竹节参总皂苷通过调节FGF21抵抗改善高脂饮食诱导的焦虑症

焦虑症是高发的心理疾病,研究表明肥胖是导致焦虑症的重要危险因素。该研究探讨竹节参总皂苷(saponins from Panax japonicus,SPJ)对高脂饮食小鼠焦虑症的改善作用及机制。将50只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、高脂饮食组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组。第12周从高脂饮食组取6只小鼠,分为对照组、外源性给予成纤维细胞生长因子21(FGF21)组。旷场和高架十字迷宫实验评价小鼠焦虑样行为;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝脏、脂肪的病理变化;葡萄糖耐量实验和胰岛素耐量实验评估小鼠糖代谢水平;蛋白免疫印迹法检测肝脏和皮层中FGF21及下游相关蛋白和大脑皮层中脑源性神经营养因子(BDNF)、突触后膜蛋白4(DLG4)和突触素(SYP)表达;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏和皮层中FGF21及相关受体基因表达;免疫荧光检测大脑皮层神经元激活物(c-Fos)、FGF21、FGF21辅助受体β-klotho的表达。结果显示,SPJ可显著改善高脂饮食小鼠在高架十字迷宫的开臂区及旷场中心区的活动频率,并上调BDNF、DLG4和SYP表达,有效改善高脂饮食小鼠的焦虑样行为。与正常组相比,高脂饮食组小鼠的肝脏及大脑皮层中FGF21的表达上调,成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)与β-klotho的表达显著下降,提示高脂饮食小鼠呈FGF21抵抗状态;SPJ可显著上调高脂饮食小鼠β-klotho水平,逆转FGF21抵抗。进一步与外源性给予FGF21进行对比,显示SPJ激活大脑皮层区域与其一致,同时SPJ能促进大脑皮层中c-Fos与β-klotho阳性细胞数量及共定位。综上所述,SPJ可有效改善高脂饮食小鼠的焦虑样行为,其机制与上调大脑β-klotho表达,逆转FGF21抵抗,进而激活大脑皮层、杏仁核神经元有关。

VD-FGF23-Klotho轴与糖尿病肾脏病中医证候的相关性

目的:观察糖尿病肾脏病(diabetic kidney disease,DKD)的中医证候分布特点,基于肾主骨理论进一步分析由肾脏合成的活性维生素D(vitamin D,VD)、骨骼合成的成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)和Klotho蛋白(Klotho)组成的VD-FGF23-Klotho轴与DKD中医证候的相关性。方法:采用横断面研究方法,选取2021年5月至2023年3月于北京中医药大学东直门医院住院的2型糖尿病患者126例,首先将其分为非糖尿病肾脏病组(NDKD组)、DKDⅢ期组、DKDⅣ期组、DKDⅤ期组,采用电化学发光法测定患者血25(OH)D3水平,酶联免疫吸附法检测血FGF23和Klotho水平,比较4组间25(OH)D3、Klotho、FGF23的差异。针对其中的96例DKD患者,采用本团队前期制定的四诊信息条目表,收集中医证候信息,辨证分为脾肾亏虚证组、肝肾阴虚证组、气阴两虚证组和阴阳两虚证组4个本虚证候组;湿浊证组、湿热证组、瘀血证组和痰瘀证组4个标实证候组,运用SPSS 27.0软件分别统计分析25(OH)D3、Klotho、FGF23与中医本虚及标实证候的相关性。结果:NDKD组、DKDⅢ期组、DKDⅣ期组、DKDⅤ期组患者血清25(OH)D3、Klotho、FGF23比较,差异有统计学意义(P<0.001)。DKD患者中本虚证以脾肾亏虚证为主,标实证以湿热证为主,肝肾阴虚证组25(OH)D3水平最高(P<0.05),阴阳两虚证组最低(P<0.05);气阴两虚/肝肾阴虚证组Klotho水平均高于脾肾亏虚/阴阳两虚证组(P<0.05);湿热证组FGF23水平最高(P<0.05)。结论:DKD患者血清肾骨相关指标25(OH)D3、Klotho、FGF23与中医证候存在一定相关性,25(OH)D3、Klotho有望成为指导本虚辨证的间接参考指标,FGF23有望成为指导标实证候判定的间接参考指标。

维生素D缺乏促进CVD患者血管钙化的机制研究

为探究维生素D缺乏对血管钙化(vascular calcification,VC)的作用机制,文章对心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)患者的血清学指标进行临床研究分析,发现血清维生素D、纤维母细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)、Klotho水平均与血管钙化相关;采用HASMC细胞构建钙化模型,在去除或回补维生素D的条件下,观察钙化相关分子在蛋白和mRNA水平的表达情况。结果表明,维生素D缺乏会引起循环系统、血管组织、肾脏组织中Klotho水平下降,导致FGF23-Klotho轴紊乱,从而产生FGF23抵抗,抑制FGF23对磷酸盐的代谢过程,导致体内磷酸盐代谢紊乱,加速血管钙化的发生发展。

