基于JAK2/STAT3信号通路探讨黄芪-山茱萸对高糖诱导足细胞损伤的保护作用

目的:探究黄芪-山茱萸对高糖诱导肾足细胞损伤的保护作用及机制。方法:CCK8法检测黄芪-山茱萸(0、175、350、700、1400、2800 mg/L)对足细胞(MPC-5)活性的影响。30 mmol/L葡萄糖诱导MPC-5细胞损伤,350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸进行干预;ELISA测定MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平,流式细胞术测定细胞凋亡,免疫荧光染色测定MPC-5肾病蛋白(nephrin)、足细胞素(podocin)表达,qRT-PCR测定MPC-5细胞nephrin、podocin、结蛋白(desmin)、Wilm瘤基因1(WT-1)基因表达,Western blot测定细胞Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路磷酸化表达。结果:2800 mg/L黄芪-山茱萸可显著抑制MPC-5细胞活性(P<0.01)。MPC-5细胞经高糖诱导后,IL-6、IL-1β水平升高,凋亡增加,nephrin、podocin、WT-1表达降低,desmin表达升高,JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达增加(P<0.01)。350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸可抑制高糖诱导MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平升高和凋亡,增强nephrin、podocin、WT-1表达,降低desmin表达,抑制JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达(P<0.05)。结论:黄芪-山茱萸可减轻高糖诱导足细胞炎症和凋亡损伤,其机制与抑制JAK2/STAT3通路磷酸化有关。

糖尿病肾脏病肾精亏虚证中尿ERdj3和Nephrin表达研究

目的探究糖尿病肾脏病(DKD)患者肾小球足细胞是否存在内质网应激,分析患者尿液中内质网定位Dna J家族成员3(ERdj3)和足细胞保护标志蛋白(Nephrin)与中医证型、蛋白尿和肾功能的相关性。方法以2020年9月—2023年6月北京中医药大学东直门医院东城区、通州院区诊治且基线匹配的56例2型糖尿病(T2DM组)和45例糖尿病肾脏病(DKD组)患者为研究对象,其中DKD组患者再分为DKD肾精亏虚组和DKD非肾精亏虚组。比较T2DM组和DKD组、DKD非肾精亏虚组和DKD肾精亏虚组间ERdj3、Nephrin水平;分析DKD组患者ERdj3、Nephrin水平与中医肾精亏虚证积分、兼夹实证证素积分、24h尿蛋白定量、血肌酐(SCr)、估算肾小球滤过率(eGFR)的相关性。结果DKD组患者尿ERdj3、Nephrin水平均明显高于T2DM组(P均<0.05);DKD肾精亏虚组患者尿ERdj3、Nephrin水平均明显高于DKD非肾精亏虚组(P均<0.05)。尿ERdj3水平与DKD精亏证、气滞证、血瘀证、痰浊证积分和24 h尿蛋白定量均呈正相关(P均<0.05),尿Nephrin水平与DKD精亏证、水湿证、血瘀证积分和24 h尿蛋白定量均呈正相关(P均<0.05)。结论DKD患者存在尿ERdj3、Nephrin高表达,且二者表达水平均与精亏证积分呈正相关,有望为寻找DKD肾精亏虚证及相关兼夹实证可能的分子标记物提供客观依据。

升阳益胃汤合补阳还五汤对特发性膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对Nephrin、CD2AP表达的影响

