人补体衰变加速因子、补体膜辅助调节蛋白及CD59真核表达载体构建及序列分析

目的:构建人补体衰变加速因子(Decayacceleratingfactor,DAF)、补体膜辅助调节蛋白(membranecofactorprotein,MCP)、CD59的真核表达载体pSecTag2/HygroB-DAF、pSecTag2/HygroB-MCP、pSecTag2/HygroB-CD59。方法:应用PCR方法,从DAF-pGEM-TEasyVector、MCP-pGEM-TEasyVector和CD59-pGEM-TEasyVector分别克隆所需的DNA片段,经限制性内切酶BglandXhol消化后,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,分别构建人DAF、MCP、CD59真核表达质粒,并进行酶切鉴定及DNA序列测定分析。结果:DAF基因大小为1049bp,MCP基因大小为1065bp,CD59基因大小为312bp,与genbank中记载的人DAF、MCP和CD59cDNA序列结果基本相同。结论:成功构建DAF、MCP和CD59真核表达质粒,为今后进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础。

构建人补体膜辅助调节蛋白真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH 3T_3细胞

目的:构建人补体膜辅助调节蛋白(m embrane cofactor prote in,MCP)真核表达载体并利用壳聚糖(Ch itosan)转染小鼠NIH3T3细胞。方法:应用PCR方法,从MCP-pGEM-T Easy Vector克隆相关的DNA序列,插入到具有相应酶切位点的真核表达载体pSecTag2/HygroB中,构建pSecTag2/HygroB-MCP真核表达质粒,并进行酶切鉴定及序列测定;利用壳聚糖包裹质粒,转染小鼠NIH 3T3细胞,并对转染细胞进行抗MCP免疫组织化学染色。结果:MCP基因大小为1 065 bp,与Genebank中记载的人MCP cDNA序列结果基本一致;抗MCP免疫组织化学染色显示转染细胞胞浆弥漫阳性。结论:成功构建了人MCP真核表达载体并通过壳聚糖介导转染NIH3T3细胞,为进一步探讨及研究转基因肝脏奠定了基础。

人补体膜辅助调节蛋白(MCP)基因的克隆和序列分析

应用 PCR方法 ,从成人肝 c DNA文库中扩增编码人补体膜辅助调节蛋白 (MCP)分子的 c DNA片段。该片段经双酶切后克隆于 p UC19载体中 ,并测定其序列。序列分析表明 ,该 c DNA长 112 2 bp,编码 36 9氨基酸残基组成的蛋白 ,属于 STC+CYT2亚型。

肾炎患者血中C3d水平及CD16^+单核巨噬细胞膜补体调节蛋白的表达

目的 :探讨肾炎患者补体激活时活化单核巨噬细胞 (CD16 + Mo MΦ)膜辅因子蛋白 (MCP)、促衰变因子 (DAF)及同种限制因子 2 0 (HRF 2 0 )表达水平。方法 :采用流式细胞术测定 136例肾小球肾炎患者血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF和HRF 2 0表达水平 ,采用ELISA法测定血清C3d及荷C3d 免疫复合物的 (C3d IC)水平。结果 :MC病人血清C3d、C3d IC水平及血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HFR 2 0表达水平与正常组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,GS、MN及PGN病人血清C3d水平、血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平及MN、PGN病人C3d IC水平均显著高于正常组 (P <0 0 1) ,且MCP、DAF、HRF 2 0表达水平与血清C3d水平呈显著正相关 (P <0 0 1)。结论 :肾小球肾炎补体激活时血中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平显著上调 ,以保护CD16 + Mo MΦ不被激活的补体损伤。从而 ,CD16 + Mo MΦ浸润肾组织并产生促炎作用 ,参于肾小球肾炎的发病及发展。

