bta-miR-27a-5p的生物信息学分析及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为了探究bta-miR-27a-5p的生物学特性及其对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,试验利用miRBase数据库对不同物种间miR-27a-5p的保守性进行分析,并构建了miR-27a-5p的系统进化树;利用TargetScan和miRWalk在线网站预测bta-miR-27a-5p的靶基因,并对靶基因进行GO功能注释和KEGG信号通路分析;利用实时荧光定量PCR方法检测在不同月龄夏南牛不同器官中bta-miR-27a-5p基因的相对表达量;最后通过实时荧光定量PCR方法、Western-blot检测、三酰甘油浓度测定和油红O染色探究过表达bta-miR-27a-5p后对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。结果表明:不同物种miR-27a-5p的成熟序列保守性较高;牛miR-27a-5p基因与山羊的亲缘关系最近,与非洲爪蟾的亲缘关系最远;bta-miR-27a-5p靶基因主要在细胞过程、生物过程、细胞、细胞部分、结合等GO条目上富集,并富集在胰岛素抵抗、细胞衰老、脂肪细胞因子等信号通路中;bta-miR-27a-5p基因可在夏南牛的多个器官中表达,且12月龄夏南牛脂肪组织中的相对表达量均显著低于0月龄和24月龄(P<0.05);过表达bta-miR-27a-5p基因可显著或极显著抑制C/EBPα、PPARγ和FABP4基因和蛋白质表达(P<0.05或P<0.01),并显著或极显著降低3T3-L1前脂肪细胞内脂滴和三酰甘油浓度(P<0.05或P<0.01)。说明bta-miR-27a-5p在不同物种间高度保守,在不同月龄夏南牛脂肪组织中显著差异表达,并且能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,bta-miR-27a-5p基因可能是调控牛脂肪生成的候选miRNA。

木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞分化和脂代谢的影响

目的:研究木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞分化和脂代谢的影响及其作用机制。方法:采用3T3-L1前脂肪细胞,利用四甲基偶氮唑蓝法检测不同质量浓度木犀草苷对3T3-L1前脂肪细胞毒性的影响;使用鸡尾酒诱导法诱导细胞分化,用油红O染色观察脂滴形成情况;测定分化后细胞中甘油三酯、总胆固醇的含量以及相关炎症因子如肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10、瘦素(leptin,LEP)和脂联素(adiponectin,ADPN)的分泌量;利用Western Blot法检测细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators activated receptor,PPAR)γ、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP)-α、固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP1)、PPARα、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP-1)、肉碱棕榈酰转移酶1(carnitine palmitoyltransferase 1,CPT-1)蛋白的相对表达水平。结果:3T3-L1前脂肪细胞存活率随木犀草苷质量浓度的升高整体呈降低趋势,木犀草苷质量浓度在5~60μg/mL时细胞存活率均在80%以上。木犀草苷处理组可显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,减少脂质积累;木犀草苷可下调成脂分化后细胞中总胆固醇、甘油三酯的含量以及炎症因子TNF-α、IL-6和LEP的分泌量,上调IL-10和ADPN的分泌量;木犀草苷能下调PPARγ、C/EBP-α和SREBP1蛋白的相对表达水平,上调PPARα、UCP-1和CPT-1蛋白的相对表达水平。结论:木犀草苷可以抑制3T3-L1前脂肪细胞分化和影响脂代谢,其机制一方面是下调PPARγ、C/EBP-α和SREBP1蛋白表达,抑制脂肪合成;另一方面是激活PPARα上调下游蛋白,促进脂肪消耗;木犀草苷还可能通过调节细胞因子的分泌量,促进细胞脂解,从而改善脂代谢失衡。