血清APOC1和Klotho表达对肾癌后腹腔镜下肾部分切除术患者预后的预测价值

目的探讨载脂蛋白C1(APOC1)和Klotho表达预测肾癌后腹腔镜下肾部分切除术患者预后的临床价值。方法选择确诊为肾癌并行后腹腔镜肾部分切除术的患者80例,根据预后情况分为预后良好组(61例)和预后不良组(19例),另择健康体检者78例为对照组。收集一般临床资料,采用荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清APOC1、Klotho表达。采用Pearson法分析患者血清APOC1与Klotho水平的相关性,Cox回归分析影响患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线评估APOC1、Klotho水平对患者预后的预测效能。结果预后不良组和预后良好组临床分期和病理分级差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、预后良好组和预后不良组血清APOC1表达水平依次升高,Klotho表达水平依次降低(P<0.05)。患者血清APOC1与Klotho表达水平呈负相关(r=-0.577,P<0.001)。Cox回归分析结果显示,Klotho表达水平降低、APOC1表达水平升高、病理分级2级、临床分期Ⅱ期是导致患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清APOC1、Klotho联合预测肾癌患者术后预后不良的临床价值优于单一指标(P<0.05)。结论肾癌后腹腔镜下肾部分切除术预后不良患者血清APOC1水平升高,Klotho水平降低,二者联合对患者预后具有较高的临床价值。

腹膜透析患者血清klotho蛋白水平与中医证候的相关性研究

目的:探讨腹膜透析患者血清klotho蛋白水平与中医证候的相关性。方法:选取180例规律腹膜透析患者作为研究对象,均进行中医辨证,分为主证和兼证两类;并根据患者肾小球滤过率(GFR)和血清分泌型klotho蛋白水平的四分位数,分为4组,统计各组中医主证、兼证分布情况。结果:180例腹膜透析患者主证占比,脾肾气虚证>气阴两虚证>肝肾阴虚证>脾肾阳虚证>阴阳两虚证;兼证占比,瘀血证>湿热证>湿浊证;不同主证的GFR和klotho蛋白水平存在显著性差异(P<0.05),GFR、klotho蛋白水平比较,肝肾阴虚证<阴阳两虚证<气阴两虚证<脾肾阳虚证<脾肾气虚证,且GFR与血清klotho蛋白水平呈正相关。不同兼证患者GFR和klotho蛋白水平比较无统计学意义(P>0.05)。按照血清分泌型klotho蛋白水平分布范围分组,发现在klotho蛋白水平较低的患者中,肝肾阴虚证和阴阳两虚证的占比较高;相反,在klotho蛋白水平较高的患者中,脾肾气虚证和脾肾阳虚证的占比较高,各组中医主证比率比较有统计学意义(P<0.05),而兼证比率比较无统计学意义(P>0.05)。结论:腹膜透析患者血清klotho蛋白水平与中医主证呈显著相关性,且肝肾阴虚证、阴阳两虚证者klotho蛋白降低尤其明显,主要与肾精不足或衰退相关。

甲状旁腺全切+自体移植术对肾性继发性甲状旁腺功能亢进患者骨密度的影响

目的观察甲状旁腺全切+自体移植术(total parathyroidectomy with autotransplantation,tPTx+AT)对继发性甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroidism,SHPT)患者骨密度(bone mineral density,BMD)及血清可溶性Klotho(soluble Klotho,sKlotho)蛋白的影响。方法选取自2019年6月至2022年5月于安徽医科大学第二附属医院行tPTx+AT患者86例,收集患者术前人口学特征,术前及术后第5天、术后1个月、术后3个月、术后6个月、术后12个月及术后24个月的血清校正钙、磷、全段甲状旁腺激素(intact parathyroid hormone,iPTH)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)及sKlotho蛋白,双能X线吸收法测量术前及术后(3个月、6个月、12个月及24个月)腰椎L1-L4骨密度。观察tPTx+AT术前及术后FGF23、sKlotho蛋白及骨密度的变化。结果86例患者均手术成功,术后临床症状如骨痛、皮肤瘙痒等明显改善;术后血钙、磷、iPTH、ALP及FGF23较术前均明显下降。血sKlotho在术后第5天时较术前显著下降,术后1个月时sKlotho水平较术前升高约24.5%,此后sKlotho趋于稳定。术后腰椎L1-L4骨密度增加,至术后12个月最高。进一步分析显示,透析龄、SHPT持续时间、ALP、iPTH及FGF23与术前腰椎L1-L4 Z值呈负相关,sKlotho与术前腰椎L1-L4 Z值呈正相关。结论tPTx+AT可显著改善SHPT患者临床症状,调节钙磷代谢平衡,增加sKlotho、降低FGF23水平,是提高骨密度的有效治疗手段。

