰祛瘀调瘿方对甲状腺功能亢进症患者TR-Ab、TPOAb表达的影响

目的研究当归六黄汤加减联合化痰祛瘀调瘿方对甲状腺功能亢进症患者促甲状腺激素受体抗体(TR-Ab)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)表达的影响。方法选取2019年1月—2021年1月在医院就诊的甲状腺功能亢进症患者148例,根据治疗方法的不同分为当归六黄汤组和联合组,各74例。当归六黄汤组给予当归六黄汤加减治疗,联合组在当归六黄汤组用药的基础上给予化痰祛瘀调瘿方治疗,两组均持续治疗8周。检测患者在治疗前及治疗4周、8周后TR-Ab、TPOAb表达水平。结果两组治疗后4周、8周TR-Ab、TPOAb、T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、Vm水平及甲状腺肿大、突眼、心悸心慌、多食易饥评分低于两组治疗前,RI、PI水平高于两组治疗前(P<0.05)。联合组治疗后4周、8周TR-Ab、TPOAb、T_(3)、T_(4)、FT_(3)、FT_(4)、Vm水平及甲状腺肿大、突眼、心悸心慌、多食易饥评分低于当归六黄汤组4周、8周,RI、PI水平高于当归六黄汤组4周、8周(P<0.05)。与当归六黄汤组相比,联合组治疗总有效率升高(P<0.05)。结论当归六黄汤加减联合化痰祛瘀调瘿方能够改善甲状腺功能亢进症患者TR-Ab、TPOAb表达水平,缓解患者临床症状,疗效显著。

化痰祛瘀消瘤方配合肝动脉化疗栓塞治疗中晚期原发性肝癌30例

目的:观察益气活血、祛瘀散结类中药配合肝动脉化疗栓塞治疗中晚期肝癌的疗效。方法:采用化痰祛瘀消瘤方(黄芪、夏枯草、海藻、白花蛇舌草、鸡内金、浙贝母、莪术、桃仁、蒲公英、枳实、青皮、玄参等)为主配合肝动脉化疗栓塞治疗本病30例,并设对照组,观察两组治疗前后症状及体征变化情况。结果:治疗组疗效明显高于对照组。两组生存率比较:两组6月生存率无显著性差异,而治疗组1年、2年的生存率明显高于对照组。两组治疗前后生活质量评分比较:治疗组明显优于对照组。两组近期疗效及瘤体大小变化,治疗组有效率明显高于对照组。治疗组白细胞下降、肝肾功能损害、胃肠道反应发生率方面略低于对照组,差异无统计学意义。结论:本方法对本病有益气活血,祛瘀散结的功效,可有效缩小肿瘤,延长患者生存期,提高其生活质量。

化痰祛风逐瘀方对癫痫患者发作的临床疗效

目的:观察化痰祛风逐瘀方对癫痫患者发作的临床疗效。方法:将96例癫痫患者随机平均分为对照组和治疗组,对照组给予西医常规治疗,治疗组在对照组常规治疗的基础上给予化痰祛风逐瘀方治疗,观察两组患者的治疗效果。结果:治疗组患者治疗后的总有效率为95.8%,脑电图异常的改善率为72.9%;对照组治疗后总有效率为60.4%,脑电图异常的改善率为39.6%,两组总有效率和改善率的比较均具有显著差异(P?0.05),治疗组疗效明显优于对照组。治疗组治疗前后的月平均发作次数、血糖、血钙和血镁的浓度有极其显著的差异(P?0.01);治疗组治疗后的月平均发作次数较对照组治疗后有显著差异(P?0.05)。结论:化痰祛风逐瘀方不但可有效控制癫痫发作,提高临床疗效,同时对改善患者的生活质量、降低不良反应的发生也具有显著作用。

