疏肝补肾毓麟汤通过Keap1/Nrf2/GPX4通路抑制睾丸细胞铁死亡改善肝郁肾虚型少弱精子症小鼠的精子质量

目的探讨疏肝补肾毓麟汤改善肝郁肾虚型少弱精子症小鼠生精功能和精子质量的作用及其可能机制。方法60只雄性KM小鼠,随机分为空白组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高、中、低剂量组和司他丁-1(Ferrostatin-1,Fer-1)组(Fer-1是铁死亡抑制剂)。除空白组外,其余组以1.25 g·kg^(-1)腺嘌呤灌胃(Intragastrical administration,ig.)+慢性束缚刺激构建肝郁肾虚型少弱精子症小鼠模型。给予相应药物干预后:精密天平称取小鼠体质量、睾丸质量、附睾质量计算睾丸指数、附睾指数;苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察睾丸组织病理变化并对睾丸生精功能进行评分;全自动精子分析仪检测精子密度和活动率;苯胺蓝染色法观察精子成熟度;布鲁斯蓝染色法观察睾丸组织铁沉积;免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测睾丸组织谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(Recombinant Solute Carrier Family 7 Member 11,SLC7A11)蛋白表达;生化法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测睾丸组织Kelch-样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、GPX4、SLC7A11蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠睾丸指数、附睾指数、睾丸生精功能、精子密度及活动率、精子成熟度均显著下降(P<0.05,P<0.01);经疏肝补肾毓麟汤及Fer-1干预后,上述指标均有显著改善(P<0.05,P<0.01),且睾丸组织铁沉积显著降低,Keap1表达显著降低,Nrf2、SLC7A11、GPX4表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论疏肝补肾毓麟汤能明显改善肝郁肾虚型少弱精子症,其机制可能与调控Keap1/Nrf2/GPX4信号通路抑制睾丸细胞铁死亡有关。

疏肝补肾毓麟汤通过PINK1/Parkin通路调控自噬流提高精子活力的研究

目的 明确疏肝补肾毓麟汤畅通自噬流,通过PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路,调节线粒体功能,提高精子活力的作用机制。方法 通过随机数字表法将SD大鼠分为正常组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、五子衍宗丸对照组。采用腺嘌呤(0.05 g·kg^(-1))灌胃14 d,复制少弱精症大鼠模型。正常组与模型组给予等容0.9%氯化钠溶液,疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组给药32.4 g/(kg·d)、8.1 g/(kg·d),五子衍宗丸对照组给药2.6 g/(kg·d)。全自动精子分析仪检测精子活力,透射电镜观察睾丸组织中线粒体自噬的超微结构变化、JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测线粒体膜电位水平变化、免疫荧光标记线粒体外膜易位酶20(Translocase of the outer membrane ofmitochondrion 20,TOMM20)与微管相关蛋白1轻链3II(Microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II)的共定位、PCR与Western Blot检测睾丸组织PINK1、Parkin、选择性自噬接头蛋白62(Selective autophagy adaptor protein 62,P62)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3II/I)的表达。结果 与正常组相比,模型组的精子活动力下降(P<0.05),线粒体膜电位比例下降(P<0.05),线粒体超微结构出现核周聚集,嵴受损或丢失,除了碎裂外,还有暗基质,以及外膜不规则,并且受损的线粒体与包括线粒体吞噬体在内的线粒体空泡相关,免疫双染中发现LC3II的存在量明显增多,LC3II与TOMM20的双重标记也增加,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、对照组的精子活动力升高(P<0.05),线粒体膜电位比例增加(P<0.05),超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多,且线粒体溶酶体的数量也减少,免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少,LC3II与TOMM20的双重标记减少,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P<0.05)。与对照组相比,高剂量组的线粒体膜电位比例增加(P<0.05);疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多,且线粒体溶酶体的数量也减少,免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少,LC3II与TOMM20的双重标记减少,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P<0.05)。结论 疏肝补肾毓麟汤能改善精子活力低下症模型大鼠的精子活动力,可能是通过提高模型大鼠的线粒体膜电位水平,保护线粒体功能,下调PINK1、Parkin、LC3 II/I、P62的表达,并畅通自噬流,减轻线粒体的过度自噬来发挥作用。

疏肝补肾法对慢性应激模型小鼠子宫内膜容受性的调节及作用研究

目的:研究疏肝补肾中药对于慢性应激模型小鼠子宫内膜容受性的调节及作用机制。方法:将60只SPF级6周龄KM雌性未孕小鼠随机分为4组,每组小鼠数量为15只,即空白对照组(空白组)、应激模型组(模型组)、阳性对照组(逍遥丸组)、中药观察组,除空白组外其余各组均接受21d应激刺激,在刺激期间各组分别灌药,造模成功后各组小鼠按雌雄2∶1合笼,仍接受慢性应激刺激,并给予孕后方药继续灌胃至见栓第5d。观察各组小鼠行为学指标、见栓率、着床数以及子宫内膜VEGF、LIF的表达水平。结果:各组间中央格停留时间、水平穿格数、直立次数、悬尾静止时间均具有统计学差异(P<0.05);经进一步两两对比,各组间各项行为学指标均具有统计学差异(P<0.05)。各组间见栓率具有统计学差异(P<0.05),进一步对比观察组与空白组、模型组与阳性对照组间见栓率无统计学差异(P>0.05);其余各组间均具有统计学差异(P<0.05);观察组胚胎着床数高于其它各组,各组间胚胎着床数两两对比均具有统计学差异(P<0.05)。各组子宫内膜VEGF、LIF表达水平均具有统计学差异(P<0.05)。结论:疏肝补肾法能够有效改善慢性应激小鼠子宫内膜容受性,从而提高妊娠成功率,其作用较单纯应用逍遥丸治疗更为理想。