目的观察升阳益胃汤合补阳还五汤对特发性膜性肾病大鼠肾脏的保护作用及对肾组织中肾病蛋白(Nephrin)、CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响。方法取40只雄性SD大鼠,随机选择10只大鼠作为正常组,余30只大鼠尾静脉一次性注射羊抗大鼠F×1A血清0.4 mL/100 g制备特发性膜性肾病模型。将造模成功后大鼠随机分为模型组、升阳合补阳组、贝那普利组,每组10只。升阳合补阳组给予升阳益胃汤合补阳还五汤全方颗粒剂溶液9.2 g/(kg·d)灌胃,贝那普利组给予盐酸贝那普利溶液0.00088 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,均1次/d,连续灌胃6周。于灌胃6周末收集各组大鼠24 h尿液,用以检测24 h尿蛋白水平;腹主动脉取血,检测血白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;取肾组织,HE染色和Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化法和Western blot法检测肾脏组织中Nephrin、CD2AP表达情况。结果与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白及血清TC水平均明显升高(P均<0.05),血清ALB水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,升阳合补阳组、贝那普利组大鼠24 h尿蛋白及血清TC水平均明显降低(P均<0.05),血清ALB水平均明显升高(P均<0.05);各组间血清Cr、BUN水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。HE染色和Masson染色显示,模型组大鼠肾小球体积增大,肾小球基底膜明显增厚,大量嗜复红蛋白沉积;与模型组相比,升阳合补阳组和贝那普利组大鼠肾小球体积明显减小,肾小球内嗜复红蛋白沉积较模型组明显减少。模型组大鼠肾脏组织中Nephrin、CD2AP阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显低于正常组(P均<0.05),升阳合补阳组和贝那普利组大鼠肾脏组织中Nephrin、CD2AP阳性表达平均光密度值和蛋白相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05)。结论升阳益胃汤合补阳还五汤具有保护特发性膜性肾病大鼠肾脏的作用,作用机制可能与上调Nephrin、CD2AP蛋白表达有关。

霉酚酸酯对阿霉素肾病大鼠肾小球Nephrin和TGF-β_1表达的影响

目的:探讨霉酚酸酯(MMF)对阿霉素肾病大鼠肾小球Nephrin、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。方法:将36只SD大鼠随机分为模型组(n=24)和对照组(n=12)。模型组大鼠尾静脉一次注射盐酸阿霉素(ADR)7mg/kg,对照组大鼠尾静脉注射等容积生理盐水,注射ADR 1周后尿蛋白定量>100mg/24h即为建模成功,共有20只大鼠建模成功,随机又分为肾病模型组(n=10)和MMF干预组(n=10)。MMF干预组每天给予MMF 10mg/kg灌胃,每日1次,共8周。对照组和肾病模型组给予等容积生理盐水灌胃。实验结束后检测各组大鼠24h尿蛋白定量,光镜观察肾脏病理学改变,免疫组化技术和Western-Blotting技术检测Nephrin、TGF-β1的表达。结果:肾病模型组及MMF干预组24h尿蛋白定量、肾小球TGF-β1表达均高于对照组(P?0.05),但MMF干预组上述指标均低于肾病模型组(P?0.05);肾病模型组及MMF干预组肾小球Nephrin表达低于对照组(P?0.05),但MMF干预组Nephrin表达高于肾病模型组(P?0.05)。结论:Nephrin及TGF-β1在阿霉素肾病发病机制中起重要作用;MMF能够增加肾小球Nephrin的表达,抑制TGF-β1的表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白的排出,减轻及延缓肾小球硬化,发挥保护肾脏的作用。

黄芪多糖对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的:观察黄芪多糖(APS)对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(nephrin和podo-cin)表达的影响,探讨其防治DN的作用机制。方法:24只健康雄性SD大鼠,随机抽取8只为正常对照组,其余大鼠链脲佐菌素(STZ)腹腔注射复制糖尿病模型,1周后经血糖浓度测量确定大鼠糖尿病建模成功,将造模大鼠分为STZ组(8只)和STZ+APS组(8只),各组分别干预8周。于干预后第2、5、8周检测大鼠血糖浓度;第8周末称量大鼠体重,计算肾指数,观察肾脏病理改变;检测24 h尿蛋白总量t和血尿素氮、血肌酐;蛋白免疫印迹法检测大鼠肾组织nephrin和podocin的表达水平。结果:应用APS干预后,大鼠血糖、肾系数、24 h尿蛋白总量、血尿素氮和血肌酐明显降低(P<0.05),体重增加(P<0.05);病理改变减轻;nephrin和podocin蛋白表达增加(P<0.05)。结论:APS对DN肾脏的保护作用可能与维持足细胞nephrin和podocin的表达有关。