益气化痰祛瘀方对慢性间歇缺氧大鼠肺血管重塑的影响及其机制研究

目的探讨益气化痰祛瘀方对慢性间歇缺氧大鼠肺血管重塑的影响及其机制。方法将24只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和中药干预组,8只/组。除了正常对照组外,其余两组大鼠置于低氧舱中制备慢性间歇缺氧模型。4周后,中药干预组给予益气化痰祛瘀方灌胃,正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,3组大鼠每次灌胃量均为19.2 mL/kg·次^(-1),连续灌胃28 d。干预结束后,处死各组大鼠,取肺组织进行HE染色,观察病理形态学特征,采用qPCR法检测肺组织PI3K、Akt、mTOR的基因表达水平,Western Blot法检测肺组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达水平。结果模型组大鼠肺组织HE染色结果显示,肺血管壁增厚,管壁周围炎性细胞浸润增多,肺泡腔扩大甚至融合成肺大疱;中药干预组大鼠的肺血管壁厚薄较均匀,未见明显增厚,管壁周围炎性细胞浸润减少,肺泡形态结构较完整。qPCR检测结果显示,模型组大鼠肺组织PI3K、Akt、mTOR的mRNA表达水平较正常对照组明显升高(P<0.05),中药干预组则较模型组显著降低(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达水平显著上升(P<0.05),中药干预组较模型组明显下调(P<0.05)。结论益气化痰祛瘀方可以改善慢性间歇缺氧大鼠的肺血管重塑,其机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路相关。

化瘀祛痰方对痰瘀互结证急性冠脉综合征患者血小板功能及活性的影响

目的 探讨影响痰瘀互结证急性冠脉综合征(Acme coronary syndrome, ACS)患者血小板功能及活性的相关因素及化瘀祛痰方对其的作用。方法 前瞻性开放标签招募2022年6月—2023年6月就诊于辽宁中医药大学附属医院心内科,符合痰瘀互结证ACS诊断标准同时服用双联抗血小板聚集药物患者50例为研究对象,给予化瘀祛痰方治疗4周。检测化瘀祛痰方治疗前后血小板压积(Plateletcrit, PCT)、花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)最大聚集率、二磷酸腺苷(Adenosinediphosphate, ADP)最大聚集率、血小板活化标记物全血P选择素CD62p、血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物PAC-1水平,探讨化瘀祛痰方对其的作用。同时采用Pearson、Spearman相关系数分析探讨血小板功能及活性参数与ACS重要危险因素:吸烟史、体质量指数(Body Mass Index, BMI)、血脂水平、2型糖尿病病史、高血压病病史的相关性。结果 1.化瘀祛痰方治疗后,痰瘀互结证ACS患者血清总胆固醇(Total Cholesterol, TC)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein, LDL-C)水平明显下降,载脂蛋白A1(Apoprotein A1,APO-A1)水平明显上升,差异有统计学意义(P<0.01);血清甘油三酯(Triglycerides, TG)、载脂蛋白B(Apoprotein B,APO-B)、脂蛋白A[Lipoprotein(a),LPa]水平呈下降趋势,高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein, HDL-C)水平呈上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。2.化瘀祛痰方治疗后,痰瘀互结证ACS患者血小板压积减低,AA最大聚集率下降,CD62p、PAC-1含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);ADP最大聚集率下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3.吸烟史、BMI、血脂水平与AA、ADP最大聚集率、CD62p、PAC1、血小板压积均无明显关系;2型糖尿病病史与血小板压积之间存在显著相关关系(P<0.05),且为正相关;高血压病病史与AA最大聚集率、CD62p之间存在显著相关关系(P<0.05),且均为正相关。结论 化瘀祛痰方能够一定程度上降低痰瘀互结证ACS患者血小板聚集功能及活性,发挥其防治痰瘀互结证ACS的作用。吸烟史、BMI以及血脂水平与痰瘀互结证ACS患者血小板聚集功能及活性均无明显相关性。2型糖尿病病史与痰瘀互结证ACS患者血小板压积之间存在正相关。高血压病病史与痰瘀互结证ACS患者AA最大聚集率、CD62p之间存在正相关。

从阳微阴弦探讨化痰祛瘀方治疗冠心病的证治特点

近年来导师在大量冠心病人群诊治工作中,发现痰瘀互阻型已逐渐成为冠心病患者的主流证型,尽管大部分冠心病患者的证型较为复杂,或伴气虚、阳虚,或伴气滞,或伴寒凝,但瘀血、痰湿相互搏结仍是主要的证治特点,二者互为因果,瘀滞心脉,且伴随整个发病阶段。汉·张仲景所著《金匮要略》中指出胸痹的基本病机为"阳微阴弦",诸代医家对此有不同的解读,对胸痹治疗有重要的指导意义。文章通过大量的文献研究,从胸痹的古籍论述、"阳微阴弦"理论源流、"阳微阴弦"继承及发扬、"阳微阴弦"对化痰祛瘀方指导等方面来一一论述,为治疗冠心病提供更多的思路。

