升清降糖合剂对H_2O_2诱导凋亡的胰岛β细胞周期和Caspase-3的影响

目的:探讨升清降糖合剂(以下简称SQ)对氧化损伤的胰岛β细胞凋亡的保护作用。方法:以H2O2诱导建立胰岛细胞凋亡模型,采用半仿生提取法提取复方有效成分,以10μg/ml作用于胰岛细胞凋亡模型,采用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,分光光度法检测凋亡蛋白Caspase-3的活性。结果:H2O2可诱导胰岛β细胞凋亡,加用SQ后细胞凋亡现象明显下降。与正常组比较,模型组RINm5F细胞在G2/M期比例减少(P<0.01),保护组RINm5F细胞在G0/G1的比例减少(P<0.05),在G2/M期细胞比例上升(P<0.01)。模型组RINm5F细胞Caspase-3活化增强,模型组原代胰岛细胞Caspase-3活化增强,保护组Caspase-3活性下降,与模型组比较,有统计学差异(P<0.01)。结论:SQ对氧化损伤诱导的胰岛β细胞凋亡具有保护作用,其机制与调节胰岛β细胞的细胞周期和调节凋亡相关蛋白Caspase-3表达有关。

升清降糖合剂对1型糖尿病小鼠胰岛细胞形态功能及凋亡相关基因的影响

目的:探讨升清降糖合剂(简称SQ)对1型糖尿病小鼠胰岛细胞形态功能及凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达的影响。方法:小剂量连续多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立1型糖尿病小鼠模型。根据不同的干预方式将1型糖尿病小鼠分为模型组、SQ低剂量组、SQ高剂量组。每周测小鼠体质量和血糖,于干预第6周末,各组小鼠麻醉后心脏取血,ELISA法测定血清C肽水平,取胰腺组织HE染色观察病理学改变,免疫组化法观察胰岛素表达情况,RT-QPCR法检测胰腺组织凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果:平均体质量:正常对照组(26.32±0.91)>SQ高剂量组(24.40±1.42)>SQ低剂量组(23.01±1.70)>模型组(22.81±1.61),SQ高剂量组与模型组相比,差异具有显著性(P<0.01)。空腹血糖:模型组(18.69±2.21)>SQ低剂量组(15.92±3.35)>SQ高剂量组(14.13±4.19)>正常对照组(6.51±0.70),SQ低、高剂量组相较于模型组血糖明显降低,差异有显著性(P<0.05、P<0.01)。血清C肽:正常对照组(0.72±0.09)>SQ高剂量组(0.69±0.07)>SQ低剂量组(0.60±0.06)>模型组(0.33±0.08),SQ低、高剂量组血清C肽与模型组相比均明显升高,差异有显著性(P<0.01)。Bcl-2mRNA、BaxmRNA、Bcl-2/Bax比值:Bcl-2mRNA正常对照组(1.03±0.28)>SQ高剂量组(0.66±0.20)>SQ低剂量组(0.39±0.17)>模型组(0.29±0.05);BaxmRNA模型组(5.73±0.80)>SQ低剂量组(2.80±1.11)>SQ高剂量组(1.68±0.90)>正常对照组(1.04±0.31);Bcl-2/Bax比值正常对照组(1.09±0.56)>SQ高剂量组(0.50±0.26)>SQ低剂量组(0.15±0.08)>模型组(0.05±0.01),与模型组相比,SQ低、高剂量组Bcl-2mRNA、Bcl-2/Bax比值均显著升高,BaxmRNA均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。胰岛病理切片HE染色形态学观察发现:模型组小鼠胰岛明显萎缩,轮廓不规则,胰岛细胞数量明显减少,排列紊乱,分布稀疏,胞质染色浅呈空泡状,部分胞核固缩,伴有炎症细胞浸润,SQ低、高剂量组小鼠胰岛细胞受损程度较轻。胰岛素免疫组化染色:模型组小鼠胰岛素染色阳性面积仅占胰岛较小部分,SQ低、高剂量组染色较深,在胰岛内分布较广泛均匀。结论:SQ能明显增加糖尿病小鼠的体质量,降低空腹血糖水平,提高血清C肽水平,具有保护胰岛细胞功能,促进胰岛素分泌的作用。其机制可能与其上调1型糖尿病模型小鼠胰腺组织Bcl-2mRNA表达、抑制BaxmRNA表达,调节Bcl-2/Bax比值,抗胰岛细胞凋亡有关。