坎地沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin和CD2AP表达的影响

目的探讨糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞相关分子Nephrin、Podocin及CD2AP表达的变化,以及坎地沙坦对其的干预作用,为DN的防治提供理论依据。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为3组:A组为正常对照组,B组为DN组,C组为DN+坎地沙坦组。用药后第4周和第7周检测各组大鼠的血糖(GLU)、体重、24h尿蛋白(proteinuria)和内生肌酐清除率(Ccr),于第7周予RT-PCR法检测大鼠肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA表达。结果 7周后,与A组比较,B组出现尿蛋白排泄增多,Ccr下降(P<0.05),肾组织Nephrin、Podocin及CD2AP mRNA水平均下调(均P<0.05);与B组比较,C组尿蛋白排泄量降低(P<0.05),Ccr升高(P<0.05),Nephrin、Podocin及CD2AP mR-NA水平均增加(均P<0.05)。采用直线相关分析后发现,尿蛋白与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈负相关;Ccr与肾组织Nephrin、Podocin和CD2AP mRNA水平呈正相关。结论 DN时存在足细胞分子Nephrin、Podo-cin及CD2AP表达异常,坎地沙坦对肾脏的保护作用机制可能是通过增加Nephrin、Podocin及CD2AP表达而实现。

雷公藤甲素对嘌呤霉素模型足细胞病变的影响

目的:研究雷公藤甲素对非免疫因素介导的、单纯足细胞病变模型——嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型的疗效及其对足细胞病变的影响。方法:采用PAN单次颈静脉注射法建立PAN肾病模型。大鼠分为正常对照组,模型组,雷公藤甲素预防组和治疗组。分别在1天、3天、5天、10天、14天和21天收集血尿标本,并处死大鼠留取肾组织标本。检测24h尿蛋白排泄量、血生化指标,行肾组织光镜和电镜观察肾小球病变和足突超微结构。采用定量学方法测定足突宽度。免疫荧光染色观察足细胞裂孔膜分子Nephrin和Podocin表达和分布变化。结果:雷公藤甲素无论是预防还是治疗性用药均能明显改善PAN肾病大鼠的肾病综合征状况,明显减少尿蛋白,加快血清白蛋白回升和血脂水平恢复。与此同时,雷公藤甲素预防组和治疗组大鼠在各观察点足突融合程度和范围均比PAN肾病大鼠明显减轻,至第14天仅见少数足突融合,第21天足突形态已基本恢复正常。雷公藤甲素预防性和治疗性用药均能够增加足细胞裂孔膜分子Nephrin和Podocin表达,促进其分布异常的修复。在第10天,Nephrin和Podocin不仅表达较PAN肾病大鼠明显增多,而且大部分血管袢已开始呈现连续的线状分布,以Podocin更为明显;两者的表达和分布在第14天已基本恢复,至第21天已完全恢复正常。结论:雷公藤甲素对PAN导致的足细胞损伤模型具有明显的预防和治疗作用,表现为减少蛋白尿,改善足突融合,恢复足细胞相关蛋白的表达及其分布,逆转足细胞病变。

白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin表达的影响及机制

目的探讨白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin蛋白表达的影响及机制。方法建立链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病模型,将模型大鼠随机分糖尿病组与TGP(50,100,200mg·kg-1.d-1灌胃)给药组,另设正常对照组。8wk末检测大鼠血糖、24h尿白蛋白排泄率(AER)变化,应用间接免疫荧光法检测肾组织Nephrin分布、West-ern杂交检测肾组织Nephrin、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与NF-κB-p65蛋白表达。结果模型组大鼠24hAER明显高于给药组,TGP治疗组大鼠24hAER明显减低。免疫荧光显示对照组肾小球Nephrin呈线状均匀分布;糖尿病组表达明显减少、呈颗粒状不均匀分布;TGP治疗组Nephrin表达增加,呈线状及颗粒状分布。Westernblot显示模型组肾组织Nephrin蛋白表达明显低于对照组,TGP治疗组表达增加;模型组肾组织TNF-α与NF-κB-p65蛋白表达明显高于对照组,TGP治疗组呈剂量依赖性降低它们的表达。结论TGP降低糖尿病大鼠尿蛋白机制可能部分与增加肾小球Nephrin表达有关。

槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin和podocin表达的影响

目的:通过观察槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin与podocin基因及蛋白表达的影响,探讨槐杞黄颗粒治疗肾病综合征的作用机制。方法:将Sprague-Dawley大鼠20只随机分为5组(即正常对照组、模型组、激素组、槐杞黄组和槐杞黄+激素组),除正常组大鼠外,各组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素造模。分别在建模后第7、14、21及28天收集24h尿液,检测大鼠24h尿中的蛋白含量;第29天处死所有大鼠,取肾脏组织,光学显微镜和电子显微镜下观察大鼠肾脏病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾组织nephrin与podocin mRNA的表达,蛋白质印迹法检测肾组织nephrin与podocin蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,从建模第14天开始模型组大鼠24h尿液中蛋白量增多(P=0.005),并随造模时间延长逐渐增加(P=0.015,P=0.012);从第14天开始,槐杞黄组与正常对照组相比,其尿蛋白减少不明显(P<0.05);第21天时,激素组与正常对照组相比,其尿蛋白明显增加(P=0.045)。光学显微镜下发现:模型组肾间质有灶性炎症细胞浸润,伴少量纤维组织增生;药物治疗组炎症细胞浸润较少。电子显微镜下发现:模型组肾小球足突大部分融合、消失,或出现部分微绒毛;槐杞黄组基底膜基本光滑均匀,足突融合明显减轻;激素组及槐杞黄+激素组足突清晰,甚至接近正常对照组。与正常对照组相比,模型组肾组织中nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显减少(P<0.05);与模型组比较,药物治疗组nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显增加(P<0.05)。24h尿蛋白量与nephrin mRNA以及nephrin和podocin蛋白的表达呈负相关。结论:槐杞黄颗粒可通过上调裂孔隔膜上的nephrin及podocin的表达维持足细胞裂孔隔膜的完整性,减轻肾小球滤过屏障的损伤,以此降低尿蛋白漏出。

真武汤对阿霉素所致大鼠肾损伤的治疗作用

目的:研究真武汤对阿霉素肾病模型(adriamycin nephropathy,AN)大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(podocin和nephrin)表达的影响,探讨其防治阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制。方法:采用常规生化、病理方法(包括HE染色、Masson染色及电镜)观察真武汤对AN模型所致纤维化大鼠肾功能、肾组织形态学变化及羟脯氨酸(Hyp)含量的改善作用;采用蛋白免疫印迹等方法探索真武汤对足细胞标志蛋白podocin和nephrin信号分子表达的影响。结果:模型组大鼠尿蛋白(TP)、血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)显著增加,肌酐清除率(CCr)显著下降(P<0.05);Hyp显著增加(P<0.05);肾组织podocin和nephrin蛋白表达水平显著降低(P<0.05);肾小管萎缩,基底膜增厚;足突扁平、融合、消失。肾小球集中现象明显;部分肾小管扩张,肾小管上皮细胞变性,蛋白管型明显;肾间质纤维组织增生和较多炎症细胞浸润。与模型组相比,各治疗组TP、BUN和SCr均有一定程度的下降,CCr显著提高;Hyp明显下降(P<0.05);真武汤组肾组织podocin和nephrin蛋白表达水平显著提高(P<0.05);肾组织病变程度轻于模型组。结论:真武汤能减少阿霉素肾病大鼠肾组织羟脯氨酸含量,改善肾功能及减轻病理损伤。真武汤降低模型大鼠蛋白尿的作用可能与其维持足细胞podocin和nephrin的表达有关。