补肾化痰祛瘀方治疗女性月经不调临床观察

目的:对补肾化痰祛瘀方治疗女性月经不调患者的临床治疗效果进行观察。方法:选取女性月经不调患者140例,并随机将患者分为中药治疗组和西药对照组,各组患者70例。西药对照组患者采用常规药物治疗,中药治疗组患者采用补肾化痰祛瘀中医疗法治疗。连续治疗3个月经周期,比较患者的临床疗效与不良反应的具体发生情况。结果:治疗后,治疗组临床总有效率达95.4%,对照组临床总有效率达67.2%,治疗组临床疗效评估结果优于对照组(P<0.05);治疗组不良反应发生概率8.57%,对照组患者不良反应发生概率31.43%,治疗组低于对照组的发生率(P<0.05)。结论:通过应用补肾化痰祛瘀疗法对女性月经不调患者治疗,与常规西药治疗具有一定的优势,能够对患者机体起到良好的改善作用,安全性高,患者不良反应发生率低,改善了患者的生活质量。

陈莹补肾化痰祛瘀方辨治肥胖型多囊卵巢综合征

陈莹教授认为多囊卵巢综合征系脾肾阳虚,湿阻气滞、痰瘀互结,高胰岛血症和胰岛素抵抗等多种因素相互影响,属"闭经""崩漏""瘢瘕""不孕"等范畴;提出"益肾健脾、化痰行瘀,攻补兼施,固本祛邪",根据"肾-天癸-冲任-胞宫"生殖轴特点,结合月经周期调治,自拟补肾化痰祛瘀方,调整月经周期、促进排卵;注重调整生活方式,低热量饮食,耗能锻炼,适饮食、调起居、畅情志。

化瘀祛痰方干预糖酵解途径对高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方干预肝脏糖酵解途径对高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制。方法将24只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组和化瘀祛痰方组,每组8只。正常组给予基础饲料喂饲,模型组和化瘀祛痰方组给予高脂饲料喂养制备高脂血症模型。造模时间为4周,造模结束后灌胃给药4周。化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方10 mL/(kg·d)灌胃,其余两组给予等量生理盐水。全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;HE及油红O染色观察大鼠肝脏组织形态学改变;ELISA法检测糖酵解关键酶己糖激酶-II(HK-II)、磷酸果糖激酶(PFKM)及丙酮酸激酶(PKM2)活性;用蛋白免疫印迹法(Western Blot法)检测肝脏HK-II、PFKM、PK、cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax、Bcl2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肝脏HK-II、PFKM、PKM2、cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax、Bcl2 mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高,HDL-C含量有下降趋势;HE染色显示大鼠的肝细胞肿胀明显,肝细胞脂肪变性;油红O染色显示胞浆内含有大量脂肪空泡蓄积;肝脏HK-II、PFK、PKM2活性降低;肝脏组织HK-II、PFKM、PKM2蛋白及mRNA表达降低,cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax/Bcl2蛋白及mRNA的表达增高;与模型组比较,化瘀祛痰组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低,HDL-C含量有升高趋势。肝脏HK-II、PFKM、PKM2活性升高。肝脏组织HK-II、PFKM、PKM2蛋白及mRNA表达升高,cleaved-caspase3、cleaved-PARP、Bax/Bcl2蛋白及mRNA的表达降低;肝细胞形态恢复或者部分恢复,胞浆内脂滴含量明显减少。结论化瘀祛痰方可能通过调控糖酵解途径,抑制肝脏细胞凋亡,减轻肝脏细胞脂质沉积,进而防治高脂血症。