升清降糖合剂对糖尿病大鼠胰岛细胞形态及功能的影响

目的:探讨升清降糖合剂(简称SQ)对糖尿病大鼠空腹血糖水平和胰岛细胞形态及功能的影响。方法:腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型。根据不同的干预方式将糖尿病大鼠分为模型对照组、SQ低剂量组、SQ中剂量组、SQ高剂量组。每两周测空腹血糖和体重,于干预后第八周末,各组大鼠麻醉后采集血样,ELISA法测定血清C肽水平,取胰腺组织HE染色观察病理学改变。结果:空腹血糖水平,模型对照组(26.92±3.68)>SQ低剂量组(23.87±2.86)>SQ高剂量组(20.66±2.81)>SQ中剂量组(20.66±2.81)>正常对照组(4.55±0.57),SQ中、高剂量与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清C肽水平,正常对照组(2.27±0.47)>SQ中剂量组(1.76±0.91)>SQ高剂量组(1.74±0.79)>SQ低剂量组(1.11±0.36)>模型对照组(0.70±0.62),SQ中、高剂量组与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。胰岛病理切片形态学观察发现,模型对照组大鼠胰岛细胞数量减少,排列紊乱,胞质呈空泡状,部分细胞核固缩;SQ各组大鼠胰岛细胞受损程度较轻。结论 SQ能明显降低糖尿病大鼠的空腹血糖水平,提高血清C肽水平,保护胰岛细胞功能。

升清降糖合剂治疗糖尿病45例临床观察

目的:观察升清降糖合剂(SQ)治疗糖尿病临床疗效。方法:将30例1型糖尿病(TIOM)和60例2型糖尿病(T2DM)患者各对半分为基础组和SQ组,其中T1DM以胰岛素注射为基础治疗,SQ组加服升清降糖合剂;T2DM以二甲双胍加拜糖苹为基础治疗,SQ组加服升清降糖合剂。观察周期为2月。结果:治疗后T1DM患者中,总有效率SQ组为86.7%,基础组为40.0%,2组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。T2DM患者中,总有效率SQ组为80.0%,基础组为36.7%,2组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。治疗后T1DM SQ组糖化血红蛋白(GHbAlc)、空腹血清C肽改善优于基础组,差异有显著性意义(P<0.05);T2DM患者空腹血糖(FBG)、餐后2小时血糖(P2hBG)、GHbAlc、餐后2h血清C肽、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)SQ组改善优于基础组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:升清降糖合剂可降低和稳定糖尿病患者血糖并调节血脂,明显改善糖尿病病人的临床症状,推断升清降糖合剂是通过保护T1DM患者自身残存胰岛细胞的功能,促进胰岛素的合成和分泌,及通过改善T2DM患者胰岛素抵抗状态,加强胰岛素的利用,从而调节体内的糖脂代谢,有利于提高早期糖尿病病情的控制和防止心血管等并发症的进展,提高糖尿病患者的生存质量,值得临床进一步推广。

升清降糖合剂对氧化损伤胰岛β细胞Bcl-2、Bax、Akt表达的影响

目的:研究升清降糖合剂(SQ)对氧化损伤胰岛β细胞凋亡的保护作用,探讨其对凋亡蛋白Bcl-2和Bax、Akt蛋白表达的影响。方法:H2O2诱导胰岛细胞氧化损伤模型,流式细胞术测定胰岛细胞凋亡率,以荧光免疫法检测细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达,免疫印迹测定细胞Akt磷酸化表达。结果:模型组细胞凋亡率增高,达(35.18±2.41)%,与正常组比较有差异(P<0.01),与SQ保护组比较有差异(P<0.01)。模型组细胞内Bax荧光表达较正常组增加(P<0.05);SQ保护组Bcl-2荧光表达上升,Bax荧光表达下降,与模型组比较,均有统计学差异(P<0.05)。对于胰岛细胞瘤株RINm5F,模型组磷酸化Akt蛋白表达减少,与正常组比较有统计学差异(P<0.05),与保护组比较有统计学差异(P<0.01);对于原代胰岛,模型组磷酸化Akt蛋白减少,与正常组比较有统计学差异(P<0.05),与保护组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:升清降糖合剂可降低氧化损伤胰岛β细胞凋亡率,上调Bcl-2,抑制Bax蛋白表达,促进Akt磷酸化。升降糖合剂抗氧化和抗凋亡机制与调节凋亡蛋白Bcl-2和Bax及PI3K-Akt通路有关。