补肾疏肝汤配合黄体酮胶丸治疗围绝经期功能失调性子宫出血的临床研究

目的：观察补肾疏肝汤配合黄体酮胶丸对围绝经期子宫功能性出血患者的疗效。方法：将2011年3月至～2014年3月在我院诊治的患者70例，随机分为对照组及治疗组各35例，两组患者我们均给予刮宫治疗，而对照组则在刮宫治疗后给予黄体酮胶丸治疗，治疗组给予黄体酮胶丸配合中药补肾疏肝汤治疗，3个周期后比较两组患者临床效果。结果：对照组有效率为63．9％，治疗组的有效率88．6％，治疗组疗效明显优于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：补肾疏肝汤配合黄体酮胶丸治疗围绝经期子宫功能性出血疗效确切，且不良反应少，复发率低，值得临床应用。

补肾疏肝和血法对不同年龄段卵巢低反应患者卵巢功能的影响

目的:探讨补肾疏肝和血法对不同年龄段卵巢低反应患者卵巢功能改善的情况。方法:以35岁为分界线将86例卵巢低反应性患者划分为小于35岁(A组)41例,大于35岁(B组)45例。两组均给予补肾疏肝和血中药,每日1剂,经期停用,共3周期。结果:治疗3周期后2组患者基础雌二醇(bE_2)下降,卵巢间质基础血流速度峰值(bPSV)、抗苗勒氏管激素(AMH)均上升,且A组患者较B组患者更加显著;同时与之前比较A组患者基础卵泡刺激素(bFSH)下降、窦卵泡计数(AFC)上升,而B组患者则无明显改善。结论:在相同用药时间内补肾疏肝和血中药对年轻患者卵巢功能改善明显,对于高龄者疗效较差。

疏肝补肾法结合周期疗法治疗月经后期疗效观察

目的:观察疏肝补肾中药遵循中药周期疗法对高泌乳素血症引起的月经后期患者的临床疗效。方法:将98例月经后期患者,随机分为观察组和对照组,观察组52例给予补肾养血疏肝汤,按照月经的不同时期(月经后期、经间期、经前期、行经期)进行相应加减进行治疗;对照组46例口服西药溴隐亭,两组均连续治疗3个月,观察两组患者治疗前后的月经周期变化、中医证候积分、血清性激素水平及治疗后不良反应的情况。结果:治疗后两组患者总有效率分别为观察组90.38%,对照组82.61%,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组患者的催乳素水平均低于治疗前,雌二醇、黄体生成素、卵泡刺激素水平较治疗前明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后两组间催乳素水平无统计学意义(P>0.05)。而黄体生成素、雌二醇、卵泡刺激素水平组间比较均有明显差异,有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者的中医症候积分均明显低于同组治疗前(P<0.05),且治疗后组间中医症候积分比较观察组明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组不良反应发生率分别为观察组5.76%,对照组54.34%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中药疏肝补肾法遵循中药周期疗法治疗高泌乳素血症引起的月经后期疗效确切,能有效改善患者的临床症状和性激素水平,同时具备副作用小之优势。

调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗帕金森病伴抑郁的临床疗效

目的探讨调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗帕金森病伴抑郁患者的临床疗效。方法选取2019年3月—2021年3月医院收治的108例帕金森病伴抑郁患者,依照随机数表法分为观察组和对照组。对照组采用多芭丝肼片配合普拉克索治疗,观察组在对照组的基础上另给予调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗,两组治疗时间均为3个月。比较两组患者帕金森病综合评分表(unified Parkinson’s disease rating scale,UPDRS)评分,汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)评分,中医症状评分,临床疗效,血清人软骨糖蛋白39(human cartilage glycoprotein-39,YKL-40),脑源性神经营养因子(rain-derived neurotrophic factor,BDNF)水平及不良反应。结果治疗后两组患者UPDRS-Ⅰ、UPDRS-Ⅱ、UPDRS-Ⅲ、UPDRS-Ⅳ评分较治疗前均降低(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05);治疗后两组患者HAMD评分和中医症状评分较治疗前均降低(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率较对照组更高(P<0.05);治疗后两组患者血清YKL-40水平较治疗前均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05),两组患者血清BDNF水平较治疗前均升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗帕金森病伴抑郁患者可以改善临床症状,疗效确切,同时可以减轻炎症反应,促进认知功能恢复,安全可靠。