健脾祛痰化瘀方调节miR-155/Rheb/mTOR途径介导内皮细胞自噬防治动脉粥样硬化机制研究

目的探讨健脾祛痰化瘀方调节miR-155/Rheb/mTOR途径介导内皮细胞自噬防治动脉粥样硬化(atherosclerotic,AS)的机制。方法将40只ApoE小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,8只C57BL/6 Cnc小鼠作为正常组。除正常组给予基础饲料外,其余各组给予高脂饲料。造模12周后,灌胃给药,正常组与模型组给予相应体积的生理盐水,阿托伐他汀组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组给予相应药物。4周后全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;HE染色观察主动脉病理及斑块变化情况;采用透射电镜观察主动脉自噬体超微结构的变化;实时荧光定量Q-PCR法检测miR-155、LC3、Rheb、GAPDHmRNA的表达;采用Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测LC3、Rheb、p70s6k、p-p70s6k、mTOR、p-mTOR及β-actin蛋白的表达。结果与正常对照组相比,模型组ApoE小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平均显著升高,HDL-C水平显著下降(P<0.01);HE染色结果显示模型组小鼠主动脉管腔中斑块面积范围较大、程度较重;电镜结果显示模型组小鼠主动脉超微结构自噬小体增多;模型组ApoEAS小鼠主动脉LC3-I、LC3-II、miR-155 mRNA表达显著下调(P<0.01),Rheb mRNA表达显著升高(P<0.01);模型组ApoEAS小鼠主动脉LC3-II/LC3-I显著下降(P<0.01),Rheb、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K蛋白表达显著升高(P<0.01)。经阿托伐他汀和健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组治疗后,与模型组相比,阿托伐他汀组以及健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组血清中TG、TC、LDL-C水平均发生显著性降低(P<0.01),HDL-C水平无明显变化趋势;HE染色结果显示阿托伐他汀和健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组小鼠主动脉管腔中斑块面积范围明显减小、程度明显减轻;电镜结果显示阿托伐他汀和健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组小鼠主动脉超微结构显示自噬小体减少;阿托伐他汀组以及健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组LC3-I、LC3-II、miR-155mRNA表达显著上调(P<0.01或P<0.05),Rheb mRNA表达显著下调(P<0.01或P<0.05);阿托伐他汀组以及健脾祛痰化瘀方药低、中、高剂量组LC3-II/LC3-I表达有所上调(P<0.01或P<0.05),Rheb、p-mTOR/mTOR、p-P70S6K/P70S6K蛋白表达显著下调(P<0.01或P<0.05)。结论健脾祛痰化瘀方可能通过调节miR-155/Rheb/mTOR途径介导内皮细胞自噬从而达到防治AS的作用。

化瘀祛痰方药含药血清调控PI3K/AKT通路对肝癌细胞自噬及上皮间质转化的调控作用研究

目的探讨化瘀祛痰方药含药血清调控PI3K/Akt通路对肝癌细胞自噬及上皮间质转化的调控作用。方法20只SD大鼠随机分成两组:空白组、化痰祛瘀方组,化瘀祛痰组给予16 g/kg灌胃,空白组给予等量生理盐水灌胃。各组大鼠连续灌胃10 d,1次/d。将HepG2细胞分为4组:空白对照组,转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)处理组,TGF-β1+化痰祛瘀含药血清组,TGF-β1+阿霉素组。收集上述各组细胞,CCK-8法分析化瘀祛痰方对肝癌细胞增殖的抑制作用,MDC染色法检测HepG2细胞自噬,Western Blot、qPCR检测各组细胞自噬、上皮间质转化相关蛋白和基因Beclin-1、LC3、E-cadherin和Vimentin的影响以及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果化瘀祛痰含药血清能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,MDC染色法显示化瘀祛痰方促进自噬小泡的形成。Western Blot和qPCR结果显示化瘀祛痰方上调Beclin-1、LC3 II水平促进自噬(P<0.01),下调E-cadherin水平(P<0.01),同时上调Vimentin水平(P<0.01),抑制HepG2细胞上皮间质转化,p-PI3K、p-Akt蛋白水平均显著下调(P<0.01)。结论化瘀祛痰方可能通过抑制PI3K-Akt通路活化,诱导HepG2细胞自噬,抑制细胞上皮间质转化。

化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)AS小鼠主动脉G6PD/NF-κB表达及炎症水平的影响