升清降糖合剂对糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护作用及机制研究

目的:探讨升清降糖合剂(简称SQ)对糖尿病大鼠胰岛细胞Fas、Fas L蛋白表达的影响及对糖尿病大鼠胰岛β细胞的保护机制。方法:腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病大鼠模型。根据不同的干预方式将糖尿病大鼠分为模型对照组、SQ低剂量组、SQ中剂量组、SQ高剂量组。干预后第8周末,摘除并制备胰腺组织标本,免疫组化染色观察胰岛细胞Fas、Fas L蛋白的表达及TUNEL法检测胰岛细胞的凋亡率。结果:空腹血糖水平,模型对照组>SQ低剂量组>SQ高剂量组>SQ中剂量组>正常对照组,SQ中、高剂量组与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。胰岛细胞Fas蛋白的表达:药物干预后,与模型对照组比较,SQ中、高剂量组均减少(P<0.05),SQ低剂量组无明显改变(P>0.05)。胰岛细胞Fas L蛋白的表达:药物干预后,与正常对照组比较,模型对照组、SQ低、中、高剂量组均增高(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。胰岛细胞凋亡率:药物干预后,与模型对照组比较,SQ中、高剂量组降低(P<0.05),SQ低剂量组无明显改变(P>0.05)。结论:SQ能明显降低糖尿病大鼠的空腹血糖水平,抑制胰岛细胞凋亡,其机制可能是通过抑制胰岛细胞Fas蛋白的表达而实现。

升清降糖合剂对1型糖尿病小鼠T细胞功能影响

目的:研究升清降糖合剂(简称SQ)对1型糖尿病小鼠的降糖作用和对胰岛细胞的保护作用,探讨其对调节性T细胞数量的影响。方法:小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立1型糖尿病小鼠模型。根据不同的干预方式将1型糖尿病小鼠分为正常组、模型组、SQ低剂量组、SQ高剂量组。每周测小鼠体质量和血糖,干预6周后各组小鼠麻醉后心脏取血,ELISA法测定血清C肽水平,取胰腺组织一部分做HE染色观察病理学改变,另一部分免疫组化观察CD4+T细胞的浸润情况。取脾脏,流式细胞仪检测各组小鼠脾细胞CD4+CD25+Fox P3+T细胞的阳性率。结果:体质量:正常组(26.32±0.91)>SQ高剂量组(24.40±1.42)>SQ低剂量组(23.01±1.70)>模型组(22.81±1.61),SQ高剂量组体质量比SQ低剂量组、模型组体质量较高,差异有显著性(P<0.01)。空腹血糖:模型组(18.69±2.21)>低剂量组(15.92±3.35)>高剂量组(14.13±4.19)正常组(6.51±0.70),SQ高剂量组比模型组血糖明显降低,差异有显著性(P<0.05)。血清C肽:正常组(0.72±0.09)>高剂量组(0.66±0.11)>低剂量组(0.68±0.07)>模型组(0.48±0.17),SQ低剂量组、SQ高剂量组血清C肽与模型组相比均较高,差异有显著性(P<0.01)。胰岛HE染色形态学观察发现:模型组小鼠胰岛变小,形状呈现出不规则扭曲,部分胰岛细胞出现严重挤压变形,胰岛内可见大量淋巴细胞浸润,SQ各组小鼠胰岛T淋巴细胞浸润现象减少或无浸润。胰岛CD4+抗体免疫组化观察:模型组胰岛细胞小,内可见大量CD4+阳性的T细胞浸润,SQ组胰岛损伤轻,可见少量CD4+阳性的T细胞浸润胰岛周边,或者无浸润。流式细胞仪测CD4+CD25+Fox P3+T细胞的阳性率结果:正常组(4.97±0.17)>SQ高剂量组(4.20±0.73)>SQ低剂量组(3.89±0.42)>模型组(3.40±0.82),SQ高剂量组、SQ低剂量组脾细胞CD4+CD25+Fox P3+T细胞比率比模型组高,差异有显著性(P<0.05)。结论:SQ能增加1型糖尿病小鼠体质量,降低空腹血糖,升高血清C肽,保护胰岛细胞免受T淋巴细胞浸润,增加脾CD4+CD25+Fox P3+T细胞比率。