跨膜蛋白Klotho与纤连蛋白在瘢痕疙瘩表达水平及对术后复发的相关性分析

目的:探究Klotho蛋白结合纤连蛋白(FN)在瘢痕疙瘩术后复发的相关性。方法:选取2020年4月至2023年4月于我科就诊的耳部瘢痕疙瘩患者43例及普通求美者37例,实验对象分为研究组(瘢痕疙瘩组织和血清)及对照组(正常组织和血清)。采用免疫组织化学染色法及酶联免疫吸附法(ELISA)检测比较两组组织和血清标本中Klotho蛋白及上皮间质转化标志物纤连蛋白FN的表达。同时在术后1月、3月、6月、12月对瘢痕疙瘩患者进行随访、记录复发情况,分为复发组及未复发组。应用统计学方法分析Klotho的表达与瘢痕疙瘩纤维化标志物FN的表达及术后复发的相关性。结果:免疫组化结果:研究组Klotho阳性率较对照组低(P<0.05),为37.20%;研究组FN阳性率为72.10%,高于对照组阳性率(P<0.05);复发组Klotho阳性率为21.40%,低于未复发组(P<0.01);复发组FN阳性率为92.90%,高于未复发组(P<0.05)。Klotho和FN两种蛋白水平的相关性存在统计学差异(r=-0.307,P<0.05);ELISA检测血清结果:研究组Klotho表达含量为65.99(55.05,79.06)ng/mL,低于对照组(P<0.05);研究组FN表达含量为83.56(62.67,91.85)ng/mL,较高于对照组(P<0.01);经Logrank检验,在术后复发患者中Klotho阴性表达与FN蛋白阳性表达相关(P均<0.05)。结论:Klotho蛋白结合上皮间质转化标志物FN可作为预测瘢痕疙瘩术后复发的重要标志物。

Klotho、成纤维细胞生长因子23在矮身材儿童的水平变化及其与GH-IGF1轴的关系

目的探讨Klotho、成纤维细胞生长因子23(FGF23)在矮身材儿童的水平变化及其与生长激素(GH)-胰岛素样生长因子1(IGF1)轴的关系。方法选取2021年3月—2021年11月在河北省人民医院儿童保健门诊就诊的身材矮小的67例患儿作为研究组,并分为生长激素缺乏症组(GHD组)、特发性研究组(ISS组),分别有26和41例。另选取同期于该院儿童保健门诊行常规体格检查的正常身材儿童29例作为对照组。检测并比较研究组与对照组血清Klotho、FGF23、IGF1、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)、血清钙、1,25-二羟维生素D3、磷酸盐水平。结果GHD组、ISS组身高-标准差数值(SDS)、体重-SDS均低于对照组(P<0.05)。各组年龄、性别、性发育分期、BMI-SDS比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。GHD组IGF1、IGFBP3、Klotho、FGF23水平低于ISS组、对照组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,Klotho与IGF1、IGFBP3、FGF23、磷酸盐均呈正相关(rs=0.628、0.512、0.495和0.266,均P<0.05)。FGF23与IGF1、IGFBP3、磷酸盐均呈正相关(rs=0.440、0.484和0.277,均P<0.05)。结论GHD患儿Klotho、FGF23水平低下。Klotho、FGF23通过参与GH-IGF1轴的调节,在GHD患儿线性生长中发挥一定作用,并且在矮身材儿童血清磷酸盐稳态调节中有重要意义。