目的基于G6PD/NF-кB表达,探讨化瘀祛痰方对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化(athrosclerotic,AS)小鼠斑块及炎症反应的影响及机制研究。方法24只ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,给予高脂饲料喂养12周。选用8只C57BL/6J小鼠作为空白组,给予普通饲料喂养。化瘀祛痰方组以及辛伐他汀组分别给予相应的药物灌胃,空白组与模型组给予等量的生理盐水。4周后采用酶联免疫法(ELISA)检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉斑块形态学改变;ELISA法检测各组小鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平;Western Blot法及实时荧光定量Q-PCR法检测主动脉IL-6、IL-1β、TNF-α、G6PD、NF-κB蛋白及mRNA的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C含量无明显改变(P>0.05),主动脉内膜增厚,管腔狭窄,大量粥样斑块形成,血清中IL-6、IL-1β、TNF-ɑ水平显著升高(P<0.05或P<0.01),主动脉内IL-6、IL-1β、TNF-ɑ、G6PD、NF-κB蛋白及mRNA水平显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,化瘀祛痰组及辛伐他汀组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C含量无明显改变(P>0.05),主动脉斑块较模型组明显减小,血清中IL-6、IL-1β、TNF-ɑ水平显著降低(P<0.05或P<0.01),主动脉内IL-6、IL-1β、TNF-ɑ、G6PD、NF-κB蛋白及mRNA水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方能够减小主动脉斑块大小,延缓AS进展,其机制可能与其调控G6PD/NF-κB表达,降低G6PD、NF-κB蛋白水平、抑制炎症反应有关。

化瘀祛痰方含药血清通过抑制内质网应激通路蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞损伤

目的从体外的角度探讨化瘀祛痰方含药血清对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical veins endothelial cells, HUVECs)损伤的保护作用,并从内质网应激途径(endoplasmic reticulum stress, ERS)探讨其机制。方法实验选取人脐静脉内皮细胞系HUVECs为研究对象,分为正常对照组,ox-LDL处理组、化瘀祛痰方含药血清低、中、高剂量组,通过比色法检测NO生成量;通过免疫荧光法检测ATF6激活情况;通过免疫印迹法检测ERS通路相关蛋白表达情况。结果和正常对照组相比,ox-LDL处理组NO的生成量显著下降(P<0.01),内质网应激相关蛋白IRE1、PERK和GRP78蛋白表达增高(P<0.01),内质网应激相关蛋白ATF6发生明显的核转位;与ox-LDL处理组相比,化瘀祛痰方含药血清低、中、高剂量组NO的生成量显著增多(P<0.05,P<0.01,P<0.01),内质网应激相关蛋白ATF6核转位程度降低,内质网应激相关蛋白IRE1、PERK和GRP78蛋白表达水平降低,并且呈剂量依赖方式,中、高剂量效果显著(P<0.01,P<0.01)。结论化瘀祛痰方含药血清可有效缓解ox-LDL诱导的HUVECs细胞功能障碍,其机制可能与提高NO的分泌量、抑制内质网应激途径相关蛋白表达有关。

基于网络药理学探究化瘀祛痰方介导hsa-miR-93的靶基因机制探究

目的应用网络药理学技术及miRNA挖掘技术探究化瘀祛痰方介导hsa-miR-93的靶基因作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中药分子机制生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)检索化瘀祛痰方各中药的化学成分和作用靶点。并在targetscan、miRDB、PicTar、microRNA数据库中对hsa-miR-93的靶基因进行预测。并在Cytoscape 3.7.2中构建化瘀祛痰方-有效成分-靶基因-hsa-miR-93网络图。以及String网站中构建相关的蛋白质相互作用关系图,最后在David数据库和R3.6.2中进行GO生物学功能富集分析和KEGG通路富集分析。结果预测得到化瘀祛痰方173个活性化合物,hsa-miR-93交集靶基因279个,其中38个活性化合物与16个hsa-miR-93靶基因呈现潜在作用机制,并且富集到其作用机制可能存在于酶抑制剂活性、核激素受体结合、蛋白激酶活性调节、细胞周期蛋白依赖性活性调节等生物学功能,其通路可能与细胞周期、细胞衰老、肝细胞癌、癌症中的MicroRNAs、JAK-STAT、AMPK、HIF-1等信号通路有关,并可能与ESR1、SLC2A4、CCND1、APP、ATP1A2等靶基因起着重要作用。结论通过网络药理学的方法探究了化瘀祛痰方介导hsa-miR-93的多成分-多靶点-多通路的作用机制特点,为进一步揭示化瘀祛痰方介导hsa-miR-93的靶基因作用机制提供了新思路和新方法。