高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响和机制研究

目的探讨高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响和机制。方法本研究选取2022年9月—2023年2月珠海市人民医院·暨南大学附属珠海医院3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,使用MTT法评估高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1细胞增殖的影响。通过油红O染色检测分析高良姜二苯庚烷化合物对3T3-L1细胞分化的影响。应用实时定量聚合酶链锁反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检测高良姜二苯庚烷化合物对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator Activated Receptorγ,PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/Enhancer Binding Proteinα,C/EBPα)基因mRNA表达的调控作用。通过Western blot分析检测高良姜二苯庚烷化合物对PPARγ和C/EBPα蛋白表达的影响。结果高良姜二苯庚化合物(0、0.05、0.2、0.4 g/L)在24、48 h对前脂肪细胞的生长表现为增殖趋势,呈现一定的量效关系,其中高良姜二苯庚烷化合物浓度为0.4 g/L时3T3-L1增殖[(7.02±0.35)、(17.23±0.95)g/L]高于与对照组,差异有统计学意义(t=13.794、10.843,P均<0.05)。高良姜二苯庚烷化合物呈剂量依赖性地抑制了3T3-L1细胞的增殖。油红O染色结果显示,高良姜二苯庚烷化合物处理显著抑制了3T3-L1细胞的脂肪细胞分化,并减少了脂滴的积累;100μmol/L处理组,PPARγ和C/EBPα的mRNA表达水平显著降低。高良姜二苯庚烷化合物通过抑制PPARγ和C/EBPα基因的表达,调控了3T3-L1前脂肪细胞的分化过程,从而减少了脂肪滴的积累。结论高良姜二苯庚烷化合物抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,其机制与PPARr/EBPα的低表达有关。

肥胖相关新基因NYGGF4对3T3-L1脂肪前体细胞的增殖调节作用

目的观察NYGGF4基因过表达对3T3-L1脂肪前体细胞增殖的影响,探讨该基因在肥胖发生发展中的作用。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增NYGGF4开放阅读框(ORF)的全长,通过双酶切连接法构建NYGGF4-pcDNA3.1真核表达载体。采用脂体法转染3T3-L1前体脂肪细胞,以pcDNA3.1空载和未转染细胞为对照。遗传霉素(G418)压力筛选稳定转染细胞株,PCR鉴定转染细胞的NYGGF4的mRNA水平。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测稳定转染细胞株连续7 d的生长状态,以转染空载和未转染正常3T3-L1为对照,绘制生长曲线。采用SPSS 10.0软件进行统计学分析。结果1.稳定转染细胞株有NYGGF4基因的表达,而pcDNA3.1空载未见人源性NYGGF4的表达;2.转染NYGGF4基因的3T3-L1细胞增殖速度明显较未转染和转染空载的3T3-L1细胞加快。结论新基因NYGGF4可明显促进3T3-L1脂肪前体细胞的增殖,可能影响肥胖的发生发展。

脂联素基因在3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化中表达水平变化的研究

目的:观察脂联素基因mRNA在3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中表达水平的变化。方法:体外培养3T3-L1脂肪前体细胞,应用MIX、地塞米松、胰岛素诱导其分化,采用RT-PCR技术检测诱导分化不同时间(0～10天)脂肪细胞中脂联素基因mRNA的表达水平。结果:脂联素基因低表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,并随脂肪前体细胞分化成熟,该基因表达水平呈逐渐上调趋势,除在诱导剂作用后第0天与第2天、第1～2天、第3～4天、第6天与第8～10天、第7～10天各时段内差异无显著性(P>0.05)外,其余各时段之间表达水平差异均有显著性(P<0.05)。结论:在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中脂联素基因表达逐渐上调,可能有利于脂肪细胞的分化成熟。

维拉帕米对前体脂肪细胞3T3-L1分化及脂质积聚的影响

目的:观察钙离子通道阻滞剂盐酸维拉帕米对3T3鄄L1前体脂肪细胞分化及脂质积聚的影响。方法:体外培养3T3鄄L1前体脂肪细胞,在常规诱导分化方案基础上加用维拉帕米(终浓度30μmol/L),采用油红O染色各分化时段脂肪细胞,计数含脂滴脂肪细胞数。结果:维拉帕米干预后,脂肪细胞分化速度低于正常对照,虽未影响脂滴出现的时间(第4天),但含脂滴脂肪细胞数均显著低于同期正常对照(P<0.001)。结论:维拉帕米具有抑制脂肪细胞分化及脂质积聚的作用。