六味地黄丸防治大鼠糖尿病肾病的实验研究

目的:观察足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin在糖尿病肾病发病机制中的作用,探讨六味地黄丸(LWDHW)保护糖尿病肾病大鼠肾脏的机制。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素复制糖尿病模型,1周后,按血糖浓度将成模的糖尿病大鼠随机分为:模型组(STZ,8只)、治疗组(STZ+LWDHW,8只),另设正常组(Control,8只)。治疗组给予六味地黄丸灌胃,模型组、正常组给予等量生理盐水,持续观察8周。治疗第8周末,称大鼠体重,计算肾系数,观察肾脏病理改变;检测24h尿蛋白总量、血尿素氮、血肌酐;免疫印迹检测nephrin和podocin在肾组织中的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血糖,体重明显下降(P<0.01),肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显升高(P<0.01);模型组大鼠肾小球肥大、毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,见蛋白管型;nephrin和podocin蛋白表达减少(P<0.01)。治疗组血糖、体重无明显改变;肾系数,24h尿蛋白总量,血尿素氮,血肌酐明显降低(P<0.05);病理改变明显减轻;大鼠肾组织nephrin和podocin表达明显增加(P<0.05)。结论:六味地黄丸可能通过增加足细胞nephrin和podocin表达发挥保护糖尿病肾病大鼠肾脏的作用。

阿霉素肾病大鼠模型动态变化及其足细胞数量和nephrin的表达变化

【目的】探讨足细胞数量及nephrin在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化及意义。【方法】SD大鼠64只分为两组,模型组40只和对照组24只。模型组大鼠间隔2周两次尾静脉注射盐酸阿霉素,对照组大鼠相同时间尾静脉注射等容积生理盐水,各组分别于注射后1周、4周、8周、12周检测血、尿的生化指标,光镜、电镜观察肾脏病理学改变,免疫组化技术观察足细胞数量及nephrin的表达变化。【结果】①根据肾脏病理变化模型可分为两期:急性期(1～4周)和慢性期(5～12周)。光镜检查4周末可见肾小球足细胞肿胀,8周末出现球囊粘连,12周末部分肾小球节段性轻、中度硬化。②1周末足细胞nephrin表达减弱(P<0.05),8周末足细胞数量减少(约是对照组的84%,P<0.05)。③nephrin、足细胞数量与24h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈负相关关系;足细胞数量与nephrin呈正相关关系。【结论】①经改良间隔2周两次尾静脉注射阿霉素0.004mg/g,可成功建立急性和慢性阿霉素肾病模型,急性模型病理学改变类似人的微小病变性肾病,慢性模型病理学改变类似人的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)。②足细胞nephrin的表达减少和分布方式改变可能是大量蛋白尿发生的重要因素。③FSGS发生时足细胞数量减少了约16%。

阿霉素肾病大鼠肾小球中足细胞数量及nephrin、VEGF的表达变化

目的探讨足细胞的数量及nephrin、VEGF在阿霉素(ADR)肾病大鼠肾小球中的表达变化及意义。方法建立ADR诱导的大鼠肾病模型,于不同实验时间点检测血尿生化指标;光镜、电镜观察肾脏病理学改变;免疫组化技术观察足细胞数量、nephrin、VEGF的表达变化。结果肾病模型组大鼠在第2次注射ADR后1周末足细胞nephrin表达减弱(P<0.05);8周末肾小球VEGF表达增强(P<0.05)、足细胞数量减少(P<0.05);nephrin、足细胞数量与24 h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈负相关;VEGF与24 h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈正相关。结论足细胞nephrin的表达减少和分布方式改变可能是大量蛋白尿发生的重要因素,VEGF既参与蛋白尿的产生,又参与肾小球硬化。

小檗碱对糖尿病肾病大鼠nephrin、podocin和α3β1整合素表达的影响

目的观察小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞相关蛋白nephrin、podocin和α3β1整合素蛋白表达的影响,探讨小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及部分机制。方法采用高糖高脂饲料喂养6周,联合低剂量链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠模型。随机分为正常对照组、模型组、3个不同剂量(50、100和200 mg·kg-1)小檗碱给药组和依那普利阳性药对照组(1 mg·kg-1)。分别采用免疫组织化学法,油镜(×1 000倍)和高倍镜(×400倍)和Western blot法,观察和检测肾脏足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素的分布和表达水平。结果足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素蛋白主要分布于足细胞,但分布位置略有差异;与正常对照组相比,模型组大鼠的足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素的表达水平明显降低;与模型组相比,小檗碱(100和200 mg·kg-1)给药组明显改善糖尿病肾病大鼠肾脏形态学异常,上调足细胞相关蛋白nephrin、podocin及α3β1整合素的表达水平。结论小檗碱可以缓解糖尿病肾病大鼠肾脏病理异常改变及蛋白尿的产生,这可能与其上调足细胞相关蛋白nephrin、podocin及整合素α3β1的表达相关。