早发型重度子痫前期合并胎儿生长受限患者母血Irisin、Klotho蛋白、Sesn2水平检测及其临床意义

目的检测早发型重度子痫前期(EOSP)合并胎儿生长受限(FGR)患者母血鸢尾素(Irisin)、Klotho蛋白和应激诱导蛋白2(Sesn2)水平,并分析其临床意义。方法选取2021年1月至2022年12月郑州市妇幼保健院收治的187例EOSP患者进行前瞻性研究,根据是否合并FGR分为FGR组90例和非FGR组97例;FGR组根据新生儿结局分为结局不良组47例和结局良好组43例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测母血Irisin、Klotho蛋白和Sesn2水平,收集所有患者的临床资料,采用多因素Logistic回归分析EOSP合并FGR的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析母血Irisin、Klotho蛋白、Sesn2对EOSP合并FGR新生儿结局不良的预测价值。结果FGR组患者的母血Irisin、Klotho蛋白水平分别为(3.64±1.06)mmol/L、(158.37±23.46)pg/mL,明显低于非FGR组的(5.83±1.45)mmol/L、(197.42±33.65)pg/mL,母血Sesn2水平和24 h尿蛋白定量(24 hUPQ)分别为(2.14±0.56)ng/mL、(6.67±2.13)g/24 h,明显高于非FGR组的(1.17±0.32)ng/mL和(4.26±1.78)g/24 h,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistics回归分析结果显示,24 hUPQ和Sesn2升高、Irisin和Klotho蛋白降低是EOSP合并FGR的独立危险因素(P<0.05);结局不良组患者的母血Irisin、Klotho蛋白水平分别为(2.98±1.02)mmol/L、(144.68±19.75)pg/mL,明显低于结局良好组的(4.36±1.17)mmol/L、(173.33±25.77)pg/mL,母血Sesn2水平为(2.47±0.63)ng/mL,明显高于结局良好组的(1.78±0.44)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC分析曲线结果显示,母血Irisin、Klotho蛋白、Sesn2单独及联合预测EOSP合并FGR患者新生儿结局不良的曲线下面积(AUC)分别为0.813、0.760、0.795、0.935,三项指标联合预测的AUC高于各指标单独预测(P<0.05)。结论EOSP合并FGR患者母血Irisin、Klotho蛋白水平降低,Sesn2水平升高,且均是EOSP合并FGR的独立危险因素。母血Irisin、Klotho蛋白、Sesn2联合检测对EOSP合并FGR患者新生儿结局不良具有较高的预测价值。

六味地黄丸干预FGF23/Klotho轴对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的影响

目的:观察六味地黄丸通过成纤维细胞生长因子23(FGF23)/Klotho轴对慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的影响及其干预机制。方法:50只SPF级SD大鼠随机分为假手术组(10只)、手术组(40只),手术组采用5/6肾切除及高磷饮食喂养构建慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱大鼠模型,模型复制成功后将30只造模成功大鼠随机分为模型组、骨化三醇组、六味地黄丸组,每组10只。六味地黄丸组、骨化三醇组大鼠分别予六味地黄丸和骨化三醇灌胃,假手术组及模型组大鼠予等体积的蒸馏水灌胃,持续给药8周。HE染色观察肾组织变化,检测大鼠血清钙(Ca^(2+))、磷(P^(3+))、碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺激素(PTH)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),免疫组化及Western blotting法检测大鼠肾皮质Klotho、FGF23蛋白的表达。结果:HE染色显示,模型组大鼠肾小球结构紊乱、肾小管扩张,间质有大量炎症细胞浸润;与模型组比较,六味地黄丸组大鼠肾小球轻度增生,肾小管轻度扩张,间质炎症细胞浸润数目减少。模型组大鼠血清Scr、BUN、P^(3+)、PTH、ALP高于假手术组(P<0.01),体质量、血清Ca^(2+)低于假手术组(P<0.01);六味地黄丸组大鼠血清Scr、BUN、P^(3+)、PTH、ALP低于模型组,体质量、血清Ca^(2+)高于模型组(P<0.01)。模型组大鼠肾皮质Klotho蛋白相对表达量低于假手术组(P<0.05),FGF23蛋白相对表达量高于假手术组(P<0.01);六味地黄丸组大鼠肾皮质Klotho蛋白相对表达量高于模型组(P<0.01),FGF23蛋白相对表达量低于模型组(P<0.01)。六味地黄丸组大鼠血Scr、BUN及肾皮质FGF23、Klotho蛋白相对表达量与骨化三醇组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。六味地黄丸组大鼠血P^(3+)、Ca^(2+)高于骨化三醇组(P<0.05)。结论:六味地黄丸可能通过调控FGF23/Klotho轴改善慢性肾衰竭钙磷代谢紊乱模型大鼠的肾功能和钙磷代谢。