新型SIRT1激活剂XZG2151对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

目的探讨新型沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)激活剂化合物XZG2151对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞分成4组:3T3-L1细胞组(Pre组)、DMSO组(Ctrl组)、阳性对照组(SRT2104组)、实验组(XZG2151组)。采用CCK8法检测XZG2151对3T3-L1细胞增殖的影响。油红O染色法、甘油含量测定法观察XZG2151对3T3-L1细胞中脂肪形成的影响。实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹法检测XZG2151对3T3-L1细胞分化过程中相关基因和蛋白表达水平的影响。结果10μmol/L XZG2151对3T3-L1前脂肪细胞的增殖无显著影响(P>0.05)。与Ctrl组相比,SRT2104组和XZG2151组3T3-L1细胞脂肪含量显著降低(P<0.05)。与Ctrl组相比,XZG2151组SIRT1、激素敏感脂肪酶(HSL)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);脂肪合成转录因子PPARγ和C/EBPβ、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)、乙酰辅酶A羟化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FASN)的mRNA表达水平显著下降(P<0.05)。此外,与Ctrl组相比,XZG2151组SIRT1、p-ACC、CPT1A蛋白表达显著升高(P<0.05),FASN蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论XZG2151可调节3T3-L1前脂肪细胞的脂肪生成和脂质代谢,从而抑制前脂肪细胞分化。

Resistin基因在3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中表达水平的变化

目的:观察Resistin基因在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中不同时段表达水平的变化,探讨Resistin基因与脂肪细胞分化、脂质积聚之间的关系。方法:体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,在诱导其向成熟脂肪细胞分化的不同时段(第0￣10天),采用RT-PCR技术检测脂肪细胞中Resistin基因mRNA的表达水平。结果:①Resistin基因在3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化初期(第0￣2天)不表达,分化第3天开始表达,分化第4￣6天Resistin基因的表达显著上调,分化第6￣10天Resistin基因的表达保持在较高水平并趋于稳定;②Resistin基因的表达水平除在诱导分化第3￣4天、第6￣10天内差异无显著性(P>0.05)外,其余各时段间表达水平差异均有显著性(P<0.01)。结论:Resistin基因可能参与了脂肪细胞分化的中晚期过程,在3T3-L1脂肪细胞分化过程中表达逐渐上调,其表达变化与脂肪细胞分化、脂质积聚过程相一致。

PRNP基因在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用

目的探讨3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中PRNP基因表达水平的变化及TNF-α对其调节作用。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤（MDI）方案诱导3T3-L1细胞分化成熟,并收集分化前、分化0～10 d各时段细胞,采用RT-PCR技术检测诱导分化不同时段3T3-L1细胞PRNP基因表达水平;同时在成功诱导3T3-L1细胞分化成熟的基础上,应用不同水平TNF-α（0.1、1.0、10.0μg/L）干预分化后的成熟脂肪细胞（第10天）,收集TNF-α刺激前（0 h）及刺激后0.5、2.0、6.0、12.0、24.0 h的脂肪细胞,通过RT-PCR测定TNF-α干预前后不同时间点脂肪细胞中PRNP基因表达水平。采用Excel软件进行统计学分析。结果1.PRNP基因低表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,至分化第10天其表达水平最高。PRNP基因表达水平除在诱导分化前（第-1天）至第4天、第2～5天、第6～10天时段内无显著性差异外（Pa〉0.05）,其余各时段间表达水平均有显著性差异（Pa〈0.05）;2.在分化前的3T3-L1脂肪细胞和成熟脂肪细胞中,不同水平TNF-α（0.1、1.0、10.0μg/L）均能在短时间内明显抑制PRNP基因mRNA的表达,且呈时间依赖性。结论PRNP基因可能参与3T3-L1脂肪细胞分化及脂质积聚过程;不同水平重组TNF-α对成熟脂肪细胞的PRNP基因表达具有抑制作用,其抑制效应总体趋势上呈时间依赖性。

荷叶水提物对3 T3-L1前体脂肪细胞增殖、凋亡及前体脂肪细胞、成熟脂肪细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的影响

目的:研究荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、凋亡的影响,以及对3T3-L1前体脂肪细胞、成熟脂肪细胞白介素-6(IL-6)信使核糖核酸(mRNA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响.方法:体外培养3T3-L1细胞,采用MTT法检测荷叶水提物对3T3-L1前体脂肪细胞增殖的影响;采用荧光定量PCR检测其对3T3-L1前体脂肪细胞和成熟脂肪细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的表达,采用DAPI染色法检测其对3T3-L1前体脂肪细胞凋亡的影响.结果:不同质量分数的荷叶水提物均能抑制3T3-L1细胞增殖,且呈现量-效关系;1 g/L荷叶水提物可增高3T3-L1成熟脂肪细胞TNF-αmRNA和IL-6 mRNA的表达,降低3T3-L1前体脂肪细胞TNF-αmRNA的表达;还可以促进3T3-L1前体脂肪细胞的凋亡.结论:荷叶水提物可能是通过抑制细胞增殖、降低细胞炎症因子mRNA的表达、促进细胞凋亡进而影响脂肪细胞的活性.