左归降糖益肾方对2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin与podocin表达的影响

目的观察左归降糖益肾方对MKR转基因2型糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞nephrin、podocin表达的影响,探讨其作用机制。方法 8周龄MKR小鼠40只随机分为4组,空白组(A组)、DN组(B组)、DN+中药组(C组)、DN+糖适平+贝那普利组(D组)。B、C、D组给予高脂饮食联合右侧肾切除造模。手术4周后,各给药组给予相应药物,4周后处死小鼠。电化学法观察小鼠空腹血糖,全自动生化仪检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),ELISA法测定尿微量白蛋白(UmAlb),RT-PCR法检测nephrin、podocin mRNA表达,Western Blotting法测定nephrin、podocin蛋白表达,电镜观测足细胞形态结构。结果与A组比较,B组小鼠空腹血糖、SCr、BUN及UmAlb均明显升高(P<0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.01)。给药后,与B组比较,用药组小鼠血糖、SCr、BUN及UmAlb明显下降(P<0.01),肾小球足细胞nephrin、podocin mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01,P<0.05)。电镜结果显示,给药组小鼠肾小球足细胞较B组明显改善。结论左归降糖益肾方通过恢复2型糖尿病肾病小鼠足细胞nephrin和podocin的表达而保护肾脏。

阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin和CD2AP的表达及意义

【目的】动态观察nephrin、CD2相关蛋白(CD2AP)在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。【方法】72只大鼠分为2组,模型组36只和对照组36只,模型组大鼠尾静脉一次性注射盐酸阿霉素,对照组大鼠尾静脉一次性注射等容积生理盐水,分别于注射后3、5、7、14、28、42d各杀检6只大鼠。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学检测大鼠肾小球中nephrin、CD2AP的表达和分布变化。【结果】①模型组大鼠7d时nephrinmRNA表达增加,14d时其蛋白表达(9.44±0.49)亦显著增加;CD2AP表达增加时间较晚,28d时其mRNA和蛋白表达(7.88±1.01)才显著增加。②与对照组相比,模型组nephrin、CD2AP出现分布异常,从沿着毛细血管袢线样分布逐渐转变为不连续性颗粒样或斑片状分布。③肾小球nephrinmRNA、CD2APmRNA表达量与24h尿蛋白量均呈正相关关系(r=0.878,P<0.01;r=0.945,P<0.01)。【结论】①nephrin早期出现表达增加及分布异常,可能是导致蛋白尿的原因及判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。②CD2AP在后期出现表达增加,可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。

水蛭素对特发性膜性肾病足细胞nephrin的影响

特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)是一种以肾小球基底膜(GBM)上皮细胞下弥漫的免疫复合物沉积,伴GBM弥漫性增厚为病理特点的原发性肾小球疾病。随着足细胞相关致病抗原的陆续发现,目前普遍认为IMN是一种自身免疫性足细胞病,因此,探索足细胞保护途径对于IMN具有十分重要的意义。nephrin是由足细胞合成,同时又具有维持足细胞的正常形态和功能的一种跨膜蛋白,其对于稳定足细胞功能意义重大。目前对于足细胞保护的中西医药物临床上各有利弊,故我们需要寻找是否还存在其他中药能够防止IMN nephrin表达下降、保护足细胞功能。水蛭素临床上长期运用与特发性膜性肾病治疗,其作用机制是多途径的。鉴于IMN蛋白尿、肾脏损害的最根本机制是足细胞损伤,而水蛭素对IMN是否具有稳定nephrin表达、保护足细胞功能却没有更深的研究。进一步深入研究水蛭素是否存在调节nephrin表达,保护足细胞功能,将为水蛭素治疗IMN提供重要的理论和实践依据。