血清维生素D结合蛋白、FGF23、Klotho与乳腺癌骨转移的相关性分析

目的骨转移是乳腺癌常见的并发症之一,严重影响患者的生存和预后。本研究旨在探究血清维生素D结合蛋白(vitamin D⁃binding protein,VDBP)、成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor 23,FGF23)和Klotho蛋白在乳腺癌骨转移中的表达及临床意义。方法收集95例来自本院2019⁃08⁃01至2021⁃08⁃01的女性乳腺癌患者作为研究对象,经影像学和组织病理学方式诊断是否发生骨转移,将患者分为骨转移组36例,非骨转移组59例。分析两组患者的临床病理特征;采集患者外周血样本,通过ELISA对血清中VDBP、FGF23和Klotho进行定量分析;使用Spearman相关分析进行指标间的关联性分析;Logistic回归分析乳腺癌发生骨转移的影响因素;ROC曲线分析血清VDBP、FGF23和Klotho水平预测乳腺癌发生骨转移的价值。结果骨转移和非骨转移乳腺癌病理分级比较有统计学意义(P<0.05)。骨转移和非骨转移乳腺癌患者血清中VDBP、FGF23及Klotho的水平依次为:(80.35±29.34)和(115.18±48.69)ng/mL、(658.35±201.19)和(405.36±154.42)pg/mL以及(155.82±40.29)和(229.35±72.46)pg/mL,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,骨转移乳腺癌患者血清中VDBP水平与乳腺癌病理分级相关(P<0.05);FGF23和Klotho水平与病理分级、是否骨痛以及转移部位有关(P<0.05)。VDBP、FGF23和Klotho水平均为乳腺癌骨转移发生的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,VDBP、FGF23及Klotho预测乳腺癌患者发生骨转移的曲线下面积依次为:0.733、0.806、0.761,最佳截断值为:81.56 ng/mL、573.501 pg/mL和201.193 pg/mL;3个指标联合诊断的曲线下面积为0.820,高于单一指标诊断的曲线下面积。结论血清VDBP、FGF23及Klotho水平可作为乳腺癌骨转移的参考指标,在乳腺癌骨转移的临床诊断上具有一定应用前景。

血清CYR61、IL-17、Klotho蛋白对Graves眼病病情的评估价值

目的 探讨血清高半胱氨酸蛋白61(CYR61)、白细胞介素-17(IL-17)、单向跨膜蛋白(Klotho)对Graves眼病(GO)病情的评估价值。方法 收集2020年1月至2023年10月于郑州大学第一附属医院眼五科诊治的103例患者的临床资料为研究对象,根据临床活动性评分(CAS)评估患者病情,将其分为活动期组42例及非活动期组61例,比较两组患者一般资料、临床基础指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)及TSH受体抗体(TRAb)、CYR61、IL-17、Klotho蛋白水平及CAS评分],并通过多因素回归分析和ROC曲线分析GO眼病活动期的相关影响因素以及预测价值。结果 活动组Klotho、TSH、FT3、FT4、TRAb、TNF-α、IFN-γ、CYR61水平及CAS评分相较于非活动组更高,差异有统计学意义(t=7.953,4.364,5.232,6.100,4.364,7.344,4.890,6.541,6.995,13.283,P<0.05);经多因素回归分析得出TSH、FT3、FT4、TRAb、TNF-α、IFN-γ、IL-17、Klotho、CYR61合并CAS评分为影响GO眼病活动期的独立危险因素(OR=1.730,1.667,1.689,1.692,1.742,1.791,1.863,1.887,1.828,1.842,P<0.05);CYR61、IL-17、Klotho联合预测GO活动期的预测价值均高于三者单一检测,曲线下面积(AUC)分别为0.943,0.827,0.817,0.866(P<0.05)。结论 血清CYR61、IL-17、Klotho蛋白与GO活动期密切相关,三者联合联合检测对GO病情预测效能较好,评估价值确切。

lncRNA NEAT1通过Klotho/mTOR轴调控慢性脑低灌注大鼠的认知障碍

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA)核富集丰度转录物1 (NEAT1)对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的调控作用和潜在机制。方法双侧颈总动脉闭塞术(BCCAO)诱导CCH模型大鼠。将大鼠分为5组(每组n=10):Ⅰ组(假手术组);Ⅱ组(BCCAO手术组);Ⅲ组[BCCAO后于海马区注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的沉默lncRNA NEAT1的短发夹RNA重组质粒(shNEAT1),持续12 w];Ⅳ组[BCCAO后于海马区每周注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的shNEAT1和50 mg·kg^(-1)·w^(-1)的沉默克洛托蛋白(Klotho)的短发夹RNA重组质粒(shKlotho),持续12 w];V组[BCCAO后于海马区注射0.3 mg·kg^(-1)·w^(-1)的shNEAT1和25mg·kg^(-1)哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制剂(AZD-8055),持续12w]。行Morris水迷宫实验记录逃避潜伏期。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)测lncRNA NEAT1的表达。Western blot法检测Klotho、mTOR、磷酸化的mTOR (p-mTOR)、神经核抗原(NeuN)、多聚腺苷酸核糖聚合酶(PARP)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、切割模式的半胱天冬酶-3(cleaved-caspase-3)的表达。免疫荧光化学检测海马区NeuN阳性细胞数。结果 与Ⅰ组比,Ⅱ组大鼠的逃避潜伏期延长,lncRNA NEAT1、PARP、cleaved-caspase-3的表达均上调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均下调,NeuN阳性的细胞数减少(~均P<0.05)。与Ⅱ组比,Ⅲ组大鼠的逃避潜伏期缩短,且海马组织中lncRNA NEAT1、PARP、cleaved-caspase-3的表达均下调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均上调,NeuN阳性的细胞数增加(~均P><0.05)。与Ⅲ组比,Ⅳ组和Ⅴ组中大鼠的逃避潜伏期延长,且海马组织中PARP、cleaved-caspase-3的表达均上调,NeuN、Klotho和p-mTOR的表达均下调,NeuN阳性细胞数都减少(~均P <0.05)。结论 lncRNA NEAT1通过负调控Klotho/mTOR轴促进CCH大鼠的认知障碍,为研究CCH的有效治疗靶点提供理论依据。