蚕丝支架与3T3-L1前脂肪细胞生物相容性的体外实验(英文)

背景:蚕丝是天然制品,其力学性能及生物相容性优于传统人工合成的可降解高分子材料,在医疗领域中已获得了广泛的应用而受到关注。目的:观察蚕丝对3T3-L1前脂肪细胞吸附作用及蚕丝对3T3-L1前脂肪细胞形态和功能的影响。方法:取原料蚕丝和用胰酶消化后的蚕丝任意缠绕成网状立体构型纤维条索,架空固定在自制的不锈钢支架上,支架网孔70～200μm,厚200～300μm,孔隙率为20%。消化后的蚕丝三维支架放入24孔培养板中,将浓度为6×1010L-1的3T3-L1前脂肪细胞悬液每孔滴入3滴,每孔细胞数量为1×107个。悬空孵育4h,待细胞充分吸附在支架上后加入培养液,令细胞完全浸没,隔两三天换半液,培养1～4周。结果与结论:①倒置显微镜观察3T3-L1前脂肪细胞-蚕丝复合物可见细胞伸出细长的突起沿着蚕丝不断向前迁移延伸,细胞首尾相互融合,渐渐连成一片分布于蚕丝网眼内。②扫描电镜观察3T3-L1前脂肪细胞-蚕丝复合物可见细胞与支架紧密贴附,适度伸展,并有基质分泌。提示蚕丝对3T3-L1前脂肪细胞具有良好的吸附作用,并能维持3T3-L1前脂肪细胞正常形态和功能。

选择性β_3受体激动剂对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响及机制

目的探讨选择性β3受体激动剂BRL37344对3T3-L1前体脂肪细胞分化的影响及ERK1/2分子磷酸化在此过程中的作用。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,不同药物干预一定时间后裂解细胞收集蛋白,应用Western blot法检测PPARγ、ERK1/2及pERK1/2蛋白表达。结果 10-7mol/L BRL37344可以显著提高3T3-L1前体脂肪细胞内ERK1/2分子的磷酸化水平,下调PPARγ表达。部分阻断BRL37344引起的ERK1/2磷酸化可以恢复PPARγ表达。结论 10-7mol/L BRL37344引起的ERK1/2长时间高水平磷酸化在抑制3T3-L1细胞分化过程中起着十分重要的作用。

沉默SOCS3对TNF-α诱导3T3-L1前体脂肪细胞凋亡的抑制作用

【目的】运用si RNA沉默小鼠前体脂肪细胞3T3-L1的细胞信号负调控因子3基因(SOCS3),探讨SOCS3在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导3T3-L1细胞凋亡中的作用。【方法】体外培养3T3-L1细胞,用0,20,40,60,80,100,150,200 ng/mL TNF-α处理细胞24 h后,观察细胞凋亡情况。利用脂质体LipofectamineTM2000,用化学合成的SOCS3小干扰RNA(si RNA)转染3T3-L1细胞,用100 ng/mL TNF-α刺激24 h,荧光显微镜下观察细胞凋亡的变化,RT-PCR检测SOCS3、c-myc和survivinmRNA的表达情况。【结果】SOCS3 si RNA抑制了3T3-L1细胞中SOCS3 mRNA的表达(P<0.05)。与空白对照组相比,SOCS3 si RNA组的SOCS3 mRNA表达量极显著减少,c-myc和survivinmRNA的表达水平极显著或显著升高,而脂质体组和阴性对照组无显著差异。【结论】体外试验结果证明,靶向抑制SOCS3基因表达可以有效抑制TNF-α诱导的3T3-L1细胞凋亡。