肾炎患者尿中sC5b-9水平及CD16^+单核巨噬细胞膜补体调节蛋白的表达

目的 :探讨肾炎患者补体激活时尿中活化单核巨噬细胞 (CD16 + Mo MΦ)膜辅因子蛋白 (MCP)、促衰变因子 (DAF)及同种限制因子 2 0 (HRF 2 0 )表达水平。方法 :采用流式细胞术测定 134例肾小球肾炎患者尿中CD16 + Mo MΦMCP、DAF和HRF 2 0表达水平 ,采用ELISA法测定尿中可溶性C5b 9(sC5b 9)水平。结果 :MC病人尿中sC5b 9水平及CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平与正常组无显著差异 (P >0 0 5 ) ,GS、MN及PGN病人尿中sC5b 9水平、CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平均显著高于正常组 (P <0 0 1) ,且MCP、DAF、HRF 2 0表达水平与sC5b 9水平呈显著正相关 (P <0 0 1)。结论 :肾小球肾炎补体激活时尿中CD16 + Mo MΦMCP、DAF、HRF 2 0表达水平显著上调 ,以保护浸润肾组织的CD16 + Mo MΦ不被激活的补体损伤。从而 ,CD16 + Mo MΦ产生促炎作用 ,参与肾小球肾炎的发病及发展。

膜辅蛋白—补体激活途径中的一个重要的膜调节蛋白

膜辅蛋白(MCP)是补体激活途径中的一个重要的膜调节蛋白,它是Ⅰ因子灭活C(?)b、iC(?)b 和C4b 的辅因子。它与CR1、CR2、DAF、C4bp 和H 因子组成补体调节蛋白,其基因均定位于人的第1号染色体q31～34上。现已克隆了MCP,并弄清了其结构特征及一些重要的生物学功能。

膜结合型补体调节蛋白与肾小球疾病

补体激活在膜增生性肾炎、狼疮性肾炎、膜性肾病等肾小球疾病的发生中扮演着关键性角色。肾脏局部表达衰变加速因子、膜辅蛋白、Ⅰ型补体受体及CD59等膜结合型补体调节蛋白对补体激活进行负向调控以保护自身组织。目前学者们正试图将其运用于肾小球疾病的治疗。本文就补体激活及调控、膜结合型补体调节蛋白与肾小球疾病的关系及其在肾小球疾病治疗中的运用等方面,对近些年研究成果予以综述。

膜结合性补体调节蛋白及其在肿瘤免疫治疗中的控制策略

通过抗体进行的肿瘤免疫治疗,其机制大多是通过活化补体直接引起肿瘤细胞溶解(CDC)或加强抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用。而许多研究证实,肿瘤细胞表面表达的膜结合性补体调节蛋白(mCRPs)能抑制补体系统的激活,而保护肿瘤细胞免遭CDC的杀伤,因此许多抗体介导的肿瘤免疫治疗的效果往往不尽人意。相关研究表明,通过阻断mCRPs或抑制mCRPs表达能使肿瘤的杀伤效果有明显的提高,因而控制mCRPs在未来的免疫治疗中很有潜力,本文简述了相关研究进展。

膜辅蛋白─补体活化调节剂家族新成员

膜辅蛋白（ＭＣＰ，ＣＤ４６）是一种广泛分布于Ｃ３ｂ／Ｃ４ｂ结合细胞表面的糖蛋白。它属于补体活化调节剂（ＲＣＡ）基因簇家族。ＭＣＰ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上呈两条完全不同的带，其表达量在不同的细胞类型有所不同。已用探针从ｃＤＮＡ文库中获得了其ｃＤＮＡ片段并测序，基因组构成也已确定。ＭＣＰ在补体调控途径中发挥很重要的作用，它可与Ｃ３结合，并具有Ⅰ因子依赖性辅因子活性。

补体膜辅蛋白的研究进展

补体膜辅蛋白是分子质量为 4 5 0 0 0～ 70 0 0 0u的单链穿膜糖蛋白 ,为补体活化调节基因家族的成员之一。补体膜辅蛋白的细胞分布广泛 ,但不同类型的细胞表达的数量有所不同。现已用探针从cDNA文库中获得其cDNA克隆片断并测序 ,基因组结构已确定。补体膜辅蛋白的主要功能是辅助Ⅰ因子降解C3b和C4b ,它和其它补体成员一起有效控制补体活化 ,保护宿主细胞免受补体介导的杀伤。此外 ,补体膜辅蛋白还可作为麻疹病毒受体 ,在生殖免疫。