基于Klotho、PI3K、Akt蛋白表达水平探讨补肾活血汤对绝经后骨质疏松大鼠骨骼、血管及肾脏功能的影响

目的通过观察补肾活血汤对去势大鼠股骨近端、主动脉外膜及肾小管中可罗索(Klotho)蛋白,大鼠股骨近端磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)蛋白及蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)表达水平的影响,探讨补肾活血汤治疗绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)的作用机制。方法选取6月龄SD雌性大鼠31只,第1次随机分为空白组8只、假手术组5只、手术组18只,手术造模8周后随机处死空白组和手术组大鼠各3只,评估造模成功后,手术组按随机数字表法第2次分组:模型组5只、补肾活血汤组5只、戊酸雌二醇组5只。然后分组给药:空白组、假手术组及模型组予以蒸馏水灌胃,补肾活血汤组予补肾活血汤3.32 mg/kg灌胃,戊酸雌二醇组予戊酸雌二醇0.1 mg/kg灌胃,连续给药8周。观察大鼠的一般情况;分光光度法测定血清钙含量;偶联反应法测定血清磷含量;骨密度扫描仪测量股骨近端的骨密度;电镜观察股骨近端的骨细胞;HE染色观察大鼠股骨近端的病理变化;ELISA法检测大鼠股骨近端、主动脉外膜及肾小管中Klotho蛋白的水平;Western blot检测大鼠股骨近端中Klotho、PI3K及Akt蛋白的相对表达水平。结果与模型组比较,补肾活血汤组和戊酸雌二醇组大鼠的平均体质量较重、活力较好,饮食及毛发情况未见明显差异。与模型组比较,补肾活血汤组和戊酸雌二醇组大鼠股骨近端细胞、骨小管形态数量均有不同程度恢复,股骨近端骨组织骨质疏松病变均得到不同程度的修复。与空白组、假手术组比较,模型组、补肾活血汤组血清钙含量降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,戊酸雌二醇组血清钙含量增加(P<0.05)。与空白组、假手术组比较,模型组骨密度明显降低(P<0.01);股骨近端、主动脉外膜及肾小管中Klotho蛋白含量明显减少(P<0.01);骨组织中Klotho蛋白表达水平显著降低(P<0.01),PI3K、Akt蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。与模型组比较,补肾活血汤组、戊酸雌二醇组股骨近端、主动脉外膜及肾小管中Klotho蛋白含量明显增加(P<0.01);骨组织中Klotho蛋白表达水平显著增加(P<0.01),PI3K、Akt蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与补肾活血汤组比较,戊酸雌二醇组股骨近端及肾小管中Klotho蛋白含量增加(P<0.05,P<0.01),骨组织中PI3K、Akt蛋白表达水平降低(P<0.05)。各组大鼠血清磷含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾活血汤可通过提高股骨近端、主动脉外膜及肾小管中Klotho蛋白的表达,抑制股骨近端中PI3K蛋白、Akt蛋白的表达,一定程度上缓解去势大鼠的骨质疏松样病变,其作用机制可能与抑制骨细胞凋亡、改善肾脏功能及循环系统功能相关。

解毒活血汤对慢性肾脏病大鼠肾脏FGF23、Klotho表达的影响

目的:观察解毒活血汤对慢性肾脏病(CKD)大鼠肾脏FGF23、Klotho的影响。方法:将60只SPF级健康雄性SD大鼠,随机分空白组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,每组12只。采用腺嘌呤加高磷饮食制作CKD大鼠伴血管钙化模型。采用生化试剂盒测定血清中肌酐、尿素氮、钙、磷水平;Western blot法检测肾脏组织中FGF23、Klotho的表达。结果:与空白组相比,其余各组血清中肌酐、尿素氮、钙、磷均有明显变化(P<0.05或P<0.01);和模型组相比,中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组CKD大鼠血清中肌酐、尿素氮、磷水平明显改善(P<0.05),FGF23、Klotho蛋白表达量增高(P<0.05),血清钙水平升高(P<0.05)。结论:解毒活血汤可以改善CKD大鼠肾脏功能,可以通过提高CKD大鼠肾脏组织中FGF23、Klotho蛋白的表达影响失衡的FGF23-Klotho轴,进而调节CKD大鼠血中钙、磷浓度。