BRL37344增强3T3-L1前体脂肪细胞pERK1/2蛋白水平

BRI37344是一种选择性β3受体激动剂，有研究表明其在动物模型中表现出良好的抗肥胖作用。本实验研究了BRI37344对细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK1／2）的影响，推测其能够抑制前体脂肪细胞分化。

KCTD15基因调控3T3-L1脂肪前体细胞分化的研究

目的探讨含钾通道四聚化结构域15(KCTD15)基因在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中的作用。方法①采用半定量逆转录PCR检测在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中KCTD15mRNA表达变化。②在3T3-L1脂肪前体细胞增殖早期通过RNA干扰技术靶向敲低KCTD15基因的表达,在靶向敲低KCTD15基因后的转染KCTD15siRNA48h后通过半定量逆转录PCR验证KCTD15基因的敲低效果。用油红O染色法观察KCTD15敲低后3T3-L1细胞第0天和第10天的细胞形态学改变。③采用半定量逆转录PCR检测KCTD15基因敲低后PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPδ成脂基因的变化。结果在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中,KCTD15mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05);KCTD15敲低能显著抑制3T3-L1脂肪前体细胞分化;KCTD15敲低后PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPδ成脂基因无明显变化。结论在分化早期阶段敲低KCTD15基因能抑制3T3-L1脂肪前体细胞分化。

3T3-L1前脂肪细胞的体外培养及胰岛素样生长因子1对其增殖、分化的作用

背景:前脂肪细胞是一类具有增殖和向脂肪细胞分化潜力的特异化的前体细胞,如果能够找到可以强力促进前脂肪细胞增殖和分化的因子或药物,在脂肪组织移植的同时使用,则有希望提高脂肪组织的移植效果。目的:摸索体外培养经典的3T3-L1前脂肪细胞的最佳培养环境并积累培养经验,观察胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响,并探求胰岛素样生长因子1的最佳作用剂量。设计、时间及地点:以细胞为对象的对照观察实验,于2007-10/2008-02在辽宁医学院科学实验中心完成。材料:3T3-L1前脂肪细胞株购于上海中科院生命科学院;胰岛素样生长因子1购于美国Biological公司。方法:根据3T3-L1前脂肪细胞的体外培养条件分为6组:空白对照组应用含体积分数为0.1的胎牛血清的标准高糖DMEM培养基培养;各实验组分别应用含有5,10,20,50,100μg/L胰岛素样生长因子1的含体积分数为0.1的胎牛血清的高糖DMEM培养基培养。主要观察指标:倒置显微镜下观察各组3T3-L1前脂肪细胞的生长、增殖及分化情况并拍照记录。待细胞铺满瓶底达到单层汇合时,应用流式细胞仪检测细胞周期,应用四甲基偶氮唑盐比色法测定3T3-L1前脂肪细胞的增殖率;应用油红O染色提取法测定3T3-L1前脂肪细胞内脂肪含量的增殖率。结果:①倒置显微镜下观察分化前3T3-L1前脂肪细胞呈梭形,胞浆内无脂滴,分化后3T3-L1前脂细胞呈圆形,胞浆内含有大量的脂滴,脂滴聚集于核周,被油红O染成橙红色,形成"戒环"样形态。②四甲基偶氮唑盐比色法和油红O染色提取法检测结果均显示,不同剂量的胰岛素样生长因子1组中3T3-L1前脂肪细胞的增殖率及细胞内脂肪含量的增殖率均高于空白对照组(P<0.05),胰岛素样生长因子120μg/L组对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化作用最为明显(P<0.05);流式细胞仪的分析结果与四甲基偶氮唑盐比色法及油红O染色提取法的检测结果基本一致。结论:体外细胞培养实验表明,胰岛素样生长因子1对3T3-L1前脂肪细胞的增殖、分化有明显促进作用,其促进作用与浓度并非成正比,而是达到一定剂量后,其促进作用不再增加,而这个剂量接近本实验的最佳剂量值,即20μg/L。