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin表达的影响及机制

目的探讨霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil,MMF)对糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin蛋白表达的影响及机制。方法建立链脲佐菌素诱导的单侧肾切除大鼠糖尿病模型,将模型大鼠随机分成糖尿病组(DM组)与MMF给药组(DM+MMF组,10mg·kg-1.d-1灌胃给药),另设对照组(C组)。8wk末检测血糖、24h尿白蛋白排泄率(AER)变化,通过免疫组化方法检测肾组织ED-1表达,Westernblot方法检测肾组织Nephrin、Podocin、白细胞介素-1(IL-1)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达。结果DM组大鼠尿AER明显高于C组(P<0.01),DM+MMF组大鼠尿AER明显低于DM组(P<0.05)。DM组大鼠肾小球ED-1阳性细胞数明显高于C组(P<0.01),DM+MMF组肾小球巨噬细胞浸润明显低于DM组(P<0.05)。DM组肾组织Nephrin与Podocin表达较C组分别下降80.2%与65.1%,MMF可明显恢复肾组织Nephrin与Podocin表达(P<0.01)。DM组肾组织IL-1与TNF-α表达较C组分别增加2.8倍与3.8倍,MMF可明显降低肾组织IL-1与TNF-α表达(P<0.01)。结论MMF可能通过恢复糖尿病大鼠肾组织Nephrin与Podocin蛋白表达减少尿白蛋白排泄。

CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用

本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)在足细胞分化过程中的作用。用RPMI1640培养基在33oC许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组),转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)后置于37oC非许可条件下培养(转染组),并将非许可条件下未转染组作为对照组。用MTT法检测足细胞的生长速度;用RT-PCR方法检测CD2AP、WT1、synaptopodin和nephrin mRNA表达;用Westernblot检测CD2AP、WT1和nephrin蛋白表达;用免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、F-actin和tubulin在分化及未分化足细胞中的分布及其共定位情况。结果显示,CD2AP、WT1和nephrin在分化及未分化足细胞中均可稳定表达,而synaptopodin仅表达于已分化足细胞,在未分化足细胞无表达。在足细胞分化过程中,CD2AP和nephrin的表达上调(P<0.05);CD2AP、tubulin和F-actin在细胞内的分布发生改变,CD2AP与nephrin及F-actin在未分化足细胞中存在共定位关系。转染特异性siRNA下调CD2AP表达,细胞生长速度明显减慢,synaptopodin mRNA表达下调(P<0.05),细胞分化迟滞。结果表明,足细胞分化过程中伴随细胞骨架的重新分布和细胞形态的改变;CD2AP可能作为足细胞裂孔隔膜分子与细胞骨架的连接蛋白,在足细胞分化过程中发挥重要作用。

小檗碱对高糖诱导足细胞功能及相关蛋白表达的影响

目的探讨小檗碱对高糖诱导肾小球足细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为正常对照组、高糖模型组、不同浓度小檗碱组(30、60、90μmol·L^(-1)),分别处理足细胞。MTT法检测小檗碱对高糖诱导足细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI双染实验观察小檗碱对高糖诱导足细胞凋亡的影响;利用Transwell小室观察小檗碱对高糖诱导足细胞迁移能力的影响;Western blot法检测小檗碱对高糖诱导足细胞nephrin、podocin、desmin蛋白表达的影响;黏附能力实验检测小檗碱对高糖诱导足细胞黏附功能的影响。结果 MTT检测结果显示,小檗碱能增加高糖诱导足细胞的活力;Annexin V-FITC/PI双染实验结果显示,小檗碱能抑制高糖诱导足细胞的凋亡;Transwell迁移实验结果显示,小檗碱可以抑制高糖诱导足细胞的迁移;Western blot结果显示,小檗碱可降低高糖诱导足细胞desmin蛋白表达,明显升高nephrin与podocin蛋白的表达;黏附功能实验结果表明,小檗碱能明显提高高糖诱导足细胞的黏附能力。结论小檗碱改善高糖诱导足细胞功能的损伤,其作用机制可能与保护足细胞nephrin和podocin蛋白相关。