人补体调节蛋白CD46与异种移植

器官移植是治疗人脏器功能衰竭的理想选择之一,但是器官来源的短缺明显影响该技术在临床的应用。目前即使运用扩大供体来源的多种措施以增加器官供体来源,也不能从根本上解决供受体不平衡的状况。扩大供器官来源成为移植工作者永恒的话题,而解决器官供体来源不足最好的方法是异种移植。但因物种进化之间的差异,异种移植暂未能进入临床,因此目前一直进行猪--非人灵长类动物的临床前研究。猪因解剖及生理与人相近及容易进行基因编辑等优点,成为良好潜在的供体来源。随着基因编辑技术越来越娴熟,多基因修饰器官猪成为可能,为临床选择更优基因组合供体提供了技术保障。本文主要阐述人膜辅助蛋白在异种移植中的作用。

补体激活调节因子作为补体抑制剂的研究进展

补体激活调节因子 (RCA)家族的补体调节蛋白可阻断人类疾病时补体的不适当激活。它们均作用于补体前端反应 ,通过其短同源重复 (SCR)与C3b或C4b结合 ,或促进C3和C5转化酶的衰变 ,或辅助Ⅰ因子裂解C3b和C4b ,从而达到抑制补体激活的目的。本文对近年来RCA家族中部分成员作为补体抑制剂的研究进展作一综述。

它莫西芬对绒毛膜癌细胞株JAR补体调节蛋白表达的影响

为探索抗肿瘤药物Tamoxifen对绒毛膜癌细胞株JAR表面补体调节蛋白表达的影响 ,实验以绒毛膜癌细胞株JAR为研究对象 ,用流式细胞术和RT PCR分别检测Tamoxifen作用前后JAR细胞补体调节蛋白在蛋白质和mRNA水平的表达。结果显示 :在 10 6MTamoxifen作用 3d后 ,JAR细胞补体调节蛋白DAF和CD5 9的蛋白质表达水平明显降低 ,而MCP无明显改变 ;在 10 6MTamoxifen作用 2 4h后 ,JAR细胞DAF和CD5 9mRNA表达水平分别降低 88%和 6 0 %。提示Tamoxifen可能通过降低DAF和CD5 9的表达 。

子痫前期患者胎盘蛋白14 与Th17/Treg平衡的相关性研究

目的:研究子痫前期(PE)患者蜕膜组织中胎盘蛋白14(PP14)与辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)的关系。方法:选取2019年4月至2020年4月在广西乐业县人民医院就诊的PE患者30例作为实验组,同期选取正常妊娠行剖宫产妇女30例作为正常对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测蜕膜组织中PP14、白细胞介素(IL)-17和IL-10水平,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测蜕膜组织中PP14 mRNA、叉头盒蛋白P3(FOXP3)mRNA、维甲酸相关孤儿受体γ(RORC)mRNA相对表达量。结果:与对照组比较,实验组PP14 mRNA和FOXP3 mRNA相对表达量及PP14、IL-10水平显著降低,RORC mRNA相对表达量和IL-17水平明显升高(均P<0.05)。实验组PP14表达与IL-10、FOXP3呈正相关关系(r=0.730、0.409,P<0.05)。结论:PE患者蜕膜组织中Treg细胞的减少可能与PP14的减少相关,PE母胎界面Th17/Treg细胞的失衡可能与PP14的减少有关。