表达谱芯片分析KCTD15对3T3-L1前体脂肪细胞的影响

目的通过筛选分析3T3-L1前体脂肪细胞中KCTD15基因敲低后的差异表达基因研究其细胞生物学功能,探讨KCTD15基因与肥胖发生的关联。方法①运用RNA干扰技术在3T3-L1前体脂肪细胞中特异性敲低KCTD15基因表达,并用半定量RT-PCR技术检测KCTD15基因敲低效率。②用Illumina表达谱芯片检测基因表达。③筛选差异表达基因后,运用Gene Ontology(GO)和KEGG pathway进行功能聚类分析。④挑选部分差异表达基因进行半定量RT-PCR验证。结果①KCTD15基因敲低后筛选到833个差异表达基因(差异倍数值≥2或≤0.5)。②GO功能分析显示差异表达基因主要富集在以下相关通路:细胞黏附(34个)、细胞骨架组装(26个)、生物膜组装(26个)、染色体组装(20个)、脂肪细胞分化(6个);KEGG pathway分析则显示半乳糖代谢和二羧酸代谢受到影响。③对MTHFD1、MDH1、VSP4B、CUX1、ABCA7 5个基因表达的半定量RT-PCR与芯片测试结果相符。结论 KCTD15基因功能与生物膜和细胞骨架有关且能够影响细胞能量代谢过程。

AdipoR2介导C2C12肌管细胞促进3T3-L1前体脂肪细胞的糖代谢能力

[目的]本文旨在探究脂联素受体2(AdipoR2)在C2C12肌管细胞与3T3-L1前体脂肪细胞共培养体系中对3T3-L1前体脂肪细胞葡萄糖吸收与消耗能力的影响。[方法]利用siRNA干扰AdipoR2基因表达,同时利用Transwell细胞培养小室对这2种细胞进行了共培养并检验相关基因的表达水平和细胞葡萄糖消耗能力的变化。[结果]使用siRNA干扰AdipoR2基因的表达后,3T3-L1前体脂肪细胞的AdipoR2基因和葡萄糖转运蛋白基因Slc2a1和Slc2a4表达水平显著下降,3T3-L1前体细胞每单位所消耗的葡萄糖量也显著下降。而在与C2C12细胞共培环境下,3T3-L1前体细胞中AdipoR2基因和葡萄糖转运蛋白Slc2a1、Slc2a4基因表达水平显著上调。同时,3T3-L1前体细胞单位消耗的葡萄糖量显著上升。进一步研究发现,AdipoR2能够有效调节3T3-L1前体脂肪细胞内葡萄糖转运蛋白基因的表达水平与葡萄糖的消耗能力。[结论]在C2C12肌管细胞共培体系中,AdipoR2能够加速3T3-L1前体脂肪细胞对葡萄糖的吸收。

人参二醇诱导3T3-L1脂肪前体细胞凋亡及其作用机制

目的:探讨人参二醇(PD)诱导3T3-L1脂肪前体细胞凋亡作用,并阐明其可能的作用机制。方法:将3T3-L1脂肪前体细胞分为空白对照组和不同浓度PD处理组,采用CCK-8法测定0~100μmol·L^(-1)PD作用后未分化3T3-L1脂肪前体细胞及分化后成熟脂肪细胞的细胞活性。不同浓度(0、5、25和50μmol·L^(-1))PD作用于3T3-L1脂肪前体细胞,采用DAPI染色观察细胞凋亡的形态表现,流式细胞术检测3T3-L1脂肪前体细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷酸肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)蛋白表达水平,计算p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值。结果:CCK-8实验,与空白对照组比较,不同浓度PD处理组3T3-L1脂肪前体细胞的细胞活性降低(P<0.05或P<0.01),成熟脂肪细胞的细胞活性差异无统计学意义(P>0.05);DAPI染色实验,与空白对照组比较,不同浓度PD处理组3T3-L1脂肪前体细胞轮廓变得不规则,出现核碎裂,观察到凋亡小体与染色质碎片;流式细胞术检测,与空白对照组比较,不同浓度PD处理组3T3-L1脂肪前体细胞凋亡率升高(P<0.01),S期细胞百分率明显升高(P<0.05或P<0.01);Western blotting法检测,与空白对照组比较,不同浓度PD处理组细胞中Bax和cleaved-Caspase 3蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值降低(P<0.05或P<0.01)。结论:PD能够明显诱导3T3-L1脂肪前体细胞发生凋亡,其作用机制可能与其影响凋亡相关蛋白表达水平有关。