慢性肾衰竭患者并发心血管疾病相关危险因素分析

目的:探究慢性肾衰竭(CRF)患者并发心血管疾病(CVD)的相关危险因素。方法:选取111例CRF维持性血液透析患者作为研究对象,调查CVD发生情况。将其分为CVD组(n=54)、非CVD组(n=57),收集两组一般临床资料,采用Logistic单因素和多因素回归分析,探究CRF患者并发CVD的独立危险因素。结果:两组患者年龄、性别、体重指数(BMI)、合并糖尿病情况、心血管疾病史及原发病差异比较无统计学意义(均P>0.05);CVD组血红蛋白、Klotho蛋白水平均低于非CVD组(均P<0.05),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)/高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清磷酸盐、甲状旁腺激素(PTH)、白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、硫酸对甲酚水平均高于非CVD组(均P<0.05);Logistic多因素回归分析显示,血红蛋白、Klotho蛋白下降及TG/HDL-C、IL-6、硫酸对甲酚升高均为CRF连续性血液透析患者发生CVD的独立危险因素(均P<0.05)。结论:血红蛋白和Klotho蛋白的下降以及TG/HDL-C、IL-6和硫酸对甲酚的升高均可增加CRF维持性血液透析患者CVD的风险,血液透析治疗期间应加强对上述危险因素的评估和管理。

天马颗粒剂通过TLR4/NF-κB/Klotho途径调控大肠癌裸鼠移植瘤研究

目的:观察天马颗粒剂对大肠癌裸鼠移植瘤组织中TLR4、NF-κB、Klotho表达的影响。方法:以SPF级裸鼠为研究对象,通过皮下种植HCT116细胞株构建裸鼠移植瘤模型,随机分为3组:对照组、天马颗粒低剂量组、天马颗粒正常剂量组,对照组予生理盐水20 mL/kg,天马颗粒低剂量5.39 g/kg;天马颗粒正常剂量10.79 g/kg;灌胃给药,隔天1次,持续2周。摘除肿瘤组织,测量肿瘤体重及体积,免疫组化检测TLR4、NF-κB、Klotho表达量。结果:同对照组相比,天马颗粒正常剂量组肿瘤组织中TLR4、NF-κB表达降低,Klotho表达明显增加(P<0.05);天马颗粒正常剂量组与天马颗粒低剂量组相比,肿瘤组织中TLR4、NF-κB表达未见明显差异(P>0.05),Klotho表达升高(P<0.05)。结论:天马颗粒剂可抑制TLR4/NF-κB通路活性,促进Klotho表达,降低肿瘤中炎性因子表达,改善肿瘤炎症微环境。

小于胎龄儿生后血清Klotho和成纤维细胞生长因子23水平变化及其与生长发育的关系

目的:探讨小于胎龄儿(SGA)生后血清Klotho和成纤维细胞生长因子23(FGF23)水平变化,并阐明其与生长发育的关系。方法:选取35例SGA和53例适于胎龄儿(AGA)作为研究对象,分为SGA组(n=35)和AGA组(n=53),其中早产儿组51例,早产SGA组20例,早产AGA组31例;足月儿组37例,足月SGA组15例,足月AGA组22例。收集各组新生儿的临床资料,分别检测新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平及临床生化指标,分析新生儿生后第7和14天血清Klotho及FGF23水平与新生儿体质量、身长、头围、胸围和考普氏(Kapu)指数等各项生长发育指标及钙磷代谢的相关性。结果:与AGA组比较,SGA组新生儿出生体质量、身长、头围、胸围和Kapu指数均明显降低(P<0.05)。生后第7和14天,与早产儿组比较,足月儿组新生儿血清Klotho和FGF23水平均明显升高(P<0.01);与生后第7天比较,生后第14天早产儿组和足月儿组新生儿血清Klotho水平均明显升高(P<0.01),FGF23水平均明显降低(P<0.01)。与AGA组比较,SGA组新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与生后第7天比较,生后第14天AGA组和SGA组新生儿血清Klotho水平明显升高(P<0.01),FGF23水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。与早产AGA组比较,早产SGA组新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与足月AGA组比较,足月SGA组新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。SGA组新生儿生后第7天血清Klotho和FGF23水平与胎龄、体质量、身长、头围、胸围和Kapu指数等生长发育指标均呈正相关关系(P<0.05或P<0.01),血清Klotho水平与FGF23水平呈正相关关系(P<0.05)。钙磷代谢方面,SGA组新生儿生后第7天血清Klotho水平与血清磷水平呈正相关关系(P<0.01);FGF23水平与血清钙和磷水平均呈正相关关系(P<0.05或P<0.01)。结论:Klotho和FGF23蛋白与新生儿生长发育及磷酸盐代谢有密切关联。SGA新生儿生后血清Klotho和FGF23水平较低,但随着各器官发育逐渐完善,Klotho分泌增加,而FGF23水平降低可能是机体的代偿性反应。