补体在单克隆抗体介导的肿瘤免疫治疗中的作用

被单克隆抗体激活的补体可以直接造成肿瘤细胞溶解或增强ADCC作用。然而肿瘤细胞表面通常有高水平表达的膜结合补体调节蛋白(mCRP)使其免受补体介导的杀伤作用。近期研究表明,阻断或克服肿瘤细胞的mCRP可显著提高单抗免疫治疗的疗效。另外,单抗辅以β-葡聚糖可以使iC3b沉积在肿瘤细胞表面并激活补体受体3(CR3)从而介导CR3依赖性细胞毒作用。这些都已成为现有单抗作用机制的有益补充。

HBXIP抑制补体介导的细胞毒活性促进肝癌免疫逃逸的机制研究

目的:探讨乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)对补体介导的细胞毒活性的影响及其在肝癌细胞免疫逃逸中的作用。方法:构建NC-shRNA和HBXIP-shRNA慢病毒稳定细胞系,台盼蓝染色检测HBXIP对补体介导的细胞毒作用的影响;Western blot检测HBXIP对CD46、CD55和CD59表达的影响;免疫荧光检测HBXIP对NF-κB活性的影响;HBXIP-shRNA细胞中过表达NF-κB,Western blot检测CD46、CD55和CD59表达变化。结果:HBXIP-shRNA细胞补体介导的细胞毒作用显著高于NC-shRNA细胞(P<0.05)。与NC-shRNA细胞相比,HBXIP-shRNA细胞CD46、CD55、CD59表达显著下降,NF-κB活性明显降低(P<0.05)。HBXIP-shRNA细胞中过表达NF-κB,CD46、CD55和CD59蛋白表达水平明显回升(P<0.05)。结论:HBXIP可能通过介导NF-κB活性调节CD46、CD55、CD59表达参与肝癌细胞免疫逃逸,为肝癌临床治疗提供新靶点。

MHBs^t167基因转染对肾小管上皮细胞膜结合型补体调节蛋白表达的影响

补体激活导致肾组织免疫损伤是肾脏疾病的重要发病机制，而肾脏固有细胞可表达一系列补体调节蛋白对其激活进行限制。肾脏是乙型肝炎病毒（HBV）感染的主要靶脏器之一，其中肾小管上皮细胞尤易被感染。病毒感染与宿主细胞应答间的关系极为复杂，HBV-DNA与宿主DNA整合的过程中可发生基因重排，编码HBx、LHBs和MHBs^1等反式激活因子，进而活化多种转录因子和原癌基因启动子，参与感染后的炎性反应。以往研究表明乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）患者肾小管上皮细胞中可检测到HBV—DNA，并且大多为整合型。

补体在单克隆抗体介导的肿瘤免疫治疗中的作用

使用单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）的免疫治疗,作为一种抗肿瘤的治疗方法具有良好的应用前景,因为它能特异性靶向肿瘤细胞,却对周围正常组织没有作用.这相对于非特异性的化疗和放疗是一个很重要的优点.鉴于此,笔者阐述抗体诱导的补体介导的效应机制、肿瘤细胞逃避补体损伤以及补体活化和调节,同时阐述mAb治疗肿瘤的现状、存在的问题,以及通过改进更好的使用补体系统增强治疗性的mAbs的临床作用.

补体系统参与IgA肾病发病机制的研究进展

IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）病理表现为肾小球系膜区IgA或IgA沉积为主,其主要临床表现为反复发作的镜下或肉眼血尿,伴或不伴蛋白尿。目前认为IgA肾病是一个缓慢进展的疾病,有研究表明,15%~20%的IgA肾病患者在10年内、30%~40%的患者则在20年内进展为ESRD[1]。

补体活化异常在IgA肾病致病机制中的研究进展

IgA肾病是世界上最常见的原发性肾小球疾病,近几十年来IgA肾病的发病率迅速增加,其起病隐匿,临床表现多样,但确切发病机制尚不清楚,目前认为IgA肾病的可能机制为糖基化缺陷的IgA1增多,与抗聚糖抗体结合为免疫复合物沉积于肾小球系膜区,进而激活补体途径,导致免疫炎症反应。补体激活的替代途径、凝集素途径、补体成分以及补体调节蛋白在IgA肾病的发病及进展过程中发挥重要作用。