疏肝补肾活血汤联合刮痧对女性更年期综合征患者内分泌紊乱状态的调节作用研究

目的评价疏肝补肾活血汤联合刮痧对女性更年期综合征患者内分泌紊乱状态的调节作用研究。方法选择2018年3月—2020年7月该院收治的女性更年期综合征患者136例,按随机数表法分为研究组(68例)和参照组(68例)。参照组采用尼尔雌醇片治疗。口服,2 mg/次,2周1次。在经期及其后5 d停药。研究组在参照组治疗的基础上,口服疏肝补肾活血汤结合刮痧治疗。两组均规范治疗3个月。比较两组治疗前后中医证候积分和治疗疗效,比较两组治疗前后Kupperman评分,比较两组治疗前后促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)和雌二醇(E;)水平。结果参照组治疗总有效率低于研究组(P<0.05);两组治疗后中医证候积分较治疗前降低,研究组下降幅度优于对照组(P<0.05);两组治疗后Kupperman评分较治疗前降低,研究组降低幅度优于对照组(P<0.05);两组治疗后内分泌激素水平LH、FSH较治疗前降低,E;较治疗前升高。研究组改善幅度优于对照组(P<0.05)。结论疏肝补肾活血汤联合刮痧能更大幅度地改善女性更年期综合征患者的临床症状,缓解病情,调节患者的内分泌水平,改善机体内分泌功能紊乱状态,疗效优于西医治疗。

补肾疏肝方联合克罗米芬治疗黄体功能不全不孕(肝郁肾虚)随机平行对照研究

[目的]观察补肾疏肝方联合克罗米芬治疗黄体功能不全不孕(肝郁肾虚)疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将80例门诊患者按随机数字表法随机分为两组。对照组40例克罗米芬,50mg/次,1次/d,月经第5d开始服用,持续5d。治疗组40例补肾疏肝方(柴胡、枸杞子、地黄熟各12g,淫羊藿、菟丝子各15g,白芍、当归、车前子、泽泻、茯苓、牡丹皮、山萸肉、牛膝各10g,甘草炙6g),水煎400mL,2次/d;克罗米芬治疗同对照组。连续治疗3个月为1疗程。观测临床表现、催乳激素、尿促卵泡素、促黄体生成素、睾酮、孕酮、雌二醇、不良反应。治疗1疗程(4周),判定疗效。随访1年,观测妊娠率。[结果]治疗组显效23例,有效15例,无效3例,总有效率92.50%;对照组显效11例,有效12例,无效17例,总有效率57.50%;治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。PRL、FSH、LH、T、P、E2两组均有改善(P<0.05,P<0.01),治疗组改善优于对照组(P<0.01)。随访1年,治疗组妊娠率77.50%优于对照组52.50%(P<0.05)。[结论]补肾疏肝方联合克罗米芬治疗黄体功能不全不孕(肝郁肾虚),疗效满意,无严重不良反应,值得推广。

疏肝补肾毓麟汤联合维生素E软胶囊治疗肝郁肾虚型弱精子症不育症45例多中心随机对照试验

目的观察疏肝补肾毓麟汤治疗肝郁肾虚型弱精子症不育症的临床疗效及安全性。方法采取多中心、随机、对照临床研究设计,在华中地区三所医院招募肝郁肾虚型弱精子症不育症患者95例,按照随机数字表法将患者分为治疗组47例和对照组48例。对照组给予维生素E软胶囊(每日2次,每次100 mg)口服,治疗组在对照组的基础上给予疏肝补肾毓麟汤(每日1剂,早晚饭后30 min,每次约200 ml)口服,两组治疗疗程均为12周。治疗结束后,比较两组患者治疗前后精子浓度、前向运动精子百分率(PR)、总精子活动率[PR+非前向运动精子百分率(NP)]并判断临床疗效,比较治疗前后中医证候评分(包括6个单项症状评分及中医证候总积分)及抑郁-焦虑-压力量化评分表(DASS-21)评分(包括抑郁、焦虑、压力评分)。随访6个月比较两组患者配偶妊娠情况。记录两组患者试验期间不良事件发生情况及生命体征判定安全性。结果治疗组脱落2例,对照组脱落3例,最终两组各45例进入统计分析。两组临床疗效比较,治疗组总有效率86.67%(39/45),对照组为73.74%(33/45),治疗组高于对照组(P<0.05)。两组治疗后PR、PR+NP均较本组治疗前升高,且治疗后治疗组PR、PR+NP高于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组腰膝酸软,情志不畅,精冷滑泄,胸胁、少腹胀痛,善太息评分及中医证候总积分均较治疗前降低(P<0.05);治疗后治疗组腰膝酸软,情志不畅,胸胁、少腹胀痛,善太息评分及中医证候总积分均低于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组DASS-21评分中抑郁、焦虑、压力评分均较治疗前降低,且治疗后治疗组抑郁评分较对照组降低(P<0.05)。经6个月的随访,治疗组5例和对照组3例患者配偶妊娠,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗过程中两组患者均未发生不良事件,生命体征平稳。结论疏肝补肾毓麟汤可明显提高肝郁肾虚型弱精子症患者总精子活动率,有效改善临床症状及焦虑抑郁情绪,且安全性好。