基于FGF23/Klotho稳态观察口服糖皮质激素致生长障碍的临床研究

目的观察长期口服糖皮质激素(glucocorticosteroid,GC)抑制原发性肾病综合征(primarynephrotic syndrome,PNS)儿童生长与FGF23/Klotho比值变化的相关性。方法前瞻性选取已停用GC 3个月以上,于2022年6—12月至河南中医药大学第一附属医院儿科医院复查的56例激素敏感型PNS儿童为研究对象。入院监测尿蛋白定性及定量后,尿蛋白复发者加用GC治疗,为GC组(n=29);尿蛋白未复发者不加用GC治疗,为无GC组(n=27)。同期选取29例3岁至青春期前年龄的健康体检儿童作为对照组。比较各组身高、骨龄、增长速度及FGF23/Klotho比值等指标,并进行相关性分析。结果GC组加用GC 1个月后的FGF23/Klotho比值高于无GC组(P<0.05),半年内的身高增长速度、骨龄增长速度均低于无GC组(P<0.05)。相关性分析显示PNS儿童治疗1个月后的FGF23/Klotho比值与治疗半年内的身高增长速度、骨龄增长速度均呈显著负相关(分别r=-0.356、-0.436,P<0.05)。结论FGF23/Klotho稳态失衡是长期口服GC导致生长障碍的机制之一。

Klotho蛋白灌胃对急性脑梗死大鼠脑缺血再灌注损伤的改善作用及其机制

目的观察Klotho蛋白灌胃对急性脑梗死(ACI)大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的改善作用,并探讨其作用机制。方法50只SPF级SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、Klotho低剂量组、Klotho中剂量组、Klotho高剂量组,每组10只。模型组和Klotho低剂量组、Klotho中剂量组、Klotho高剂量组大鼠建立ACI后CIRI模型。假手术组只做颈动脉血管分离和伤口缝合,不做颈动脉夹闭处理。大鼠继续饲养24 h后,Klotho低、中、高剂量组分别用25、50、100 mg/kg的Klotho蛋白进行灌胃处理,模型组与假手术组均采用等体积生理盐水进行灌胃处理。5组大鼠均每天灌胃处理1次,持续处理14 d。取各组大鼠,采用Longa评分法和平衡木评分法进行神经功能评分。取各组大鼠,断头处死后取脑组织,采用苏木精染色法测算大鼠大脑皮层神经元凋亡率,采用Western Blotting法检测大鼠大脑皮层组织中受体相互作用蛋白激酶1(RIP1)、RIP3蛋白,采用酶联免疫法检测大鼠大脑皮层组织中炎症介质IL-1β、TNF-α、IL-6,采用TBA法检测MDA,采用酶联免疫法检测SOD,采用紫外比色法检测GSH-Px。结果假手术组大鼠神经功能评分、大脑皮层神经元凋亡率均低于其余各组(P均<0.05),模型组均高于其余各组(P均<0.05),Klotho高剂量组均高于Klotho低剂量组、Klotho中剂量组(P均<0.05),Klotho中剂量组均高于Klotho低剂量组(P均<0.05)。假手术组大鼠大脑皮层组织中RIP1、RIP3蛋白相对表达量和IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA表达水平均低于其余各组,SOD、GSH-Px表达水平均高于其余各组(P均<0.05),模型组大鼠大脑皮层组织中RIP1、RIP3蛋白相对表达量和IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA表达水平均高于其余各组,SOD、GSH-Px表达水平均低于其余各组(P均<0.05),Klotho高剂量组大鼠大脑皮层组织中RIP1、RIP3蛋白相对表达量和IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA表达水平均低于Klotho低剂量组、Klotho中剂量组,SOD、GSH-Px表达水平均高于Klotho低剂量组、Klotho中剂量组(P均<0.05),Klotho中剂量组大鼠大脑皮层组织中RIP1、RIP3蛋白相对表达量和IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA表达水平均低于Klotho低剂量组,SOD、GSH-Px表达水平均高于Klotho低剂量组(P均<0.05)。结论100 mg/kg Klotho蛋白灌胃对ACI大鼠CIRI具有改善作用,其作用机制可能与抑制大脑皮层组织中RIP1和RIP3蛋白表达、抑制脑损伤部位炎症反应和氧化应激反应有关。